Name: הניתוח של מורפולוגיה דנדריטים סלולרי פורקינג בתרבויות Slice Organotypic (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: חקור את פיתוח עץ הדנדריטים של תאי פורקינג'ה בתרביות slice אורגנוטיפיות ממוח עכברים. פרוטוקול זה משתמש בחיטוי Calbindin ומיקרוסקופיית פלואורסצנציה להערכה מורפולוגית מפורטת של השפעת אגוניסטי MGLR1 על התפתחות הדנדריטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי האוניברסיטה של ​​באזל, המחלקה לביו, והשויצרית הקרן הלאומית למדע (31003A-116624).

<ol><li>Bosman, L. W., Hartmann, J., Barski, J. J., Lepier, A., Noll-Hussong, M., Reichardt, L. F., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+of+TrkB+for+synapse+elimination+in+developing+cerebellar+Purkinje+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Requirement of TrkB for synapse elimination in developing cerebellar Purkinje cells.</a> Brain Cell Biol. 35, 87-101 (2006).</li>
<li>Boukhtouche, F., Janmaat, S., Vodjdani, G., Gautheron, V., Mallet, J., Dusart, I., Mariani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoid-related+orphan+receptor+alpha+controls+the+early+steps+of+Purkinje+cell+dendritic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Retinoid-related orphan receptor alpha controls the early steps of Purkinje cell dendritic differentiation.</a> J. Neurosci. 26, 1531-1538 (2006).</li>
<li>Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+control+of+dendritic+growth+and+development+of+cerebellar+Purkinje+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular control of dendritic growth and development of cerebellar Purkinje cells.</a> Prog. Histochem. Cytochem. 39, 131-182 (2004).</li>
<li>Kapfhammer, L. C. Cerebellar slice cultures. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKapfhammer%2C+LC+%22Protocols+for+Neural+cell+culture%22">Protocols for Neural cell culture</a>. Doering, J. P. , 4th edition, Springer Protocols Handbooks. 285-298 (2010).</li>
<li>Gugger, O. S., Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+size+of+the+dendritic+tree+does+not+protect+Purkinje+cells+from+excitotoxic+death%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced size of the dendritic tree does not protect Purkinje cells from excitotoxic death.</a> J. Neurosci. Res. 88, 774-783 (2010).</li>
<li>Li, J., Gu, X., Ma, Y., Calicchio, M. L., Kong, D., Teng, Y. D., Yu, L., Crain, A. M., Vartanian, T. K., Pasqualini, R., Arap, W., Libermann, T. A., Snyder, E. Y., Sidman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mediates+Purkinje+cell+dendritic+development+via+lysyl+oxidase+propeptide+and+NF-%CE%BAB+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">mediates Purkinje cell dendritic development via lysyl oxidase propeptide and NF-κB signaling.</a> Neuron. 68, 45-60 (2010).</li>
<li>Metzger, F., Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C+activity+modulates+dendritic+differentiation+of+rat+Purkinje+cells+in+cerebellar+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C activity modulates dendritic differentiation of rat Purkinje cells in cerebellar slice cultures.</a> Eur. J. Neurosci. 12, 1993-2005 (2000).</li>
<li>Schrenk, K., Kapfhammer, J. P., Metzger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+dendritic+development+of+cerebellar+Purkinje+cells+in+slice+cultures+from+protein+kinase+C%3F-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Altered dendritic development of cerebellar Purkinje cells in slice cultures from protein kinase C?-deficient mice.</a> Neuroscience. 110, 675-689 (2002).</li>
<li>Sirzen-Zelenskaya, A., Zeyse, J., Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+class+I+metabotropic+glutamate+receptors+limits+dendritic+growth+of+Purkinje+cells+in+organotypic+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activation of class I metabotropic glutamate receptors limits dendritic growth of Purkinje cells in organotypic slice cultures.</a> Eur. J. Neurosci. 24, 2978-2986 (2006).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. -A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Tomomura, M., Rice, D. S., Morgan, J. I., Yuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Purkinje+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting+from+transgenic+mice+that+express+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Purification of Purkinje cells by fluorescence-activated cell sorting from transgenic mice that express green fluorescent protein.</a> Eur. J. Neurosci. 14, 57-63 (2001).</li>
<li>Weyer, A., Schilling, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+and+cell+type-specific+expression+of+the+neuronal+marker+NeuN+in+the+murine+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental and cell type-specific expression of the neuronal marker NeuN in the murine cerebellum.</a> J. Neurosci. Res. 73, 400-409 (2003).</li>
</ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיית מועצת הקהילות האירופית יום 24 בנובמבר 1986 (86/609/EEC) ונסקרו ומותר על ידי הרשויות השויצריות. המחברים אין לי מה לחשוף.

