Name: שילוב הקרנות של מודל העכבר Orthotopic המוח גידול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: למד שתלת תאי גליובלסטומה במוח עכברים לחקר אונקולוגיה באמצעות מודל אורתוטופי. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות טיפולים חדשים כמו כימותרפיה והקרנות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מימון תוכנית המיפוי של NIH.

I. הכנה Cell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים גדלים על המפגש ב DMEM עם FBS 10% על בקבוק 1 80% confluent 225 3 ס"מ על כל 5 העכברים להיות מושתלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aspirate התקשורת הנחה של התאים, לשטוף עם 10 מ"ל של PBS ללא סידן או מגנזיום. Aspirate PBS מחוץ לתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize תאים עם 3 מ"ל של טריפסין, לחכות 10-15 דקות, ולנטרל טריפסין עם 15 מ"ל של התקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Pipet כל התאים ומדיה לתוך 50 מ"ל חרוטית. שתי צלוחיות גדולות להתאים 1 50 מ"ל חרוטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין תאים בסל"ד 1600 דקות 7 ב 4 ° C. לחלוטין לשאוב supernatant. Resuspend תאים 10 מ"ל של קר PBS, ולשטוף תאים על ידי pipetting בעדינות מעלה ומטה. ודא כי התא גלולה מעורבב באופן אחיד עם PBS. ההשעיה צריך להיות מעונן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה מספר התא נעשית באמצעות מונה קולטר. התאים centrifuged שוב 4 ° C. בסל"ד 1600 דקות 7 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר צנטריפוגה 2 nd של התאים, כמופיראט כל PBS ו resuspend ב 1 מ"ל של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים הסתובב 1ml של PBS ב -3000 סל"ד ב 10 דקות 4 ° C. PBS היא להישאף, ו PBS נוסף כדי להתאים את הריכוז הסופי של 1x10 6 ל μl 5 ל U87 תאים, שורות תאים אחרים עשויים לדרוש מספר ריכוז שונה של תאים עבור הגידול האופטימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי נפח הריכוז הסופי מתקבל התאים מוחזקים על קרח בצינור eppendorf. </li></ol> השנייה. Xenograft <ol class="ualpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הם הרדים באמצעות הזרקה של תערובת קטמין / Xylazine / מלוחים. התערובת היא 120 מ"ג / ק"ג של קטמין, 16 מ"ג / ק"ג של Rompun מליחים. העכברים נשקלים בנפרד ונתן 0.1 מ"ל לכל 10 גרם לפי המשקל שלהם. ההרדמה ניתנת באמצעות מחט 26G מחוברים IP 1 מ"ל במזרק. זה ייקח בערך 15 דקות על העכברים להגיע לשלב השינה לתגובה כאב. אתה יכול לבדוק את תגובת הכאב שלעכברים על ידי שודד דרכים צובט שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי סמן העכבר נמצא בהרדמה מלאה, משחת עיניים ניתנת עיניהם כדי למנוע מהם להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר מונח על המיטה של ​​stereotaxic עם השיניים העליונות הקדמיות של החריץ בשורת הפה. המיטה ממוקמת אז stereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השומר אף ממוקם מעל אפו של העכבר כדי למנוע תנועה של הראש, ואת הברים אוזניים בעדינות למקם את תעלת האוזן של העכברים. להיזהר לא לעשות או מיקום של סרגל האף או ברים אוזניים חזק מדי, כמו הגולגולת עשויה שבר ו / או למנוע את העכבר מן הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי הראש של העכבר הוא ברמה באמצעות השנתות על stereotaxic מועיל תוך כדי התהליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי הכנה יוד, עכבר אלכוהול providine מוחל בנדיבות על ראשו של העכבר לסירוגין עבור סכום כולל של 3 יישום של יישומים אלכוהול ו 3 של יוד. אחד היישומים הסופית של משטח אלכוהול עם 70% יחול עלראש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל המכשירים בהליך יש לעקר או על ידי השריית מעוקר או מכשירים באתנול 70% לפני תחילת ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצעים חתך בחלק העליון של הגולגולת מאחורי העין הימנית באלכסון חזרה האחורי השמאלי של הגולגולת. החתך צריך להיות כ - מ"מ 10-15 מ"מ אורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש Q-עצה, לאט להפריד את החתך לחשוף את הגולגולת למחות את הממברנה כי הוא בין הגולגולת ואת העור. השתמש Q-עצה כדי לספוג את הדם ולראות לדימום יתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את החלק העליון של הגולגולת לדמיין גבחת. באמצעות נקודת מזרק המילטון, למקם אותה על גבחת. מיקום נכון של החור לקידוח בגולגולת הוא הנכון 2 מ"מ 1 מ"מ הקדמי של גבחת (איור 2). הרגשתי שקצהו של המנתח דה מרקר, כאלה שנרכשו סטרילית, נעשה שימוש כדי לסמן את מיקומו של החור לקידוח. יש לציין כי החור ממוקם קרובקו תפר terior. