Name: השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: למדו השרשה תוך גולגולתית של תאי GL261 בעכברי C57BL/6 ליצירת מודל גליומות. השיטה מאפשרת מעקב כמותי בזמן אמת של התקדמות הגידול באמצעות הדמיה ביולומינסצנטית תלת־ממדית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ברצוננו להודות לד&quot;ר יהושע ב &#39;רובין על המתנה הנדיבה של פלסמידים למערכת lentivirus וכן ראו Mahil עבור ההצעה מועיל על הכנת התאים GL261 לוק. אנו מודים לתלמידים תמיכה גידול במוח מחקר (SSBTR), נוירולוגיות בארו קרן קרן וואלאס על תמיכתם הנדיבה. ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש החולים סנט ג&#39;וזף המרכז הרפואי.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
<li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Living+Image+Software+Version+4.0.+VivoVision+Systems%22">Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems</a>. , (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 2nd Ed, Academic Press. (2001).</li>
<li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li>
</ol>

גישה חופשית המאמר הזה הוא בחסות Caliper מדעי החיים.

Inoculum התא הוא החדיר בעומק של 2.6 מ&quot;מ מפני השטח של המוח לאחר יצירת כיס 0.4 מ&quot;מ. כדי להבטיח השמה עומק נכונה של המחט רנטגן ניתן לקחת באמצעות C-Arm או מכשיר דומה רנטגן תמונה הגברת, אך זו היא אופציונלית. סיבוכים של הניתוח עשוי להיווצר אם בעל החיים אינו מסומם כהלכה, ובנקודה בעלי חיים עשוי לעבור במהלך עירוי לתא. זה יכול לגרום דליפה של תערובת תאים או דימום מן המסלול מחט. דליפה של תאים מחוץ לרחם גורם צמיחה של תאים סרטניים. חשוב גם לא לנקב את החדר שבו ניתן לעשות אם burrhole עשוי המדיאלי מ&quot;מ 2.3 המתואר בפרוטוקול 4. מיקום נכון של המחט התפשטות התא נבדק על ידי יציקת עכבר עם צבע 2 μl מתילן כחול לנתח את רקמת המוח כדי לבדוק את המיקום של הצבע רווי. בפרוטוקול זה השתמשנו ספקטרום IVIS in vivo הדמיה המערכת tהוא חי תוכנה תמונה (v 4.0) מיועד לשימוש עם מכשיר זה. (Caliper מדעי החיים). כל השוואה במערכת הדמיה vivo ו כלי ניתוח התמונה ניתן להשתמש כדי להשיג תוצאות דומות. מערכות אלו מספקות כמה יתרונות על פני הדמיה המסורתית תהודה מגנטית (MRI) כדי לעקוב אחר הצמיחה של הגידול תוך גולגולתי ניסיוני. הברורה ביותר היא העלויות היחסית של 2 מכשירים - מכונות בבעלי חיים MRI הם הרבה יותר יקר בדרך כלל דורשים את שירותיו של טכנאי מיומן MRI. בשנת vivo הדמיה כגון מה שתואר כאן ניתן לעשות זאת על ידי משתמש הקצה. נתוני פליטת אור הוא כמותי, בעוד quantitation של נתוני ה-MRI היא גוזלת זמן מדויק במקצת. יתר על כן, בתמונות MRI להראות בצקת ודלקת בנוסף תאים סרטניים זה יכול להיות קשה להפריד בין הגידול אפקט הטיפול. מסיבות אלה השגת מדידות מדויקות של נפח הגידול הגובר יכול להיות אתגר. פליטת אור דורש ATPולכן רק תאים סרטניים חיים לתרום את הנתונים גודל הגידול. למרות זאת, יש כמה יתרונות על ה-MRI אם המכשיר זמין. תאים לא צריך להיות שסומנו בסמן bioluminescent להיות דמיינו ידי בדיקת MRI. היכולת לדמיין peri-tumoral בצקת עשוי להיות יתרון עבור חלק פרוטוקולי הניסוי. כוח של טכנולוגיות הן כי באמצעות אחד אינו מונע את השימוש של האחר, כך ניתן לקבל נתונים על הצמיחה של הגידול, כמו גם את נוכחותו של בצקת peri-tumoral ודלקת מן החי זהה כאשר שניהם זמינים טכנולוגיות החוקר.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב או אספקת </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> GL261 luc2-BioWare Ultra </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco של הנשר השתנה בינוני (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> עוברית עגל סרום (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate שנאגרו מלוחים (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr עכברים </td><td> NCI-פרדריק </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA דמעות עיניים חומר סיכה משחה </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (hydrochloride קטמין) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (hydrochloride xylazine) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> בעלי חיים קטנים Stereotaxic Instrument </td><td> Kopf מכשירים </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump עם SYS-Micro4 Controller </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> UMP3-1 </td><td> אם לא זמין, ניתן להחדיר באופן ידני </td></tr><tr><td> 10μl מזרק עם מחט מד 26 משופעים </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison מלקחיים </td><td> העולם מכשירים Precision </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> פנפילד מבתר </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16G ½ 1 Precision Glide מחט </td><td> Beckton, דיקינסון החברה (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> להב כירורגי טפל </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> 15 גודל Blade </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> תפר Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> עצם שעווה </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine-יוד ספוגית מקלות </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferin מלח אשלגן </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isoflurane) </td><td> בקסטר </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI מיקרוסקופ Pentero </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td></td><td> כל מיקרוסקופ כירורגי יספיקו </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS ספקטרום עם מערכת הרדמה אופציונלי </td><td> Caliper מדעי החיים </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

