Name: תיוג בתאי גזע עם Ferumoxytol, ה-FDA אוקסיד Nanoparticle ברזל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: למד שיטה לתיוג תאי גזע מזנכימליים אנושיים באמצעות Ferumoxytol, ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל מאושרי FDA. השיטה מאפשרת מעקב אחר השתרשות תאי הגזע בחולים באמצעות הדמיית תהודה מגנטית לא פולשנית לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם המכון הלאומי של דלקת מפרקים ומחלות עור השלד והשרירים: 3R01AR054458-02S2.

1. יום 1 1) פלייט תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט hMSC בבקבוק T75 בבית% confluency של 80 לפחות 18-24 שעות לפני תיוג. עיין טבלה מס '1 להוראת עבור כלי חלופי. </li></ol> 2. יום 2 2) להכין פתרון תיוג. הכנה זו תווית אחת (1) T75 בקבוק ב 80% confluency עם ריכוז של 400 מיקרוגרם Fe / ml. עיין טבלה מס '1 להוראת עבור כלי חלופי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת פתרון (פתרון 1) על ידי ערבוב 1 מ"ל של סרום ללא מדיה 93.1 μl של ferumoxytol (מניות: 30 מ"ג / מ"ל) בצינור חרוטי 15 מ"ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת הפתרון השני (פתרון 2) על ידי ערבוב 1 מ"ל של סרום ללא מדיה 7 μl של סולפט protamine (מניות: 10 מ"ג / מ"ל) בתוך שפופרת 15 מ"ל second חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר כל פתרון לנוח במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת פתרונות 1 ו -2 יחד. לערבב בעדינות את הפתרון תיוג חדש. אפשר פתרון לנוח במשך 5 דקות כדי לאפשר USPIO הפרומתחמי סולפט tamine הטופס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ"ל של סרום ללא מדיה מ"ל 2 מעורבת של SPIO / פתרון סולפט protamine עבור נפח סופי של 7 מ"ל. </li></ol> 3) הכינו תאים תיוג <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את התקשורת בין התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף בעדינות תאים פעם אחת עם 2-3 מ"ל של טרום חימם Mg / Ca ללא D-PBS או בסרום ללא מדיה לשטוף ממני חלבונים בסרום שיורית או רכיבים אחרים לתקשורת, העלולות לפגום חומר ניגוד ספיגת ויעילות תיוג. לשאוב את הנוזלים ולשטוף. </li></ol> 4) תווית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את מ"ל להשלים 7 של תיוג פתרון תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום התאים לתוך אינקובטור (37 ° C / 5% CO 2) ולאפשר לתאים כדי לדגור בפתרון תיוג במשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 700 μl של FCS לפתרון תיוג של תאים כדי להשיג ריכוז בסרום סופי של 10%. סרום הוא הוסיף ליצור מחדש את הסביבה העשירה של התאים אשר מורגלים, ועל מנת לסייע minimizing מוות של תאים העלולה לנבוע שינוי פתאומי חשיפה 24 שעות ביממה לסביבה בסרום חופשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר התאים כדי לדגור עם פתרון תיוג עבור 20 שעות נוספות. </li></ol> 3. יום 3 5) הכנת תאים שכותרתו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את הפתרון תיוג מן התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף בעדינות תאים עם 2-3 מ"ל של טרום חימם Mg / Ca ללא D-PBS. לשאוב את PBS. חשוב להשתמש Mg / Ca ללא PBS כמו מ"ג ו Ca יפגע את היעילות של טריפסין בשלב הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 מ"ל של טריפסין מראש חימם 0.05% אל התאים להטות את הבקבוק קדימה ואחורה על מנת להבטיח את פני השטח של הבקבוק מכוסה בשכבה דקה של טריפסין. המקום התאים באינקובטור (37 ° C / 5% CO 2) ולאפשר התאים לנוח 5-7 דקות או עד התאים מתחילים להתנתק הצלחת. זה עשוי להיות נחוץ כדי לאשר ניתוק תחת מיקרוסקופ. לטפוח בעדינות