Name: יצירת חולף קרום התא הנקבוביות באמצעות מדפסת הזרקת דיו רגילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למדו ליצור חולף קרום תאים באמצעות מדפסת הזרקת דיו רגילה שעוברת התאמה לביוהדפסה. השיטה מאפשרת הכנסת מולקולות קטנות כמו G-actin פלואורסצנטי לתאים חיים תוך שמירה על רמת חיות גבוהה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להכיר ד&quot;ר תומס בולנד על הרעיון של שימוש המדפסות של HP DeskJet להדפסה התא. המימון לפרויקט זה מתוך 0903795 NSF RII-EPS ו NIH K25 HL0922280.

1. המרת HP DeskJet 500 יש לציין כי טכניקה זו צריך לעבוד הרבה עם מדפסות הזרקת דיו מסחרית. עם זאת, מדפסות ישנות יותר נוטים לפעול טוב יותר כאשר הם משתמשים מחסניות דיו עם חרירים בקוטר גדול יותר, אשר לא סותמים באותה קלות. בנוסף, מדפסות מבוגרים נוטים להשתמש מכניים הזנת הנייר חיישנים כי הם יותר קל לעקוף. מדפסות עם חיישנים אופטיים יכול להיות מרומה אלא באמצעות רצועת נייר קטנה בקצה המרוחק של המדפסת במהלך כל מחזור, אבל הוא קצת קשה יותר מאשר מערכת מכנית &quot;טריק&quot;. מדפסות כרגע זמינים מסחרית שהעבודה הטובה ביותר יש רזולוציה נמוכה (DPI). מדפסות ברזולוציה גבוהה יותר נוטים להדביק בקלות רבה יותר. רזולוציה של HP Deskjet 500 הוא 300 DPI. יש מדפסות מסחריים רבים (HP Deskjet סדרת ואחרים) בעלי רזולוציה של 600 DPI. סוג זה של המדפסת ניתן להשתמש עם עלייה קטנה בלבד בנחירסתימת נושאים ניתן להקל באמצעות ניקוי זהיר (סעיף 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את מעטפת הפלסטיק העליון של המדפסת על ידי פותח קליפים פלסטיק כמה מהבסיס התחתון של המדפסת ולאט לאט להרים את המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתחו את הברגת כפתור / תצוגה אור לוח מלמעלה של המדפסת, משאיר אותו מחובר אל לוח האם של המדפסת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את החלק הפנימי של המדפסת, במיוחד באזורים בהם מחסנית הדיו נח שם הדפסה מתרחשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את כבלי אספקת החשמל מנגנוני הזנת הנייר ונתק בינם לבין האם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב-HP DeskJet 500, אלה נמצאים ממש מתחת מגש הנייר לכיוון השמאלי של החזית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר זיהוי מנגנון נייר. לעקוף את המנגנון על ידי הדבקת מחרוזת או לולאת תיל לשמש ידית משיכה ידנית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב-HP DeskJet 500, מנגנון זיהוי נייר הוא מנוף הפלסטיק האפור נמצא מעל ומאחורי מנגנון הדפסה / נייר ההזנה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת הבמה מול מנגנון הזנת הנייר (שם נייר יהיה מוזן מ והפקיד) על מנת להביא את השקופיות ההדפסה הרצוי לרמה בדיוק מתחת לראש מחסנית הדפסה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הניסויים שלנו, משלוח קצף בעל 15 צינורות צנטריפוגות מ&quot;ל שימש עם שקופיות מיקרוסקופ מספר מוקלטות במקום באזור ההדפסה כדי להביא את רמת הסופי של השקופיות לגובה הרצוי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על טכניקה מזוהם, המדפסת יכול להיות ממוקם בתוך ארון Biohazard רגילה או למינרית השולחן מכסה המנוע לזרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשוב לציין כי שינוי זמינים מסחרית הזרקת דיו למדפסת בדרך כלל להפר את האחריות אל יצרן המדפסת. </li></ol> 2. המרת מניות של HP מחסניות דיו (HP 26 ראש דיו שחור) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא את המחסנית מהאריזה שלו, עוזב את הסרט המגן מכסה את הקשר המדפסת ראש ההדפסה עבור בינתיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצב את הגוףשל מחסנית (החלק השחור) או עם מהדק או מלחציים (פשוט לופת בחוזקה את מחסנית ביד בדרך כלל עבד גם כן), עוזב ראשיות הירוק של מכשול כלשהו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות צבת או מפתח ברגים מתכוונן, לתפוס את החלק העליון הירוק של מחסנית ולסובב הלוך ושוב מספר פעמים עד שהוא משתחרר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה לא צריך לקחת בכוח רב, אבל את החלק העליון כבר אינו נחוץ, אז זה בסדר אם זה שובר כאשר הסרתו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מברגים, לחלץ את פיסת פלסטיק שקופה נחשף עכשיו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוב, זה לא צריך לקחת הרבה כוח, אבל זה לא יהיה צורך, אז זה בסדר אם זה שובר במהלך ההסרה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרוקן כל שנותר מן המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסרט מגן פלסטיק המכסה את המגעים המדפסת ראש ההדפסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף היטב את מאגרי מים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש טפטפת או מזרק לדחוף את המים דרך הערוצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מים צפוי להדליף מהראש במהלך ההדפסהתהליך זה, זה מקובל, ואינו גורם נזק לפעולה התקינה של המחסנית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשהמים פועל ברורה, לאפשר המחסנית לייבוש. </li></ol> 3. ניקוי דיו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לשמור על סביבה נקייה הדפסה, מחסנית הדיו יש לנקות לפני ואחרי השימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה גם עוזר עם מניעת התגבשות מלחים חומר ביולוגי אחר מחסנית שעלולה לגרום חסימות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא להטביע את מחסנית בכוס מלאה במים דה מיונן, ו sonicate במשך 15 דקות לפני ואחרי ההדפסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר sonication, להסיר את המחסנית מתוך המים, לנער את עודפי המים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרסיס אתנול 70% לתוך המחסנית כדי ליצור סביבה יותר מזוהם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא אתנול התייבש לפני הוספת פתרון הדפסה bioink. </li></ol></li></ol> 4. ביצוע השעיה Cell - &quot;ביודיו &quot; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים והתרבות עד מוכנים למעבר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור fibroblasts 3T3: תאים זרעים על T-75 צלוחיות על כ 1.3x10 4 תאים / ס&quot;מ 2 ב Dulbeccos שינוי הנשרים בינוני (DMEM) עם סרום 10% שור עוברית (FBS). תאים תרבות יומיים באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הפתרון ניאון G-אקטין המניות בריכוז 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​בפתרון פוספט חוצץ (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המעבר התאים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור fibroblasts 3T3: הסר מדיה הבקבוק ולשטוף פעמיים עם PBS. לכסות את התאים עם 5 מ&quot;ל 0.25% + טריפסין EDTA ו דגירה במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של מדיום טרי פיפטה ההשעיה התא לתוך צינור מ&quot;ל 15 צנטריפוגה צנטריפוגה חרוטי ו בסל&quot;ד 1000 דקות 5. Aspirate בילה בינוני. