Name: טפיל מושרה מונע גנטית אוטואימונית מחלות לב Chagas דגם עוף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: חקור שילוב DNA מיטוכונדרי של Trypanosoma cruzi בגנום עוף ואת השפעתו על מחלת לב דומה לצ'אגאס. מחקר זה מספק מודל חדשני לחקר מנגנוני המחלה הגנטיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו חייבים תודה ננסי ר &#39;שטורם, המחלקה לאימונולוגיה, למיקרוביולוגיה מולקולרית ביולוגיה, דיוויד גפן בית הספר לרפואה, אוניברסיטת קליפורניה בלוס אנג&#39;לס, על קריאה ביקורתית של כתב היד. המועצה הלאומית למחקר-CNPq, והקרן למחקר ופיתוח-FAPDF, ברזיל, נתמך במחקר. אנו מודים על הסיוע הטכני של אלסנדרו א &#39;סוזה, מריה ג Guimaro, סירו Cordeiro, אנה דה Cassia רוזה, אלבס Roseneide, ורפאל אנדראדה, מהאוניברסיטה של ​​ברזיליה, ברזיל.

<ol><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+chagas%27+disease%3A+parasite+persistence+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22CMR%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of chagas' disease: parasite persistence and autoimmunity.</a> CMR. 24, 592-630 (2011).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Postg.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Chagas disease.</a> Postg. Med. J. 82, 788-798 (2006).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypanosoma+cruzi+in+the+chicken+model%3A+Chagas-like+heart+disease+in+the+absence+of+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl.+Trop.+Dis%22%5BJournal%5D)">Trypanosoma cruzi in the chicken model: Chagas-like heart disease in the absence of parasitism.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1000(2011).</li>
<li>Hecht, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+DNA+transferred+from+American+trypanosomes+to+human+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts.</a> PLoS One. 5, e9181(2010).</li>
<li>Xing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+ERK+MAPK+in+the+regulation+of+proinflammatory+and+apoptotic+responses+in+chicken+macrophages+infected+with+H9N2+avian+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Roles of the ERK MAPK in the regulation of proinflammatory and apoptotic responses in chicken macrophages infected with H9N2 avian influenza virus.</a> J. Gen. Virol. 91, 343-351 (2010).</li>
<li>Kim, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIK+and+IKKbeta+interdependence+in+NF-kappaB+signalling--flux+analysis+of+regulation+through+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">NIK and IKKbeta interdependence in NF-kappaB signalling--flux analysis of regulation through metabolites.</a> Biosystems. 99, 140-149 (2010).</li>
<li>Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2Fp38+MAP-kinases+and+PI3K+are+involved+in+the+differential+regulation+of+B7-H1+expression+in+DC+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">ERK/p38 MAP-kinases and PI3K are involved in the differential regulation of B7-H1 expression in DC subsets.</a> Eur. J. Immunol. 40, 254-266 (2010).</li>
<li>Finsterer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heart+in+human+dystrophinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">The heart in human dystrophinopathies.</a> Cardiology. 99, 1-19 (2003).</li>
<li>Nitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritable+integration+of+kDNA+minicircle+sequences+from+Trypanosoma+cruzi+into+the+avian+genome%3A+insights+into+human+Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heritable integration of kDNA minicircle sequences from Trypanosoma cruzi into the avian genome: insights into human Chagas disease.</a> Cell. 118, 175-186 (2004).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetoplast+DNA+in+trypanosomid+flagellates%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Kinetoplast DNA in trypanosomid flagellates.</a> Int. Rev. Cytol. 99, 1-19 (1986).</li>
<li>Bonney, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-killed+Trypanosoma+cruzi+induces+acute+cardiac+damage+and+polyantigenic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Heat-killed Trypanosoma cruzi induces acute cardiac damage and polyantigenic autoimmunity.</a> PLoS One. 6, e14571(2011).</li>
<li>Moser, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Trypanosoma+cruzi+by+DNA+amplification+using+the+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 27, 1477-1482 (1989).</li>
<li>Sturm, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+and+schizodeme+classification+of+Trypanosoma+cruzi+cells+by+amplification+of+kinetoplast+minicircle+DNA+sequences%3A+use+in+diagnosis+of+Chagas%27+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection and schizodeme classification of Trypanosoma cruzi cells by amplification of kinetoplast minicircle DNA sequences: use in diagnosis of Chagas' disease.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 33, 205-214 (1989).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+pathology+in+chagas+disease--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mem.+Inst.+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Evolution and pathology in chagas disease--a review.</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 101, 463-491 (2006).</li>
<li>Yurchenko, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+Leishmania+minicircle+kinetoplast+DNA+classes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Structure of Leishmania minicircle kinetoplast DNA classes.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 1656-1657 (1999).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+organization+of+guide+RNA+genes+in+kinetoplastid+protozoa%3A+several+conundrums+and+their+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The genomic organization of guide RNA genes in kinetoplastid protozoa: several conundrums and their solutions.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 86, 133-141 (1997).</li>
<li>Thomas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-universal+transcription+factor%3F+The+Leishmania+tarentolae+TATA+box-binding+protein+LtTBP+associates+with+a+subset+of+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A non-universal transcription factor? The Leishmania tarentolae TATA box-binding protein LtTBP associates with a subset of promoters.</a> Int J. Parasitol. 36, 1217-1226 (2006).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

