Name: בעלי חיים שלמה זלוף קיבוע של מכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: למד טכניקת קיבוע הדמיה בלחצים פיזיולוגיים לשימור מוח עכברושים עבור אימונוהיסטוכימיה. השיטה מספקת שימור אחיד של רקמות לניתוח מורפולוגי מדויק במחקר נוירולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי המרכז לטכנולוגיה ותקשורת עצבית (CNCT), מרכז P41 משאבים הממומן על ידי המכון הלאומי ביו הדמיה Bioengineering (NIBIB, P41 EB002030) ונתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH).

<ol><li>Cinar, O., Semiz, O., Can, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microscopic+survey+on+the+efficiency+of+well-known+routine+chemical+fixatives+on+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Histochem%22%5BJournal%5D)">A microscopic survey on the efficiency of well-known routine chemical fixatives on cryosections.</a> Acta. Histochem. 108, 487-496 (2006).</li>
<li>Fritz, M., Rinaldi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+pressure+measurement+with+the+tail-cuff+method+in+Wistar+and+spontaneously+hypertensive+rats%3A+Influence+of+adrenergic-+and+nitric+oxide-mediated+vasomotion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Blood pressure measurement with the tail-cuff method in Wistar and spontaneously hypertensive rats: Influence of adrenergic- and nitric oxide-mediated vasomotion.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 58, 215-221 (2008).</li>
<li>Ikeda, K., Nara, Y., Yamorii, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indirect+systolic+and+mean+blood+pressure+determination+by+anew+tail+cuff+method+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Indirect systolic and mean blood pressure determination by anew tail cuff method in spontaneously hypertensive rats.</a> Laboratory Animals. 25, 26-29 (1991).</li>
<li>Jacobowitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+discrete+fresh+regions+of+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of discrete fresh regions of rat brain.</a> Brain Res. 80, 111-115 (1974).</li>
<li>Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardial+perfusion+fixation+of+the+CNS+by+means+of+a+compressed-air-driven+device%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device.</a> Journal of Neurosci. Meth. 12, 141-149 (1984).</li>
<li>Jung-Hwa, T. ao-C. heng, Gallant, J., Brightman, P. E., Dosemeci, M. W., A,, Reese, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+changes+at+the+synapse+after+delayed+perfusion+fixation+in+different+regions+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Structural changes at the synapse after delayed perfusion fixation in different regions of the mouse brain.</a> J. Comp. Neurol. 501, 731-740 (2007).</li>
<li>Kasukurthi, R., Brenner, M. J., Morre, A. M., Moradzadeh, A., Wilson, Z. R., Santosa, K. B., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardial+perfusion+versus+immersion+fixation+for+assessment+of+peripheral+nerve+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Transcardial perfusion versus immersion fixation for assessment of peripheral nerve regeneration.</a> J. Neurosci. Meth. 184, 303-309 (2009).</li>
<li>Lamberts, R., Goldsmith, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation%2C+fine+structure%2C+and+immunostaining+for+neuropeptides%3A+perfusion+versus+immersion+of+the+neuroendocrine+hypothalamus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Fixation, fine structure, and immunostaining for neuropeptides: perfusion versus immersion of the neuroendocrine hypothalamus.</a> J. Histochem. Cytochem. 34, 389-398 (1986).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+Aspects+of+Immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Technical Aspects of Immunohistochemistry.</a> Vet. Pathol. 42, 405-426 (2005).</li>
<li>Shi, Z. R., Itzkowitz, S. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+three+immunoperoxidase+techniques+for+antigen+detection+in+colorectal+carcinoma+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A comparison of three immunoperoxidase techniques for antigen detection in colorectal carcinoma tissues.</a> J. Histochem. Cytochem. 36, 317-322 (1988).</li>
<li>Walker, W. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalker%2C+WF+%22Vertebrate+dissection%22">Vertebrate dissection</a>. , Sixth Ed, W.B. Saunders Comp. Philadelphia. (1980).</li>
<li>Zwienenberg, M., Gong, Q., Lee, L. L., Berman, R. F., Lyeth, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((J.+Neurotrauma%5BTitle%5D)+AND+%22Monitoring+in+the+Rat%3A+Comparison+of+Monitoring+in+the+Ventricle%2C+Brain+Parenchyma%2C+and+Cisterna+Magna%22%5BJournal%5D)">J. Neurotrauma.</a> Monitoring in the Rat: Comparison of Monitoring in the Ventricle, Brain Parenchyma, and Cisterna Magna. 16, 1095-1102 (1999).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