השרשה תוך גולגולתי עם 3d לאחר in vivo bioluminescent הדמיה של gliomas murine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Glioma העכבר 261 (GL261) מזוהה במערכת מודל vivo כי משחזר רבות מהתכונות של האדם multiforme glioblastoma (GBM). קו התא היה מושרה במקור על ידי הזרקה תוך גולגולתי של 3 cholantrene-מתיל לתוך C57BL / 6 זן עכבר syngeneic 1, ולכן המוסמכת immunologically C57BL / 6 עכברים ניתן להשתמש. בעוד אנו משתמשים GL261, פרוטוקול הבאים יכולים לשמש להשתלה וניטור של כל מודל העכבר תוך גולגולתי הגידול. GL261 היו תאים מהונדסים ביציבות להביע גחלילית בלוציפראז (GL261 לוק). אנחנו גם יצר את קו בהיר GL261-luc2 התא על ידי transfection יציב של הגן luc2 הביע מן האמרגן CMV. עכברים C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (גרסה של לבקנים C57BL / 6) מן המכון הלאומי לסרטן, פרדריק, MD שימשו כדי לחסל את הנחתה אור הנגרמת על ידי עור פרווה שחור. עם השימוש C57BL לבקן / 6 עכברים; בתחום ההדמיה vivo באמצעות ספקטרום IVIS in vivo imהזדקנות מערכת אפשרי מיום ההשתלה (Caliper מדעי החיים, Hopkinton, MA). GL261 לוק ו-GL261 luc2 שורות תאים הראו אותו בהתנהגות vivo כמו GL261 תאים ההורים. חלק מהתכונות היסטולוגית משותפת נוכח GBMs האדם מודל זה עכבר כוללים: נמק הגידול, pseudopalisades, neovascularization, פלישה, hypercellularity, ודלקת 1. לפני ההשתלה החיות היו מורדמים בזריקה intraperitoneal של קטמין (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג), xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו - עצירות (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג), להציב מנגנון stereotactic ואת חתך נעשה עם אזמל על הגולגולת קו האמצע. Burrhole נעשה האחורי 0.1mm ל 2.3mm גבחת וגם בצד ימין של קו האמצע. מחט הוכנס לעומק של 0.4mm 3mm ומסוגר עד לעומק של 2.6mm. שני μl של GL261 לוק או GL261-luc2 תאים (10 7 תאים / מ&quot;ל) היו חדורים במשך 3 דקות. Burrhole נסגרעם bonewax ואת החתך היה sutured. בעקבות ההשתלה stereotactic התאים bioluminescent הם לגילוי מיום ההשתלה הגידול ניתן לנתח באמצעות תמונה 3D שחזור תכונה של המכשיר ספקטרום IVIS. בעלי חיים מקבלים זריקה תת עורית של 150μg luciferin / ק&quot;ג משקל גוף 20 דקות לפני הדמיה. נטל הגידול לכמת באמצעות פליטת אור הגידול מתכוון לאורך זמן. נושאות גידולים בעכברים נצפו יומי כדי להעריך את התחלואה היו מורדמים כאשר אחד או יותר מהתסמינים הבאים נוכחים: עייפות אי ambulate, יציבה כפופה, אי החתן, אנורקסיה שגורם לאובדן&gt; 10% ממשקל. גידולים ניכרו כל החיות על necropsy.