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, לקדוח חור קטן בגולגולת במיקום המסומן באמצעות חוד המחט 22g באגרטל סיכה או הפד באמצעות מחט 18G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 10 μl זכוכית המילטון מזרק עם 5 μl של תאים. מזרק המילטון הוא 10 μl עם 30G בוטה מחט קבועה 33G קשור אליו. יש להקפיד לערבב את התאים לפני טעינת אותם, בין אם על ידי pipetting אותם או באמצעות מזרק עם מחט 1ml 25 גרם המחובר. לאחר מזרק המילטון נטען, למקם אותו בזרוע להסתדר זה עם חור בגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את סוף bunt של המחט אל פני השטח של הגולגולת, פעם מחט הוא ברמה עם הגולגולת; להוריד את המחט עד שהיא בעומק של 3 מ"מ מתחת לפני השטח של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהמחט יורדת, היא תישאר שם למשך 2 דקות, כדי למנוע כל טראומה קשה מהמחט להשפיע על המוח. השתלת התאים הוא בשיעור של μl 1 לדקה עבור סכום כולל של 6-8 דקות, להיזהר בכל backfloW. לאחר שאחרון התאים כבר מושתל, להשאיר את המחט במקום עוד 2 דקות, כדי לאפשר את כל התאים להתיישב בו </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט מהמוח, ולנקות את החור עם Q-עצה. להמשיך לנקות את המחט במזרק עם 50% Actone, EtOH 100% ו PBS, 3x בפתרון כל בסדר הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור הגולגולת הוא מוכן להיות איחוי בשלב זה. שימוש 5-0 PBS לסגור את החתך עם כ 3 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכבר להתעורר על משטח חום, ולהחיל מחדש משחת עיניים במידת הצורך. העכבר ניתן להחזיר לכלוב אחרי זה מראה תנועה בפני עצמה (כלומר, הרמת את הראש או להזיז את הכתפיים). </li></ol></li></ol> ג. הטיפול של השתל IC על ידי קרינה והתרופות <ol class="ualpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרינה טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לקו התא, טיפול העכברים יכולים להתקיים 5 עד 7 ימים לאחר השתל. המחלקה שלנו משתמשת יחידת הקרנות orthovoltage עבור לטפל קרינהment. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדמיה כגון BLI (הדמיה ביולומינציה), MRI או CT יכול לשמש כדי לחזות את הגידול לפני אקראיות (איור 3 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הם הרדים עם קוקטייל קטמין / Xylazine / מלוחים כמו בעבר, משחת עיניים מוחל על עיניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכברים מוצבים לנענע קרינה מותאם אישית עשה המוגדר כמו גלגל עוגה, בהם ראשי העכברים להצביע לכיוון המרכז. גופותיהם של העכברים מוגן מפני קרינה עם עופרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטיפול התרופתי יכול להינתן לפני או קרינה דרך נתיבי מסירה שונים, כלומר מ"ר, ה-IP ו-IV. </li></ol></li></ol> IV. תוצאות העכבר צריך להתעורר ההליך בתוך 45-60 דקות לאחר הזרקת הרדמה. אם העכבר יש המתקשים להתעורר לאחר הניתוח וזמן חרג ½ 1 שעות לאחר ההליך, העכבר לא יכול להתאושש המתת חסד עשוי להיות חלופה יעילה. אם ההוא פה דימום מוגזם או הגולגולת הופך סדוק בכל שלב במהלך הליך המתת חסד מומלץ. אם הכל ילך כשורה ובהתאם קו התא, הגידול צריך להתחיל להרכיב בתוך 2-4 שבועות לאחר הניתוח יש לקחת את המקום. בעת שימוש במודלים xenograft תוך גולגולתי, היעילות הטיפולית נמדד בדרך כלל ההישרדות לאחר ההשתלה 5. עם זאת, כפי זהו מודל משולבים סימנים ותסמינים תתרחש לפני מותו. חלק מהסימנים הפיזיים העכבר עשוי להפגין הם יציבה כפופה, אובדן משקל הגוף, חוסר פעילות. חלק מהסימנים נוירולוגיות יכול להיות התקפים, להטות את הראש, ואיבוד שיווי משקל. איור 3 ב מציג HE כתם של הגידול על תמותה. העלילה Kaplan-Meier משמש להערכת הנתונים (איור 4). מספר הימים של הישרדות של 50% מחושבים לעומת שליטה. אם קבוצת שילוב חיו זמן רב יותר מאשר תוספת של קרינה הפרט נשק סמים שילוב זה הצליח. <img alt='"איור' src="/files/ftp_upload/3397/3397fig1.jpg" files> באיור 1. ציוד Stereotaxic Stoelting. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig2.jpg"> איור 2. תרשים של מיקום לקדוח חור בגולגולת העכבר. <img alt="איור 3 א" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3A.jpg"> איור 3 א. BLI הדמיה לאחר ההשתלה GBM. <img alt="איור 3 ב" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3B.jpg"> איור 3 ב. H ו E של הגידול GBM על התמותה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig4.jpg"> איור 4. תוצאות U87 שתלים משולבים הזריק עם מעכבי PARP 7 ימים שלאחר הניתוח.