הערות נוספות לניתוח מוצלח: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרעפת פרוץ, להקדים במהירות היפוקסיה ו hypercapnia תיזום שינויים פיזיולוגיים בלתי הפיכים שעלולים הרודפים את הניתוח שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המחט מוחדרת והידק במקום, הלחץ השיורי ידחוף הדם בבסיס המחט (פלאשבק). למעשה, בעלי חיים גדולים יותר עשויים במרץ לגרש דם. זה קריטי, כי דם לפחות להגיע אל הבסיס של המחט, כדי למנוע החדרת בועות אוויר אשר מכשול בפני להשלים זלוף. אם אין דם הוא ציין בבסיס המחט, הוצא את המחט ולמלא עם חיץ על ידי הצמדתו נמל יציאה של המתקן זלוף. לאחר חיץ הופעל באמצעות עצה, המחט אפשר לרחם אל לב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום נכון של המחט בתוך אבי העורקים הוא קריטי, זה לא צריך להגיע עד קשת אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם perfusions רבים מתקיימים אין צורך לאo הגדרת מההתחלה כל פעם. המשתמש צריך להיות נפח ראוי למאגר וגם מקבע בבקבוק אחד (200mls בעלי חיים / פתרון). הבקבוקים ניתן ומילא אם יש צורך. ההיבט החשוב ביותר שיש להביא בחשבון הוא בפלאשינג את הקו המחבר בין זלוף ההתקנה לבעל החיים (שסתום התפוקה). לאחר השלמת זלוף, קו זה יהיה paraformaldehyde 4% בה. הסר את צינורות מהבקבוק חיץ ולהשתמש מזרק 50 מ&quot;ל מלא מים כדי לשטוף את מקבע. ודא שסתום היציאה ממוקם הגביע בזבוז אוסף לסילוק נאות של paraformaldehyde. חזור על כך שלוש פעמים. מילוי עם המאגר באמצעות אותה שיטה שמוצג 2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטה זו של קיבעון ניתנת להתאמה מאוד את היכולת לשנות גם חיץ fixatives מקבע אחרים (כגון אלו המשמשים EM) בהתאם לדרישות של הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המערכת הוא גם משמש לעתים קרובות למיצוי של רקמת חיים. לשם כך1 תהליך פשוט משתמש מסירת חיץ בלבד (בקבוק חיץ תוך עדיין מחוברת המערכת כולה מונחת בתוך דלי קרח בקבוק מקבע הוא כמו תוכנית ההתקנה ריק אבל סגור). זה מבטיח זלוף חיץ קר בלחץ האופטימלי. מכאן שהמערכת יכולה להיות מותאם עירוי של צבעים ניתן לתקן או על ידי הוספת צבע ישירות למאגר (אם הכמות היא לא בעיה) או להשתמש במזרק עם כמות מינימלית של חיץ / פתרון צבע בין למאגר - מקבע צעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של יציקת כלי דם, ניטור לחץ צעד חיץ חיוני עם זאת בשל צמיגות וגיבוש אופי הפתרון הליהוק או מזרק 50 מ&quot;ל יש להשתמש למסירה ישירה או משנית מצורף הפנויה למנגנון (שסתום בצינור והחזקה מיכל) עשה להתממשק עם המערכת הנוכחית לשמש. הליהוק של כלי הדם במעבדות שלנו שקדמה עיצוב וייצור של מכשירים זלוף. לכן אנחנו לא יכולים רחובאוכלים כי יש למדוד את הלחץ תהיה מדידה מדויקת באתר המסירה. המספרים אולי צריך להיות מותאם על מנת להשיג ההפצה המוצלחת של נוזלים צמיגה. </li></ol>