ההשתלה תוך גולגולתי של תאים לתוך GL261 C57BL / 6 עכברים מייצרת gliomas ממאיר לשחזר רבים מסימני ההיכר של multiforme glioblastoma האדם. השתמשנו GL261 התאים ביציבות להביע בלוציפראז כדי לאפשר לנו להשתמש<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה לעקוב אחרי התקדמות הגידול. ניתוח 3D<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה הם הפגינו.

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

גליאומה 261 (GL261) בעכברים מוכרת כמערכת מודל in vivo המשחזרת תכונות רבות של גליובלסטומה מולטיפורמה (GBM) אנושית. ה...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא ליצור מודל תוך-גולגולתי של גליומות שניתן לעקוב אחריו כמותית לאורך זמן באמצעות דימות in vivo. דבר זה מושג תחילה על ידי קציר של תאי גליומה שגודלו בתרבית עם השתקפות לומנסנטית, והכנת תרחיף תאים בריכוז של 1-2 × 10⁷ תאים למיליליטר. השלב השני של הפרוצדורה הוא השתלה סטריאוטקטית של התאים שנקצרו אל תוך האונה הפרונטלית הימנית של מוח העכבר.לאחר מכן מזריקים Luciferian תת-עורית לבעל החיים ומייצרים עקומה קינטית של ביטוי ה-Luciferian. השלב הסופי של הפרוצדורה, באמצעות מערכת הדמיה in vivo מסוג IVUS spectrum, הוא ביצוע הדמיות סדרתיות של בעלי החיים ומעקב אחר צמיחת הגידול. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות את צמיחת תאי הגידול ואת המיקום התלת-ממדי של הגידול באמצעות אות ביו-לומנסנטי הניתן לזיהוי בעזרת מערכת הדמיה in vivo מסוג IVUS spectrum.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון MRI הוא שדימות ביולומינסנציה מזהה תאי גידול חיים בלבד ואינה דורשת טכנאי MRI מיומנ במיוחד. היא מאפשרת גם הדמיה סימולטנית של בעלי חיים בפרק זמן קצר יותר. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום הנוירו-אונקולוגיה, כגון מהי היעילות של טיפולים חדשניים לגידולי מוח.בתוך הגוף (In vivo), על אף ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי גידולי מוח, ניתן ליישמה גם על מערכות איברים אחרות, כגון סרטני ריאה, ערמונית וכבד. כדי להכין את הפרוצדורה, טענו לפחות 3 µL של תרבית תאי הגליומה למזרק בנפח 10 µL ואורך 50 mm עם מחט בעלת קצה משופע במידה 26 gauge.וודאו שהתאים אינם גושים, אחרת ייתכן שיהיה צורך למלא מחדש את המזרק. את העכבר המורדם מניחים במסגרת הסטריאוטקטיקה וראש העכבר מקובע באמצעות תפס הפה כפי שמוצג בתמונה זו. הכניסו את המזרק המלא למזריק המיקרו (micro injector).כדי להתחיל בהליך הכירורגי, בצעו חתך בעור באמצעות להב בגודל 15 ופינצטה בעלת שיניים. בצעו חתך של 10 עד 15 מילימטרים בין עיני בעל החיים, לכיוון האוזניים, כדי לחשוף את ה-bgma. ודאו כי זיהיתם כראוי את ה-bgma עבור.ניתן להתבלבל בקלות עם אזור הסינוס הנמצא דיסטלית ל-bma. באמצעות מחט במידה 16 gauge ובאורך של שבוע ורבע אינץ', צרו את חור הקידוח 0.1 מילימטרים פוסטריורית לתפר הקורונלי ו-2.3 מילימטרים מימין לקו האמצע, תוך הפעלת לחץ קל על המחט ובמקביל סיבובה עד לחדירה לגולגולת וחשיפת המוח; הזריזו את מחט ההזרקה באמצעות המיקרו-מזרק עד שתיגע רק בפני השטח של המוח. ממיקום זה, העמיקו את המחט עד לעומק של שלושה מילימטרים.