בניגוד ליונקים רגישים כל החיים ט &#39; זיהומים cruzi, תרנגולות הם מגיבים ט cruzi זיהום. היתרון העיקרי של מערכת מודל עוף היא חיסול הזיהום מוקדם בפיתוח של מערכת החיסון העוברי. לכן, ה-DNA הטפיל היחיד שנותר בתוך הגוף עוף משולב ב לוקוסים מספר. השימוש כמות אופטימלית של ט ארסית cruzi trypomastigotes לחסן ביצה פורייה היא צעד קריטי לקראת קבלת שילוב של minicircles kDNA לתוך הגנום עובר עוף. שיעור הבקיעה הגוזלים חי ביצים מחוסן עם 100 trypomastigotes הוא פי ארבעה גבוה יותר מזה שהושג עם 500 טפילים. יש להקפיד לחסן את ההשעיה טפילים μL 10 בינוני התרבות לתוך תא האוויר ביצה. לא אמורה להיות דליפה של חלבון ביצה. בתנאים אופטימליים, זיהום טפילי תאיים מתרחש Wiדקה כמה שעות לאחר כפל הדגירה ואת הטפיל בתוך התמורה תאים המארח למשך שבוע, לאחר מכן את הזיהום מסולק על ידי חסינות מולדת. שילוב kDNA דורש זיהום חיים, ואת הרכבה של minicircles עירומים לתוך ביצי תרנגולת הראשונים העובר אינו תוצאה של שילוב. KDNA חיובי העוברים והבקרות יש שוכנו בתנאים מבוקרים על 37.5 מעלות צלזיוס והלחות 65%. הגוזלים מוחזקים בכלובים במשך שבועיים ב 33 ° C טמפרטורת החדר. לאחר מכן את התרנגולות מוחזקות בכלובים תלויים על מתלים נפרדים ב -1.5 מטר רוחב המעברים בחדר על 22 מעלות צלזיוס עם אוויר מסונן לחץ חיובי תחת עייפות מתמדת כדי להבטיח את תנאי הרווחה של בעלי חיים. המבוגרים נמאס עוף האוכל ושותה מים זורמים ראויים לשתייה להשיג צמיחה בגרות מלאה, להטיל ביצים על חמישה חודשים של גיל. ותחזוקה של נהלים היגיינה חיוניים שחזור של תוצאות בעבודה עם ט &#39; cruzi מחוסןבתוך ביצי תרנגולת פוריים. במערכת עוף מודל T. זיהומים cruzi הושרשו לאחר פיתוח של מערכת החיסון בתקופה המוקדמת של צמיחה לעובר. בנוסף להיותו זיהום חינם, הגוזלים הבוקעים מן ט cruzi מחוסן ביצים, בחוסר של נוגדנים ספציפיים, סובלניים כדי אנטיגנים הטפיל. דחייה של לב תאים היעד ידי לימפוציטים ציטוטוקסיים (יחידת דחייה מינימלית, איור 3) היא לראות את התרנגולות kDNA-מוטציה המראים שינויים גנוטיפ פירוט של מעקב החיסונית 3. את שונה genotypically מתאי T להציג דחייה מואצת של רקמות עצמי בגוף. האתר הנגע העיקרי הוא הלב, שהוא סימן ההיכר של המחלה Chagas. המעבר מ פיזיולוגי (מעקב) למצב physiopathologic נתפסת עוף kDNA-מוטציה מראה clonally ריבוי לימפוציטים ציטוטוקסיים 3. Tהמודל שלו transkingdom המערכת מציגה טפיל-Induced, גנטית מונע מחלה אוטואימונית (איור 6), הנובע שינויים הגנום של ט &#39; cruzi kDNA minicircle ואינטגרציות. שינויים אלה לא נראים הגוזלים שבקעו מן הביצים LB-מחוסן. תופעה זו עולה כי הטיפול הניסיוני של קרדיומיופתיה אוטואימונית דלקתית kDNA למוצרי מוטציה תרנגולות עשויים לדרוש תרופות דיכוי של מח העצם של אבי פנוטיפ T-cell ספציפיים חדירה שריר הלב, וכן השתלת מח עצם בריא histocompatible כדי למנוע את דחיית רקמות עצמית.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Taq פולימראז ה-DNA רקומביננטי </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> פלטינום Taq DNA פולימראז </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Random סימון primers DNA מערכת </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> MBO אני </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> סט dNTP, פתרונות 100mm </td><tד&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - חתול n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep מיני ספין ערכת </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> NSI אני </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R5884 1KU </td><td></td></tr><tr><td> , ה-DNA מלח נתרן דגים זרע </td><td> AMRESCO </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> נגד עוף עכבר bu-1B </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> עכבר נגד עוף CD45 </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>עכבר נגד עוף TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> עכבר נגד עוף CD8α </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> עכבר נגד עוף מונוציטים / מקרופגים </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