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים PBS עם פתרון ה-G-אקטין המניות ניאון ליצור bioink. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bioink צריך הריכוז הסופי של ה-G-אקטין של מיקרוגרם 10 / מ&quot;ל ​​ו שותף לתאncentration של 1x10 5 תאים / מ&quot;ל. ריכוז זה עבר אופטימיזציה כדי להגביל את כמות התאים לכל טיפה ואת סתימת ראש המדפסת. 8 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב, 250 μl של bioink מדפיסה שלושה תלושי מכסים תבנית שמוצג באיור 2. </li></ol></li></ol> 5. Bioprinting <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המדפסת ולתת להתחמם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקום משטח ההדפסה הרצוי (כאן, אנו משתמשים 22 מ&quot;מ x 22 מ&quot;מ coverslips) על מרכז הבמה מוכנה בשלב 1.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת קובץ תבנית ההדפסה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את Microsoft Word (או כל תוכנת ציור אחרת), ולצייר את התבנית הרצויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר תבנית ההדפסה הרצוי להדפסה התא בקובץ את התערובת של העוגיות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את המחסנית מוכן עם ההשעיה התא הרצוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה ההשעיה לתוך עגול קטן גם בחלק התחתון של תא מחסנית. השתמש כ 100-120 μl של פתרון. גודל טיפה מודפס הוא בסביבות 130picoliters 8. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדפיס את הקובץ עם מדפסת HP Deskjet 500. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת התוצאות הטובות ביותר, להדפיס תבניות קטנות יותר מספר רב של פעמים (5), על ידי שינוי כמות עותקים הרצויה בתוכנית עיבוד תמלילים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדפסת יהיה לחמם שוב, ואז המחסנית יעברו &quot;העמדה מוכן&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המחסנית עובר למצב מוכן (מעט שמאלה של טפטוף דיו הרבה מתחת ונשאר שם), משוך על חוט מנגנון הזנת הנייר, ודפוס שצריך להתחיל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך מספר עותקים של הדפסה, מנגנון הזנת הנייר יהיה להשתחרר אחרי כל מחזור או דף מודפס. המחסנית לאחר מכן לחזור למצב &quot;מוכן&quot;, ואת חוט מנגנון הזנת הנייר יש להעלות שוב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המדפסת תדפיס על coverslip דגש על מרכז הבמה הדפסה בשלב 5.2 (ראה תרשים 2). </li></ol> 6. תוצאות נציג &lt;/ P&gt; התוצאות מייצגות של תהליך ההמרה של כל תקן, מדף-HP Deskjet 500, 26 מחסניות סטנדרטיות של HP מסדרת ייצור מדפסת עם יכולת של פתרונות הדפסה ניידים עבור סוגים רבים של ניתוח כאמור קודם לכן. המדפסת הושלמה לאחר ההמרה מוצגת באיור 3, כאשר בשלב ההדפסה למקם את תלוש כיסוי מיקרוסקופ על. המדפסת יכולה להיות שימושית בניתוח בתחומים רבים, כולל אך לא רק: מכניקת תאים בודדים, הנדסת רקמות, transfection גן, micropatterning biosensor, וטיפולים סלולריים ישירות 1-10, 16-22. בדוגמה זו, HP Deskjet 500 Printer ו-HP 26 מחסניות דיו סדרת שונו עבור bioprinting. באמצעות הגדרת מדפסת זו עם bioink המורכב ההשעיה פיברובלסטים תא פתרון ה-G-אקטין מונומר, תאים הודפסו על גבי זכוכית מיקרוסקופ coverslips. איור 1 מדגים מיל נציג<html> אולטס של תאים פיברובלסטים מודפסים, אשר מראים המשולבים מונומרים אקטין פלואורסצנטי. התוצאות התקבלו בסביבה מבוקרת מזוהם שבו התאים הודפסו לתוך תבניות הניתנות להתאמה אישית. דפוס שימוש בדוגמה זו נוצרה ב-Microsoft Word (איור 2). דפוס זה נוצר קו רציף של פתרון הדפסה על רוב שקופיות מיקרוסקופ. איור 4 מראה קו ישר שבו bioink ותאי מופקדים הדדית. יש לציין כי מיד לאחר ההדפסה, יש גידול של הקרינה רקע כי הפתרון bioink, שבו התאים מושעים, מכיל חינם מונומרים עודף אקטין ניאון. זו הקרינה רקע מקטין באופן משמעותי לאחר תוספת של בתקשורת הצמיחה על התאים (איור 1), אשר שוטף מונומר העולה מן המצע. <html> ad/3681/3681fig1.jpg &quot;/&gt; באיור 1. תמונות נציג של fibroblasts 3T3 3 שעות לאחר הדפסה באמצעות מדפסת הזרקת דיו שונה. הפנים של התאים להראות המשולבים מונומרים אקטין מתויג fluorescently. ברים בקנה מידה מייצגים 50 מיקרומטר. <img alt="איור 2." src="/files/ftp_upload/3681/3681fig2.jpg" /> איור 2. עיצוב השתמשו להדפיס bioink. <img alt="איור 3." src="/files/ftp_upload/3681/3681fig3.jpg" /> איור 3. מדפסת לאחר ההמרה עם הבמה קלקר. החוט הכתום באמצע עוקף את הזנת הנייר חיישן מנוף. <img alt="באיור 4." src="/files/ftp_upload/3681/3681fig4.jpg" /> איור 4. התמונה נציג fibroblasts 3T3 מודפסים באזור דפוס מקומי. תמונה מיקרוסקופית לקח 5 דקות לאחר ההדפסה בהגדלה 20x. / Files/ftp_upload/3681/3681fig5.jpg &quot;/&gt; איור 5. התמונה פלואורסצנטי (בהגדלה 40X) לקח 3 שעות לאחר ההדפסה מראה פיברובלסטים עם מופנמים מונומרים אקטין ניאון. סרגל קנה מידה מייצג 50 מיקרומטר. <img alt="איור 6." src="/files/ftp_upload/3681/3681fig6.jpg" /> איור 6. מיקרוסקופיה פלורסנט (20x הגדלה) של תא לקח 15 דקות לאחר ההדפסה. התמונה מראה גם G-אקטין (ירוק) ואת גרעין (כחול). משמאל לימין: G-אקטין עם Alexa פלואוריד 488, הגרעין עם DAPI, וכן כיסוי של שניהם. <img alt="איור 7." src="/files/ftp_upload/3681/3681fig7.jpg" /> איור 7. מיקרוסקופיה פלורסנט מראה שני fibroblasts בתבנית שורה 3 שעות לאחר ההדפסה. התמונה משמאל מראה מונומרים אקטין שכותרתו fluorescently בתוך התאים. התמונה מימין היא כיסוי של ערוץ ניאון עם תמונת הרקע להראות כי למרותייתכנו כמה פסולת בשקופית (בפינה השמאלית התחתונה), זה לא לזרוח. ברים בקנה מידה מייצגים 50 מיקרומטר אם הגודל לא הצביע על הימין הקיצוני היא קבוצת הביקורת שאינם מודפסים תאים מודגרות במשך 3 שעות עם מונומרים מתויג fluorescently. שליטה זו היא להראות כי מונומרים לא יכול לחדור את קרום התא ללא permeabilization קרום התא על ידי הדפסה.

