Name: הפרוטוקולים עבור הרכבת חיסון וגינלי אוסף דוגמאות במודל ניסיוני של עכבר קנדידה דלקת הנרתיק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: למדו את פרוטוקולי ההרכבה והדגימה של חיסון וגינלי במודל ניסיוני של עכבר Candida. השיטה מאפשרת כימות עומס פטרייתי וניתוח תאים לימפואידים לחקר מנגנוני מחלה ותגובות חיסוניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי R01 AI32556 (NIAID, המכון הלאומי לבריאות). עבודה זו נתמכה גם על ידי לואיזיאנה חיסון מרכז ודרום לואיזיאנה המכון לחקר מחלות מדבקות בחסות מועצת העוצרים לואיזיאנה בחלקו.

<ol><li>Abraham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+immunity+to+Trichomonas+vaginalis+in+a+mouse+model+of+vaginal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection.</a> Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+histocompatibility+haplotype+does+not+impact+the+course+of+experimentally+induced+murine+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis.</a> Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neutropenia+decreases+inflammation+associated+with+murine+vaginal+candidiasis+but+has+no+effect+on+the+course+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection.</a> Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+severity+of+Candida+vaginitis+in+BALB%2Fc+nu%2Fnu+mice+versus+the+parent+strain+is+not+abrogated+by+adoptive+transfer+of+T+cell+enriched+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes.</a> J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).</li>
<li>Buchannan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+stromal+and+epithelial+estrogen+receptors+in+vaginal+epithelial+proliferation%2C+stratification%2C+and+cornification%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification.</a> Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).</li>
<li>Clemons, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+susceptibility+of+mice+to+Candida+albicans+vaginitis+correlates+with+host+estrogen+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity.</a> Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).</li>
<li>Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+the+type+I+interferon+pathway+increases+vulnerability+of+mice+to+genital+Herpes+simplex+virus+2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection.</a> J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).</li>
<li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+estromal-epithelial+interaction+in+hormonal+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses.</a> Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).</li>
<li>Enjalbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multifunctional%2C+synthetic+Caussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> 77 (11), 4847-4847 (2009).</li>
<li>Feinen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+Th17+responses+in+a+murine+model+of+Neisseria+gonorrhoeae+genital+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection.</a> Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+protective+host+defenses+against+oral+and+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intravaginal+live+Candida+challenge+in+humans+leads+to+new+hypotheses+for+the+immunopathogenesis+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+D0870+treatment+of+experimental+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis.</a> Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Reproductive+hormones+on+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+Candida+glabrata+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inf.+Dis%22%5BJournal%5D)">A murine model of Candida glabrata vaginitis.</a> J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+vaginal+cell+populations+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida-specific+cell-mediated+immunity+is+demonstrable+in+mice+with+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunopathogenesis+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev.+9%22%5BJournal%5D)">Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFidel%2C+PL+%22Murine+Models+of+Candida+Vaginal+Infections%2C+In+Experimental+models+in+antimicrobial+chemotherapy%22">Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy</a>. Zak, O., Sande, M. , 2nd ed, Academic Press Ltd. London, UK. 741-748 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+glabrata%3A+Review+of+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+clinical+disease+with+comparison+to+C.+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans.</a> Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).</li>
<li>Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+depletion+increases+susceptibility+to+systemic+and+vaginal+candidiasis+in+mice%2C+and+reveals+differences+between+brain+and+kidney+in+mechanisms+of+host+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance.</a> Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).</li>
<li>Gill, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+require+type+I+IFN+receptor+for+antiviral+responses+during+genital+HSV-2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection.</a> Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).</li>
<li>Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-dependent+induction+of+persistent+vaginal+candidosis+in+naive+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice.</a> Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).</li>
<li>Hamad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+the+oestrogen-dependent+vaginal+candidosis+murine+model+in+evaluating+the+efficacy+of+various+therapies+against+vaginal+Candida+albicans+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection.</a> Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).</li>
<li>LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+dendritic+cells+in+immunoregulation+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).</li>
<li>McGrory, T., Garber, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+intravaginal+infection+with+Trichomonas+vaginalis+and+role+of+Lactobacillus+acidophilus+in+sustaining+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection.</a> Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).</li>
<li>Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+Candida+infection%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS.+Microbiol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).</li>
<li>Nomanbhoy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaginal+and+oral+epithelial+cell+anti-Candida+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity.</a> Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).</li>
<li>Pietrella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beta-glucan-conjugate+vaccine+and+anti-beta-glucan+antibodies+are+effective+against+murine+vaginal+candidiasis+as+assessed+by+a+novel+in+vivo+imaging+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique.</a> Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).</li>
<li>Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+Lactobacilli+in+the+control+and+maintenance+of+the+vaginal+bacterial+microflora%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora.</a> Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).</li>
<li>Saavedra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+production+of+chemokines+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+epidemiology+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Infect. Dis. 14, Suppl 1. S148-S153 (1992).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vulvovaginal+candidiasis%3A+Epidemiologic%2C+diagnostic%2C+and+therapeutic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).</li>
<li>Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+humoral+immune+responses+against+primary+and+repeat+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections+of+17%CE%B2-estradiol-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice.</a> Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).</li>
<li>Taylor, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+virulence+of+Candida+albicans+isolates+causing+mucosal+infections+in+people+infected+with+the+human+immunodeficiency+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus.</a> J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).</li>
<li>Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+Th1%2FTh2+cytokine+production+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).</li>
<li>Tirabassi, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mucosal+vaccination+approach+for+herpes+simplex+virus+type+2%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2.</a> Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).</li>
<li>Broeck, W. V. anden, Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes%3A+descriptive+and+nomenclatory+standardization+in+BALB%2FcAnNCrl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).</li>
<li>Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+adhesion+molecule+and+lymphocyte+activation+marker+expression+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis.</a> J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).</li>
<li>Yano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