טפיל מושרה מונע גנטית אוטואימונית מחלות לב chagas דגם עוף

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

את cruzi Trypanosoma זיהומים חריפים שנרכשו בינקות ובילדות נראה ללא תסמינים, אך כשליש מן המקרים שנדבקו במחלה כרונית להראות Chagas עד שלוש שנים או במאוחר. אוטואימוניות והתמדה טפיל מתחרים תיאוריות כדי להסביר את הפתוגנזה של המחלה Chagas 1, 2. לתפקידים שונים שיחק על ידי התמדה טפיל אוטואימוניות במחלה Chagas לנו לחסן ט cruzi בחדר אווירה של ביציות מופרות. המערכת החיסונית היא עוף בוגר מחסום ביולוגי חזק נגד ט &#39; cruzi ואת הזיהום הוא נמחק על התפתחות המערכת החיסונית שלה עד סוף השבוע הראשון של הצמיחה 3. האפרוחים הם טפיל ללא ב הבקיעה, אבל הם שומרים משולב טפיל המיטוכונדריה kinetoplast DNA (kDNA) minicircle בתוך הגנום שלהם המועברים לצאצאים. תיעוד של אינטגרציה kDNA minicircle בגנום עוף הושג על ידי טארגeted ראש זנב PCR, הכלאות הדרום, שיבוט, וכן רצף 3, 4. KDNA minicircle ואינטגרציות הקרע מסגרות קריאה פתוחות עבור שעתוק גורמים במערכת החיסון, phosphatase (GTPase), adenylate cyclase ו phosphorylases (PKC, NF-kappa B activator, PI-3K) הקשורים לפיזיולוגיה התא, צמיחה, והבחנה 3, 5 - 7, ופונקציות גנים אחרים. דלקת שריר הלב חריפה עקב דחייה של סיבי הלב היעד על ידי לימפוציטים ציטוטוקסיים effectors היא לראות את העופות שעברו מוטציה kDNA, מראה cardiomyopathy דלקתית דומה לזה ביטוי המחלה Chagas האדם. יש לציין כי אי ספיקת לב, חולשה בשרירי השלד נמצאים עופות בוגרים עם הקרע kDNA של גן הדיסטרופין על כרומוזום 1 8. שינויים דומים genotipic קשורים להרס רקמות שביצע effectors CD45 +, CD8γδ +, CD8α לימפוציטים. כך זה יכול לגרום זיהום protozoan מחלה אוטואימונית מונע גנטית.