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> הרדמה: </td></tr><tr><td> קטמין / xylazine תערובת (הרדמה יכולה להשתנות לפי המעבדה / מוסד) </td><td> Ketaset </td><td> NDC 0856-2013-01 </td><td> 10 מ&quot;ל בבקבוקון </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ניתוח: </td></tr><tr><td> קצה המחט, GA 27 x 1.25 &quot; </td><td> אמצעי שירותים </td><td> 25251 </td><td></td></tr><tr><td> גדולים קהים / בוטה מספריים מעוגלות (~~~HEAD=NNS 14.5 ס&quot;מ) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 14519-14 </td><td></td></tr><tr><td> ישר איריס מספריים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 14058-11 </td><td></td></tr><tr><td&gt; תקן פינצטה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11027-12 </td><td></td></tr><tr><td> זוג יפה (גרפה) פינצטה </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 11050-10 </td><td></td></tr><tr><td> 1 hemostat מלקחיים גדולים - מעוגלים או ישרים (~~~HEAD=NNS 19 ס&quot;מ) </td><td> surgicaltools.com </td><td> 17.21.51 </td><td></td></tr><tr><td> 2 hemostat מלקחיים רגילים - ישר משוננים (14 ס&quot;מ) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 13013-14 </td><td></td></tr><tr><td> 1 hemostat שונה (עם חור בקוטר 15 הגיש את קצה) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 13013-14 </td><td></td></tr><tr><td> 15-מחט מד בוטה או זית שקצהו (מחט זלוף) </td><td> Fisnar </td><td> 5601137 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> זלוף: </td></tr><tr><td> HyPerfusion מערכת או שווה ערך &lt;/ Td&gt; <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> פוספט pH שנאגרו מלוחים, 7.4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde 4% במאגר M פוספט 0.1, pH 7.4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> זכוכית שטוחה או מגש פלסטיק, כ 10 &quot;x 10&quot; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> קרח כתוש </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> מי האמבט (37 ° C) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> שעון עצר </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל במזרק </td><td> Medline תעשיות </td><td> NPMJD50LZ </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> דיסקציה: </td></tr><tr><td> אבאIR של תקן מספריים חדים ישרים / קהה (~~~HEAD=NNS 12 ס&quot;מ) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 14054-13 </td><td></td></tr><tr><td> Rongeurs מעוגלים או ישרים בינוני (14-16 ס&quot;מ) או הסרת עצם הגולגולת צבת </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 16020-14 </td><td></td></tr><tr><td> ישר איריס מספריים (~~~HEAD=NNS 9 ס&quot;מ) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 14058-11 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרו מרית (כפול 2 &quot;קצוות שטוחים, אחד מעוגל, אחת קוני ל 1/8&quot;) </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 10091-12 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> לאחר קיבוע &amp; Storage: </td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל בקבוקון זכוכית </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 40 מ&quot;ל HEPES שנאגרו הנקס פתרון (HBHS) עם אזיד הנתרן (90mg / L) </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody&gt; </table>