דגם ניסיוני של העכבר קנדידה דלקת הנרתיק הוקם ושימש היסטורית על בעשורים האחרונים כדי ללמוד בתגובה מארח הרירית כדי קנדידה, כמו גם בדיקות וטיפולים נגד פטריות 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. הפרוטוקולים המוצגים כאן לשלב יעיל בשיטות פחות עתירי עבודה, ואשר נראה כי אחת ממערכות מודל אופטימיזציה ביותר של דלקת הנרתיק קנדידה שתואר עד כה. טכניקות אלה מאפשרות כימות מהיר של נטל איסוף פטריות של דגימות מהנרתיק. יתר על כן, מחקרים קודמים בדיקות haplotypic מספר...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> נקבה CBA / י עכברים </td><td> Charles River Laboratories </td><td> 01C38 </td><td> 5-6 שבועות של גיל </td></tr><tr><td> קנדידה אלביקנס (3153A) </td><td> האוסף הלאומי של פטריות פתוגניים, בריטניה </td><td> NCPF3153 </td><td></td></tr><tr><td> שמן שומשום </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S3547 </td><td> לא צריך להיות מראש לעקר לפני השימוש </td></tr><tr><td> Β אסטרדיול-17-valerate </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E1631 </td><td> 0.1-0.5mg בשמן שומשום </td></tr><tr><td> Phytone peptone </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 211906 </td><td> עם תוספת גלוקוז 0.1% </td></tr><tr><td> Trypan פתרון כחול </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8154 </td><td></td></tr><tr><td> Sabouraud אגר דקסטרוז </td><td> בקטון דיקinson </td><td> 211584 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase סוג IV </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C5138 </td><td> 0.25% </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> Invitrogen </td><td> 17105-041 </td><td> 1.7 U / ml </td></tr><tr><td> קווי המסכים </td><td> TWP </td><td> 060X060S0065W36T </td><td> רשת מס &#39;60, אל חלד </td></tr><tr><td> הנקס &quot;פתרון מאוזן מלח </td><td> Invitrogen </td><td> 24020-117 </td><td></td></tr><tr><td> CytoPrep מקבע </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 12-570-10 </td><td> שומר על שקופיות למרוח </td></tr><tr><td> Papanicolaou כתם EA-65 </td><td> EMD כימיקלים </td><td> 7054X-85 </td><td></td></tr><tr><td> Papanicolaou כתם OG-6 </td><td> EMD כימיקלים </td><td> 7052X-85 </td><td></td></tr><tr><td> אלום hematoxylin האריס &quot; </td><td> EMD כימיקלים </td><td> 638A-85 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> בקסטר בריאות </td><td> NDC 10019-773-60 </td><td> בשימוש עם מאדה isoflurane או ירידה במערכת סגורה הרדמה קאמרית </td></tr></table>