<ol><li>Bleau, A. M., Holland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trapping+the+mouse+genome+to+hunt+human+alternations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trapping the mouse genome to hunt human alternations.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).</li>
<li>McGrady, B. J., McCormick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+intracranial+invasion%3A+morphological+observations+on+central+nervous+system+invasion+by+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A murine model of intracranial invasion: morphological observations on central nervous system invasion by melanoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 10, 387-393 (1992).</li>
<li>Fei, X., Zhang, Q., Dong, J., Diao, y, Wang, Z., Li, R., Wu, Z., Wang, A., Lan, Q., Zhang, S., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+clinically+relevant+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+metastatic+lung+cancer+and+glioblastoma+through+surgical+tumor+tissues+injection+with+trocar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of clinically relevant orthotopic xenograft mouse model of metastatic lung cancer and glioblastoma through surgical tumor tissues injection with trocar.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 29, 84-84 (2010).</li>
<li>Fujita, M., Zhu, X., Sasaki, K., Ueda, R., Low, K., Pollack, I., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+STAT3+Promotes+the+Efficacy+of+Adoptive+Transfer+Therapy+Using+Type-1+CTLs+by+Modulation+of+the+Immunological+Microenvironment+in+a+Murine+Intracranial+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of STAT3 Promotes the Efficacy of Adoptive Transfer Therapy Using Type-1 CTLs by Modulation of the Immunological Microenvironment in a Murine Intracranial Glioma.</a> J. Immunol. 180, 2089-2098 (2008).</li>
<li>Candolfi, M., Curtin, J. F., Nichols, W. S., Muhammad, A. K. M. . G., King, G., Pluhar, G. D., McNiel, G. E., Ohlfest, E. A., Freese, J. R., Moore, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathlogical+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathlogical characterization and tumor progression.</a> J. Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Kaye, A., Morstyn, G., Gardner, I., Pyke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+xenograft+glioma+model+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a xenograft glioma model in mouse brain.</a> Cancer Research. 46, 1367-1373 (1986).</li>
<li>Zhao, Y., Xiao, A., diPierro, C., Carpenter, J., Abdel-Fattah, R., Redpath, G., Lopez, M., Hussaini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Extensive+Invasive+Intracranial+Human+Glioblastoma+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An Extensive Invasive Intracranial Human Glioblastoma Xenograft Model.</a> American Journal of Pathology. 176, 3032-3049 (2010).</li>
<li>Learn, C., Grossi, P., Schmittling, R., Xie, W., Mitchell, D., Karikari, I., Wei, Z., Dressman, H., Sampson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+Intracranial+Tumors+in+a+Murine+Model+of+Glioma+Demonstrate+a+Shift+in+Gene+Expression+in+Response+to+Host+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of Intracranial Tumors in a Murine Model of Glioma Demonstrate a Shift in Gene Expression in Response to Host Immunity.</a> J. Neuroimmunol. 182, 63-72 (2007).</li>
<li>Martens, T., Laabs, Y., Günther, H., Kemming, D., Zhu, Z., Witte, L., Hagel, C., Westphal, M., Lamszus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Glioblastoma+Growth+in+a+Highly+Invasive+Nude+Mouse+Model+Can+Be+Achieved+by+Targeting+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+but+not+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Glioblastoma Growth in a Highly Invasive Nude Mouse Model Can Be Achieved by Targeting Epidermal Growth Factor Receptor but not Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2.</a> Clin. Cancer Res. 14, 5447-5458 (2008).</li>
<li>Purow, B., Schiff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+genetics+of+glioblastoma%3A+are+we+reaching+critical+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Advances in the genetics of glioblastoma: are we reaching critical mass.</a> Nat. Rev. Neurol. 5, 419-426 (2009).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