חיסון של<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; ביצים פוריות שקדמו הדגירה הופך kDNA טפיל minicircle אינטגרציה בגנום העובר תאים. הכלאה מגלה העברה אנכית של המוטציות על הצאצאים. KDNA משתלב קידוד אזורי ב כרומוזומים מספר התרנגולות למות ממחלות לב דלקתית אוטואימונית.

טפיל מושרה מונע גנטית אוטואימונית מחלות לב Chagas דגם עוף

נראה כי זיהומי Trypanosoma cruzi חריפים שנרכשו בינקות ובילדות הם א-סימפטומטיים, אך בכשליש מהמקרים של זיהום כרוני...

מחלת צ'ה היא המצב הקליני הנובע מזיהומים כרוניים על ידי ate prot ו-tno mausi. המחלה תוקפת את הלב של אנשים עם זיהום כרוני מספר עשורים לאחר הדבקה. מערכת מודל חוצת ממלכות מראה כי ביצי תרנגולות רגישות לזיהומי Taz macro cruise.במהלך השבוע הראשון של צמיחת העובר, הניסויים מראים כי תרנגולות נקיות מזיהומים השומרות על הטפיל KA בגנום שלהן מתות ממחלת הצ'גאס בלב; דיור מצוין ואספקה טובה של מזון ומים מבטיחים את רווחת בעלי החיים. מסה משולשת של השייט (cruise), צורות שחייה טובות, מתקבלות מתרבית רקמה. תאורה חוזרת עבור tio וביצים כדי להראות את בקרת הבועה שלהם.ביצים אינן עוברות הזרקה של para. ביצים של ביקורת דמה (Mock control) מוזרקות ב-10 µL של תוצר תרבית. החור נסגר באמצעות סרט דביק 100 viral FL mania.במטרה להשיג ריכוז גבוה של נגיפים, מזריקים למדבב של ביצת תרנגולת מופרית 100 ויראליים, כאשר נגיפי macro triple master בנפח של 10 µL של מצע סידן מוזרקים למדבב של ביצת תרנגולת מופרית. הביצים מדגרות בטמפרטורה של 37 °C ובלחות של 65% למשך יום אחד, עם סיבוב עדין מדי 30 דקות; האפרוחים בוקעים בשיעור זהה הן מהביצים שהוזרקו ב-renoso macro והן מביצי הביקורת של mark.הלחיים גדלות עד לשלב הבגרות. דגימות דם נשאבות מוורידי הכנף. הדם מועבר למבחנות קוניות של 15 Ml.תאים חד-גרעיניים מופרדים באמצעות סרכוז (צנטריפוגציה) על מצע FICO; שוטפים את משקע התאים הלבנים ומשליכים את תוצרי ההפרדה. DNA גנומי מופק מתאים חד-גרעיניים של הדם. הכינו מבחנות קוניות של 1.5 ml בהתאם לתכנון ה-PCR. ה-PCR מבוצע כדי להגביר את ה-chroy nuclear G-N-A-N-G-N-A ו-pls GNA kg NA. באמצעות סטים של פריימרים ספציפיים, הניחו את מבחנות התגובה בטרמוסייקלר לאחר ההרצה.הוציאו את המבחנות מהתרמוציקלר. נתחו את תוצרי ה-PCR. תוצרי ה-PCR מופרדים באמצעות אלקטרופורזה בג'ל אגרוז.פסי ה-GNA בג'ל מועברים לממברנת ניילון טעונה חיובית. ההכלה (היברידיזציה) מתבצעת עם גששים ספציפיים המסומנים רדיואקטיבית, כדי להפריד בין התפקידים שממלאים באופן עצמאי ההתמדת הטפיל ומערכת החיסון. בפתוגנזה של מחלת הצ'גאס, אנו משתמשים במודל של תרנגולת העמיד לזיהום ב-TNO cruise, למעט במהלך הגדילה העוברית המוקדמת לפני התפתחות מערכת החיסון; אפרוחים שבקעו מביצים שהוחדרו ב-TNO cruise נקיים מזיהום, אך ה-A KG A המיטוכונדריאלי של הטפיל נשמר בגוף.