הפרוטוקולים עבור הרכבת חיסון וגינלי אוסף דוגמאות במודל ניסיוני של עכבר קנדידה דלקת הנרתיק

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Vulvovaginal קנדידה (VVC), נגרמת על ידי מינים קנדידה, הוא זיהום פטרייתי בדרכי המין הנשי הנמוך שמשפיע על כ -75% מהנשים בריאים במהלך שנות הפוריות שלהן, 18,32-34. גורמים predisposing כוללים שימוש באנטיביוטיקה, סוכרת בלתי מבוקרת והן הפרעה ברמות הורמון הרבייה עקב הריון, גלולות למניעת הריון או טיפול הורמונלי 33,34. VVC חוזרים (RVVC), כמוגדר שלוש או יותר אפיזודות לשנה, משפיעה על 5 נפרד 8% מהנשים ללא גורמי predisposing 33. דגם ניסיוני של העכבר VVC כבר נקבעה בעבר במחקר בפתוגנזה ותגובה מארח הרירית כדי קנדידה 3,4,11,16,17,19,21,25,37. מודל זה גם היה מועסק כדי לבחון טיפולים נגד פטריות פוטנציאל in vivo 13,24. המודל דורש כי בעלי חיים להישמר במצב של pseudoestrus עבור optimal קנדידה קולוניזציה / זיהום 6,14,23. בתנאים אלה, בעלי חיים מחוסן יהיה להבחין נטל פטרייתי וגינלי במשך שבועות עד חודשים. מחקרים שנעשו בעבר מראים במקביל גבוהה מאוד בין המודל בבעלי חיים הידבקות בני אדם יחסית המאפיינים החיסונית הפיזיולוגית 3,16,21. הבדלים, לעומת זאת, כוללים חוסר קנדידה כמו הפלורה בנרתיק רגיל ו-pH נייטרלי הנרתיק בעכברים. הנה, אנחנו מדגימים סדרה של שיטות המפתח במודל דלקת הנרתיק עכבר הכוללים חיסון הנרתיק, איסוף מהיר של דגימות מהנרתיק, הערכת נטל פטרייתי וגינלי, וההכנות רקמות להפקת בידוד הסלולר /. זה ואחריו נציג תוצאות עבור המרכיבים של נוזל שטיפה וגינלית, נטל פטרייתי, וניקוז הלימפה התשואות לויקוציטים. עם שימוש בהרדמה, דגימות שטיפה ניתן לאסוף בנקודות זמן רבות על עכברים זהה להערכת האורך שלזיהום / קולוניזציה. יתר על כן, מודל זה לא דורש סוכנים ליזום מערכת החיסון לזיהום, ומאפשר מחקרים החיסונית בתנאים המארח מוגדר. לבסוף, מודל וכל טכניקה הציג כאן עלול להצמיח שימוש במתודולוגיות לבחון ומחלות זיהומיות אחרות של דרכי להוריד את המין הנשי (חיידקים, טפילים, ויראלי) ו בהתאמה הגנות המארח המקומי או מערכתי.