בעלי חיים שלמה זלוף קיבוע של מכרסמים

Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents

המטרה של קיבעון היא במהירות אחידה לשמר רקמות במצב כמו חיים. תוך שימת רקמות ישירות בעבודות מקבע היטב חתיכות קטנות של רקמות, דגימות גדולות יותר כמו המוח ללא שינוי מהווה בעיה עבור קיבעון טבילה משום מקבע לא מגיע בכל אזורי הרקמה באותו קצב 5,7. לעתים קרובות, שינויים בתגובה היפוקסיה להתחיל לפני רקמה ניתן לשמר 12. היתרון של המרוססת מקבע ישירות דרך מערכת הדם היא כימית יכול להגיע במהירות לכל פינה של האורגניזם באמצעות רשת כלי דם טבעי. על מנת לנצל את מחזור הדם בצורה היעילה ביותר, יש להקפיד להתאים לחצים פיזיולוגיים 3. חשוב לציין כי לחצים פיזיולוגיים תלויים המינים בשימוש. טכניקות קיבוע זלוף משתנים בהתאם רקמות להיות קבוע וכיצד רקמות יעובדו קיבעון הבאה. זה וידאואנו מתארים בעלות נמוכה, בהליך מהיר, קיבעון מבוקר ואחיד באמצעות paraformaldehyde 4% perfused דרך מערכת כלי הדם: דרך הלב של חולדה כדי לקבל את השמירה הטובה ביותר של המוח עבור אימונוהיסטוכימיה. היתרון העיקרי של שיטה זו (לעומת כוח הכבידה-fed מערכות) היא מערכת הדם הוא מנוצל בצורה היעילה ביותר.

כאן אנו מתארים בעלות נמוכה, בהליך מהיר, קיבעון מבוקר ואחיד באמצעות paraformaldehyde 4% perfused דרך מערכת כלי הדם: דרך הלב של חולדה כדי לקבל את השמירה הטובה ביותר של המוח.

