Name: צומת Murine שטחית לימפה ניתוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: למד כיצד לבצע ניתוח להסרת צמתי לימפה שטחיים בעכברים מורדמים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תגובות חיסוניות לאורך זמן באמצעות ניתוח תאי לימפוציטים חיים בזרימתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים Lesage סילבי וכל חברי המעבדה של קריאה ביקורתית של פרוטוקול. עבודה זו נתמכה על ידי מענק (MOP-77545) מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). נטלי Labrecque נתמך על ידי מלגה בכיר FRSQ ומליסה מתייה קיבל אלכסנדר גרהם בל NSERC קנדה מלגות לתואר שני.

1. הכנה לפני הניתוח העכברים טופלו בהתאם המועצה הקנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים Anesthetise על ידי הזרקה של קטמין / xylazine (150/300 מ"ג / ק"ג, ה-IP) או על ידי שאיפה של isoflurane (2% חמצן 1 ליטר). אם ניתן, יש להשתמש isoflurane שכן היא מאפשרת שליטה טובה יותר של זמן ועומק ההרדמה. כמו כן, ניתנת חמצן בעת ​​ובעונה אחת התומכת את הפונקציות הפיזיולוגיות של החיה. יתר על כן, isoflurane מסולק ישירות על ידי הריאות, ולכן אינו מחייב את חילוף החומרים בכבד או בכליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק עצירות (0.05-0.1 מ"ג / ק"ג, SC) או אחר משכך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה על העיניים העכבר לפני הניתוח, כדי למנוע יובש בעיניים (אם isoflurane משמש). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא עכבר ישן של צובט ברגל, מגלגל את זנבו. אם העכבר לא מגיב, להמשיך עם הניתוח. </li></ol> 2. כירורגיה class = "jove_content"&gt; ניתן להסיר 4 של בלוטות הלימפה השטחיות (LN) על ידי ניתוח: 2 מפשעתי לבין הזרוע 2. הבידוד של LN קל יותר בעכברים רזים צעירים (6-8 שבועות) מאז נוכחות של רקמת שומן אצל עכברים מבוגרים יכולים להפריע בידוד LN. עם זאת, מגבלה זו היא להתגבר עם אותו לחזור על התרגילים. לנוחות עכברים, אנו לקצור מקסימום 2 LNs בכל פעם, כאשר אנו מבצעים בזמן הקורס ניסויים, אנחנו קוצרים LNs כל יום 2. כמו כן, כדי למנוע זיהום, אנטיביוטיקה יכולה להינתן העכבר, אבל אנחנו לא והפצעים הם ריפוי בסדר גמור. אחד צריך להיות מודע לכך בהתאם לעיצוב ניסיוני, שימוש באנטיביוטיקה יכול להשפיע על התוצאה ציין (לדוגמה, אם בעקבות חיידק נמדד). שים לב שכל המכשירים מעוקרים לאחר כל שימוש ותנאי אספטיים נשמרים לאורך כל ההליכים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכבר על צדו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את האזור שבו תוכלו לבצע incision, בהתאם LN אתה רוצה לקצור. (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל כלורהקסידין או חומר חיטוי אחר, לאזור זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן במספריים חדות (כ 5 מ"מ) או בצד האחורי של רגלו הקדמית ומעלה כפה האחורית ליד הבטן (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את שערות שנשרו שגזרת עם המלקחיים. אם אתה מעדיף, אתה יכול לגלח את העכבר לפני ביצוע החתך. עם זאת, היא מאריכה את ההליך, ואנחנו חושבים שזה לא נחוץ, שכן, כפי שמוצג כאן, זה לא לשפר את הריפוי או ירידה בזיהום, אשר הן נדירות מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למתוח את החתך עם 2 מלקחיים כדי לראות LN. החתך עשוי להגיע 10 מ"מ. LN נראה אפור או כהה יותר שומן שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצבוט fascia (קרום דק המכסה את שומן ורקמות) על גבי LN אחד עם מלקחיים ומושכים קלות בלי לשבור את הרקמה שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מלקחיים השני ככל האפשר underneath LN. עם מלקחיים הראשונים לשבור את fascia ולהסיר LN. אם קוצרים בהצלחה LN, כתם הדם אמור להופיע במקום שבו היה ממוקם בעבר LN. שים לב הוזהרו כיורים בתמיסה איזוטונית. זו בדיקה פשוטה מאפשר לך לאמת כי חילצת LN ורקמת השומן לא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוודא כי השיער לא נמצא הפצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך על ידי דבק את 2 החלקים של העור יחד (החלק הפנימי של העור) ועל ידי הידוק להם קליפ. אנו משתמשים קצת קליפ מישל עם מלקחיים החלים. התקן אחד או 2 קליפים בהתאם לגודל של החתך. לרוב, קליפים ליפול כאשר הרקמה מרפא. </li></ol> 3. לאחר הניתוח טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף קצת מזון רטוב אל החלק התחתון של הכלוב אז העכברים יכול להאכיל בקלות לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 עד 8 שעות לאחר הניתוח, לבדוק את העכברים כדי לוודא שהם אינם חווים כאב. בזהירות לבחון את התנהגותם (היציבה, ההליכה, עלteraction עם כמשלימתו והמראה של הפרווה). אם המראה הכללי של העכברים הוא עני, לנהל את המנה השנייה של עצירות. למחרת העכברים צריכים להחזיר את ההתנהגות הרגילה אחרת להמשיך את הניהול של עצירות. העכברים לא צריך להגיע אל נקודות הקצה שנקבעו קודם לכן, התקבלה על ידי מועצת שלך Animal Care. אולי כדאי לך להתייעץ ולעזור מן החי טכנאי טיפול ביבר. </li></ol> 4. הלימפה טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במעבדה, כדי להשיג הפסקת תא בודד, לנתק LN על פי הנוהל הרגיל שלך. אנחנו הקש LN נגד שקופיות הקפואות ובאופן שגרתי לקבל 1-2 x 10 6 תאים לכל LN. לחילופין, אנו מכינים LN להפקת RNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם התאים לפי הפרוטוקול הרגיל שלך. אתה צריך להשיג צפוי תזרים הוזהרו פרופילים cytometry. </li></ol> 5. נציג תוצאות דוגמה עמ 'פיזור קדימה בצדהרבה מוצג עבור LNs שנקטפו מן העכבר על ידי ניתוח בהרדמה או עכבר הקריב (איור 2). הפרופיל של אחוזי התאים בשער הלימפוציטים חיים זהים הוכחת כי ניתוח LN הוא הטכניקה המתאימה לתאי הקציר. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3444/3444fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 1"> באיור 1. מפשעתי ולוקליזציה LN הזרוע של העכבר. א LN מפשעתי ממוקם בדיוק מעל כף רגל אחורית, מעט לכיוון הבטן. ב LN הזרוע ממוקם מאחורי רגלו הקדמית. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3444/3444fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 2"> 2. תרשים זרימה cytometry פרופיל של לימפוציטים שהושג לאחר הניתוח LN. פרופילים פיזור קדימה לצד מוצגים LNs שנקטפו מן anesthעכבר etized על ידי ניתוח () או עכבר הקריב (ב '). LNs נקצרו, ניתק ונותחו על cytometer הזרימה. אחוזי התאים הלימפוציטים השער חי מוצגים.