גליומות ממאירות, כגון multiforme glioblastoma, לייצג את הגידולים השכיחים ביותר במוח יסודי בעלי פרוגנוזה עגומה 4. ההישרדות של חולים שנפגעו GBM נשארה כמעט ללא שינוי בעשור האחרון (כלומר, 9-12 חודשים לאחר האבחון) למרות ההתקדמות ניתוח, הקרנות וכימותרפיה 5. התכונות של הדגם המתאים לחקר הטיפול glioma לכלול מיקום הגידול בצמיחה לשחזור של התאים כגידול דיסקרטית יחסית, התאים צריכה להיות דומה ככל האפשר את תכונות היסטולוגית של gliomas אדם, לא אמורה להיות צמיחה צפויה קצב הגי...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מעבדה רגילה Stereotaxic Instrutment </td><td> Stoelting עכבר מתאם עכברוש </td></tr><tr><td> בבטאדין </td><td> 100% EtOH </td></tr><tr><td> 70% EtOH </td><td> 50% אצטון </td></tr><tr><td> 6 &quot;Q-טיפים </td><td> מטליות אלכוהול </td></tr><tr><td> המילטון מזרק 80008 </td><td> Ethicon 5-0 PD </td></tr><tr><td> 1701 SN-33G 31/1 &quot;/ PT3 מחט </td><td> 1 מ&quot;ל מזרקים </td></tr><tr><td> 25 גרם מחטי </td><td> כרית חימום </td></tr><tr><td> משחה דמעות מלאכותיות </td><td> יפה מאוד בטוש בלתי מחיק היטה </td></tr></tbody></table>