מטרת הקיבוע היא לשמר את הרקמה במהירות ובאופן אחיד במצב הדומה למצב החי. בעוד שהנחת רקמה ישירות בתוך חומר קיבוע עובדת היטב עבור דגימות קטנות...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להדגים את טכניקת קיבוע הפרפוזיה שלנו, המדגישה שימוש בלחצים פיזיולוגיים כדי לשמר כראוי רקמת מוח של חולדה לצורך פרוצדורות של אימונוהיסטוכימיה. ראשית, מודגמים השימוש וההגדרה של מכשיר הפרפוזיה. לאחר מכן, נאספים הכלים הדרושים לביצוע הן של ניתוח הפרפוזיה והן של הוצאת המוח, והחיה המורדמת עמוק מונחת במגש רדוד מלא בקרח גרוס.מבצעים חתך צדי של חמישה עד שישה סנטימטרים דרך העור ודופן הבטן, ממש מתחת לכלוב הצלעות. חושפים את הלב ומבצעים פירפוזיה לבעל החיים. השלב האחרון הוא הוצאת המוח והנחתו במבחנה עם נוזל מקבע בנפח הגדול פי 10 לפחות מנפח המוח עצמו.המטרה הכללית של הליך זה היא להדגים את טכניקת הקיבוע בפרפוזיה שלנו, המדגישה את השימוש בלחצים פיזיולוגיים כדי לשמר כראוי רקמת מוח של חולדה עבור אימונוהיסטוכימיה. נתחיל בהכנת מערך הפרפוזיה. תהליך זה יארך כ-10 דקות. בעזרת מזרק של 50 milliliter, שטפו שוב ושוב את קו הקיבוע עם באפר עד להסרת כל בועות האוויר.להצלחת הפרפוזיה חיוני למנוע הופעת בועות אוויר בכל אחד מהקוים. דבר זה מושג על ידי הנחת שסתום היציאה בתוך כלי כימי המלא בבופר. כעת, סגרו את שסתום היציאה.לאחר מכן, הוצא את המבחנה מהמזרק תוך כדי לחיצה עליו, כך שטיפה של באפר תישאר תלויה מקצהו. הכנס את הצינור המלא, כאשר פתח המקבע נמצא בתוך בקבוק המכיל 200 milliliters של מקבע פאראלדהיד לכל חיה. יש להקפיד לא להחדיר בועות אוויר.הדק את הפקק, וודא שהאטם יושב כראוי. אם הוא אינו יושב כראוי, הלחץ בתוך המערכת הסגורה לא יישמר. הנח את הבקבוק בתוך מתקן הפרפוזיה.הגדירו את הזרימה מקו התמיס הרצוף (buffer) בלבד על ידי סגירת פתח היציאה וסיבוב שסתום התמיס הרצוף לאותה מיקום של שסתום המקבע (fixative). פתחו את פתח היציאה ונקו את קו התמיס הרצוף כפי שבוצע קודם לכן עבור קו המקבע. לאחר ניקוי הקו, הכניסו את הצינור לבקבוק התמיס הרצוף.בשלב הבא, בדקו את יכולתו של המערכת להחזיק לחץ. בעת שאיבה של נורת גומי של המנומטר, תורגש התנגדות. כהכנה סופית.מלאו את מחט הפרפוזיה בבופר כדי למנוע חדירת אוויר. המערכת מוכנה כעת להפרפוזיה. לאחר מתן תערובת של ketamine ו-xylazine, תוך וידוא הגעה למישור הרדמה כירורגי באמצעות שיטת צביטת בהונות, הניחו את החולדה המורדמת באופן מלא על מגש רדוד מלא בקרח גרוס.אין להמשיך אלא אם בעל החיים נמצא תחת הרדמה מלאה. התחילו את הניתוח בחתך צדי של חמישה עד שישה סנטימטרים דרך העור ודופן הבטן, ממש מתחת לכלוב הצלעות. הפרידו בזהירות את הכבד מהסרעפת.בצעו חתך קטן בסרעפת באמצעות המספריים הקעורות והקהות. מיקום האצבע והלחץ שהיא מפעילה יכולים לסייע ביכולת לחתוך את הסרעפת. המשיכו בחתך הסרעפת לאורך כל בית הצלעות כדי לחשוף את חלל הפלורה.הנח מספריים קהים ומעוקלים לאורך צדו של כלוב הצלעות, הדחק בזהירות את הריאות ובצע חיתוך דרך כלוב הצלעות עד לעצם הבריח. לאחר מכן, בצע חיתוך דומה בצד הנגדי. כעת הרם את עצם החזה והסר בזהירות כל רקמה המחברת אותה ללב.סגור את קצה העצם החזה (sternum) באמצעות המוסטט והנח את ההמוסטט מעל הראש. החזה אמור להיות מורם, ובכך יסופק מבט ברור על כלי הדם הראשיים. באמצעות מספרי איריס (iris scissors), בצע חתך קטן בקצה האחורי של החדר השמאלי.