Name: שיטות לניהול עצמי תוך ורידים במודל של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 9 s
Description: למדו שיטות ניתוח להשתלת קתטרים בעכברים לניהול עצמי תוך ורידי. הטכניקות מספקות הנחיות מפורטות לשמירה על פתיחות הקתטר ולאמינות הניסוי במחקרי התמכרות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים והטיפול בבעלי חי ועדת אוניברסיטת מקגיל. מחקר זה נתמך על ידי קרנות שהוענקו לKG מהמכון הקנדי לבריאות המחקר (CIHR). אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

1. נהלי דיור ואקלום בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי זכרים ונקבת CD-1 הם שוכנו בהמלטת הבנים אותו מין, עד 5 בעלי חיים לכלוב, בכלובי פלסטיק רגילים המכילים את מצעים בטאו שבב ורפידות nestlet, עם מכסי רשת תיל כדי להכיל בקבוקי מים ומזון. תקן עכבר זלילה ומים הם כרצונך זמין בכלובים הביתיים לאורך הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים נשמרים בלוח זמנים הפוך אור כהה (אורות על 22:00-10:00). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מותרים להתאקלם אל חדרי ניסוי IVSA במשך שבוע אחד לפני תחילת הליכים ניסיוניים. </li></ol> 2. אימון אינסטרומנטאלית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל נהלי ההתנהגות כולל הדרכה והפעלות חלב ממותקת וסמים תוך ורידיים מנהל עצמי מתבצעים באמצעות תאים אופרנטית מדידת 15.9 x 14 x 12.7 סנטימטר, מצויד עם 2 מנופים Ultra-רגישים לעכבר, כוסות דובה, אורות גירוי ומשאבות מזרק microliter (המד associאטס Inc, סנט אלבנס, ורמונט, ארה&quot;ב). צ&#39;יימברס הוא interfaced למחשב באמצעות מד Associates חכמה CR ממשק ותוכנת Med-PC כדי לתכנת את לוח הזמנים של חיזוק ולאסוף נתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים נאיביים הם מורגלים לתאי אופרנטית והוכשרו לעיתונות מנוף באמצעות גמול חלב ממותק (0.1 מ&quot;ל) הציג בכוס מצקת. הכשרת חלב אינסטרומנטאלית מתנהלת בפגישות 1-hr 5-7 ימים. השלים יחס לוח זמנים קבוע (FR) על המנוף הפעיל הביא המצגת של כוס המצקת ואת התאורה של אור גירוי. פתרון החלב הממותק כלל סוכרוז (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל, מגיב ACS, סיגמה אולדריץ בע&quot;מ סנט לואיס מיזורי, ארה&quot;ב) הוסיף לחלב (3.25% שומן). הכשרת אינסטרומנטאלית עם פתרון חלב ממותק או מחזקת מזון נוזלית היא טכניקה נפוצה בשימוש כדי להקל אופרנטית להגיב ב1,2 עכברים. </li></ol> 3. הכנת הציוד לשימוש במהלך הניתוח Requציוד ired - 20, 23 ו 26 מחטי מד, מטחנה, 1 מזרקי סמ&quot;ק, צינורות tygon, ברזל הלחמה, הפרין, אנטיביוטיקה ומשככי כאבים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את המחט להדריך החדרת הצנתר לתוך עורק הצוואר על ידי גילוח את מחט מד 20. הפיר של המחט גלח למטה באמצעות מטחנה כדי ליצור ערוץ בתוך המחט כדי להנחות את צינורות הצנתר לווריד. ערוץ המחט צריך להיבדק בזהירות לכל פסולת מתכת, שייתכן שהופקד. כל הפרעה לערוץ צריך להיות גרד מתוך באמצעות מלקחי חוד עדינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאים שני מזרקים 1-cc שישמש לשטיפה ובדיקת קטטר. הכן שני מזרקים על ידי נטילת 12 חתיכות סנטימטר של צינורות Tygon ולצרף אותם בקצה אחד ל26 מחטי מד מודבק 1 מזרקי סמ&quot;ק, ומותח את הקצוות האחרים של הצינורות מעל 23 מחטי מד. מזרק אחד צריך להיות מלא בתמיסת מלח סטרילית 0.9% והשניים עם פתרון ticarcillin heparinized (33 מ&quot;ג של ticarcillinו 0.3 מ&quot;ג של הפרין ל10 מ&quot;ל של תמיסת מלח סטרילית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כובעי צינורית קטטר. צינורות Tygon נמתחו מעל מחט מד 23, ולחתוך 1 סנטימטר מההטיה. ממס את הקצה הפתוח של הצינור כדי ליצור חותם עבה. הצינור צריך להיות נמס כך שכל כובע הצינורית ארוך מספיק כדי להתאים מעל צינורית קטטר, עם הסיום ההולם האטום בנוחות על קצה הצינורית. שים לב שאם הפקק ארוך מדי, יש סיכון שזה יהיה כפוף ולאחר מכן דקר במהלך התהליך של חיבור הברגה בצנתר מכסה. לכן הכנה קפדנית של כובעי קטטר מומלצת, על מנת לספק התאמה טובה לצינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרונים נדרשים. כל ריאגנטים נרכשים מסיגמה אולדריץ Inc (סנט לואי מיזורי, ארה&quot;ב). <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון Heparinized Ticarcillin לשטיפת קטטר - להמס 0.33 גרם Ticarcillin (disodium מלח) ו0.003 גרם של הפרין ב10 מ&quot;ל של תמיסת מלח סטרילית. 