<ol><li>Calvert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Materials+science.+Printing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Materials science. Printing cells.</a> Science. 318, 208-209 (2007).</li>
<li>Mironov, V., Reis,, Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Bioprinting%3A+A+beginning%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Review: Bioprinting: A beginning.</a> Tissue Eng. 12, 631-634 (2006).</li>
<li>Pepper, M. E., Parzel, C. A., Burg, T., Boland, T., Burg, K. J. L., Groff, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+Implementation+of+a+two-dimensional+inkjet+bioprinter%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+IEEE+Eng.+Med.+Biol.+Soc%22%5BJournal%5D)">Design and Implementation of a two-dimensional inkjet bioprinter.</a> Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 3-6, 6001-6005 (2009).</li>
<li>Campbell, P., Weiss, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+with+the+aid+of+inkjet+printers%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Biol.+Th%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering with the aid of inkjet printers.</a> Expert Opin. Biol. Th. 7, 1123-1127 (2007).</li>
<li>Boland, T., Xu, T., Damon, B., Cui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+inkjet+printing+to+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Application of inkjet printing to tissue engineering.</a> Biotechnol. J. 1, 910-917 (2006).</li>
<li>Mironov, V., Prestwich, G., Forgacs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprinting+Living+Structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Chem%22%5BJournal%5D)">Bioprinting Living Structures.</a> J. Mater. Chem. 17, 2054-2060 (2007).</li>
<li>Xu, T., Rohozinski, J., Zhao, W., Moorefield, E. C., Atala, A., Yoo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inkjet-mediated+gene+transfection+into+living+cells+combined+with+targeted+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Inkjet-mediated gene transfection into living cells combined with targeted delivery.</a> Tissue Eng. Part A. 15, 95-101 (2009).</li>
<li>Cui, X., Dean, D., Ruggeri, Z., Boland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Damage+Evaluation+of+Thermal+Inkjet+Printed+Chinese+Hamster+Ovary+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Cell Damage Evaluation of Thermal Inkjet Printed Chinese Hamster Ovary Cells.</a> Biotechnol. Bioeng. 106, 963-969 (2010).</li>
<li>Hamm, A., Krott, N., Breibach, I., Blindt, R., Bosserhoff, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transfection+method+for+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Efficient transfection method for primary cells.</a> Tissue Eng. 8, 235-245 (2002).</li>
<li>Saunders, R., Derby, B. B. ioprinting Inkjet Deposition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSaunders%2C+R+%22Encyclopedia+of+Industrial+Biotechnology%3A+Bioprocess%2C+Bioseparation%2C+and+Cell+Technology%22">Encyclopedia of Industrial Biotechnology: Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology</a>. 15, John Wiley & Sons. (2010).</li>
<li>Prabha, S., Zhou, W., Panyam, J., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependency+of+nanoparticle+mediated+gene+transfection%3A+studies+with+fractioned+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Size-dependency of nanoparticle mediated gene transfection: studies with fractioned nanoparticles.</a> Int. J. Pharm. 244, 105-115 (2002).</li>
<li>Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprinting%3A+inkjet+printing+proteins+and+hybrid+cell-containing+materials+and+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Chem%22%5BJournal%5D)">Bioprinting: inkjet printing proteins and hybrid cell-containing materials and structures.</a> J. Mater. Chem. 18, 5717-5721 (2008).</li>
<li>Apodaca, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocytic+Traffic+in+Polarized+Epithelial+Cells%3A+Role+of+Actin+and+microtubule+Cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">Endocytic Traffic in Polarized Epithelial Cells: Role of Actin and microtubule Cytoskeleton.</a> Traffic. 2, 149-159 (2001).</li>
<li>Hotulainen, P., Llano, O., Smirnov, S., Tanhuanpää, K., Faix, G., Rivera, C., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+mechanisms+of+actin+polymerization+and+depolymerization+during+dendritic+spine+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining mechanisms of actin polymerization and depolymerization during dendritic spine morphogenesis.</a> J. Cell Biol. 185, 323-339 (2009).</li>
<li>Allen, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+filament+uncapping+localizes+to+ruffling+lamellaw+and+rocketing+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Actin filament uncapping localizes to ruffling lamellaw and rocketing vesicles.</a> Nat Cell Biol. 5, 972-979 (2003).</li>
<li>Cooper, G. M., Miller, E. D., Desesare, G. E., Usas, A., Lensie, E. L., Bykowski, M. R., Huard, J., Weiss, L. E., Losee, J. E., Campbell, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inkjet-based+biopatterning+of+bone+morphogenetic+protein-2+to+spatially+control+calvarial+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Inkjet-based biopatterning of bone morphogenetic protein-2 to spatially control calvarial bone formation.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1749-1759 (2010).</li>
<li>Deitch, S., Kunkle, C., Cui, X., Boland, T., Dean, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+matrix+alignment+using+inkjet+printer+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+1094+%28DD%22%5BJournal%5D)">Collagen matrix alignment using inkjet printer technology.</a> Proc. 1094 (DD. , 7-16 (2008).</li>
<li>Ilkhanizadeh, S., Teixeira, A., Hermanson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inkjet+printing+of+macromolecules+on+hydrogels+to+steer+neural+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inkjet printing of macromolecules on hydrogels to steer neural stem cell differentiation.</a> Biomaterials. 28, 3936-3943 (2007).</li>
<li>Ringeisen, B. R., Orthon, C. M., Barron, J. A., Young, D., Sparago, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jet-based+methods+to+print+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Jet-based methods to print living cells.</a> Biotechnol. J. 1, 930-948 (2006).</li>
<li>Cui, X., Boland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microvasculature+fabrication+using+thermal+inkjet+printing+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Human microvasculature fabrication using thermal inkjet printing technology.</a> Biomaterials. 30, 6221-6227 (2009).</li>
<li>Langer, R., Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering.</a> Science. 260, 920-926 (1993).</li>
<li>Okamoto, T., Suzuki, T., Yamamoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+fabrication+with+covalent+attatchment+of+DNA+using+Bubble+Jet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microarray fabrication with covalent attatchment of DNA using Bubble Jet technology.</a> Nature Biotechnol. 18, 438-441 (2000).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