את צידי הבקבוק במידת הצורך כדי facilitate על פני קרום התא ניתוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 4 מ"ל של טרום חימם התקשורת מלאה הבקבוק על מנת לנטרל את טריפסין. לשטוף בעדינות את הבקבוק על ידי pipetting טריפסין / מדיה / פתרון התא למעלה ולמטה מספר פעמים. אסוף את הפתרון כולו צינור חרוטי 15 מ"ל. צנטריפוגה הפתרון הנייד RCF 400 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לשאוב supernatant מבלי להפריע לתא גלולה. Resuspend התאים 5 מ"ל של התקשורת (סרום המכיל סרום או ללא). צנטריפוגה הפתרון הנייד RCF 400 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על לשטוף תא המתואר בשלב 5.5. בסך הכל, התאים יהיו שטופים שלוש פעמים להסיר סוכן שיורית, בניגוד חופשי בתקשורת על פני השטח של התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים בשלב זה להשיג את ספירת התאים המדויק ביותר, כמו תאים יאבדו במהלך הכביסה הקודמת. בצעו בדיקת הכדאיות של תאים. תאים מוכנים כעת לניתוח עתידיים או יישום ניסיוני. MR הדמיה ניתן לבצע עם T1 ו-W T2-w פרמטרים, כי למרות ferumoxytol הוא סוכן T2-W לעומת זאת, ferumoxytol גם מפגין השפעות T1. נציג T2-w פרמטרים MRI כי ניתן להשתמש בתאים תמונה ferumoxytol שכותרתו כוללים: FSE או SE_Multislice רצפים עם TR של 2000-2500 ms ו TE של 60-80 אלפיות. כדי לרכוש תמונה T1-W, להקטין את הערך TE על FSE או רצף SE_Multislice או להשתמש רצף GRE עם TR גבוה TE נמוך. איור 4 מדגים את פוטנציאל היישום vivo הדמיה שכותרתו בתאי גזע. </li></ol> 4. נציג תוצאות: תאים תווית להוכיח השפעה משמעותית לעומת המחשיך או שלילית על T2 משוקלל תמונות MR ואת אפקט הניגוד התבהרות או חיובית על T1-משוקלל תמונות MR (איור 2). אורך MR הדמיה בדיקות כדאיות שבוצעו 5 ימים תיוג הודעה הפגינו שום איתות משמעותי MR ואין השפעה משמעותית על כדאיות בהשוואה לקבוצת הביקורת ללא תווית (מידע לא מוצג). jove_content "&gt; בתאי גזע תווית יכול לאחר מכן להיות מובחן לתוך תאים מסוגים שונים או מוזרק לווריד במשך בחקירה vivo. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3482/3482fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 1"> באיור 1. קו הזמן סכמטי תיוג בתאי גזע עם nanoparticle תחמוצת ברזל, ferumoxytol. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3482/3482fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 2"> באיור 2. תמונות של MR sagittal חתכים צינורות thrrough Eppendorf עם תאים גלולה התא. א) שולטת ללא תווית. ב) תאים תווית הוכחת T2 משמעותי או השפעה שלילית חומר ניגוד על FSE T2 משוקלל או SE_Multislice הדמיה סוכן T1 או חיובית לעומת השפעה על רצף GRE-T1 משוקלל. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3482/3482fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 3"> באיור 3. חתכים sagittal של צינורות Eppendorf עם תאים פל תאמאפשר. קטנה כמו 10,000 תאים שכותרתו ferumoxytol ניתן לאתר באמצעות T2-w MR הדמיה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3482/3482fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 4"> איור 4. להדמיה של MR ferumoxytol שכותרתו בתאי גזע שהוחדר לתוך החדרים מוחין Murine. א) ציר הסיבוב, MR דמותו של ברין Murine עם זריקה לא של USPIO שכותרתו בתאי גזע. ב) ציר הסיבוב, C) העטרה, ו-D) sagittal תמונות MR המתארת ​​את אפקט T2, בניגוד שלילית של USPIO שכותרתו בתאי גזע (חצים לבנים) מוזרק במוח Murine. <img alt="טבלה 1" src="/files/ftp_upload/3482/3482table1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="טבלה 1"> 1. טבלת כמות adaptions תיוג התאים כלי חלופי.