השיטות שהוצגו כאן מאפשרים ללמוד פיתוח הדנדריטים תא פורקינג&#39; בתרבויות פרוסות cerebellar organotypic וכדי להעריך כמותית הרחבת הדנדריטים תא פורקינג&#39; על ידי מדידת גודל עץ הדנדריטי ומספר נקודתי הסתעפות הדנדריטים. כמובן, ניתוח כמוני מקיף ומתוחכם יותר של דנדריטים הסלולריים פורקינג&#39; הוא אפשרי, למשל על ידי קביעת אורך הדנדריטים מוחלט, ביצוע ניתוח Sholl או קביעת ממד פרקטל של העץ הדנדריטי. לסוג זה של ניתוח זה בדרך כלל נדרש ידני להתחקות העץ הדנדריטי תא פורקינג&#39; כולו לתכנית לנית...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> הוספת תרביות רקמה </td><td> Millipore </td><td> PICM 03050 PICM ORG50 </td><td> את PICMORG50 מוסיף לי שפה נמוכה ומאפשר צפייה של תרבויות חיות במיקרוסקופ </td></tr><tr><td> ממ </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 11012044 </td><td></td></tr><tr><td> 1 Glutamax </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 35050038 </td><td></td></tr><tr><td> אסאל Medum נשר </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 41010026 </td><td></td></tr><tr><td> סוס סרום </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 26050070 </td><td></td></tr><tr><td> Phorbol 12-myristaטה 13-תצטט (PMA) </td><td> Tocris </td><td> 1201 </td><td></td></tr><tr><td> (RS) -3,5-Dihydroxy-phenylglycine (DHPG) </td><td> Tocris </td><td> 0342 </td><td></td></tr><tr><td> הארנב נגד calbindin D-28k </td><td> Swant </td><td> CB38 </td><td></td></tr><tr><td> אנטי NeuN, השיבוט A60 </td><td> Chemicon, Millipore </td><td> MAB377 </td><td></td></tr><tr><td> ארנב אנטי GFP </td><td> Abcam </td><td> Ab290 </td><td></td></tr></tbody></table>