העבירו מחט פרפוזיה בעלת קצה קהה או קצה זית (olive tipped) בכילוי 15, דרך החתך בחדר אל תוך האורטה העולה. קצה המחט צריך להיות גלוי דרך דופן האורטה ואסור שיגיע לקשת האורטה, שם מיתforks העורקים הברכיאליים והקרטידיים. כדי לקבע את המחט ולמנוע דליפות, סגרו את הלב באמצעות המוסטט.לבסוף, השתמש במספרי איריס כדי ליצור פתח גדול בעלייה הימנית. הקפד לא לפגוע באורטה היורדת. בשלב זה, בעל החיים מוכן לביצוע פרפוזיה.חברו את מחט הפרפוזיה בעלייה הימנית לפתח היציאה (outlook port) ללא הכנסת בועות אוויר, ופתחו את פתח היציאה. לאחר מכן, נפחו במהירות ובאופן אחיד את פלבלב המנומטר עד ללחץ של 80 millimeters of mercury. שמרו על לחץ זה לאורך כל תקופת הזרקת הבאפר.כעת הפעילו טיימר. כווננו את זווית המחט לנקודה שבה הזרימה היא החזקה ביותר, וכאשר הבופר כמעט נגמר, העבירו את שסתום הבופר. הנוזל יתחיל לזרום בצורה צלולה כאשר הכבד יעבור פרפוזיה.זהו סימן לפרפוזיה טובה ויש לרשום את הזמן שבו הכבד התנקה במהירות רבה. לאחר אירוע זה, יבחנו רעידות קיבוע. סמנו זאת כזמן הקיבוע האמיתי. כדי לשמור על קצב זרימה קבוע, ניתן להעלות את הלחץ בהדרגה עד למקסימום של 130 millimeters of mercury.כאשר המקבע כמעט נגמר, סגור את שסתום היציאה ורשום את הזמן. החולדה צריכה להיות כעת קשיחה. כעת ניתן להוציא את איברי החולדה. כדי להוציא את המוח, התחל בניתוח של החולדה המקובעת על ידי הסרת הראש באמצעות גיליוטינה.בשלב הבא, בצעו חתך בקו האמצע לאורך העור מהצוואר ועד לאף, וחשפו את הגולגולת באמצעות מספריים. גזרו את שרירי הצוואר הנותרים כך שבסיס הגולגולת יהיה חשוף. הכניסו את הקצה החד של מספרי איריס לתוך ה-foramen magnum מצד אחד, והחליקו את המספריים בזהירות לאורך פני השטח הפנימיים של הגולגולת.בשלב הבא, בצעו חתך המגיע עד לקצה הדיסטלי של פני הגולגולת האחוריים. בצעו חתך זהה בצד הקונטרלטרלי. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה (theros) כדי להסיר את הגולגולת מסביב למוחון.החליקו בזהירות את קצה המספריים לאורך פני השטח הפנימיים של הגולגולת, מהפינה האחורית-דיסטלית הגבית (dorsal distal posterior) ועד למדף הפרונטלי הדיסטלי (distal frontal ledge). הימנעו מפגיעה במוח על ידי הרמה של קצה הלהב. במהלך תהליך זה, חזרו על פעולה זו וגזרו בצד הנגדי.לאחר מכן, בעזרת פינצטות, קלפו את פני השטח הגביים (דורסליים) של הגולגולת מהמוח. הסִירו את צדדי הגולגולת בעזרת פינצטות גם כן. כעת, בעזרת שפכטל, נתקו את הפקעות הריח ואת הקשרים העצביים לאורך פני השטח הבטניים (ונטרליים) של המוח, והפרידו בעדינות את המוח מהראש.בעזרת מספרי איריס, גזרו כל קשרי קשקש (dura) המחברים את המוח לגולגולת. לאחר הוצאת המוח, הניחו אותו במבחנה עם נוזל קיבוע שנפחו גדול פי 10 לפחות מנפח המוח עצמו. אחסנו את המבחנה בטמפרטורה של four degrees Celsius למשך 24 שעות.לאחר 24 שעות, שטפו את המוח עם PBS שלוש פעמים תוך כדי סיבוב עדין. לאחר מכן ניתן לשמור את המוח ב-PBS או ב-Hanks. בנוכחות sodium azide ובטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס, ניתן לשמור את המוחות למשך שלושה חודשים.ללא חיתוך. לאחר רכישת מיומנות, ניתן להשלים את כל תהליך הפרפוזיה תוך חמש עד שמונה דקות.