<ol><li>Narsinh, K. H., Plews, J., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+induced+pluripotent+and+embryonic+stem+cells%3A+fraternal+or+identical+twins%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Comparison of human induced pluripotent and embryonic stem cells: fraternal or identical twins?</a> Mol Ther. 19, 635-638 (2011).</li>
<li>Bulte, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+MRI+cell+tracking%3A+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22AJR.+Am.+J.+Roentgenol%22%5BJournal%5D)">In vivo MRI cell tracking: clinical studies.</a> AJR. Am. J. Roentgenol. 193, 314-325 (2009).</li>
<li>Henning, T. D., Boddington, S., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+hESCs+and+hMSCs+with+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Non-Invasive+in+vivo+Tracking+with+MR+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging.</a> J. Vis. Exp. (13), e685-e685 (2008).</li>
<li>Tallheden, T., Nannmark, U., Lorentzon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+MR+imaging+of+magnetically+labeled+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life.+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo MR imaging of magnetically labeled human embryonic stem cells.</a> Life. Sci. 79, 999-1006 (2006).</li>
<li>Jung, C. W., Jacobs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+properties+of+superparamagnetic+iron+oxide+MR+contrast+agents%3A+ferumoxides%2C+ferumoxtran%2C+ferumoxsil%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical properties of superparamagnetic iron oxide MR contrast agents: ferumoxides, ferumoxtran, ferumoxsil.</a> Magn. Reson. Imaging. 13, 661-674 (1995).</li>
<li>Coyne, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferumoxytol+for+treatment+of+iron+deficiency+anemia+in+patients+with+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert.+Opin.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Ferumoxytol for treatment of iron deficiency anemia in patients with chronic kidney disease.</a> Expert. Opin. Pharmacother. 10, 2563-2568 (2009).</li>
<li>Li, Z., Suzuki, Y., Huang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+reporter+gene+and+iron+particle+labeling+for+tracking+fate+of+human+embryonic+stem+cells+and+differentiated+endothelial+cells+in+living+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Comparison of reporter gene and iron particle labeling for tracking fate of human embryonic stem cells and differentiated endothelial cells in living subjects.</a> Stem Cells. 26, 864-873 (2008).</li>
<li>Metz, S., Bonaterra, G., Rudelius, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+human+monocytes+to+phagocytose+approved+iron+oxide+MR+contrast+agents+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Capacity of human monocytes to phagocytose approved iron oxide MR contrast agents in vitro.</a> Eur. Radiol. 14, 1851-1858 (2004).</li>
<li>Nedopil, A., Klenk, C., Kim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MR+signal+characteristics+of+viable+and+apoptotic+human+mesenchymal+stem+cells+in+matrix-associated+stem+cell+implants+for+treatment+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Radiol%22%5BJournal%5D)">MR signal characteristics of viable and apoptotic human mesenchymal stem cells in matrix-associated stem cell implants for treatment of osteoarthritis.</a> Invest. Radiol. 45, 634-640 (2010).</li>
<li>Kraitchman, D. L., Heldman, A. W., Atalar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+magnetic+resonance+imaging+of+mesenchymal+stem+cells+in+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">In vivo magnetic resonance imaging of mesenchymal stem cells in myocardial infarction.</a> Circulation. 107, 2290-2293 (2003).</li>
<li>Stuckey, D. J., Carr, C. A., Martin-Rendon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+particles+for+noninvasive+monitoring+of+bone+marrow+stromal+cell+engraftment+into%2C+and+isolation+of+viable+engrafted+donor+cells+from%2C+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Iron particles for noninvasive monitoring of bone marrow stromal cell engraftment into, and isolation of viable engrafted donor cells from, the heart.</a> Stem Cells. 24, 1968-1975 (2006).</li>
<li>Henning, T. D., Sutton, E. J., Kim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+ferucarbotran+on+the+chondrogenesis+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast.+Media.+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">The influence of ferucarbotran on the chondrogenesis of human mesenchymal stem cells.</a> Contrast. Media. Mol. Imaging. 4, 165-173 (2009).</li>
<li>Arbab, A. S., Yocum, G. T., Kalish, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+cell+labeling+with+protamine+sulfate+complexed+to+ferumoxides+for+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.</a> Blood. 104, 1217-1223 (2004).</li>
<li>Nedopil, A. J., Mandrussow, L. G., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+Ferumoxides+Labeled+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Cartilage+Defects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects.</a> J. Vis. Exp. (38), e1793-e1793 (2010).</li>
<li>Arbab, A. S., Yocum, G. T., Wilson, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transfection+agents+in+forming+complexes+with+ferumoxides%2C+cell+labeling+efficiency%2C+and+cellular+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Comparison of transfection agents in forming complexes with ferumoxides, cell labeling efficiency, and cellular viability.</a> Mol Imaging. 3, 24-32 (2004).</li>
<li>Babic, M., Horak, D., Trchova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28L-lysine%29-modified+iron+oxide+nanoparticles+for+stem+cell+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Poly(L-lysine)-modified iron oxide nanoparticles for stem cell labeling.</a> Bioconjug Chem. 19, 740-750 (2008).</li>
<li>Golovko, D. M., T, H. enning, Bauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+stem+cell+labeling+with+ferucarbotran+and+protamine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Accelerated stem cell labeling with ferucarbotran and protamine.</a> Eur. Radiol. 20, 640-648 (2010).</li>
<li>Lu, M., Cohen, M. H., Rieves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+report%3A+Ferumoxytol+for+intravenous+iron+therapy+in+adult+patients+with+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hematol%22%5BJournal%5D)">FDA report: Ferumoxytol for intravenous iron therapy in adult patients with chronic kidney disease.</a> Am. J. Hematol. 85, 315-319 (2010).</li>
</ol>