הניתוח של מורפולוגיה דנדריטים סלולרי פורקינג&#39; בתרבויות slice organotypic

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

תאי פורקינג&#39; הם מערכת מודל אטרקטיבית ללימוד פיתוח הדנדריטים, כי יש להם עץ הדנדריטי מרשים שהוא בהחלט בכיוון במטוס sagittal ומתפתח בעיקר בתקופה שלאחר הלידה במכרסמים קטנים 3. יתר על כן, כמה נוגדנים זמינים אשר באופן סלקטיבי ואינטנסיביים תאי תווית פורקינג&#39; כולל את כל התהליכים, עם D28K אנטי Calbindin להיות בשימוש הנרחב ביותר. לצפייה של הדנדריטים בתאי חיים, עכברים מבטאים EGFP סלקטיבי בתאי פורקינג&#39; 11 זמינים דרך מעבדות ג&#39;קסון. תאי תרבויות פרוסות cerebellar Organotypic לאפשר מניפולציה ניסויית קלה של התפתחות הדנדריטים תא פורקינג&#39; כי רוב התרחבות הדנדריטים של העץ הדנדריטי תא פורקינג&#39; אכן מתרחש בתקופת התרבות 4. אנו מציגים פרוטוקול קצר, אמין וקל לצפייה וניתוח המורפולוגיה של תאי דנדריטים פורקינג&#39; גדלה בorganotypi כאןג תרבויות פרוסות מוח הקטנים. למטרות רבות, הערכה כמותית של העץ הדנדריטי תא פורקינג&#39; רצויה. נתמקד להלן בשני פרמטרים, גודל עץ הדנדריטי ומספרי נקודות של סניף, שניתן לקבוע במהירות ובקלות מהתרבויות פרוסות אנטי calbindin המוכתמות cerebellar. שני פרמטרים אלו מניבים מדד אמין ורגיש של שינויים של העץ הדנדריטי תא פורקינג&#39;. באמצעות הדוגמא של טיפולים עם החלבון קינאז C (PKC) activator PMA וקולט metabotropic גלוטמט 1 (mGluR1) אנחנו מדגימים כיצד הבדלים בהתפתחות הדנדריטים הם דמיינו וכמותית הוערכה. שילוב של הנוכחות של עץ הדנדריטים נרחב, שיטות immunostaining סלקטיבית ואינטנסיביות, תרבויות פרוסות organotypic שמכסות תקופה של צמיחת הדנדריטים ומודל עכבר עם ביטוי EGFP פורקינג&#39; תא מסוים להפוך תאי פורקינג&#39; מערכת מודל רבת עצמה עבור לחשוף את המנגנונים של הדנדריטים פיתוח.

אנו מציגים פרוטוקול המאפשר להציג וכמותית לתחת המורפולוגיה של העץ הדנדריטי של תאים בודדים פורקינג&#39; גדלו בתרבויות פרוסות cerebellar organotypic. פרוטוקול זה נועד לקדם מחקרים על המנגנונים של התפתחות הדנדריטים תא פורקינג&#39;.

