עכבר דגם של אנדומטריוזיס בניתוח המושרה על ידי השתלת אוטומטי של רקמות הרחם

המטרה הכללית של הליך זה היא להשרות קרינדיומטריוזיס באופן כירורגי בעכברים באמצעות העברה אוטולוגית של רקמת רחם לקסקדה העורקית של הגריד המעיי (intestinal mesentery). דבר זה מושג תחילה על ידי קשירה, הסרה וחשיפה של הנדומטריום של הרחם. השלב השני של ההליך הוא יצירת שלושה שתלי אנדומטריואיד מהנדומטריום החשוף באמצעות מחץ ביופסיה של 2 mm.

השלב השלישי של הפרוצדורה הוא תפירת שלושה שתלים אנדומטריואידיים לעורקים במפל העורקים של גרסום המעי. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא סגירת דופן הבטן והעור, כדי לאפשר לבעל החיים לפתח את הנגעים האנדומטריואידיים. נגעים שהוצאו מעכברים דומים לאלו של נשים עם אנדומטריוזיס, כפי שנקבע באמצעות ניתוח היסטולוגי ותבניות ביטוי של גנים וחלבונים.

באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו יתקלו בשלוש בעיות עיקריות. ראשית, רקמות העכבר הן קטנות מאוד. שנית, הקירוו של המעי (intestinal mesentery) פגיע לפגיעה בקלות, ושלישית, תפרים שיוצבו בצורה הדוקה מדי יגרמו לנמק של המעי.

התחילו באיסוף כל הציוד הכירורגי הדרוש לביצוע ניתוח אספטי מוצלח, כולל תמיסות לאנלגזיה ולאנסטזיה. לאחר הרדמת בעל החיים באמצעות איסופלורן בשאיפה, ודאו הרדמה מלאה באמצעות גירוי של צביטה בבוהן (מענה שלילי). כדי למנוע התייבשות במהלך הניתוח, מרחו משחה אופתלמית על העיניים ולאחר מכן גלחו את אזור הניתוח באמצעות מכונת גילוח קטנה. חטאו את אזור הניתוח בשלוש פעמים לסירוגין של שפשוף עם כלורהексиדין ו-70% ethanol, ולאחר מכן כסו את בעל החיים בשדה סטרילי.

בצעו חתך קטן בקו האמצע באמצעות מספריים קטנים או להב סקלפל, המסתיים 0.5 עד 1.0 סנטימטרים rostral לפתח הנרתיק. בצעו דיסקציה קהה בעדינות של דופן הגוף מדופן הבטן כדי להקל על סגירת אתר הניתוח. לאחר הדיסקציה הקהה, בצעו חתך קטן בקו האמצע של דופן הבטן.

בשלב הבא, בעזרת פינצטה קטנה, אתרו בעדינות את קרן הרחם השמאלית. הרחם נמצא גבּיתית למעי, שזהו האיבר שבדרך כלל נראה ראשון עם הכניסה לאתר החתך; משכו בעדינות את קרן הרחם כלפי מעלה והחליקו פינצטה פתוחה מתחתיה כדי שתשמש כרטרקטור. מומלץ גם לשים לב למראה השחלות והרחם בשלב זה.

כדי לסייע בתאריך מחזור הבעצועה. החליקו שני קטעים של 6 עד 8 ס"מ של חוט תפר משי שחור קלוע במידה 5-0 מתחת לקרן הרחם המתוחה. קשרו בחוזקה את הקרן בחיבור שבין הרחם לבית החוליות (utero tubule junction).

קשרו בעדינות את הת cheating לתובעת הביצית ובחיבור שבין הרחם לצווארו. השתמשו בקשר ריבועי בכל מיקום, והשאירו את קצות התפר ללא חיתוך. חתכו את מקטע קרן הרחם שבין שתי הקשירות והניחו את הרקמה בצלחת פטרי מזכוכית המכילה כ-100 µL של PBS עם פניצילין וסטראפטומייצין.

גזרו את קצות תפר המשי בסוף. אם התפר השתחרר או שיש דימום, אתרו את קצה החוט וקשרו קשר נוסף באמצעות מספריים קטנים. הסירו את השומן מקרן הרחם.

פתחו את קרן הרחם על ידי הכנסת להב אחד של מספריים קטנים אל תוך הלומן. החליקו בעדינות את המספריים במורד קרן הרחם תוך כדי החזקתה בעזרת פינצטה. בתוך צלחת פטרי מזכוכית, השתמשו במנקב ביופסיה של 2 mm כדי לחתוך שלושה שתלים בגודש שווה, תוך הקפדה למנוע מהם להתייבש.