מפתח טכניקות כדי לשמש להערכת<em&gt; קנדידה</em&gt; דלקת הנרתיק במודל חיה ניסיוני מתוארים. שיטות תאפשר איסוף מהיר של דגימות מן הנרתיק לימפוציטים ניקוז בלוטות לימפה המותני. טכניקות אלה יכולים להצמיח מודלים העכבר של מחלות אחרות בדרכי המין הנשי התחתון.

קנדידוזיס וולבו-וגינלי (VVC), הנגרם על ידי מיני Candida, הוא זיהום פטרייתי של דרכי השתן והמין התחתונות אצל נשים, המשפיע על כ-75% מ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להדגים סוגיות פרוצדורליות ספציפיות הקשורות לשימוש במודל חיות ניסוי של קנדידה נרתיקית כאמצעי לכימות העומס הפטרייתי בנרתיק, וכן להשתמש בתאים נרתיקיים או לימפואידיים בבדיקות ספציפיות כגון בדיקות אימונולוגיות והיסטולוגיות. מטרה זו תושג תחילה על ידי הדגמת טכניקת ההזרקה לנרתיק בעכברים שטופלו באסטרוגן. לאחר מכן, לאחר הדממה של העכבר, יבוצע שטיפה נרתיקית (lavage) לשחזור הקנדידה.לאחר מכן יחלצו את רקמת הנרתיק ו/או את קשרי הלימפה המנקזים של הנרתיק. ניתן לבחון את נוזל השטיפה תחת מיקרוסקופ כדי לזהות קנדידה המלווה תאי אפיתל נרתיקיים, או לזרוע אותה על אגר כדי לכמת את העומס הפטרייתי בנרתיק. ניתן להשתמש בפריכה של הפракציה התאית גם לצביעה של תאי אפיתל ותאים לימפואידיים.היתרון המרכזי בהדגמת טכניקה זו הוא לאפשר למשתמשים במודל החייתי של דלקת הנרתיק (vaginitis) לבצע אותה בצורה היעילה והאפקטיבית ביותר. השאלות המרכזיות שנענות באמצעות טכניקה זו הן בתחומי דלקת הנרתיק והאקולוגיה, והיא עונה על שאלות מפתח כגון תגובות חיסוניות של המאכסן, התפלגות תאית, יעילות של תרופות, יעילות אימונותרפית, וכן השפעות של חיסון והדגמת הטכניקה. היום, סטודנטית לתארים מתקדמים במעבדתי, junco yano, תדגים כיצד להדביק עכבר ב-C albicans שלושה ימים לאחר מתן זריקה של beta estradiol.התחל בייצוב העכבר על משטח gRED שטוח כדי שיוכל להיאחז בו. לאחר מכן, החזק את בסיס הזנב בשתי אצבעות והרם את ירך העכבר כלפי מעלה כך שפתח הנרתיק יפנה אליך. הכנס את טיפ הפ pipette לעומק של כ-5 mm לתוך חלל הנרתיק ושאב עד 20 µL מת сусפנסיית האינוקולום.בצע שלב זה במהירות ובעדינות רבה ככל האפשר כדי למזער את הסטרס של העכבר. לאחר תקופת האינקובציה הרצויה, בצע הריגה של בעל החיים בהתאם לפרוטוקול של המוסד שלך. לאחר מכן, החזק את העכבר כלפי מטה בעזרת שתי אצבעות בבסיס הזנב, כך שפתח הנרתיק יהיה חשוף עבור הפפטה.החדירו 100 µL של PBS סטרילי אל תוך הלומן הנרתיקי, ובצעו שטיפה (lavage) באמצעות שאיבה וערבוב חוזרים. אם קצה הפפטה נחסם על ידי תאים, פלטו את התאים החוסמים והמשיכו בשטיפה עם ה-PBS שנותר. אספו את נוזל השטיפה למבחנה של מיקרו-צנטריפוגה.בעקבות הליך שטיפת הנרתיק, הנח את העכבר על גבו והרבה את אזור המפשעה ב-70% ethanol. באמצעות פינצטה, הרם את פתח השתן כלפי מעלה כך שפתח הנרתיק ייחשף. הכנס זוג פינצטות קמורות לתוך חלל הנרתיק ואתר את צוואר הרחם תוך שמירה על אחיזה חזקה עם הפינצטות.הוציאו את צוואר הרחם דרך חלל הנרתיק, כרסמו את הנרתיק בבסיס פתח הנרתיק, ולאחר מכן הסירו את צוואר הרחם מהנרתיק באמצעות מספריים כירורגיים. מכיוון שרקמת הנרתיק מכווצת, הפכו אותה כדי לשמור על הכיוון המקורי, או פתחו אותה לצורת דף על ידי ביצוע חתך צדי לצורך כריתת קשריים לומבריים כאשר בעל החיים שוכב על גבו. השביעה את הבטן ב-70% ethanol.