הניתוח של מורפולוגיה דנדריטים סלולרי פורקינג&#39; בתרבויות Slice Organotypic

תאי פורקיניה (Purkinje cells) מהווים מערכת מודל אטרקטיבית לחקר התפתחות דנדריטים, כיוון שיש להם עץ דנדריטי מרשים אשר הוא ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לנתח את התפתחות העץ הדנדריטי של תאי ה-burkini תחת תנאים ניסויים שונים. דבר זה מושג תחילה על ידי הקמת תרביות פרוסות אורגנוטיפיות של המוח הדגילי (cerebellum) של עכבר לאחר הלידה. לאחר מכן, יש לגדל את תרביות הפרוסות תחת תנאים ניסויים שונים.לדוגמה, בחנו את השפעתם של אגוניסטים ל-MGL R one, לאחר מכן קבעו את התרביות וחשפו את המורפולוגיה של תאי פורינקיה (Purkinje cells) בודדים, ועצי דנדריטים, באמצעות צביעה אימונוהיסטוכימית של anti-Calbindin. השלב הסופי הוא ניתוח של עצי הדנדריטים של תאי הפורינקיה שגדלו תחת תנאי בקרה או תנאים ניסיוניים, המבוסס על מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של תאי הפורינקיה הצבועים. ההערכה הכמותית של הגודל וההסתעפות של עץ הדנדריטים שלהם מראה כי הפעלה של רצפטור הנוירוטרנסמיטר, ובפרט MGL R one, משפיעה עמוקות על התפתחות עץ הדנדריטים של תאי הפורינקיה.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שכמעט כל הצמיחה החוצה של קצות התאים של Purkinje מתרחשת במהלך תקופת התרבית, ובכך ניתן לחקור סוגיה מורכבת מאוד כמו התפתחות עץ דנדריטי בסביבת in vitro. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הנוירוביולוגיה ההתפתחותית, כגון השפעת הפעילות על הצמיחה וההתפתחות של שלוחות עצביות. כדי להתחיל בהליך זה, בצעו דיסקציה של הדגילי (cerebellum) מהמוח של גור חולדה מסוג PA בתוך תמיסת הכנה קרה בקרח תחת מיקרוסקופ סטריאו.בשלב הבא, חתכו את cerebellum לפרוסות בעובי 350 micron בכיוון הסגיטלי באמצעות קוצץ רקמות McIlwain. לאחר הפרדת הפרוסות, הניחו אותן על תושבות תרבית תאים של millipore, בקצב של כשישה פרוסות לכל תושבת. לאחר מכן, דגרו אותן בפלטות בעלות שישה בארות, שמולאו מראש ב-0.75 milliliters של מצע דגירה לכל באר, באטמוספירה לחה עם 5% carbon dioxide בטמפרטורה של 37 degrees Celsius.התחילו את הטיפולים הפרמקולוגיים ביום השלישי למשך הטיפוח במבחנה (in vitro) על ידי הוספת PMA או DHPG בריכוז הרצוי למצע התרבית. חדשו את התרופות יחד עם החלפת מצע התרבית מדי יומיים או שלושה. לצורך קיבוע התרבית.ראשית, הסר את מצע הגידול, ולאחר מכן הוסף בזהירות שלושה מיליליטר של paraformaldehyde לכל באר המכילה את פרוסות המוח הקטן (cerebellar slices) המחוברות לממברנה של Millicell-Insert. לאחר קיבוע של התרביות למשך לילה, הסר את חומר הקיבוע. לאחר מכן, שטוף את התרביות בבופר פוספטים.לאחר מכן, הוסיפו לתרבית נוגדן שפן נגד cow binding, המדולל בתמיסת חסימה. דללו נוגדן שפן נגד calbindin ביחס של 1:1000 לצורך הדמיה סלקטיבית של תאי per kinji, ונוגדן מונוקלונלי נגד neuN ביחס של 1:500 לצורך הדמיה סלקטיבית של תאי גרנולה בתמיסת חסימה.דגרו את התרביות יחד עם כך למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C תחת ערבול איטי. למחרת, שטפו את התרביות שלוש פעמים עם בופר פוספט 0.1 M, ודללו את הנוגדנים המשניים: Goat anti rabbit, Alexa 568 ו-goat anti mouse Alexa 488 בדילול של 1:500 בבופר פוספט 0.1 M בתוספת 0.1% Triton X 100.דגרו את התרביות יחד עם הצבע למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפת התרביות שלוש פעמים בבופר פוספט, הוציאו את פרוסות הצבע מבאר התרבית באמצעות מכחול צבע והעבירו אותן לשקופיות זכוכית מסוג super frosts plus. הניחו את כיסויי הזכוכית עם מדיום קיבוע מתאים.לאחר מכן, בוחנים את התרביות תחת מיקרוסקופ רגיל עם ציוד פלואורסצנציית-אפי (epi fluorescence) או תחת מיקרוסקופ קונפוקאלי עם סימון פלואורסצנטי של תאי bikini. ניתן למדוד בקלות את גודל העץ הדנדריטי של תא נתון, בתנאי שהעץ אינו חופף לתאים אחרים. ברגע שזוהה תא bikini עם עץ דנדריטי שאינו חופף, הוא נבחן באמצעות עדשה של 20x.תמונה מוקלטת באמצעות מצלמה דיגיטלית ולאחר מכן מנותחת באמצעות תוכנה לניתוח תמונות. במעבדה שלנו נעשה שימוש ב-image Pro plus. תוכנה זו מאפשרת לתחום את העץ הדנדריטי של התא בלחיצת עכבר אחת.באמצעות כלי ה-magic wand במצב מדידה, התוכנה מחשבת את השטח המכוסה על ידי העץ הדנדריטי ומייצאת אותו ל-Ms.Xl. לאחר מכן, נערך ניתוח סטטיסטי של הנתונים באמצעות תוכנת GraphPad Prism עבור מספר נקודות הפיצול. בשל המורפולוגיה העדינה והמסועפת מאוד של עץ ה-ENDR בתאי kinji, יש לספור אותן באופן ידני. קובץ התמונה של תאי ה-kinji בהגדלה של 20x מוגדל באמצעות Adobe Photoshop כך שיכסה את רוב המסך.לאחר מכן, כל נקודת פיצול נספרת ומסומנת בנקודה אדומה. תאי ה-bikini שזוהו צולמו שוב ושוב כדי לנטר את צמיחתו של העץ הדנדריטי. מהיום השני (div 2) עד היום השביעי (div 7), נצפתה צמיחה רציפה של הסתעפויות הדנדריטים.מיום שביעי (div 4) ועד יום 11 (div 11), העץ הדנדריטי התרחב באופן משמעותי. מוצג כאן. אלו הן דוגמאות לעכבה של התפתחות העץ הדנדריטי בתאי ביקיני על ידי p KC או mgl R one, גירוי. A ו-D מראים את תאי הבקרה שלא טופלו, בעלי עץ דנדריטי מפותח היטב. לאחר תשעת ימים של טיפול ב-PMA, הדנדריטים נראים עבים יותר, וגודלו של העץ הדנדריטי פחית באופן משמעותי, כפי שמוצג ב-BNE.מצד שני, CNF מראה כי לאחר תשעה ימים של טיפול ב-DHPG, גודלו של העץ הדנדריטי פחת משמעותית. בשונה מהטיפול ב-PMA, נצפו ענפים צדדיים קצרים ועדינים מאוד רבים על הדנדריטים הראשוניים והמשניים.המדידות הכמותיות המוצגות כאן מראות כי הן גודל העץ הדנדריטי בגרף העמודות העליון והן מספר נקודות הפיצול בגרף העמודות התחתון פחתו באופן משמעותי לאחר טיפול ב-PMA או DHPG; ההבדלים בין העצים הדנדריטיים בביקורת לבין העצים הדנדריטיים של תאי פורינגקין מתרביות שעברו טיפול היו מובהקים. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות נוספות כגון אלקטרופיזיולוגיה כדי לענות על שאלות נוספות, כגון ההשלכות התפקודיות של מורפולוגיה משתנה של העץ הדנדריטי. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו מקריאים תרביות פרוסות של המוח הדגני (organotypic cerebellar slice cultures), וכיצד מנתחים את תאי פורינגקין ואת המורפולוגיה שלהם.