השאירו את המחט במקומה למשך שלוש דקות. לאחר מכן, משכו את המחט ב-0.4 millimeters לעומק כולל של 2.6 millimeters מתחת לפני השטח של המוח. פעולה זו יוצרת כיס קטן שבו יוזרקו התאים כדי להבטיח מיקום ועומק נכונים.ניתן לצלם תמונות רנטגן של עומקי המחט באמצעות C-arm; יש להזרים את תרחיף התאים במשך שלוש דקות באמצעות המיקרו-מזרק (micro injector) המכוון לנפח של 2000 nanoliters ובקצב הזרמה של 667 NANOLITERS לדקה. לאחר ההזרמה, יש להשאיר את המחט במקומה למשך שתי דקות כדי למנוע דליפה מאתר ההזרקה. לאחר מכן, יש לשלוף את המחט החוצה באיטיות ובשלמותה.לאחר שליפת המחט, כסו את חור הקידוח בשעוות עצם בעזרת דיסקטור פנפילד (Penfield dissector). לבסוף, תפרו את החתך באמצעות תפר Vicryl 4-0, תוך וידוא שלא נותרו מרווחים גדולים בעור. In vivo.דימות ביו-לומינצנציה מבוצע באמצעות מערכת הדימות IVIS Spectrum. הפעילו את תוכנת ה-living image ואתחלו את מערכת הדימות IVIS Spectrum על ידי לחיצה על כפתור initialize IVIS system בפינה הימנית התחתונה של לוח הבקרה. בחרו במצב דימות לומינצנציה (luminescent imaging mode) בפינה השמאלית העליונה של לוח הבקרה כדי לקבוע את הזמן האופטימלי לדימות ביו-לומינצנציה.לאחר הזרקת לוציפררין לבעל החיים, יש לבצע תחילה מחקר קינטיקה כאשר בעל החיים תחת הרדמה בתא הדימות. יש לצלם את התמונה הראשונה כחמש דקות לאחר הזרקת הלוציפררין כדי ליצור עקומה קינטית של ביטוי הלוציפררין. הגדירו רצף לצילום תמונות מדי שלוש דקות למשך עד שעה.לחצו על כפתור הגדרת הרצף (sequence setup) בלוח הבקרה. בלוח הבקרה, הגדירו את ההגדרות עבור התמונה הביולומינסצנטית הראשונה ברצף, החל מ-medium binning וחשיפה אוטומטית (auto exposure).כדי לקבוע את החשיפה האופטימלית, מומלץ להשתמש בזמן. בחרו את כפתור ההשהיה (delay) בעורך הרצפים והגדירו זמן השהיה של שלוש דקות בין כל רכישה. לחצו על הוספה (add) בעורך הרצפים, ואז יתווספו פרמטרי הרכישה לטבלה.חזור על שלב זה עבור כל תמונה ברצף לאחר קביעת העקומה. ניתן לקבוע את זמן ההדמיה האופטימלי על ידי שרטוט עוצמת האות אל מול הזמן כדי לקבל את האות החזק והמדויק ביותר. יש להדמות את בעלי החיים בנקודת ספירת הפוטונים הגבוהה ביותר in vivo, שהיא כ-25 דקות לאחר הזרקת ה-Luciferian, כפי שמוצג בעקומה זו.כדי להשיג את התמונה של בעל החיים הניסויי, השתמשו באפשרות auto תחת זמן הרכישה (acquisition time). פעולה זו מאפשרת לתוכנה לקבוע את ה-bin ואת משך הזמן האופטימלי לרכישת התמונה. שמרו את קבצי התוכנית ואת הערות התמונה העוקבות בספריית המחשב של המשתמש.כדי להתחיל בדימות תלת-ממדי, השתמשו באשף הדימות כדי לבחור את הגשש של חלבון הדיווח firefly. בחלון bioluminescence delit, בחרו ב-next, ולאחר מכן יופיעו על המסך שש בחירות ספקטרליות שיירכשו; בחרו ב-acquire sequence והתמונות יצולמו באמצעות ההגדרות המתאימות תחת לשונית surface topography. בלוח הכלים, השתמשו במסכה (mask) על התמונה כדי להתאימה למתווה של בעל החיים.כדי ליצור רשת שחזור של טופוגרפיית פני השטח של בעל החיים, עברו ללשונית DLI 3D reconstruction בפלטת הכלים ובחרו ברכישות התמונה המתאימות לשחזור האות. ודאו ששריר (muscle) מופיע תחת תכונות הרקמה (tissue properties) וחוליית אור (firefly) תחת ספקטרום המקור (source spectrum). לחצו על reconstruct תחת לשונית analyze, ואז אמורים להופיע שחזור התלת-ממד של פני השטח של בעל החיים והשחזור התואם של מקור האות.