כל התורמים ללמוד את ההצעה הזו לא גילויים.

שיפור היעילות של engraftments תא גזע הוא קריטי לקידום רפואה רגנרטיבית. טכניקה לא פולשנית להדמיה עבור בתאי גזע in vivo משפר באופן משמעותי את יכולתנו להבין את המנגנונים להוביל לתוצאות engraftment מוצלח. תיוג להדמיה מגנטית MR, כגון ההליך שהראנו, מאפשר לעקוב אחר vivo בתאי גזע עם MR הדמיה. בתאי גזע שכותרתו מגנטית בעבר הושתלו רקמות היעד כבר דמיינו עד שבועות עם MR הדמיה 7. לטווח ארוך תיוג הדמיה האורך אפשרי בגלל אחסון lysosomal של חלקיקי תחמוצת ברזל בתוך התאים...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> D-גלוקוז גבוהה מ </td><td> סיגמא </td><td> D5648 </td><td> או בסיס בינוני אחרים לקו הרצוי בתאי גזע כדי לשמש </td></tr><tr><td> D-PBS (Ca + +, Mg + + חינם) </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין-EDTA 0.05% </td><td> Invitrogen </td><td> 25300-120 </td><td></td></tr><tr><td> עוברית שור סרום (FBS) </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td></td></tr><tr><td> Ferumoxytol (Feraheme) </td><td> AMAG </td><td> 59338-0775-01 </td><td></td></tr><tr><td> Protamine סולפט </td><td> APP פארם. </td><td> 22930 </td><td></td></tr>
</tbody>
</table>