רק באפרוחים שבקעו מביצים שהוחדרו ב-tzo macro נראים פסי kg a, בעוד שכל DNA זה אינו קיים בגנום של התרנגולת. אפרוחים שבקעו מביצים שהוחדרו ב-pro master goats של Leia Brazilian אינם שומרים את רצפי המעגל המיטוכונדריאליים בגנומים שלהם. נתיב 1 ריק, נתיב 2 GNA ביקורת, נתיבים 3 ו-4 mock GS, נתיבים 5 עד 14 Gs מאפרוחים שבקעו מביצים מזוהמות של Las mania Brazilians.נתיב 15 מציג את תבנית האמפליקון של las mania Brazil עם פס ב-750 base pairs שהתקבל באמצעות סטים ספציפיים של פריימרים ל-KDNA מסוג LB three ו-LB five. סריקת לוח שחמט של L-P-C-R-A מציגה את הפריימרים של gallus guns שהופעלו לאחר שלושה מחזורי הגברה עם עלייה הדרגתית בטמפרטורה (temperature walking nest). ה-PCR בוצע עם סטים שונים של פריימרי KDNA.מחזור רגישות (stringency) נמוך יוצר אתרים עבור הפריימר והקיפול, ולאחריו מחזור רגישות גבוה. פעולה זו מגבירה את הספציפיות של תוצרי ההגברה. תוצרי ה-PCR מההגברה המועטה יותר שהיברידו עם גשש KA שובטו ועברו ריצוף מסחרי.הרצף מראה את ה-kg NA בעיגול כחול, את צומת רקומינציה של מיקרו-הומולוגיה ביניים בצהוב ואת ה-gallo ga GNA בירוק. מיפוי ה-kg NA המשולב בגנום העוף בוצע באמצעות טכניקת PCR מסוג target primer, המכונה R TP therapy PCR. לתרנגולים בוגרים מוטנטיים מהסוג Cajun התפתחה מחלת הצ'אגאס בלב.קבוצת הביקורת גדלה בצורה בריאה יותר. התרנגולות עם המוטציה ב-KDNA מראות הגדלה של צללית הלב בצילומי רנטגן. הנתיחה לאחר המוות מראה כי לתרנגולות מקבוצת הביקורת גודל לב קטן.ה-Cajun, תרנגול מוטנטי, מראה hydro pericardium, hydro tox, ולב מוגדל. ה-cardiomegaly דומה לזו המופיעה במחלת לב චגאס (Chagas heart disease). לב של תרנגול שנשלט על ידי Moog מראה היסטולוגיה תקינה.התרנגול המוטגנטי kg מראה מנהרה שנוצרה במיוקרדיום על ידי לימפוציטים ציטוטוקסיים המונחים על סיבי הלב. רצפי מעגלים של avian המשתלבים באזורי קוד במספר כרומוזומים נחשפים באמצעות modified nested PCR המשלב פריימרים של kg NA עם סטים של פריימרים ספציפיים ל-GNA של המארח. תרנגולים מוטגנטיים מסוג GNA מתים מאי-ספיקת לב ומראים קרדיומגליה.הפתולוגיה המיקרוסקופית מראה דלקת שריר הלב (myocarditis) הדומה לדלקת שריר הלב במחלת הצ'גס (Chagas), המתבטאת בלב. בנקודת זמן kg NA, תרנגול מוטציה הוא מחלה מונעת גנטית. זוהי הפעם הראשונה שבה ביטויים קליניים ופתולוגיים של מחלת הצ'גס שוחזרו במערכת מודל נקייה בין-ממלכתית.תודה.

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

תאים אנושיים מסוג מיאלומה נפוצה (MM) דורשים מייקרו-הסביבה התומכת של תאי mesenchymal ורכיבי מטריצה ​​תאיים להישרדות ושגשוג. הקמנו in vivo מודל עובר עוף עם תאי מיאלומה וmesenchymal אדם engrafted ללמוד השפעות של תרופות לסרטן על צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה.