בצעו חתך צדי החל מהבטן התחתונה ועד לחזה, וחשפו את האיברים הפנימיים באמצעות פינצטה בכל אחת מהידיים. הזיזו את המעיים כלפי מעלה כך שכלי הדם המרכזיים יהיו גלויים. אתרו את ה-inferior vena cava ואת ה-abdominal aorta.ניתן לזהות זוג קשרי לימפה מותניים (lumbar lymph nodes) הסמוכים לאבי העורקים הבטני, הממוקמים בערך במחצית הדרך בין מקור העורקים הכליתיים לעורקי השקיק (common iliac arteries). ניתן להבחין בקשרי לימפה אלו מרקמת שומן על פי מרקמם הגמיש, והם בעלי צבע בהיר ועכור יותר בהשוואה לרקמת שומן. כמו כן, הם גדולים באופן ניכר בבעלי חיים מזוהמים בהשוואה לאלו שלא הוחדרו בפתוגן.הוצא את קשרי הלימפה מהבעלי החיים על ידי הנחת מיקרו-פינצטה מתחת לקשר, ולאחר מכן משוך בעדינות כלפי מעלה כדי להפרידו מהרקמה שסביבו. לאחר הוצאת הרקמה, העבר את קשרי הלימפה למסננת רשתית סטרילית המוצבת בתוך צלחת פטרי זכוכית סטרילית המכילה כ-10 milliliters של תמיסת מלח מאוזנת של Hank's. כדי לבודד תאי לימפויד, עיין בפרוטוקול הכתוב.הפרקציות התאיות של נוזל שטיפה נרתיקי מעכברים שהוחדרו לפחות ארבעה ימים קודם לכן מורכבות בדרך כלל מתאי אפיתל עם קנדידה ומנfiltrats תאיים, כפי שמוצג כאן במיקרוסקופיה של דגימה רטובה. ניתן לזהות Candida על ידי נוכחות של PHA וכן שמרים. כאן נצבעו תכשירי מריחה של נוזל שטיפה נרתיקי.שימוש בטכניקת משטח פאפ (pap smear) לבחינת תאים אפיתליאליים ולבנויקocytes חודרים, כאשר התאים העיקריים הם נויטרופילים, כפי שניתן לזהות לפי הגרעינים בעלי הפלחים. נויטרופילים מעטים מאוד, אם בכלל, מזוהים בעכברים שלא חוללו להם הדבקה. איור זה מציג דוגמה לעומס פטרייתי נרתיקי.נוזל שטיפה נרתיקי נאסף בנקודות זמן ספציפיות ומזו 여기서 לתרבית לצורך ספירת CFU. בדוגמה זו, הנוזל נאסף בחמישה ימים לאחר ההחדרה, עבר דילול סדרתי, נזרע על מצע גידול ודגרו למשך 48 שעות. לאחר מכן נספרות המושבות ומחושב העומס הפטרייתי הנרתיקי; התנחלות נרתיקית או זיהום ב-candida נמשכים שבועות בעכברים שהוחדרו וקיבלו טיפול באסטרוגן.בעוד שקנדידה אינה מצליחה להקים יישוב נרתיקי בעכברים ש接חוללו אך לא טופלו באסטרוגן, עכברים שטופלו באסטרוגן אך לא חוללו נשארים שליליים לקנדידה לאורך כל הזמן. בנוסף, ניתן לבצע שטיפות נרתיקיות פעם אחת בעכברים נפרדים בכל נקודת זמן, או באופן אורך באותם עכברים תחת הרדמה. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לקבע את בעלי החיים בצורה מאובטחת כדי למנוע טראומה לנרתיק, ויש להקדיש את הזמן הדרוש לשטיפה יסודית כדי לקבל מדד מדויק של העומס הפטרייתי הנרתיקי בעת הפקת רקמות נרתיקיות.השתמשו ב-PBS סטרילי כדי למנוע מהם התייבשות, ושימו לב שלא לפגוע בורידים ובעורקים מרכזיים בעת הסרת קשרי הלימפה; בזמן עיבוד תאי קשרי הלימפה, שמרו אותם על קרח או בטמפרטורה של ארבע מעלות כדי לשמר את חיוניות התאים. לאחר צפייה בסרטון זה, תגמירו הבנה טובה כיצד להשתמש במודל העכבר הניסויי של ואגיניטיס קנדידה כדי לכמת באופן הדיר באופן רב את העומס הפטרייתי הנרתיקי ולהוציא רקמות נרתיקיות או לימפואידיות לצורך בדיקות אימונולוגיות או היסטולוגיות ספציפיות.

