צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

המטרה הכוללת של הליך זה היא להסיר בניתוח בלוטות לימפה מעכבר מורדם. זה מושג על ידי לוקליזציה ראשונה של בלוטות הלימפה. בלוטות הלימפה נקצרות ואז החתך נסגר.

לבסוף, ניתן להשיג תרחיף תא בודד לניתוח ניסיוני. בסופו של דבר, ניתן להעריך אוכלוסיות לימפוציטים ברות קיימא על ידי זרימה ציטומטרית. הדגמה חזותית של טכניקה זו היא קריטית מכיוון שיש לראות לוקליזציה והסרה של בלוטות הלימפה על מנת לשלוט בהן.

לאחר הרדמת העכבר, יש למרוח משחת עיניים, להזריק בופרנורפין ולאשר טשטוש על ידי צביטת הבוהן, ואז להפוך את העכבר על צדו. ראשית, יש למקם את בלוטת הלימפה הברכיאלית ולאחר מכן לגלח את האזור שיש לנתח. לאחר הברשה של כל השערות הרופפות, מרחו חומר חיטוי על האזור ולאחר מכן בצעו חתך זעיר של כחמישה מילימטרים בגב ארבעת ה-Legg.

השתמש בשני זוגות מלקחיים כדי למתוח את החתך עד שניתן לראות את בלוטת הלימפה הברכיאלית, שיכולה להיראות אפרפרה או כהה יותר מהשומן שמסביב. לאחר מכן צבט את הפאשיה המכסה את בלוטת הלימפה בזוג מלקחיים אחד. הניחו את זוג המלקחיים השני רחוק ככל האפשר מתחת לבלוטת הלימפה ומשכו קלות את הממברנה מבלי לשבור את הרקמה שמסביב.

לאחר מכן השתמש בזוג המלקחיים הראשון כדי לשבור את הפאשיה ולהסיר את בלוטת הלימפה. אם בלוטת הלימפה נקצרה בהצלחה, יופיע כתם דם במקום בו הייתה בעבר בלוטת הלימפה. הנח את בלוטת הלימפה שנכרתה בתמיסה איזוטונית אם היא שוקעת, זה יאשר שהרקמה שנקטפה היא בלוטת לימפה ולא שומן.

לאחר מכן, ודא שאין שערות בפצע וסגור את החתך על ידי הדבקת שני החלק הפנימי של העור יחד ועל ידי הידוקם עם קליפס אחד עד שניים, בהתאם לגודל החתך. כעת מקם בלוטת לימפה מפשעתית וגלח את האזור שיש לנתח. לאחר הברשה של שערות רופפות, מרחו חומר חיטוי על האזור ולאחר מכן בצעו חתך זעיר של כחמישה מילימטרים מעל הכף האחורית ליד הבטן.

לאחר פתיחת החתך בשני זוגות מלקחיים כפי שהוצג זה עתה עבור בלוטת הלימפה הברכיאלית, זהה את בלוטת הלימפה המפשעתית השוכנת בתוך רקמת השומן שמסביב. לאחר מכן הסר את בלוטת הלימפה עם שני זוגות המלקחיים כפי שהודגם זה עתה. שוב, אשר קציר מוצלח של בלוטת הלימפה על ידי ציון כתם הדם המופיע במקום בו הייתה בלוטת הלימפה בעבר, ולאחר מכן זרוק את בלוטת הלימפה המפשעתית למיכל נפרד של תמיסה איזוטונית.

לאחר שנקטפו כל בלוטות הלימפה, הכניסו את העכבר לכלוב והוסיפו מזון רטוב כדי שהעכבר יוכל להאכיל בקלות. לאחר הניתוח כשש עד שמונה שעות לאחר מכן, בדוק את העכבר כדי לוודא שהוא אינו חווה כאב. שימו לב היטב כי היציבה, האינטראקציה בהליכה עם הקונגן ומראה הפרווה דומים לזו של עכבר בריא רגיל.

לבסוף, נתק את בלוטת הלימפה על ידי לחיצה עליה כנגד שקופיות חלביות בצלחת פטרי ולאחר מכן העביר אותה לצינור כדי לקבל תרחיף תא בודד. לאחר צביעת התאים עבור אנטיגנים מעניינים על פני התא, נתח את התאים על ידי ציטומטריית זרימה. כאן, דגימה קדימה וצדדית, מוצגות תרשימי פיזור עבור בלוטות לימפה שנקטפו מבעלי חיים מורדמים או שהוקרבו.

הפרופילים ואחוזי התאים בשערי הלימפוציטים החיים של שתי חלקות הפיזור זהים. הוכחה שניתוח בלוטות לימפה הוא טכניקה מתאימה לקצירת תאים לאחר השליטה בניתוח בלוטות הלימפה ניתן לבצע תוך חמש עד 10 דקות לכל עכבר אם הוא מבוצע כראוי.