ניתן להתחיל בניתוח הנתונים לאחר שהתמונה נרכשה ונשמרה; גשו לקובץ התוכנית על ידי לחיצה על כפתור הדפדוף (browse) ובחירת הקובץ. ניתן למצוא את מידע התמונה תחת תפריט "הצגת מידע התמונה" (view image information). כמת את עוצמת האות על ידי בחירה בכפתור כלי הגדרת אזור העניין (ROI).וודאו שהתמונה מנותחת במצב פוטונים (photon mode) על ידי בחירה ב-photon. ברשימה הנפתחת בפינה השמאלית העליונה של פאנל בקרת התמונה, בחרו את כפתור ה-ROI למדידה (measurement ROI) מרשימת סוגי ה-ROI ובחרו את צורת ה-ROI הרצויה. האפשרויות כוללות עיגול, ריבוע או רשת.קבעו את מיקום ה-ROI על ידי גרירת בחירת צורת ה-ROI לאזור המכיל את האות הביולומינסנטי. ודאו שכל אזורי העוצמה בתמונה שנרכשה מכוסים. לבסוף, לחצו על כפתור המדידה (measure) כדי לחשב את עוצמת האות של ה-ROI.תווית ה-ROI מוצגת. השתבצות תאים מוצלחת ניכרת כאשר ניתן לזהות את התאים המשתבצים באמצעות דימוי ביולומינצנציה ביום הניתוח, ללא קשר לשאלה אם התאים עברו טרנספקציה עם הגן luck או luck two. גרף זה עוקב אחר צמיחת תאי גידול GL 2 6 1 luck בעכבר albino C 57 black six; הביולומינצנציה נמדדה מדי שלושה ימים וסורטטה כספירת פוטונים in vivo לעומת מספר הימים לאחר ההשתבצות.התצלומים מראים בילומינסנציה בנקודות זמן שונות. הצבע מהווה אינדיקציה לבילומינסנציה, אשר היא יחסית למספר תאי הגידול. בעלי החיים מוחדרים למסגרת של קטילה הומנית (euthanization) בעת הופעת חולי או פגיעה ברווחתם.אף על פי שזהו אינו חלק סטנדרטי מניתוחים אלה, ניתן להוציא את המוח בניתוח ולהוסיף Lucifer באופן מקומי כדי לקבל תמונת sex vivo. יש לבצע זאת מיד לאחר הקטלת בעל החיים, כיוון שתגובת הביולומנסנס דורשת TP. גרף זה משווה את ספירות הפוטונים שהתקבלו מגידולים הנובעים מתאי GL 2 6 1 lux לעומת תאי GL 2 6 1 L two. התוצאות מממוצע של חמישה בעלי חיים מראות כי הגן L two מספק רמה גבוהה יותר של ביולומנסנס.האיור הבא מציג מספר מבטים של שחזור תלת-ממדי של השתלה תוך-גולגולתית של תאי GL 2 6 1 L, המיושרים עם השלד והמוח של העכבר. כמו כן, בוצע השוואה קינטית בין הזרקות תת-עוריות להזרקות תוך-בטניות; שלוש דקות לאחר הזרקת Lucifer, העכבר הורדם וצולמה תמונה בכל שלוש דקות למשך שעה, ולאחר מכן בכל שש דקות, כדי ליצור עקומה קינטית של ביו-לומינסנציה. כפי שמוצג כאן, נתיב מתן תת-עורי של Lucifer, המוצג באדום, עדיף על פני הזרקה תוך-בטנית, המוצגת בשחור, והזמן האופטימלי לדימות בעלי החיים הוא כ-25 דקות לאחר הזרקת ה-Lucifer.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע את הפרוצדורה הכירורגית תוך שעה אם היא מבוצעת כראוי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון MRI או דימיון פלואורסצנטי כדי לענות על שאלות נוספות. לדוגמה, האם קיימת בצקת מסביב לגידול או אילו שינויים מולקולריים או ביוכימיים אחרים מתרחשים בתוך הגידול ומסביבו.לאחר צפייה בסרטון זה, תגיעו להבנה טובה של אופן ביצוע השתלה תוך-גולגולתית ודימות בתלת-ממד in vivo של תאי גליומה של עכברים.