תהליך להמיר רגילות למדפסת הזרקת דיו עבור שולחן העבודה bioprinting לא קשה במיוחד. השלב המאתגר ביותר הוא לקבוע כיצד לעקוף את מנגנון הזנת הנייר, אשר תלויה המותג והדגם של המדפסת בשימוש. עם זאת, זה פשוט יחסית, כאשר חיישן הזנת הנייר הוא מכני, כמתואר כאן. עבור דגמים עם חיישנים אופטיים להאכיל, טכניקות אחרים עשויים צריך להיות מועסק על מנת להערים על מדפסת לחשוב זה היא באמצעות נייר, למשל, אפשר להפעיל פיסת נייר קטנה דרך המדפסת בזמן שהוא מדפיס בשקופית מיקרוסקופ. עקיפת מנגנון הזנת הנייר עשויה להיות הצעד הקשה ביותר ליישום נהלים אלה למודלים מדפסת אחר. כאשר בניית השלב להחזיק את coverslips להדפסה, חשוב כדי להבטיח יישור גובה תקין. שלב צריך לאפשר coverslip כדי להיות ממוקם באמצע אזור ההדפסה. בנוסף, הוא צריך PLאייס coverslip בגובה מספיק כדי לאפשר פינוי של מחסנית ההדפסה לעבור על השקופיות מבלי לשבש אותה. הגובה המדויק של הבמה תלוי בדגם המדפסת. על מנת להבטיח כי תאים מודפסים לא מקבלים שטף, השקופיות הונחו באינקובטור מיד לאחר ההדפסה למשך כ 30 דקות, כדי לאפשר התקשרות לתא לפני נוספות הצמיחה מדיה תא נוסף. כי התאים הודפסו הפתרון הכולל כמויות גדולות של PBS התאים לא התייבש ונותר בת קיימא. התאים היו צילמו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי לדמיין את חלוקת ה-G-אקטין מונומרים מתוייגים בתוך התא (איורים 1, 5-7). בעת הדפסה עם fibroblasts 3T3, איור 5 מראה תוצאה מייצג, עם אקטין גורם הרבה של התא כדי לזרוח, אבל לראווה שורות בהירות מוגברת. שילוב של מתויג fluorescently G-אקטין את cytoskeleton הואשימושי לחקר הדינמיקה cytoskeletal ומכניקה סלולריים. 12-15 הגבלה של הטכניקה הזו הוא שהיא חלה רק על מולקולות וחלבונים בעלי קוטר קטן יותר מאשר כ 10 ננומטר. על מנת להבטיח כי התאים היו ממש בטיפול ידי המדפסת המרה, DAPI (1:5000 ב PBS) נוספה bioink במקום מחצית מהיקף טהור PBS. DAPI כתם ניאון נקשר מנות חומצות האמינו העשירות של ה-DNA הנמצאים בגרעין. לכן DAPI הוא כתם שימושי גרעינים fluorescently הדמיה של תאים מודפסים. איור 6 מציג תמונה מייצגת של תא מציג גם פלואוריד Alexa 488 (אקטין) ו DAPI (גרעין) פלואורסצנטי עם תמונה כיסוי של שניהם. איור 7 גם ממחיש עד כמה התאים יהיה לזרוח פעם את G-אקטין מונומרים שולבו בזמן הלא ביולוגית חומר הופקד לתוך המדגם לא לזרוח בגלל absencדואר של G-אקטין מונומרים. שיקול אחד חשוב bioprinting היא התקשורת מימית בשימוש עבור bioink. נמצא כי באמצעות תקן התקשורת הצמיחה סלולריים עם סרום הניבו תוצאות לא עקביות. זהו ככל הנראה בשל סתימת של הדפסה חרירי ראש שנכתבו על ידי חלבונים בדם. השימוש PBS גדל עקביות של דפוסי המודפסים ומספר תאים שהופקדו. חסרון אחד לשימוש PBS היא לא התאים יש להשאיר את ההשעיה לתקופות זמן ממושכות. עם זאת, fibroblasts בדוגמאות הללו היו מסוגלים לסבול את התנאים bioink במשך שעה לפחות ללא שינוי כדאיות התא. זה עולה בקנה אחד עם ממצאים קודמים מספר, אשר מדווחים כי תאי מודפסים באמצעות מנגנוני הזרקת דיו תרמית הוכחו יש שיעור גבוה הכדאיות. 2-8 הגדרת מדפסת שונה יכול לשמש ליישומים אחרים מלבד הדפסה התא. 16-22 חלבונים מטריקס, כגון קולגן או fibronectin, ניתן להדפיס בקלות על גבי מצעים בעזרת טכניקה זו, אשר יכול להיות שימושי עבור דפוסים התא. עבור סוג, למשל קולגן הדפסתי את דפוסי קו תגרום מצעים קולגן מסודרים בהם ניתן להשתמש על התרבות תאים במבחנה. 17 בנוסף חלבונים מטריקס, מולקולות אחרות, כולל גורמי גדילה, יכול להיות מקומי אמין ללימודי תאים על מצעים וגם לפוטנציאל הריפוי. 18 המגבלה העיקרית של עיצוב תיאר את השלבים לעיל היא כי המדפסת הזו הוא לא מסוגל להדפיס בממד אחד או יותר. זה מגביל את הפוטנציאל לשימוש ביישומים בדוגמת כגון הדפסה הפיגום. כדי לאפשר הדפסה 3D, הבמה המקצועית צריך לשמש. שלב צריך להיות התאמות גובה מצטבר עבור בתצהיר שכבה אחר שכבה של bioink. Bioprinting הוכיח הבטחה כשיטה יעילה וחסכונית עבור הנדסת רקמות,, Transfection micropatterning ו microarray ייצור הגן 1-12, 16-22 היישומים העתידיים של סוג זה של המכשיר הם רבים, כולל:. יצירת microenvironments הסלולר שבשליטת בדוגמת, שילוב של מקרומולקולות לתוך הציטופלסמה התא, וכן בתצהיר של תאים על פיגומים ומבנים שאינם באופן טבעי או ביעילות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> HP Deskjet 500 </td><td> Hewlett-Packard </td><td> C2106A </td><td> הופסק מהיצרן. רכש טריידר שיפוץ דצמבר </td></tr><tr><td> HP 26 דיו שחור </td><td> Hewlett-Packard </td><td> 51626A </td><td></td></tr><tr><td> מן השריר אקטין ארנב, Alexa פלואוריד המצומד 488, 200 מיקרוגרם </td><td> Invitrogen </td><td> A12373 </td><td></td></tr><tr><td> פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) </td><td> מגה פיקסל Biomedicals </td><td> ICN1860454 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbeccos שינוי הנשרים בינוני (DMEM) </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH3002201 </td><td></td></tr><tr><td> בסרום שור עוברית </td><td&gt; סיגמא אולדריץ </td><td> F4135 </td><td></td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A2942 </td><td> השתמשו ב 0.5% בתקשורת תרבית תאים </td></tr><tr><td> פניצילין, סטרפטומיצין </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4333 </td><td> השתמשו ב 0.5% בתקשורת תרבית תאים </td></tr><tr><td> זרימה חד כיווני ספסל נקי </td><td> Envirco </td><td> VLF 797 </td><td> דיור לא חובה לשמירה על המדפסת אספטי </td></tr></tbody></table>