תיוג בתאי גזע עם ferumoxytol, ה-fda אוקסיד nanoparticle ברזל

Labeling Stem Cells with Ferumoxytol, an FDA-Approved Iron Oxide Nanoparticle

תא גזע טיפולים מבוססי להציע פוטנציאל משמעותי בתחום של רפואה רגנרטיבית. עם זאת, הרבה נשאר להיות מובן לגבי vivo ב קינטיקה של התאים המושתלים. שיטה לא פולשנית כדי לפקח שוב ושוב בתאי גזע המושתלים in vivo תאפשר לחוקרים ישירות לצג של השתלות מוח עצם ולזהות התוצאות engraftment להצליח או להיכשל. מגוון רחב של בתאי גזע ממשיך להיחקר עבור יישומים רבים מספור. פרוטוקול זה מתמקד 3 אוכלוסיות תאים שונות גזע: כליה עובריים אנושיים 293 (HEK293) תאים, אדם בתאי גזע mesenchymal (hMSC) ו המושרה גזע pluripotent (שב&quot;ס) תאים. HEK 293 תאים שמקורם בתאי כליה עובריים אנושיים הגדלים עם תרבות ה-DNA טעון adenovirus 5. תאים אלה נמצאים בשימוש נרחב במחקר כי הם בתרבית בקלות, לגדול במהירות והם transfected בקלות. hMSCs נמצאים במח מבוגר. תאים אלה can להיות משוכפל כמו תאים שלא עברו התמיינות, תוך שמירה על multipotency או פוטנציאל להתמיין למספר מצומצם של גורל התא. hMSCs יכול לבדל את שושלות של רקמות mesenchymal, כולל osteoblasts, adipocytes, chondrocytes, גידים, שרירים, stroma מוח. תאים iPS הם reprogrammed גנטית תאים בוגרים ששונו לבטא גנים וגורמים דומים המאפיינים המגדירים של בתאי גזע עובריים. תאים אלה הם משמעות pluripotent יש להם את היכולת להתמיין לכל שושלות תאים 1. שני hMSCs ותאי iPS הוכיחו יכולת ההתחדשות רקמות ב-vivo. תהודה מגנטית (MR) הדמיה יחד עם שימוש של תחמוצת ברזל פאראמגנטי (SPIO) תוויות nanoparticle תא הוכיחו יעילות של מעקב vivo לתאי גזע בשל החלטה אנטומי ליד מיקרוסקופית, דם כבר מחצית החיים המאפשר הדמיה האורך ואת גבוה sensitivity לגילוי תאים הניתנים על ידי MR הדמיה של SPIO חלקיקים 2-4. בנוסף, MR הדמיה עם שימוש של SPIOs הוא לתרגום קלינית. SPIOs מורכבים הליבה תחמוצת ברזל עם מעיל dextran, carboxydextran או עמילן משטח המשמש להכיל את ליבת ברזל bioreactive מרכיבים פלזמה. סוכנים אלה יוצרים מקומיים inhomogeneities השדה המגנטי להוביל אות ירד ב T2 משוקלל תמונות MR 5. למרבה הצער, SPIOs הם כבר לא מיוצרים. הדור השני, ultrasmall SPIOs (USPIO), לעומת זאת, מציעים חלופה. Ferumoxytol (FerahemeTM) הוא אחד USPIO מורכבת הליבה שאינו stoichiometric מגנטיט מוקף מעיל carboxymethylether polyglucose סורביטול. גודל colloidal, חלקיק של ferumoxytol הוא 17-30 ננומטר כפי שנקבע על ידי פיזור האור. משקל מולקולרי הוא 750 kDa, ואת relaxivity קבוע בשדה 2T-MRI הוא 58.609 מ&quot;מ 1 sec-1 כוח 4. Ferumoxytol לאחרונה ה-FDAשל תוספת ברזל לטיפול מחסור בברזל אצל מטופלים עם אי ספיקת כליות 6. בקבוצה שלנו יש להחיל את סוכן להשתמש &quot;את התווית&quot; תיוג עבור יישומים סלולריים. הטכניקה שלנו מוכיח תיוג יעיל בתאי גזע עם ferumoxytol שמוביל משמעותית תופעות MR האות של תאים הנקרא על תמונות MR. טכניקה זו ניתן להחיל לניטור בלתי פולשני של טיפולים בתאי גזע במסגרות טרום קליניים וקליניים.