intracranial-implantation-with-subsequent-3d-vivo-bioluminescent

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בלוציפראז, שונה אדם xenografts גידול במוח ניתן לקבוע intracranially בעכברים athymic, עם ניטור הבאים של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור. בשילוב עם ניתוח הישרדות, ניטור פליטת אור הוא כלי מחקר הכרחי לצורך בדיקות טרום קליניים של טיפולים נשקלת לטיפול בגידולים במוח.

הקמת גידול תוך גולגולתי xenografts המוח עם ניתוח בדיעבד של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור

הדמיה של פליטת אור ועין מתנהלת פעילות היפוקסיה, גורם 1α מוחל לפקח היפוקסיה תוך גולגולתי התפתחות גידולים של סרטן השד מודל גרורות במוח העכבר.

בתחום ההדמיה vivo של פליטת אור Dynamics היפוקסיה גידול של גרורות סרטן השד המוח במודל של עכברים

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

מקור: Clark, A.J., et al. הדמיית ביולומינסנציה של מודל בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית לגליובלסטומה. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיית ביולומינסנציה כדי לעקוב אחר התקדמות גליובלסטומה במודל עכבר בעל יכולת חיסונית, תוך שימוש בתאי גידול המבטאים לוציפראז ולוציפרין כדי לכמת את צמיחת הגידול באופן לא פולשני.