<ol><li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li>
<li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li>
<li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8%28%2B%29+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li>
<li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li>
<li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li>
<li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracycline-controllable+selection+of+CD4%28%2B%29+T+cells%3A+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li>
<li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+TCR+does+a+T+cell+need%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li>
<li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitope+density+influences+CD8%2B+memory+T+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740(2010).</li>
<li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li>
<li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4%28%2B%29+T+cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li>
<li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li>
<li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8%2B+memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li>
<li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8%2B+T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

תיארנו פרוטוקול הניתוח LN אשר יכול לחול על מערכות ניסיוניות רבות. אמנם שימושי מאוד לעקוב אחר התגובות החיסוניות או הומאוסטזיס תא החיסון, טכניקה זו יש מספר מגבלות. ראשית, רק 4 LNs ניתן לקצור. שנית, התגובה החיסונית למד חייב להיות מערכתי או להתרחש שטחיות (עור, ניקוז) LNs מפשעתי או הזרוע. לבסוף, מספר תאים שנקטפו מושפעת מאיכות הסרת LN, מגבלה טכנית אשר עשוי לתרום שונות ניסיוני כאשר מספרים מוחלטת לתא יש צורך. עם זאת, אחוז התאים היעד, בפני עצמו, יכול לספק מידע רלוונטי ומדויק במיוחד כאשר גו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> גרפה יפות פרימיום מלקחיים דפוסי </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 52-2144 </td><td> מעוקל מאוד, 10 ס&quot;מ (4 אינץ&#39;), 0.8 מ&quot;מ עצה </td></tr><tr><td> קליפ מישל מריחת הסרת מלקחיים </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 52-3779 </td><td> 12.5 ס&quot;מ (5 ב) </td></tr><tr><td> מישל קליפ 100 </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 52-3746 </td><td> 7.5-1.75 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> Temgesic (hydrochloride עצירות) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vetalar (hydrochloride קטמין) </td><td> Boniche בעלי חיים בריאות </td><td></td><td> DIN: 01989529 </td></tr><tr><td> Rompun (Xylazine) </td><td> באייר </td> &lt;TD&gt; </td><td> DIN: 02169592 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> אבוט </td><td></td><td> DIN: 02032384 </td></tr><tr><td> Hypotears בעין משחה </td><td> נוברטיס Ophtalmics </td><td></td><td> DIN: 02133288 </td></tr><tr><td> Baxedin (gluconate Clorhexidine 2% אלכוהול איזופרופיל 70%) </td><td> אומגה </td><td> L0000017 </td><td> DIN: 02251477 </td></tr></tbody></table>

צומת murine שטחית לימפה ניתוח

Murine Superficial Lymph Node Surgery

בתחום אימונולוגיה, להבין את התקדמות התגובה החיסונית נגד החיסון, זיהום או גידול, התגובה מלווה לעיתים קרובות לאורך זמן. באופן דומה, המחקר של הומאוסטזיס לימפוציטים דורש כמובן ניסויים זמן. ביצוע מחקרים אלו בתוך העכבר אותו הוא אידיאלי כדי להפחית את השתנות ניסיוני, כמו גם את מספר העכברים המשמשים. הנסיגה הדם מאפשרת ביצוע ניסויים כמובן זמן, אבל זה רק נותן מידע על מחזורי לימפוציטים ומספק מספר מוגבל של תאים 1-4. מאז לימפוציטים במחזור דרך הגוף המתגוררים בלוטות הלימפה יש מאפיינים שונים, חשוב לבחון את שני המקומות. הסרת רציפה של בלוטות הלימפה על ידי ניתוח מספק הזדמנות ייחודית לבצע תגובה חיסונית או הרחבת התא החיסונית של העכבר באותו הזמן. יתר על כן, שיטה זו מניבה בין 1-2x10 6 תאים בכל מפרק הלימפה אשר די PErform אפיון פנוטיפי ו / או מבחני תפקודית. לימפה הצומת רציף ניתוח או lymphadenectomy שימש בהצלחה על ידינו ואחרים 5-11. כאן, אנו מתארים כיצד בלוטות הלימפה הזרוע ואת מפשעתי ניתן להסיר על ידי ביצוע חתך קטן בעור של עכבר anesthetised. מאז הניתוח היא שטחית של דבר במהירות, עכבר מתאושש מהר מאוד, מחלים היטב ואינו לחוות כאב מוגזם. כל יום 2, ניתן לקצור אחת או שתיים בלוטות הלימפה המאפשר ניסויים כמובן זמן. טכניקה זו מתאימה ובכך ללמוד את המאפיינים של בלוטת לימפה לימפוציטים המתגוררים לאורך זמן. גישה זו מתאימה עיצובים ניסיוניים שונים ואנו מאמינים כי במעבדות רבות ירוויחו ביצוע ניתוחים עוקבים הצומת לימפה.