שילוב הקרנות של מודל העכבר orthotopic המוח גידול

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Multiforme גליובלסטומה (GBM) הם הנפוצים ביותר גידולים אגרסיביים בוגרים במוח העיקרי 1. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בהבנת המכניקה של הפלישה הגידול, חיסון intracerebral ישירה של הגידול מספק הזדמנות להתבונן בתהליך פולשני בסביבה מתאימה מבחינה פיזיולוגית 2. עד כמה גידולים במוח האדם מודאגים, המודלים orthotopic זמין כרגע מבוססים או על ידי הזרקת תאים stereotaxic של המתלים או ההשתלה של פיסת מוצק של הגידול בהליך craniotomy מסובך 3. בטכניקה שלנו אנחנו קוצרים תאים בתרבית רקמה ליצירת ההשעיה תא נהג להשתיל ישירות לתוך המוח. משך הניתוח הוא כ 30 דקות, כמו עכבר שצריך להיות במטוס כירורגית מתמיד, זריקות הרדמה משמש. העכבר ממוקם לנענע stereotaxic על ידי Stoetling (איור 1). בירכתי הספינהאה באזור הניתוח הוא ניקה והכין, מבצעים חתך, ועל גבחת נמצא כדי לקבוע את המיקום של craniotomy. מיקום craniotomy הוא 2 מ&quot;מ ימינה, 1 מ&quot;מ מקורי כדי גבחת. העומק הוא 3 מ&quot;מ מפני השטח של הגולגולת, ותאי מוזרקים בשיעור של μl 2 כל 2 דקות. העור מאוחה על ידי תפירה עם 5-0 PDS, והעכבר מותר להעיר על כרית חימום. מניסיוננו, בהתאם לקו הסלולרי, הטיפול יכול להתבצע בין 7-10 ימים לאחר הניתוח. משלוח סמים תלויה בהרכב התרופה. לטיפול בקרינה העכברים מורדמים, והכניסו מותאם אישית עשה לנענע. עופרת מכסה את גופו של העכבר חושף רק את המוח של העכבר. המחקר של tumorigenesis ואת ההערכה של טיפולים חדשים עבור GBM דורשים מדויקות לשחזור גידול במוח במודלים של בעלי חיים. לכן אנו משתמשים במודל המוח orthotopic ללמוד את האינטראקציה של microenvironment של המוח הגידול, על מנת לבחון את effectivenESS של סוכני טיפוליות שונות עם וללא קרינה.

מטרת מאמר זה היא לתאר את השימוש במודל גליובלסטומה orthotopic ללימודי chemoradiation. מאמר זה יהיה ללכת על פי עיבוד בתא, השתלה, והקרנות של העכבר באמצעות המודל תוך גולגולתי.