יצירת חולף קרום התא הנקבוביות באמצעות מדפסת הזרקת דיו רגילה

Creating Transient Cell Membrane Pores Using a Standard Inkjet Printer

Bioprinting יש מגוון רחב של יישומים ומשמעותם, כולל הנדסת רקמות, טיפולים ישירים יישומים סלולריים, microfabrication biosensor. 1-10 לאחרונה, הדפסה הזרקת דיו תרמית שימש גם עבור transfection הגן. 8,9 תהליך הדפסת דיו תרמית הוצגה זמני לשבש את קרום התא מבלי להשפיע על כדאיות התא. הנקבוביות חולפות בקרום ניתן להשתמש כדי להציג את מולקולות, אשר היה אחרת להיות גדול מכדי לעבור דרך הממברנה, לתוך הציטופלסמה של התא. 8,9,11 יישום שמפגינים כאן הוא השימוש הדפסת דיו תרמית על שילוב של מונומרים שכותרתו fluorescently G-אקטין לתוך התאים. היתרון בשימוש הדפסה הזרקת דיו תרמית להזריק מולקולות לתוך תאים היא הטכניקה היא סבירה יחסית לתאים. 8, 12 כדאיות התא לאחר ההדפסה הוכח להיות דומה לתא PLA תקןטינג שיטות 1,8. בנוסף, הדפסת דיו יכול לעבד אלפי תאים בתוך דקות, שזה הרבה יותר מהר מאשר microinjection ידנית. בנקבוביות נוצר על ידי הדפסה הוכחו להיסגר בתוך כשעתיים. עם זאת, אין הגבלה על גודל הנקבוביות של יצירה (~~~HEAD=NNS 10 ננומטר) עם טכניקה זו הדפסה, אשר מגביל את הטכניקה כדי הזרקת תאים עם חלבונים קטנים ו / או חלקיקים. 8,9,11 תקן HP Deskjet 500 Printer שונה, כדי לאפשר הדפסה התא. 3, 5, 8 הכיסוי של המדפסת הוסר מנגנון הזנת הנייר היה לעקוף באמצעות מנוף מכני. בשלב נוצר כדי לאפשר הצבת של שקופיות מיקרוסקופ ו coverslips ישירות תחת ראש ההדפסה. מחסניות דיו נפתחו, דיו הוסר והם נוקו לפני השימוש עם תאים. דפוס הדפסה נוצר באמצעות תוכנת ציור רגיל, אשר לאחר מכן נשלט על המדפסת באמצעות הפקודה הדפסה פשוטה. 3T3 fibroהפיצוצים היו גדולים כדי המפגש, trypsinized, ו resuspended מכן לתוך פוספט שנאגרו מלוחים עם מסיסים G-אקטין מונומרים שכותרתו fluorescently. ההשעיה התא pipetted לתוך מחסנית דיו שורות של תאים הודפסו על גבי זכוכית מיקרוסקופ תלושי כיסוי. התאים היו חיים צילמו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ו אקטין נמצא ברחבי הציטופלסמה. שילוב של אקטין פלואורסצנטי לתוך התא מאפשר הדמיה של זמן קצר הדינמיקה cytoskeletal והוא שימושי למגוון רחב של יישומים. 13-15

תיאור של שיטות להמיר HP DeskJet 500 המדפסת לתוך bioprinter. המדפסת מסוגלת עיבוד תאים חיים, מה שגורם הנקבוביות חולפים על הממברנה. נקבוביות אלה יכול להיות מנוצל לשלב מולקולות קטנות, כולל ניאון G-אקטין, לתוך תאים מודפסים.