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

בתחום האימונולוגיה, כדי להבין את התקדמות התגובה החיסונית נגד חיסון, זיהום או גידול, התגובה היא לרוב...

המטרה הכללית של הליך זה היא להסיר בניתוח קשרי לימפה מעכבר תחת הרדמה. הדבר מושג תחילה על ידי איתור קשרי הלימפה. קשרי הלימפה נאספים, ולאחר מכן החתך נסגר.לבסוף, ניתן להוציא תרחיף של תאים בודדים לצורך ניתוח ניסיוני. בסופו של דבר, ניתן להעריך אוכלוסיות של לימפוציטים חיוניים באמצעות ציטומטריה של זרימה. הדגמה חזותית של טכניקה זו היא קריטית, שכן יש לצפות במיקום ובסילוק של קשרי הלימפה כדי לשלוט בביצוע הפעולה.לאחר הרדמת העכבר, יש למרוח משחה לעיניים, להזריק בופרנורפין ולאשר את רמת הסדציה באמצעות צביטה בבהונות, ולאחר מכן להפנות את העכבר על צדו. ראשית, יש לאתר את קשרי הלימפה בבית השחי (brachial lymph node) ולאחר מכן לגלח את האזור המיועד לניתוח. לאחר הסרת שיער רופף בעזרת מברשת, יש למרוח חומר חיטוי על האזור ולבצע חתך קטן של כחמישה מילימטרים בגב הרגל האחורית.השתמשו בשני זוגות פינצטות כדי למתוח את החתך עד שניתן יהיה לראות את קשרי הלימפה בזרוע (brachial lymph node), שעשויים להיראות אפורים או כהים יותר מהשומן שסביבם. לאחר מכן, צבטו עם זוג פינצטות אחד את הפציה המכסה את קשרי הלימפה. מקמו את זוג הפינצטות השני עמוק ככל האפשר מתחת לקשרי הלימפה ומשכו בעדינות את הממברנה מבלי לקרוע את הרקמה שסביבה.לאחר מכן, השתמש בזוג הפינצטות הראשון כדי לקרוע את הפסציה ולהוציא את קשרי הלימפה. אם קשרי הלימפה נאספו בהצלחה, תופיע כתם דם במקום שבו שכן קשר הלימפה קודם לכן. הנח את קשרי הלימפה שהוצאו לתוך תמיסה איזוטונית; אם הם שוקעים, הדבר יאשר כי הרקמה שנאספה היא קשר לימפה ולא רקמת שומן.בשלב הבא, ודאו שאין שערות בתוך הפצע וסגרו את החתך על ידי הצמדת שני קצות העור זה לזה וסיכיכם באמצעות אחד עד שני סיכות, בהתאם לגודל החתך. כעת, אתרו קשרית לימפה מפשעתית (inguinal lymph node) וגלחו את האזור המיועד לדיסקציה. לאחר הסרת שערות רופפות בעזרת מברשת, מרססו חומר חיטוי על האזור ובצעו חתך קטן של כ-5 מילימטרים מעל כף הרגל האחורית, סמוך לבטן.לאחר פתיחת החתך באמצעות שני זוגות פינצטות כפי שהודגם זה עתה עבור קשרי הלימפה בבית השחי (brachial), זהו את קשרי הלימפה במפשעה (inguinal) השקועים בתוך רקמת השומן שסביבם. לאחר מכן, הוצא את קשרי הלימפה באמצעות שני זוגות הפינצטות כפי שהודגם. שוב, ודא כי השליפה של קשרי הלימפה הצליחה על ידי זיהוי כתם הדם המופיע במקום שבו שכן קשרי הלימפה קודם לכן, ולאחר מכן העבר את קשרי הלימפה מהמפשעה למכל נפרד המכיל תמיסה איזוטונית.לאחר קציר כל קשרי הלימפה, העבירו את העכבר לכלוב והוסיפו מזון רטוב כדי שהעכבר יוכל להזין את עצמו בקלות. כשש עד שמונה שעות לאחר הניתוח, בדקו את העכבר כדי לוודא שאינו חווה כאב. התבוננו בקפידה שהיציבה, ההליכה, האינטראקציה עם בני מינו ומראה הפרווה דומים לאלו של עכבר בריא ונורמלי.לבסוף, בצעו דיסוציאציה של קשרי הלימפה על ידי לחיצה עליהם כנגד זכוכיות כיסוי מטופלות (frosted slides) בתוך צלחת פטרי, ולאחר מכן העבירו אותם למבחנה כדי לקבל תים של תאים בודדים (single cell suspension). לאחר צביעת התאים לאנטיגנים של פני השטח הרלוונטיים, נתחו את התאים באמצעות ציטומטריית זרימה. כאן מוצגות דוגמאות של תרשימי פיזור של פיזור קדימה (forward scatter) ופיזור צדי (side scatter) עבור קשרי לימפה שנלקחו מבעלי חיים שהורדמו או שהורגו.הפרופילים ואחוזי התאים בשערי הלימפוציטים החיים בשני תרשימי הפיזור הם זהים. הדבר מוכיח שניתוח של קשרי לימפה הוא טכניקה מתאימה לאיסוף תאים. ברגע שהטכניקה נלמדת, ניתן לבצע את ניתוח קשרי הלימפה בתוך חמש עד 10 דקות לעכבר, במידה והוא מבוצע כראוי.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הטכניקה לביצוע מיקרוסקופיה intravital של הצומת לימפה מפשעתי (LN) הוא התווה. טכניקה כזו מאפשרת בזמן...