שילוב הקרנות של מודל העכבר Orthotopic המוח גידול

גליובלסטומה מולטיפורמה (GBM) הם גידולי המוח הראשוניים השכיחים והאגרסיביים ביותר בבני אדם בוגרים1. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית ב...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר, להדגים ולטפל בתאי גליובלסטומה שהושתלו תוך-גולגולתית במוחו של עכבר. מטרה זו מושגת תחילה על ידי הכנת התאים ולאחר מכן על ידי השתלתם במוחו של עכבר. לאחר ההליך הכירורגי, גדל במוח גידול שניתן להעביר עליו ניסויים עם טיפולים שונים.בסופו של דבר, עקומת הישרדות יכולה להראות אם הטיפול היה יעיל או לא. להשלכות של טכניקה זו יש חשיבות עבור הטיפול ב-glioblastoma, כיוון שהיא עשויה להוות דרך יעילה יותר לבחינת טיפולים חדשים, כגון תרופות וקרינה, בהשוואה לתרביות רקמה. התחל בגידול התאים הרלוונטיים, כגון תאי U 87, עד להגעה ל-80% confluence. ב-DMEM עם 10% FBS, בקבוק בנפח 125 cubic centimeter יספק מספיק תאים להשתלה בחמישה עכברים; שאב את המצע מהתאים, ושטוף את התאים קצרה ב-10 milliliters של PBS ללא סידן או מגנזיום תוך써 ערבוב ידני.לאחר שאיבת תמיסת השטיפה, יש להוסיף טריפסין לתאים למשך 10 עד 15 דקות, ולאחר מכן לנטרל את הטריפסין באמצעות 15 מיליליטר של מדיום. כעת העבירו את כל התאים והמדיום לתוך מבחנה קונית של 50 מיליליטר. שני בקבוקוני תאים יכנסו למבחנה אחת.סובב את התאים במהירות של 1600 RPM למשך שבע דקות והסר את supernatant לחלוטין באמצעות שאיבה. השהה מחדש את המשקע ב-10 milliliters של PBS קר, ושטוף את התאים על ידי פיפטינג עדין של התמיסה למעלה ולמטה עד להשגת סספנסיות עכורה ואחידה. לאחר מדידת ריכוז התאים באמצעות מונה תרביות, חזור על שטיפת ה-PBS כדי להבטיח צמיחה אופטימלית של הגידול.כוון את הריכוז הסופי של תאי U 87 ל-200,000 תאים למיקרוליטר. קווי תאים אחרים עשויים לדרוש ריכוז שונה לצמיחה אופטימלית של הגידול. לאחר שהתאים הוכנו להזרקה, שמור אותם על קרח והמשך בהכנת בעל החיים.התחילו בהכנת העכברים על ידי מתן חומר הרדמה לעכברי המאכסן. לאחר כ-15 דקות, ודאו שהעכברים אינם רגישים לכאב באמצעות צביטה בבהו. לאחר ההרדמה, מרחו משחה על העיניים כדי למנוע מהן להתייבש.לאחר מכן, הנח את העכבר על משטח התמיכה של המסגרת הסטריאוטקסיטיקה. תלה את השיניים בחריץ של מוט הפה. לאחר מכן, מקם את משטח התמיכה בתוך המסגרת.כעת, כדי לייצב את הראש, התקינו לעכבר מגן אף, ולאחר מכן הכניסו בעדינות את מוטות האוזן לתוך תעלת האוזן. אין להדק את המוטות הללו יותר מדי, שכן הדבר עלול לגרום לשברים בגולגולת או לחנק של העכבר. בשלב זה, ודאו שהראש נמצא במצב מאוזן.