להדפסה ביו-מדומה (Bioprinting) מגוון רחב של יישומים וחשיבות, הכוללים הנדסת רקמות, טיפולים המבוססים על יישום תאים ישיר, וחיישנים ביולוגיים...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא ליצור נקבים זמניים בממברנות של תאים באמצעות הדפסת הזרקת דיו. דבר זה מושג תחילה על ידי התאמה של מדפסת הזרקת דיו סטנדרטית. השלב השני הוא ריקון וניקוי של מחסנית דיו סטנדרטית של המדפסת כדי לאפשר את הכנסת הביו-דיו.בשלב הבא, התאים המבוקשים מושעים בתמיסה של מונומרי אקטין המסומנים פלורוצנטית וב-PBS כדי ליצור את תמיסת הדיו הביולוגי. השלב הסופי הוא הדפסת הדיו הביולוגי על גשמיות מיקרוסקופ באמצעות המדפסת והמחסנית המותאמות. לבסוף, ניתן להשתמש במיקרוסקופיה פלורוצנטית כדי להראות כי מונומרי G actin המצומדים ל-Fluor four הופנמו לתוך התאים המודפסים דרך נקבי ממברנה זמניים.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני טכניקות סטנדרטיות של טרנספקציה והזרקה מיקרוסקופית לתאים הוא שטכניקת הדפסה זו קלה לשימוש ומניבה חיות תאים גבוהה. למרות שטכניקה זו יכולה לספק תובנות בתחום הגנטיקה, ניתן ליישמה גם בתחומי מחקר אחרים, כגון ביופיזיקה של התא והנדסת רקמות בביופיזיקה של התא. ניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לצפות בקלות בשלד התא במהלך נדידת תאים.הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר רצינו להיות מסוגלים להדמיא ויזואלית שינויים בסידור השלד התאי כתוצאה מכוחות המופעלים על תאים. התחילו בשחרור התפסים מפלסטיק מהבסיס התחתון של המדפסת ולאחר מכן הרימו באיטיות את כיסוי הפלסטיק העליון. לאחר מכן, נתקו את פאנל תאורת תצוגת הכפתורים מהחלק העליון של המדפסת, תוך השארתו מחובר ללוח האם של המדפסת.באמצעות מגבוני Kim ואתנול, נקה את החלק הפנימי של המדפסת, ובמיוחד את האזורים שבהם נח cartridge הדיו ואת אזור ההדפסה. לאחר מכן, אתר את הכבל המספק חשמל למנגנוני הזנת הנייר של ה-HP desk Jet 500.הם נמצאים ממש מתחת למגש הנייר משמאל לחלק הקדמי; נתקו את הכבלים מלוח האם. כעת אתרו את מנגנון זיהוי הנייר וחברו לולאת חוט למנוף הפלסטיק האפור שנמצא מעל ומאחורי מנגנון הזנת נייר ההדפסה כדי שישמש כידית ידנית, והניחו כאן במה. מחזיק הספוג למשלוח של 15 מבחנות צנטריפוגה משמש יחד עם מספר זכוכיות מיקרוסקופ המודבקות במקומן באזור ההדפסה שלפני מנגנון הזנת הנייר, וזאת כדי להביא את זכוכיות ההדפסה הרצויות למפלס הנמצא ממש מתחת לראש ההדפסה של המחסנית.לבסוף, כדי לשמור על טכניקה אספטית, מקמו את המדפסת בתוך מbigcup זרימה למינרית. התחילו בהוצאת המחסנית מאריזתה, כאשר הסרט המגן המכסה את מגעי המדפסת ואת ראש ההדפסה נשאר במקומו. ייצבו את גוף המחסנית באמצעות תפס, כך שהחלק העליון הירוק יישאר נקי ממכשולים, והשתמשו בכלי חיתוך סיבובי ידני.חיתכו את החלק העליון הירוק של המחסנית, רוקנו את הדיו שנותר מהמאגר, ולאחר מכן הסירו את סרט ההגנה מפלסטיק המכסה את מגעי המדפסת ואת ראש ההדפסה. המים עשויים לדלוף מראש ההדפסה במהלך תהליך זה, אך הדבר לא יגרום נזק למחסנית. כאשר המים שיוצאים יהיו צלולים, הניחו למחסנית להתייבש.כדי לשמור על סביבת הדפסה נקייה, התחילו בהטבלה מלאה של המחסנית בבכור מלא במים דה-יוניזציה, ולאחר מכן בצעו סוניקציה למחסנית למשך 15 דקות. לאחר הסוניקציה, הוציאו את המחסנית ונקעו ממנה את עודפי המים. רססו ethanol 70% לתוך המחסנית כדי ליצור סביבה אספטית יותר.