whole-animal-perfusion-fixation-for-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מתאר הליך של זילוח כבד עכברי דרך הווריד הפורטלי באמצעות תמיסת collagenase לפני בידוד תאי כבד.

In Vivo Murine זילוח כבד: שיטה להחדיר לכבד המכרסם תמיסה דרך וריד הפורטל

כאן אנו מציגים שיטה היסטולוגית ללכיד, סימון, ניקוי אופטי, והדמית ממשק רקמת המוח השלם סביב microdevices המושתל כרוני ברקמת מוח מכרסם. תוצאות מהטכניקות הכוללות בשיטה זו הן שימושיות להבנת ההשפעה של-שתלים במוח חודרניים שונים ברקמות המקיפות אותם.

אפיון היסטולוגית שלם של Microdevices מוח מושתלים-ורקמה סובבת

כאן נציג של assay חדירות כלי דם במוח העכבר באמצעות הזרקה בקרום הבטן של המשדרים פלורסנט ואחריו זלוף הרלוונטיים מודלים חייתיים של תפקוד לקוי של מחסום הדם - מוח. חמי-המוח משמש עבור הערכת חדירות באופן כמותי, והשני עבור מעקב חזותי/immunostaining. התהליך לוקח ב' 5-6-10 עכברים.

In Vivo מחסום הדם - מוח חדירות Assay בעכברים באמצעות Fluorescently עם התווית המשדרים

כאן, אנו מציגים שתי מתודולוגיות הרומן, psPACT, mPACT, להשגת שקיפות אופטית מקסימלי וניתוח מיקרוסקופיים עוקבות של רקמות להערכת למכרסמים שלם כל מערכת העצבים המרכזית.

הרומן פסיבית ניקוי שיטות לייצור מהיר של שקיפות אופטית כל רקמה CNS

מאמר זה מתאר שיטה פשוטה כדי להתכונן מוח בעל חיים קטן מיקרו-CT הדמיה, פצעים אשר ניתן לכמת, אלקטרודות הממוקם עם דיוק גבוהה בהקשר של המוח כולו.

שיטה המבוססות על מיקרו-CT אפיון נגעים ואיתור אלקטרודות במוח בעלי חיים קטנים

פרוטוקול מתואר על הפרזיה באתרו של גוף העכבר התחתון, כולל שלפוחית השתן, הערמונית, איברי מין, עצם, שרירים ועור כף הרגל.

הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים

פרוטוקול זה מתאר בדיקה חדשנית של משפר-כתב ארעי המבוססת על rAAV. ניתן להשתמש בבדיקה זו כדי לגרום לביטוי המונע על ידי משפר in vivo במוח העכבר.

פריסת AAV של מבני ביטוי מבוססי משפר in vivo במוח עכבר

פרוטוקול זה מתאר גישה יעילה וניתנת לשחזור למחקרים היסתולוגיים במוח העכבר, כולל זלוף, חתך מוחי, חיסונים צפים חופשיים, הרכבת רקמות והדמיה.

חיסון חופשי של מוחות עכבר

מוצגת שיטת זלוף נוחה הניזונה מכוח הכבידה לניתוח היסטולוגי של מערכת העצבים המרכזית של העכבר. זיהוי אימונופלואורסצנטי של α-סינוקלאין זרחני מודגם במודל עכברי של מחלת פרקינסון. עבודה זו גם מתארת באופן מקיף את ההעתקה, הנתיחה, הקפאת/הטבעת רקמות ושלבי חתך קפואים.

שיטת פרפוזיה טרנסקרדיאלית הניזונה מכוח הכבידה לניתוח היסטולוגי של מערכת העצבים המרכזית של העכבר

קוצים דנדריטיים הם תאים פוסט-סינפטיים של רוב הסינפסות המעוררות. שינויים במורפולוגיה של עמוד השדרה הדנדריטי מתרחשים במהלך התפתחות עצבית, הזדקנות, למידה והפרעות נוירולוגיות ופסיכיאטריות רבות, המדגישים את החשיבות של ניתוח עמוד שדרה דנדריטי אמין. פרוטוקול זה מתאר כימות מדויק ושחזור של מורפולוגיה של עמוד השדרה הדנדריטי באמצעות תוכנה אוטומטית לשחזור נוירונים תלת-ממדיים.

כימות עמוד השדרה הדנדריטי באמצעות תוכנה אוטומטית לשחזור נוירונים תלת מימדיים

למד טכניקת קיבוע הדמיה בלחצים פיזיולוגיים לשימור מוח עכברושים עבור אימונוהיסטוכימיה. השיטה מספקת שימור אחיד של רקמות לניתוח מורפולוגי מדויק במחקר נוירולוגי.

בעלי חיים שלמה זלוף קיבוע של מכרסמים

גלה סרטונים נוספים