the-analysis-purkinje-cell-dendritic-morphology-organotypic-slice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

זהו פרוטוקול להכין ולתחזק הכנה פרוסה neocortical בתרבות organotypic לצורך ביצוע הקלטות חשמל עצב פירמידליים.

הקלטה נייד שלמים מן ההכנה פורסים Organotypic של הניאוקורטקס

סרטון זה מדגים טכניקה להשגת פרוסות אורגנוטיפיות של המוח הקטן ממוחו של גור עכבר וטיפוח הפרוסות במדיה בתוספת חומרים מזינים וגורמי גדילה כדי לחקות את התפתחות המוח הקטן במבחנה. בנוסף, פרוסות צרבלריות ספציפיות מטופלות בתרכובת בדיקה, ויכולת ההגנה העצבית של התרכובת מנותחת באמצעות טכניקת צביעה אימונופלואורסצנטית.

ניתוח הישרדות תאי Purkinje בתרביות פרוסות צרבלריות אורגנוטיפיות

מתוארת טכניקה לחקר תאי NG2 ואוליגודנדרוציטים באמצעות מערכת תרבית פרוסות של המוח הקדמי והמוח הקטן.  שיטה זו מאפשרת לבחון את הדינמיקה של התפשטות והתמיינות של תאים בתוך שושלת האוליגודנדרוציטים שבה ניתן לתפעל בקלות את הסביבה החוץ-תאית תוך שמירה על ציטו-ארכיטקטורת רקמות.

תרבויות Organotypic Slice ללמוד oligodendrocyte Dynamics וmyelination

פרוטוקול לתרבויות פרוסה organotypic entorhino-היפוקמפוס, המאפשר לשחזר היבטים רבים של פגיעה המוחית איסכמי, מוצג. על ידי לימוד לשינויים בתאי עצב שינויים של neurovasculature בנוסף, פרוטוקול זה הוא כלי תכליתי ללמוד שינויים פלסטיים ברקמה עצבית לאחר פציעה.