ההכנה הסופית היא להעביר על הראש תמיסת אלכוהול ותמיסת יוד לסירוגין, שלוש פעמים כל אחת, ולסיים במריחה רביעית של אלכוהול. התחילו את ניתוח ההשתלה בחתך שמתחיל מאחורי העין הימנית ונמשך באלכסון לאחור לכיוון הצד השמאלי האחורי של הגולגולת. אורך החתך צריך להיות כ-10 עד 15 מילימטרים.השתמשו במקלון צמר כדי להפריד באיטיות את החתך, כך שתחשפו את הגולגולת, נגבו את הקרום שנמצא בין הגולגולת לעור, וספגו דם או דימום מוגבר. כעת, אתרו את ה-bgma וסמנו את מיקומה של מזרקת המילטון מזכוכית בנפח 10 µL מעליה באמצעות טוש לביד. סמנו נקודה שתי מילימטרים מימין ואחד מילימטר קדמה ל-bgma, קרוב לקו התפר הקדמי.כעת הוציאו את המזרק וקדחו חור קטן בגולגולת במיקום המסומן. מקדח הקידוח הוא בגודלו של מחט 22 gauge. אפשרו למקדח לבצע את הקידוח אל תוך הגולגולת.אין צורך בלחץ נוסף. באמצעות מזרק עם מחט במידה 30 עד 33, טענו את המזרק עם 5 µL של תאי תאים שעורבבו היטב, ולאחר מכן חברו אותו מחדש למסגרת. יישרו את המחט עם החור בגולגולת והורידו אותה עד לפני השטח של הגולגולת.הורד את המחט שלושה מילימטרים והמתן שתי דקות. הפסקה זו מפחיתה את הסיכון לטראומה. לחץ באיטיות על הבוכנה כדי להשתיל את התאים בקצב של כ-1 µL לדקה.הימנעו בקפידה מכל זרימה חוזרת לאחר השתלת התאים האחרונים. השאירו את המחט במקומה למשך שתי דקות נוספות כדי לאפשר לכל התאים להתמקם. לאחר ההמתנה, שלפו בעדינות את המחט מהמוח ונגבו בזהירות את החור בעזרת מקל צמר גפן.כעת, באמצעות תפר PBS 5-0, סגרו את החתך בכשלושה תפרים. הניחו את העכבר על משטח חימום ובמידת הצורך, מרחו שוב משחת עיניים.ברגע שהעכבר מרים את ראשו או מזיז את כתפיו, החזירו אותו לכלוב מגוריו. מהרגע של הזרקת ההרדמה, הליך זה אורך בין 30 ל-60 דקות. אם העכבר לא התניע לאחר 90 דקות, ייתכן שלא יתאושש, ובמקרה זה הרדמה למטרת קטיל (euthanasia) עשויה להיות חלופה יעילה.כמו כן, אם מופיע דימום מוגבר או אם הגולגולת נסדקת בכל שלב במהלך הפרוצדורה, מומלץ לבצע המתת חסד. בהתאם לסוג של קו התאים, ניתן לבצע טיפול בקרינה בעכברים חמישה עד שבעה ימים לאחר ההשתלה. לדוגמה, ניתן להשתמש ביחידה לרדיותרפיה מסוג ortho voltage לצורך הטיפול בקרינה.השתמשו בטכניקות דימות כגון B-L-I-M-R-I או CT כדי לדמיין את הגידול לפני חלוקת העכברים באופן אקראי לקבוצות הניסוי. לאחר השתלת התאים, גידולים נוצרו בדרך כלל בתוך שבועיים עד ארבעה שבועות, בהתאם לסוג שורת התאים. עם מותם של העכברים, בוצע צביעה של רקמות המוח כדי לבחון את הגידול.הערכה חשובה של יעילות הטיפול היא שרטוט עקום הישרדות קפלן-מייר (Kaplan-Meier). עקומה זו משווה את תוחלת החיים הממוצעת לאחר ההזרקה של בעלי חיים שעברו טיפול תרופתי, טיפול בקרינה או טיפול משולב. לאחר הפיתוח הזה, טכניקה זו סללה את הדרך למחקר בתחום האונקולוגיה לבחון טיפולים בגידולי מוח ובעכברים.