protocols-for-vaginal-inoculation-sample-collection-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: Morrill, S. R., et al. מודלים של קולוניזציה נרתיקית של עכברים על ידי חיידקים שגדלו אנאירובית. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים פרוטוקול למידול קולוניזציה נרתיקית בעכברים באמצעות חיידקים אנאירוביים עמידים לאנטיביוטיקה. זה מתחיל בטיפול הורמונלי להגברת הרגישות לאפיתל, ואחריו חיסון נרתיקי וחיסון משותף בתנאים אנאירוביים. ההליך מסתיים בדגימה ותרבית לאחר החיסון כדי להעריך את קולוניזציה של חיידקים והיווצרות ביופילם.

מידול קולוניזציה של נרתיק עכברים על ידי חיידקים אנאירוביים

מקור: O'Brien, V.P. ואחרים. זיהום בדרכי השתן החוזר של אשריכיה קולי שנגרם מחשיפה לשלפוחית השתן בגרדנרלה וגינליס בעכברים. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את הכנת חיסון גרדנרלה וגינליס ליצירת מודל עכבר לזיהום חוזר בדרכי השתן.

הכנת חיסון Gardnerella vaginalis למידול זיהומים נמנים בדרכי השתן בעכברים

מקור: פטרס, ק. א., דוראן, ק. ס. מודל עכבר של קולוניזציה נרתיקית של סטרפטוקוקוס בקבוצה B. J. Vis. Exp. (2016)הסרטון הזה מדגים את ההכנה והחיסון הנרתיק של עכבר נקבה שטופלה הורמונלית עם סטרפטוקוקוס מקבוצה B כדי למודל זיהום. הוא מסביר כיצד לגדל ולהכין את החיידק, להזריק את החיסון ללומן הנרתיק, ולהבטיח זיהום מוצלח.

הקמת מודל עכבר לזיהום סטרפטוקוקוס בקבוצה B בנרתיק

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום Escherichia coli אורופתוגני בשלפוחית השתן של עכבר נקבה באמצעות החדרת קטטר טרנס-שופכתי. החיידקים המוזרקים מצליחים לבסס זיהום בדרכי השתן בתוך שלפוחית השתן, ומספקים פלטפורמה רבת ערך לחקר מחלות הקשורות לבריאות הקשורות לדרכי השתן.