לאחר קצירת התאים הרצויים, סבב את התאים בחמישה מיליליטר של מצע טרי בתוך מבחנה קונית של 15 מיליליטר למשך חמש דקות ב-250 ×g בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שאב את המצע ותלה את התאים בריכוז של 1 × 10⁵ תאים למיליליטר בתמיסת סטוק של fluorescent G actin שהוכנה טרי. ליצירת דיו ביולוגי, שימו לב ש-250 µL של דיו ביולוגי מדפיס שלוש לוחות כיסוי עם דפוס הקווים המוצג כאן. לאחר הדלקת המדפסת וחימומה, מקמו כאן את משטח ההדפסה הרצוי; לוחות כיסוי של 22 מילימטר על 22 מילימטר מונחים במרכז הבמה שהורכבה קודם לכן.בשלב הבא, פתחו תוכנה לשרטוט ובחרו את התבנית הרצויה. כעת, העבירו בפיפט כ-100 עד 120 µL מתלי השהייה של התאים אל הבאר המעגלית הקטנה בתחתית תא המחסנית. הדפיסו את הקובץ; בזמן שהמדפסת מתחממת שוב, המחסנית תעבור למצב מוכן.כאשר המחסנית נעה מעט שמאלה מבאר טפטוף הדיו ונשארת שם, משוך למעלה את מנגנון הזנת הנייר והחוט, וההדפסה תחל. המדפסת תדפיס על זכוכית כיסוי המונחת במרכז במת ההדפסה באמצעות מדפסת HP desk jet 500 עם דיו ביולוגי המורכב מתמיסת תאי פיברובלסט בתוך תמיסת G actin monomer.בתוך סדרה של HP 26, הודפסו תאי מחסנית דיו על לבישי זכוכית של מיקרוסקופ. איור זה ממחיש תוצאה מייצגת של תאי פיברובלסט מודפסים המראים מונומרים פלואורסצנטיים של אקטין ששולבו בהם. תבנית זו שימשה באיור הקודם ליצירת קו רציף של תמיסת ההדפסה לאורך רוב לביד המיקרוסקופ.באיור זה מוצג הקו הישר שבו הופקדו באופן הדדי ה-biolink והתאים. שימו לב כי מיד לאחר ההדפסה קיימת עלייה בفلורסצנציית הרקע, מכיוון שתמיסת ה-biolink שבה התאים מושעים מכילה עודף של מונומרים פלואורסצנטיים חופשיים של actin; דגירה של התאים למשך כ-10 דקות לאחר ההדפסה מקלה על ההיצמדות לסלייד, ומאפשרת לשטוף את תמיסת העודף של המונומרים מהמצע באמצעות מצע גידול טרי, מה שמפחית משמעותית את פלורסצנציית הרקע. כאן מוצגת תמונה מייצגת של שלושה תאי fibroblast מסוג T3 שהודפסו באזור הדפסה מקומי; כפי שמוצג, מיקרוגרף זה בצילום מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של תא שצולם 15 דקות לאחר ההדפסה מראה את ה-giin בירוק, את הגרעין בכחול, ואת השכבה המשולבת (overlay) של ה-GI actin ושל הצבע הגרעיני.שתי התמונות הבאות מציגות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של שני פיברובלסטים בתבנית קווית שלוש שעות לאחר ההדפסה. תמונה ראשונה זו מראה מונומרים של actin המסומנים פלואורסצנטית בתוך התאים. תמונה שנייה זו היא סמיכה של הערוץ הפלואורסצנטי על תמונת הרקע, כדי להראות שלמרות שייתכנו שאריות על הפסלית בפינה השמאלית התחתונה, הן אינן פלואורסצנטיות.לבסוף, מוצגת כאן קבוצת ביקורת של תאים שלא הודפסו, אשר דגרו במשך שלוש שעות עם מונומרים המסומנים פלואורסצנטית, כדי להדגים כי מונומרים אינם יכולים לחדור דרך ממבט התא ללא חדירות ממברנה המושגת על ידי הדפסת תאים. בעת ביצוע הליך זה, חשוב להכין מספר מחסניות נקיות ומוכנות לשימוש, שכן סתימה של המדפסת היא אחת הבעיות המעכבות טכניקה זו. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה לגבי אופן המרת מדפסת שולחנית סטנדרטית להדפסת תאים חיים, דבר המסייע ביצירת כוח ממברנה זמני.

creating-transient-cell-membrane-pores-using-a-standard-inkjet-printer

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

שיטה להרכבה של שיפועים ודבק מסיסים בתא מיקרוסקופי למחקרי נדידת תאי חיים מתוארת. הסביבה המהונדסת משלבת משטחי antifouling ופסי דבק עם שיפועי פתרון ולכן מאפשרת אחת כדי לקבוע את החשיבות היחסית של רמזי הדרכה.