מיקרוסקופית Intravital של הצומת לימפה מפשעתי

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד הכירורגי של בלוטת הלימפה המתנקזת מפשעתית מדגם עכבר. חתך באזור הבטן מספק גישה לבלוטת הלימפה המפשעה, אשר נקטף בניתוח. בלוטת הלימפה השקופה שנקטפה יכולה לשמש למחקרים אימונולוגיים.

קצירת בלוטת לימפה מנקזת מפשעתית ממודל מורין

כאן, אנו מתארים טכניקה לפרוסקופית זעיר-פולשנית, דגימה סדרתי של הכבד וקשרי הלימפה mesenteric (MLN) ב קופי המאפשר תדר הדגימה גדל, ומפחית פוטנציאל לסיבוכים כירורגיים בהשוואה ביצוע פיום.

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

פרוטוקול זה מתאר טכניקה לתמונה אוכלוסיות תאים שונות בבלוטות לימפה ניקוז ללא שינויים במבנה האיברים.

חזותי מבנה צומת לימפה ולוקליזציה לסלולר באמצעות Ex-Vivo Confocal מיקרוסקופ

מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.

שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים

פרוטוקול לחסום את זרימת הלימפה על ידי תפירה כירורגית של כלי לימפה שונים מוצג.

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

לימפאדמה היא נפיחות בגפיים הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של הלימפה. אנו מתארים מודל זנב מורין כרוני של ביצנית לימפה ושימוש חדשני בטכנולוגיית ננו-טראנספקטו רקמות (TNT) להעברת מטען גנטי לזנב.

מודל לימפאדמה זנב מורין

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל עכברי של אבלציה של עצבוב אדרנרגי על ידי זיהוי וכריתה של גנגליון צוואר הרחם העליון.

טכניקה כירורגית לכריתת גנגליון צוואר הרחם מעולה במודל מורין

פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות לכריתת לימפאדנקטומיה כלייתית דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב.

כריתת לימפהדנקטומיה דו-צדדית של עכברים

פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות עבור לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב, בכל אחת מארבע תחנות לאורך שרשרת בלוטות הלימפה המזנטריות. הליך זה ניתן להתאמה כדי לאפשר הפרעה סלקטיבית בתקשורת הלימפה עם המעי הגס הדיסטלי, המעי הגס הפרוקסימלי ו/או המעי הדק.

כריתת לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים לשיבוש סלקטיבי בתקשורת לימפה עם מערכת העיכול הספציפית לאזור

למד כיצד לבצע ניתוח להסרת צמתי לימפה שטחיים בעכברים מורדמים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תגובות חיסוניות לאורך זמן באמצעות ניתוח תאי לימפוציטים חיים בזרימתיות.

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

גלה סרטונים נוספים