הדמיה ביולומינסנציה של מודל עכבר בעל יכולת חיסונית לגליובלסטומה

הקמנו מודל גליובלסטומה orthotopic קליפת המוח בעכברים לשני הפוטונים במיקרוסקופ intravital שמשחזר אילוצי biophysical בדרך כלל במשחק במהלך הצמיחה של הגידול. חלון זכוכית כרוני החלפת הגולגולת מעל לגידול מאפשר המעקב של התקדמות הגידול לאורך זמן על ידי שני פוטונים במיקרוסקופ.

Glioblastoma עכבר דגם orthotopic שמירה על אילוצי המוח של רקמת ריאה, פיסיים ומתאים לשני פוטונים במיקרוסקופ Intravital

תאי גליומה GL261 מספקים מודל שימושי של בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית של גליובלסטומה. מטרות פרוטוקול זה הן להדגים טכניקות מתאימות לניטור צמיחת גידול תוך גולגולתי באמצעות הדמיית ביולומינסנציה in vivo, ולאמת את התועלת של תאי GL261 שעברו שינוי בלוציפראז לחקר אימונולוגיה של גידול וגישות אימונותרפיות לטיפול בגליובלסטומה.

הדמיה פליטת אור של דגם עם מערכת חיסון בבעלי חיים לגליובלסטומה

הזרקה תוך-גולגולתי Orthotopic של תאים סרטניים שימש בחקר הסרטן ללמוד ביולוגיה גידול במוח, התקדמות, התפתחות, תגובה טיפולית. כאן אנו מציגים פלורסצנטיות מולקולרית טומוגרפיה של גידול xenografts, אשר מספק הדמיה intravital בזמן אמת, כימות של גידול המוני במודלים פרה גליובלסטומה.

קרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית עבור הדמיה In Vivo של גליובלסטומה Xenografts

לייזר לחיתוך מיקרו (LMD) היא טכניקה רגישה ומאוד לגילוי שניתן להשתמש בה כדי לחשוף מסלולים כי בתווך glioma טרוגניות ופלישה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול ממוטב כדי לבודד אזורים נפרדים מרקמת glioma באמצעות LMD לייזר ואחריו ניתוח טרנססקריפט.

לכידת לייזר מיקרודיסקציה של גלימה Subregions עבור אפיון מרחבית ומולקולרית של טרוגניות Intrאטומוראלי, הנחלים, ופלישה

אנו מתארים את ההשתלה התוך-פרנכימלית של תאי אב עצביים אנושיים שעברו התמרות עם וקטור מדווח כפול המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק-לוציפראז (GFP) במוח העכבר. לאחר ההשתלה, אות הלוציפראז נמדד שוב ושוב באמצעות תאים מושתלים in vivo bioluminescence ותאים מושתלים המבטאים GFP שזוהו בחתכי מוח באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית.

השתלה תוך-מוחית ומעקב ביולומינסנציה In Vivo של תאי אב עצביים אנושיים במוח העכבר

אנו מציגים גישה חדשנית למיקרוסקופ דו-פוטוני של העברת הגידול של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית לגליובלסטומה במודל עכבר.

מיקרוסקופיה תוך-חיונית דו-פוטונית של גליובלסטומה במודל מורין

מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים טכניקה שניתנת לשחזור גבוה להשתלות תוך-גולגולתיות.

השתלה תוך-גולגולתית סטריאוטקטית של גליובלסטומה קווי תאי זנוגרפט שמקורם בחולה בעכברים

למדו השרשה תוך גולגולתית של תאי GL261 בעכברי C57BL/6 ליצירת מודל גליומות. השיטה מאפשרת מעקב כמותי בזמן אמת של התקדמות הגידול באמצעות הדמיה ביולומינסצנטית תלת־ממדית.

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

גלה סרטונים נוספים