אבחון שחפת ריאתית עם מבחן אקספרט MTB / RIF

המטרה הכללית של הליך זה היא לזהות בו-זמנית, בתוך שעתיים, mycobacterium, tuberculosis ועמידות ל-rifampicin בדגימות ליחה שהוצאו או במשקעים של ליחה מרוכזת. התחילו בפרוטוקול פשוט ויעיל ביותר לדה-קונטמינציה של הדגימה. לאחר מכן, העבירו כל דגימה שעברה עיבוד למחרטטת M-T-B-R-I-F חד-פעמית, המכילה את ריאגנטי ה-PCR ומשמשת כבסיס לתהליך ה-PCR.

העמיסו את המהליכים על מערכת gene expert DX והפעילו את ה-ultra sensitive HEMI nested PCR לזיהוי סימולטני של mycobacterium tuberculosis ועמידות לריפמפיצין. לבסוף, קראו את תוצאות הבדיקה ודווחו עליהן לרופא. בדיקת ה-expert MTPR מיועדת לשימוש עם דגימות מחולים החשודים קלינית בשחפת ריאית ועומדים בקריטריונים המפורטים בטקסט של החברה.

שימו לב כי אין להשתמש בבדיקה זו לניטור השפעותיה של טיפול תרופתי. Crystal. טכנאי מהמעבדה שלי ידגים כעת את הפרוטוקול בהתאם לתקן השני של התקנים הבינלאומיים לטיפול בשחפת. אספו שתי דגימות לבדיקה בקטריולוגית מכל מטופל החשוד כסובל משחפת ריאתית.

הקצו מודול אחד של מערכת gene expert DX עבור כל דגימה לבדיקה, תוך סימון כל מחסנית לפי מזהה הדגימה. כעת, עבור כל בדיקת דגימה, העבירו מיליליטר אחד של ליחה למבחנה קונית עם מכסה הברגה בנפח 15 מיליליטר באמצעות פיפטת העברה סטרילית נוספת. הוסיפו שני מיליליטרים של ריאגנט דגימה M-T-B-R-I-F.

סגרו את המכסה בחוזקה. נערה את המבחנה 10 עד 20 פעמים. לאחר מכן, העמידו את המבחנה במצב אנכי למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר לאחר ניעור חזק של המבחנה.

שוב, יש להביא לשיווי משקל בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. ודאו שכל דגימות הדגימות הן ED וללא גושי ליחה נראים. ראשית, סמנו את המחסניות עם מזהה הדגימה של כל דגימה של משקע ליחה; לכל דגימה של משקע, הוסיפו 1.5 milliliters של ריאגנט דגימה M-T-B-R-I-F, והעבירו 0.5 milliliters לפ menutup tube קוני עם פקק הברגה של 15 milliliter. החזירו את המכסה, בצעו וורטקס למשך 30 שניות והניחו את המבחנה במצב אנכי למשך חמש דקות לאחר מכן.

ערבבו באמצעות וורטקס והעמידו את המבחנה במצב אנכי למשך 10 דקות. בדקו את הדגימות המונזלות כדי לוודא שאין גושי ליחה. התאימו את התווית שעל המבחנות למחסניות המתאימות.

אין לפתוח את המחסית עד לרגע ביצוע הבדיקה, ויש להשתמש במחסית תוך 30 דקות מרגע פתיחת המכסה. בעזרת פיפט העברה סטרילי, שאבו את הדגימה הנוזלית עד שהמניסקוס יהיה מעל סימון המינימום. העבירו את הדגימה באיטיות לתוך המחסית.

סגור את מכסה המחסנית. התחל את הבדיקה תוך 30 דקות מהוספת הדגימה למחסנית. הפעל תחילה את המחשב ולאחר מכן את המכשיר שעל שולחן העבודה.

לחץ פעמיים על סמל ה-gene expert DX. התחבר לתוכנת המערכת. בחר ב-create test כדי לפתוח את תיבת הדו-שיח לסריקת ברקוד המחסנית.

לאחר מכן, הקלידו את מזהה הדגימה וסרקו את ברקוד המחסנית. כאשר יופיע חלון יצירת הבדיקה, לחצו על start test והזינו את הסיסמה בתיבת הדו-שיח. כעת פתחו את דלת מודול המכשיר והכניסו את המחסנית.

סגרו את הדלת כדי להתחיל את הבדיקה. כאשר האור הירוק נכבה, הבדיקה הושלמה. ברגע שהמערכת תשחרר את נעילת הדלת, פתחו את דלת המודול והוציאו את המחסנית.

לבסוף, יש להשליך את המחסניות המשומשות למכלי הפסולת המתאימים. כל מחסנית בדיקה כוללת ריאגנטים ל-QPCR של עמידות לריפמפיצין ב-Mycobacterium tuberculosis complex, ובקרות ניסוייות מתאימות. בקרת בדיקת הגשושית (probe check control) מאמתת את רהידראציית הריאגנטים, את מילוי מבחורי ה-PCR במחסנית, את שלמות הגשושית ואת יציבות הצבע.

עקומת עיבוד הדגימה משמשת כביקורת חיובית לעיבוד הולם של החיידקים המטרה, וכן מעידה על נוכחותם של מעכבי PCR כלשהם. הפריימרים תוכננו להבדיל בין רצף סוג הפרא (wild type) השמור לבין מוטציות באזור הליבה של הגן RPOB הקשור לעמידות ל-RIF. ערכי ה-CT נמצאים ביחס הפוך לריכוז תבנית ה-M-T-B-D-N-A המטרה בדגימת הבדיקה.

תיבת הדוּאלוג של תוצאות הבדיקה קובעת כי DNA של מטרה MTB זוהה ועמידות ל-RIF לא זוהה בדגימה זו של המטופל. DNA של מטרה MTB זוהה ברמות נמוכות עם התוויה לעמידות לריפמפיצין. שני הביקורות, SPC ו-PCC, עומדים בקריטריוני הקבלה שנקבעו.

תוצאה זו של הבדיקה נחשבת לבלתי תקפה מאחר שה-SPC שלילי ותוצרי ה-PCR אינם נוכחים. ייתכן שהדגימה לא עובדה כראוי או שה-PCR עוכב. יש לחזור על הבדיקה.

כפי שראיתם בסרטון, הבדיקה היא סטנדרטית ודורשת תשתית מעבדה והכשרה ברמה בינונית בלבד. לכן, אני מאמין שבבדיקת ה-M-T-B-R-F המומחית יש פוטנציאל להביא בדיקה אבחנתית סטנדרטית, רגישה וספציפית מאוד הן לשחפת והן לעמידות לריפמפיצין לנקודות גישה אוניברסליות בנקודת הטיפול.