הקמת מודל xenograft מיאלומה נפוצה אדם בעוף לחקר צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה

ב פרוטוקול זה, שכותרתו fluorescently ט cruzi הוזרקו לזחלים דג זברה שקוף, טפיל תנועתיות נצפתה ויוו באמצעות מיקרוסקופ אור גיליון זריחה.

הקמתה של הזחל דג זברה כמודל חיה כדי Investigate Trypanosoma cruzi תנועתיות Vivo ב

סוכן Trypanosoma cruzi Chagas המחלה מייצרת לטווח ארוך ללא תסמינים זיהומים בפתאומיות להתפתח פתולוגיה רפואית מוכרת. פרוטוקול המחקר הבאים מתאר הקצר על בסיס משפחתי אפידמיולוגיים מחקר כדי לפענח את הזיהום טי cruzi מחלות מהאב את רומא.

העברה מינית של Trypanosomes האמריקאי של זכרים ונקבות כדי החברים נאיבי

ברור גרורות תא כליות קרצינומה של תאים היא מחלה ללא מודל בעל חיים כולל לחקירה יסודית מראש. פרוטוקול זה ממחיש שני מודלים של בעלי חיים חדשניים עבור המחלה: מודל העכבר המושתל אורתולמריחה ומודל ממברנה של עוף כוראלואלי, שניהם הפגינו גרורות בריאות הדומה למקרים קליניים.

השוואת הכליה גרורות תא כליות קרצינומה של תא מודל הוקמה בתוך כליה העכבר על עוף כוראולאלי ממברנה

כאן, סיפקנו שיטה כדי להשיג שינוי יציב של העוף Eimeria טפילים על-ידי נוקלאונופיטים sporozoites או הדור השני merozoites. טפילים מהונדסים גנטית שונה ביטוי הטרוולוגי הגנים ניתן להשתמש ככלי משלוח החיסון.

נוקלאופלוט ובהפצת Vivo של העופות האימריריה טפילים

אנו מציגים את המודל ממברנה העוף כוראואליאלי כחלופה, השתלה שולחן, במודל vivo עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית תאים לסרטן וגידולים הנגזר החולה.

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

עוברים עוף, כמודל התפתחותי קלאסי, משמשים במעבדה שלנו להערכת cardiotoxicic התפתחותי בעקבות חשיפה מזהמים סביבתיים שונים. שיטות חשיפה ושיטות הערכה מורפולוגיות/פונקציונליות שנקבעו מתוארות בכתב יד זה.

שימוש בעובר עוף ככלי רב עוצמה להערכת לב-קרדיוקסיות התפתחותית

אנו מתארים בדיקה קולורימטרית בתפוקה גבוהה המודדת את פעילות β-גלקטוזידאז בשלושה שלבי מחזור חיים של טריפנוזומה קרוזי, הגורם הסיבתי של מחלת צ'אגאס. ניתן להשתמש בבדיקה זו כדי לזהות תרכובות טריפנוצידיות בצורה קלה, מהירה וניתנת לשחזור.

במבחנה בדיקת סמים נגד כל שלבי מחזור החיים של טריפנוזומה קרוזי באמצעות טפילים המבטאים β-גלקטוזידאז

הפרוטוקול המסופק כאן מתאר את השלבים המפורטים לביצוע מחקרי יעילות תרופות במודל ביולומינסנטי של זיהום טריפנוזומה קרוזי , תוך התמקדות ברכישת נתונים, ניתוח ופענוח. נהלי פתרון בעיות ובקרת איכות כדי למזער בעיות טכניות מסופקים גם כן.

הסרת המסתורין ב-Vivo Bioluminescence Imaging של מודל עכבר למחלת Chagas למחקרי יעילות תרופות

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

חקור שילוב DNA מיטוכונדרי של Trypanosoma cruzi בגנום עוף ואת השפעתו על מחלת לב דומה לצ'אגאס. מחקר זה מספק מודל חדשני לחקר מנגנוני המחלה הגנטיים.

טפיל מושרה מונע גנטית אוטואימונית מחלות לב Chagas דגם עוף

גלה סרטונים נוספים