combination-radiotherapy-in-an-orthotopic-mouse-brain-tumor-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הגידול בחולים המוח שגרתי לעבור הקרנות גולגולתי, ואף מועיל, טיפול זה לעתים קרובות תוצאות תפקוד קוגניטיבי מתישה. זו הבעיה הבלתי פתורה רציני כרגע, לא נותר קליני, העלתה את המאמצים שלנו כדי לתכנן תא גזע טיפולים מבוססי להתאוששות של קרינה הנגרמת decrements קוגניטיבי.

גזע להשתלות אסטרטגיות Cell לשיקום של ליקוי קוגניטיבי נגרמת על ידי הקרנות גולגולתי

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

הסרטון מדגים את טכניקת החיסון האורתוטופית לסרטן השד במודל עכבר. טכניקה זו מייצרת שיעור גידול גבוה עם פחות שונות בגודל הגידול וצורתו בהשוואה להזרקה תת עורית או לא ניתוחית.

הזרקה אורתוטופית: השתלת תאים סרטניים ספציפיים לרקמה בעכבר בוגר

סרטון זה מדגים השתלה של תאי גידול במוח העכבר על ידי ביצוע הזרקה תוך גולגולתית.

מודל אורתוטופי תוך גולגולתי: הליך להשתלת תאים סרטניים במוח עכבר

בעבר, הקרנה בעלי חיים קטנים בוצעה בדרך כלל ללא יכולת למקד נפח הגידול מוגדרים היטב היטב. המטרה הייתה כדי לחקות את הטיפול של גליובלסטומה אנושי אצל חולדות. באמצעות פלטפורמה הקרנה בעלי חיים קטנים, ביצענו מונחה MRI תלת-ממד קונפורמיים הקרנה עם חיית המחמד המשנה של אמצעי אחסון מבוססי לחיזוק באווירה פרה.

PET ו- MRI מודרך הקרנה של מודל גליובלסטומה עכברים באמצעות מיקרו-בעוצמה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול על ההכנה ועל המינהל stereotaxic של לימפוציטים אנושיים allogeneic בעכברים immunodeficient נושאת גידולים במוח העיקרי אנושי orthotopic. מחקר זה מספק הוכחה-של-קונספט הכדאיות והן את היעילות antitumor של המועבר intrabrain immunotherapies הסלולר.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

מחקר על אסטרטגיות טיפול teratomas נגזר תאי גזע pluripotent חשוב התרגום קלינית של טיפול בתאי גזע. כאן, אנו מתארים לפרוטוקול, ראשית, להפיק תאי גזע-derived teratomas בעכברים ולאחר, מכן, ל סלקטיבי היעד ולטפל ויוו שימוש בעוצמה קטנה-חיה של גידולים אלה.

טיפול ממוקד, סלקטיבי של Teratomas נגזר תאי גזע Pluripotent באמצעות קרינה חיצוני קרן במודל של חיית-קטן

מידול גרורות מוח תוך גולגולתי מסובך על ידי חוסר יכולת לפקח על גודל הגידול ותגובה לטיפול בשיטות מדויקות ובזמן. המתודולוגיה שהוצגה זוגות הזרקת גידול תוך גולגולתי עם ניתוח הדמיית תהודה מגנטית, אשר בשילוב, מטפח זריקות מדויקות ועקביות, ניטור משופר של בעלי חיים, ומדידות מדויקות של נפח הגידול.

מידול גרורות מוח באמצעות הזרקה תוך גולגולתית והדמיית תהודה מגנטית

כאן אנו מציגים פרוטוקול לביצוע טומוגרפיה מבוססת טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים פרה-קלינית במודל גליובלסטומה עכברוש באמצעות אלגוריתמים שפותחו בתוך הבית כדי לייעל את הדיוק והיעילות.

פוזיטרונים פליטת טומוגרפיה מבוסס מינון ציור הקרנות טיפול במודל חולדת Glioblastoma באמצעות פלטפורמת מחקר קרינה בבעלי חיים קטנים

במאמר זה אנו מתארים מודל עכבר אורתוטופי פרה-קליני עבור GBM, שהוקם על ידי הזרקה תוך-גולגולתית של תאים שמקורם בגידולי מודל עכבר מהונדסים גנטית. מודל זה מציג את סימני ההיכר של המחלה של GBM אנושי. עבור מחקרים תרגומיים, הגידול במוח העכבר נמצא במעקב על ידי MRI in vivo והיסטופתולוגיה.

מודלים אורתוטופיים תרגומיים של גליובלסטומה מולטיפורמה

פיתוח מודלים אורתוטופיים של גידולי מוח בילדים דורש דיוק קפדני, תוך שימוש במכשיר סטריאוטקסי להשתלת תאים סרטניים בצורה מדויקת. המתודולוגיה המוצגת כאן מתארת את השלבים הכרוכים בהכנת תאי גידול במוח, ביצוע זריקות תוך גולגולתיות ויישום מערכת ניטור לאחר ניתוח להערכת השתלת גידול מוח.

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

למד שתלת תאי גליובלסטומה במוח עכברים לחקר אונקולוגיה באמצעות מודל אורתוטופי. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות טיפולים חדשים כמו כימותרפיה והקרנות.

שילוב הקרנות של מודל העכבר Orthotopic המוח גידול

גלה סרטונים נוספים