אנו מתארים טכניקה תיוג ומעקב בתאי גזע עם ה-FDA, תחמוצת ברזל פאראמגנטי (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). זו טכניקת דימות הסלולר אשר מנצל מגנטית (MR) תהודה להדמיה, הוא נגיש לניטור ארוך טווח האבחנה של להצליח או להיכשל engraftments תא גזע לחולים.

תיוג בתאי גזע עם Ferumoxytol, ה-FDA אוקסיד Nanoparticle ברזל

טיפולים מבוססי תאי גזע מציעים פוטנציאל משמעותי לתחום הרפואה הרגנרטיבית. עם זאת, נותר עוד רב להבין בנוגע ל-in vivo...

בטכניקה זו, במדעי התרגום (translational science), תאים מסומנים באמצעות חלקיקי תחמוצת ברזל סופר-פרה-מגנטיים אולטרה-קטנים המאושרים על ידי ה-FDA, הנקראים far amatol. התחל עם תאי גזע מזנכימליים אנושיים המקובעים בצפיפות של 80%, ולאחר מכן בצע טרנספקציה של חומר הניגוד far amatol במצע ללא סרום כדי לסמן את התאים. המשך לקציר ולספירה של ה-hMSCs המסומנים לצורכי ניסוי.בסופו של דבר, תוצאות של דימות בתהודה מגנטית יכולות להראות ניגוד שלילי משמעותי או אפקט T2 מתאים לתאים המסומנים ב-U-S-P-I-O. ברוכים הבאים למעבדת DDR link בתוכנית לדימות מולקולרי בסטנפורד. ההשלכות של טכניקה זו פונות לעקביות in vivo של השתלות תאי גזע באמצעות ויזואליזציה ישירה על ידי דימות MR לא פולשני.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות, כגון סימון באמצעות S PIOs, הוא ש-U-S-P-I-O OL היא ננו-חלקיק תחמוצת ברזל היחיד המאושר על ידי ה-FD הזמין לשימוש לסימון תאים בשימוש off-label. בתוך מבחנה קונית של 15 מיליליטר, דללו fair ictal במיליליטר אחד של מצע נטול סרום; במבחנה שנייה, דללו protamine sulfate במיליליטר אחד של מצע נטול סרום, והמתינו להשתוויית טמפרטורה של שני התמיסות בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות. כעת, ערבבו את התמיסות והמתינו חמש דקות כדי לאפשר היווצרות של קומפלקס U-S-P-I-O protamine sulfate.לאחר מכן, הוסיפו חמישה מיליליטרים

labeling-stem-cells-with-ferumoxytol-an-fda-approved-iron-oxide

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

להערכת טיפולים בתאי גזע חדש חשוב הלא פולשני המסלול התאים מוזרקים in vivo. סרט הווידאו הזה יראה לכם כיצד לתייג אדם בתאי גזע mesenchymal ו עובריים עם סוכני תחמוצת ברזל מבוסס בניגוד in vivo עבור הבאים MR הדמיה in vivo.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

וידאו זה מציג טכניקות תיוג של אדם בתאי גזע עובריים ותאי גזע mesenchymal עם צבעי ניאון. טכניקה זו יכולה לשמש in vivo מעקב בתאי גזע המושתלים עם הדמיה אופטית עבור מתאמים histopathological עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

תיוג בתאי גזע עם צבעי ניאון על איתור פולשני עם דימות אופטי

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) מנגן עם כלוריד...

ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית

המטרה של המצגת היא להדגים שיטה לשחזור מאוד ליצור מטריצה ​​תא הקשורים שתלים גזע פגמים הסחוס, אשר יכול להיות דמיינו עם MR הדמיה. בתאי גזע מסומנים עם ה-FDA Ferumoxides, מעורבב עם agarose, מושתלים לתוך פגמים סחוס צילמו עם סורק 7T MR.

השרשה של Ferumoxides תווית אדם בתאי גזע mesenchymal ב פגמים סחוס

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

אספקת תאים ממוקדת שימושית במגוון יישומים ביו-רפואיים.  מטרת פרוטוקול זה היא להשתמש בננו-חלקיקי תחמוצת ברזל סופר-פרמגנטיים (SPION) כדי לתייג תאים ובכך לאפשר גישות מיקוד לתאים מגנטיים לרמה גבוהה של שליטה על העברת התאים ולוקליזציה.

תיוג תא ומיקוד עם פאראמגנטי תחמוצת ברזל חלקיקים

מוצג פרוטוקול לסינתזה וקטיונים של מגנטופריטין מסומם בקובלט, כמו גם שיטה למגנט במהירות תאי גזע עם מגנטופריטין קטיוני.

סינתזה של Cationized Magnetoferritin עבור המגנטיזציה אולטרה-מהירה של תאים

כתב היד הזה מתאר את משלוח יעיל, שאינו ויראלי של miR לתאי אנדותל ידי וקטור PEI / MNP ו המגנטיזציה שלהם. לכן, בנוסף שינוי גנטי, גישה זו מאפשרת להדרכת תא מגנטית ויכולת גילוי MRI. הטכניקה יכולה לשמש כדי לשפר את המאפיינים של מוצרי תא טיפוליים.

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור משלוח של תאי גזע mesenchymal לא פולשנית (MSC) ומעקב במודל העכבר של פציעה מוחית טראומטית. ברזל פאראמגנטי תחמוצת הברזל מועסקים כהדמיה תהודה מגנטית (MRI) בדיקה עבור התיוג MSC ו פולשני ב vivo מעקב אחר משלוח intranasal באמצעות MRI בזמן אמת.

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

חלקיקי תחמוצת ברזל מסונתזים באמצעות הליך ג'ל סול לא רקיקי ומצוידים במולקולות קצרות אניוניות או פולימר. השימוש מגנטומטריה לניטור התאגדות ו biotransformations של חלקיקים מגנטיים בתוך תאי גזע אנושיים מודגם באמצעות מגנטומטר מדגם רוטט (VSM).

שימוש במגנטומטריה לניטור התאגדות תאית והתפרקות ביולוגית של חלקיקי תחמוצת ברזל מסונתטיים כימית

תכולת הידרופרוקסיד שומנים מייצגת את האינדיקטור הנפוץ ביותר למוות של תאים פרופטוטיים. מאמר זה מדגים את ניתוח ציטומטריית הזרימה שלב אחר שלב של תכולת הידרופראוקסיד שומנים בתאים עם השראת פרופטוזיס.

חשיפת הפנוטיפ הפרופטוטי של מדולובלסטומה

למד שיטה לתיוג תאי גזע מזנכימליים אנושיים באמצעות Ferumoxytol, ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל מאושרי FDA. השיטה מאפשרת מעקב אחר השתרשות תאי הגזע בחולים באמצעות הדמיית תהודה מגנטית לא פולשנית לאורך זמן.

תיוג בתאי גזע עם Ferumoxytol, ה-FDA אוקסיד Nanoparticle ברזל

גלה סרטונים נוספים