הניחו גזה סטרילית מיד מעל אתר החתך והרטיבו אותה היטב ב-PBS סטרילי המכיל penicillin ו-streptomycin. חשוב לשמור על הידרציה לאורך השלבים הבאים באמצעות פינצטה קטנה וחלקה. אתרו בעדינות את המעי העיוור (cecum) והזיזו אותו בגלגול לאורך המעי הדק.

שלפו מקטע קטן של מעי באורך ארבעה עד חמישה סנטימטרים וסדרו אותו כמעין מניפה על גזה שהורטבה מראש, כך שמערכת העורקים של הקירומיזנטרי움 (mesentery) תהיה גלויה בבירור. הקפידו להרטיב את המעי בכל עת באמצעות סליין סטרילי. הניחו שתל אחד על מחט, ולאחר מכן השתמשו בתפר 6-0 aut black alon כדי לקבע בעדינות את השתל לעורק, במרחק של כ-0.5 סנטימטרים מהמעי.

השתמשו רק באחת. העבירו אותה מעל הפינצטה ואל תהדקו את התפר חזק מדי, שכן פעולה זו עלולה להוביל להפסקת זרימת הדם ולנמק עוקב של המעי.

בצעו שני קשרים עם קשר אחד נוסף, הדקו כל אחד מהם וגזרו את התפר במרחק של שני מילימטרים מהשתל, והניחו למעי להתרחב (הידרציה). לאחר מכן, התקדמו בכיוון רוסטראלי. משכו החוצה את שלושת עד ארבעת הסנטימטרים הבאים של המעי והחזירו בעדינות את המקטע שכבר מכיל שתל.

דלגו על עורק אחד או שניים מאתר ההשתלה הקודם ותפרו את השתל הבא; חזרו על הפעולה עבור השתל השלישי. לבסוף, תפרו את דופן הבטן וסגרו את העור באמצעות סיכות לסגירת פצעים. לאחר סגירת אתר הניתוח ומתן משככי כאבים, הניחו את החיה כאשר צדה הגחוני פונה מטה בתוך הכלוב, באופן חלקי על גבי פד מים מחומם במערכת סירקולציה, עד להתאוששות החיה.

כדי להוציא את הגעתים האנדומטריואידיים, אתרו את התפרים השחורים בקישרי המעי. מדדו את האורך והרוחב של כל געת אנדומטריואידי באמצעות קליפרים. הפרידו את הגעתים האנדומטריואידיים, תוך הקפדה שלא לדקור אותם.

הסר כל רקמה שאינה אנדומטריואידית מהנגע. הנע בעדינות את שלושת הנגעים האנדומטריואידיים הממולאים בנוזל לפני הסרת התפר. הסר בעדינות את התפר ונקב שניים מהנגעים האנדומטריואידיים.

שקלו אותם שוב לפני המעבר לעיבוד הרקמות. לאחר מכן, כרתו ושקלו את שאר קרן הרחם. ניתוח היסטולוגי של אנדומטריוזיס הן בנשים והן במודל העכברים המוצג כאן מעיד כי הנגע האנדומטריואידי מכיל בלוטות אנדומטריאליות וסטרומה. נגעים אנדומטריוטיים בעכברים מכילים גם מקרופאגים עמוסים בהמוסידרין, המהווים סימן היכר נפוץ לאנדומטריוזיס בנשים. נגעים אנדומטריואידיים שהוסרו מעכברים שלושה ימים לאחר ההשראה נראים דלקתיים והמוֹרגיים כפי שמוצג משמאל, לאחר שבועיים עד ארבעה שבועות של צמיחה.

נגעים אנדומטריוטיים במודל העכבר הם דמויי ציסטה, ממולאים בנוזל ומוקפים בהדבקות פריטוניאליות בהשוואה למשקל הנגע בעת ההשראה. נגעים ממולאי נוזל היו גדולים ב-306% וב-862%, ונגעים חודרניים היו גדולים ב-51% וב-172% בחודש אחד ובחודשיים לאחר ההשראה, בהתאמה. נגע אנדומטריוטי ממולא נוזל ונגע חודרני.

המשקלים נותרו עקביים בחודש אחד לאחר ההשראה בחמישה ניסויים שונים שביצעו את ההליך הזה. ניתן להשתמש במודל זה כדי לענות על שאלות בנוגע לפתופיזיולוגיה של אנדומטריוזיס ולחקור טיפולים חדשניים להפגת הכאב והעקרות הקשורים למחלה זו.