יצירת Gradients הדבק והמסיס לנדידת תאי דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי

טכנולוגיית הדפסה מיקרופלואידית תלת מימדית זו מדפיסה מערכי תאים על משטחים שקועים.  אנו מתארים כיצד מערכי תאים מועברים באופן מיקרופלואידי, בתאי זרימה תלת מימדיים על משטחים שקועים.  על ידי הדפסה על משטחים שקועים, יוצרו מיקרו-מערכי תאים המאפשרים סינון תרופות והערכת ציטוטוקסיות במספר רב של תחומים.

הדפסה השקועה של תאים על גבי משטח שונה באמצעות זרימת Microspotter רציפה

השיטות מתוארות במאמר זה להראות כיצד להמיר מדפסת הזרקת דיו מסחרית לbioprinter עם פילמור UV בו זמנית. המדפסת מסוגלת בניית מבנה רקמות 3D עם תאים וחומרים ביולוגיים. המחקר הראה כאן נבנה neocartilage 3D.

ייצור רקמת סחוס אנושי באמצעות שלושה ממדי הזרקת דיו טכנולוגיית הדפסה

jetting microfluidic נגד bilayer שומנים ממשק אגל מספק דרך אמינה כדי ליצור שלפוחית ​​עם שליטה על חוסר סימטריה בממברנה, שילוב של חלבונים הטרנסממברני, ואנקפסולציה של חומר. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת כדי ללמוד מגוון רחב של מערכות ביולוגיות שבי ביומולקולות הממודרת הן רצויה.

השומנים bilayer שלפוחיות דור שימוש Microfluidic jetting

מדפסת ביולוגית קרטזית תוכננה ויוצרה כדי לאפשר שקיעה מרובת חומרים בגיאומטריות מדויקות הניתנות לשחזור, תוך מתן אפשרות לשליטה בגורמים סביבתיים. באמצעות המדפסת הביולוגית התלת מימדית, ניתן להדפיס מבנים מורכבים ובני קיימא ולשכפל אותם בקלות.

כדאיות של מבנים ניידים Bioprinted באמצעות מדפסת הקרטזיאני Dispenser שלוש

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיית הדפסה ביולוגית באמצעות מערכת הפקדה רובוטית אוטומטית המשלבת רמזי הנחיה טופוגרפיים חרוטים עם תצהיר מדויק של תא הנושא דיו הידרוג'ל. התאים המודפסים מועברים ישירות לתכונות החרוטות ומסוגלים לחוש ולהתמצא איתם.

טכניקת Dispensing רובוטיות אוטומטית להכוון משטחים Bioprinting של תאים

דוח זה מתאר טכניקה פשוטה וקלה לביצוע, תוך שימוש בוואקום בלחץ נמוך, למילוי תעלות מיקרופלואידיות בתאים ומצעים למחקר ביולוגי.

שיטה צדדית של חלבוני דפוסי תאים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר דפוסים מוליך ברזולוציה גבוהה באמצעות הדפסה electrohydrodynamic (EHD) סילון. הפרוטוקול כולל שני מצבים של הדפסה EHD סילון: את electrospinning-שדה ליד רציף (NFES) והדפסה של מבוססי נקודה טיפה לפי דרישה EHD (משרד ההגנה).

ברזולוציה גבוהה תכנים באמצעות שני מצבים של Electrohydrodynamic סילון: ירידה על הביקוש, שדה-Electrospinning

מוצג כאן היא טכניקת הדפסה 3D מתון מונע על ידי כוחות צמיגים-אינרציאליים לסירוגין כדי לאפשר את הבנייה של מיקרוקארים הידרוג'ל. חרירים תוצרת בית מציעים גמישות, ומאפשרים החלפה קלה לחומרים וקטרים שונים. מיקרוקארים מחייבים תא בקוטר של 50-500 מיקרומטר ניתן להשיג ולאסוף עבור culturing נוסף.

הדפסה תלת-ממדית של מיקרוקארים הידרוג'ל במבחנה על ידי סילון כוח צמיג-אינרציאלי לסירוגין

פרוטוקול זה מדגיש שיטה להערכה מהירה של תאימות ביולוגית של ננו-תאי גבישי (CNC)/אגרוז דיו ביו-חומרים מרוכבים הידרוג'ל עם תאי פין שמקורם במח העצם של העכבר במונחים של כדאיות התא וביטוי פנוטיפי של קולטני פני השטח של התא, קיט (CD117) וקולטן IgE בעל זיקה גבוהה (FcεRI).

ייצור של דיו ביו-חומרים אגרוז משובץ ננו-תאית לגבישית

פרוטוקול זה מתאר תהליך פשוט המשתמש במיקרו-תבניות פלסטיק נוחות לפעולות מיקרו-הבלטה פשוטות לייצור מיקרו-ערוצים על נייר תאית ננו-פיברילציה, להשגת רוחב מינימלי של 200 מיקרומטר.

מיקרו-הבלטה: תהליך נוח לייצור מיקרו-ערוצים על מיקרופלואידיקה מבוססת נייר ננוצלולוז

למדו ליצור חולף קרום תאים באמצעות מדפסת הזרקת דיו רגילה שעוברת התאמה לביוהדפסה. השיטה מאפשרת הכנסת מולקולות קטנות כמו G-actin פלואורסצנטי לתאים חיים תוך שמירה על רמת חיות גבוהה.

יצירת חולף קרום התא הנקבוביות באמצעות מדפסת הזרקת דיו רגילה

גלה סרטונים נוספים