תרבויות Organotypic Slice ניתוח של עצבים וכלי דם שיפוץ בEntorhino-היפוקמפוס

כאן אנו מתארים טכניקה ללימוד neurogenesis לאחר הלידה בהיפוקמפוס באמצעות טכניקת התרבות הפרוסה organotypic. שיטה זו מאפשרת למניפולציה במבחנה של neurogenesis למבוגרים ומאפשרת היישום הישיר של סוכנים תרופתיים להיפוקמפוס התרבותי.

תרבויות Organotypic Slice ללימודים של אחרי לידה נוירוגנזה

כאן, אנו מראים כיצד לנתח ניתוב הדנדריטים של נוירונים לשד תסיסנית בעמודות ושכבות. זרימת העבודה כוללת טכניקת דימות כפול במטרה לשפר את איכות התמונה ואת בכלים חישוביים לאיתור, רישום סוכות דנדריטים למערך טור התייחסות לניתוח מבנים הדנדריטים בחלל 3D.

ניתוח מורפולוגיה דנדריטים ב עמודות שכבות

פרוטוקול זה מתאר שיטת הדמיה סימולטני של thalamocortical האקסון מסעף סינפסה היווצרות של organotypic cocultures של תלמוס, קליפת המוח. Thalamocortical בודדים אקסונים ומסופי presynaptic שלהם הם דמיינו ידי טכניקה אלקטרופורציה תא בודד עם DsRed ו מתויג GFP synaptophysin.

ויזואליזציה של האקסון Thalamocortical הסתעפות, סינפסה-צורה Organotypic Cocultures

כאן אנו מציגים שיטה להכין organotypic פרוסה תרבויות מן המוח הקטן העכבר מיאלין, צביעת על-ידי אימונוהיסטוכימיה מתאים לחקור מנגנונים של myelination ו- remyelination במערכת העצבים המרכזית.

Immunostaining של Myelinating Organotypic פרוסה אסטרוציטומה תרבויות והכנה

תרביות פרוסות אורגאותיות הן כלי רב-עוצמה לחקר תהליכים נוירוהתפתחותיים או ניווניות. כאן, אנו מתארים פרוטוקול כי מודלים המוות הנוירולוגי של תאים Purkinje בתוך העכבר המוח פרוסה בתרבויות. שיטה זו עשויה להועיל מחקר בגילוי של תרופות נוירוהגנה.

הישרדות התאים purkinje בתרביות פרוסה בלבלר

פרוטוקול זה מתאר את ההליך עבור הנחת פרוסות לב של האדם לניסויים פרה-קליניים ופרטים השימוש במיפוי אופטי עבור הקלטת מתח טרנסממברניות ואותות סידן תאיים בו מפרוסות אלה.

מיפוי אופטי של הערכת החשמל לניתוחי לב באמצעות מתח כפול וסידן

תאי Purkinje במוח הקטן (PC) רגישים במיוחד לליקויים בתגובת הנזק לדנ"א. פרוטוקול מוצג להערכה חזותית של הדינמיקה של תגובת PC לנזק לדנ"א, הכוללת צביעת שרשראות פולי קשורות לחלבון (ADP-ריבוז) בתוך תרביות אורגנוטיפיות במוח הקטן.

הדמיה של תגובת נזק לדנ"א בתאי Purkinje באמצעות תרביות אורגנוטיפיות במוח הקטן

חקור את פיתוח עץ הדנדריטים של תאי פורקינג'ה בתרביות slice אורגנוטיפיות ממוח עכברים. פרוטוקול זה משתמש בחיטוי Calbindin ומיקרוסקופיית פלואורסצנציה להערכה מורפולוגית מפורטת של השפעת אגוניסטי MGLR1 על התפתחות הדנדריטים.

הניתוח של מורפולוגיה דנדריטים סלולרי פורקינג' בתרבויות Slice Organotypic

גלה סרטונים נוספים