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

סרטון זה מדגים את הפיתוח של מודל עכבר in vivo לחקר היווצרות ביופילם של קנדידה אלביקנס ברקמה תת-עורית. הניסוי כולל השתלת מכשירים נגועים בקנדידה באזור הגב של החיה לצורך פיתוח ביופילם.

קנדידה אלביקנס היווצרות ביופילם במודל עכבר In Vivo

למרות שמודלים של זיהום קנדידה זמינים לחקר עמידות חיסונית של מארחים, מודל לחקר אימונופתולוגיה מתווכת של תאי T בהקשר של זיהום קנדידה נעדר. כאן אנו מתארים שיטה לביסוס אימונופתולוגיה של Th17 הקשורה לזיהום קנדידה דרך הפה בעכברים חסרי חיסון.

TH17 דגם דלקת של לוע תחתון פטרת בעכברים immunodeficient

מטרת פרוטוקול זה היא לחקות קבוצה אנושית B Streptococcus (GBS) קולוניזציה וגינלית במודל בעכברים. שיטה זו עשויה לשמש כדי לחקור תגובות מארחות חיסוניות וגורם חיידקי תורם התמדת נרתיק GBS, כמו גם לבחון אסטרטגיות טיפוליות.

מודל Murine של הקבוצה B<em&gt; סטרפטוקוקוס</em&gt; נרתיקי Colonization

כאן, אנו מציגים שיטה יעילה ויעילה להזרקות ורידים בזנב מכרסם באמצעות מכשיר התחממות /הרחקה שתוכנן באופן ייחודי. על ידי ייעול ייזום תהליכי ויתור וריסון, פרוטוקול זה מאפשר זריקות מדויקות ותוך ורידי בזמן של קבוצות גדולות של בעלי חיים עם מצוקה מינימלית.

מכשיר התחממות/ריסון עכשווי להזרקות יעילות של וריד זנב במודל אלח דם פטרייתי מורין

הפרוטוקול מציג מודל עכברי של התיישבות נרתיקית עם חיידקי נרתיק אנושיים בתרבית אנאירובית. אנו מתמקדים ב- Gardnerella vaginalis, תוך הכללת הצעות עבור Prevotella bivia ו - Fusobacterium nucleatum. פרוטוקול זה יכול לשמש גם כמדריך לחיסונים וגינליים והתאוששות בת קיימא של חיידקים אחרים שגדלו באנאירוב.

מודלים של התיישבות נרתיקית מורין על ידי חיידקים שגודלו אנאירובית

אנו מבססים מודל עכברי של זיהום הקשור לצנתר C.albicans (CRI), שבו נוצר ביופילם על הצנתר, והאינטראקציה בין C.albicans למארח מתואמת היטב עם CRI הקליני. מודל זה מסייע לסנן טיפולים עבור CRI הקשור לביופילם של C.albicans , ומניח בסיס לשינוי קליני.

מודל זיהום קנדידה אלביקנס הקשור לצנתר בעכבר

לידה מוקדמת (לידה &lt; שבוע 37) היא בעיה בריאותית עולמית דחופה עם אפשרויות מניעה וטיפול לא אופטימליות. אנו מציגים מודל עכברי של לידה מוקדמת הנגרמת על ידי זיהום חיידקי בנרתיק ומתארים כיצד לנתח את התחלואה והתמותה של היילודים כתוצאה מכך.

מידול זיהום נרתיקי עולה, לידה מוקדמת ותחלואה בילודים בעכברים

למדו את פרוטוקולי ההרכבה והדגימה של חיסון וגינלי במודל ניסיוני של עכבר Candida. השיטה מאפשרת כימות עומס פטרייתי וניתוח תאים לימפואידים לחקר מנגנוני מחלה ותגובות חיסוניות.

הפרוטוקולים עבור הרכבת חיסון וגינלי אוסף דוגמאות במודל ניסיוני של עכבר קנדידה דלקת הנרתיק

גלה סרטונים נוספים