0.03 מ&quot;ל של תמיסה סמוק through קטטר יומי. פתרון האנטיביוטיקה ניתן למניעת קרישי דם ודלקות מלפתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Amikicin (אנטיביוטיקה) להזרקה תת עורית - הזרקה תת עורית אחת ניתן לאחר ניתוח במינון של 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג, כדי למנוע זיהומים שלאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ketoprofen (משכך כאבים) להזרקה תת עורית - הזרקה תת עורית אחת ניתן לאחר ניתוח במינון של 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג לניהול כל כאב שלאחר ניתוח. </li></ol></li></ol> 4. ניתוח השתלת צנתר ציוד נדרש ומגיבים: מלוחים isoflurane, סטרילי, אלכוהול (70%), 1 ו 3 מזרקי cc מלא בתמיסת מלח סטרילית, מזרקים מותאמים 1-CC, פתרוני אנטיביוטיקה ומשככי כאבים שהוכנו בסעיף 3 לעיל, צנתרי עכבר (CamCaths, Cambridgeshire, בריטניה ), כיסויי קטטר (כובעי גביש מHRS המדעי, מונטריאול, קוויבק), סיכת עין, בר פלסטיק סנטימטר 4 לרומם וריד (זהניתן לבנות מפלסטיק Q-טיפ), מטליות polysporin, סטריליים וגזה, מלקחיים מעוקלים וישרים, מלחציים העורקים, מספריים מצוינים. <img src="/files/ftp_upload/3739/3739step1.jpg" alt="שלב 1" fo:content-width="3in" fo:src="/files/ftp_upload/3739/3739step1highres.jpg"/><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות שימוש בטכניקות סטנדרטיות אספטיים הספסל כירורגי, מכשירי הניתוח, והצנתרים מעוקרים לפני הניתוח. טכניקות כוללות עיקור עצם קיטור המעוקר למכשירים וצנתרי הכירורגיות נרכשו מCamCaths. חרוז זכוכית עיקור יכול לשמש גם על הקצוות של מכשירי הניתוח. עיקור אתילן אוקסיד יכול להיות מועסק על צנתרים או חומרים יותר עדינים שנמסו סיכון. תיאור מפורט יותר של טכניקות כירורגיות אספטיים מכרסמים ניתן למצוא ב1,2 ההפניות המצורפות. הגדרה של הספסל, מכשירים וקונוס אף לתחזוקת הרדמה מודגמים בתמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מורדמים בגז isoflurane, ונשמרו תחת הרדמה באמצעות צינור נשימה תחת מערכת הדחה. חומר סיכת עיניים (הדמעות Naturale PM) חל על שתי העיניים כדי למנוע מהם מההתייבשות במהלך ההליך. שולים ניתוחיים מתאימים גלחו על גביו של בעל החיים וסביב הצוואר. לפני כל חתכים נעשים, שדות הכירורגיות מוגבלים באמצעות סדינים מעוקרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להכין את הקטטר להכנסה לתוך העלייה הימנית של הלב, צינורות הצנתר העודפים נחתכו 1.2 סנטימטר מהנורה של קטטר. זה האורך האופטימלי הוקם לעכברים בוגרים CD-1, כ 8 שבועות של גיל, משקל גוף גרם 20-25. אורכו של צינור קטטר ייתכן שיצטרך להיות מותאם במקצת (ניסוי וטעייה), המבוסס על הזן, הגודל והגיל של העכברים. לקראת כניסה, מזרק המכיל תמיסת מלח סטרילית (סעיף 3.2) מחובר לצינורית קטטר, והקטטר סמוק ובדק להדלפות. לשמורהמזרק הזה מחובר לקטטר לאורך ההליך כירורגי. זה ישמש כדי לשטוף את הקטטר, ולמשוך לאחור את הדם בשלב 4.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות עיקור עם אלכוהול 70%, סנטימטר חתך midscapular ארוך 2 מורכבים מתחיל באמצע הדרך על הגב ומסתיים ממש מתחת לצוואר, כדי להכיל את הבסיס של קטטר. רקמת חיבור יש לאלץ בנפרד עם מלקחיים כדי לפנות מקום לבסיס קטטר מתחת לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נחת החיה על גבה, רדודה 2 1 - חתך אלכסוני 2 סנטימטר עשוי מעצם הבריח הימני הולך כלפי מעלה ללסת בעלי החיים, לאחר שהאיזור כבר חוטא באלכוהול 70%. וריד הצוואר יימצא שטחי מתחת לעור של הצוואר. כהכנה להחדרת הצנתר, צינור מבסיס הצנתר נמשך דרך החתך בגב והביא קרוב לעורק צוואר על ידי העברת הצינור מתחת לעור רק בכתף ​​הימנית. קצה צינור קטטר הואאז צורף למהדק עורק והניח בצדו של בעל החיים כדי לשמור אותו במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עורק הצוואר הימני ממוקם על ידי ההזזה בעדינות חיבור שטחי ורקמת שומן מהחתך סביב צווארו של בעל החיים. רקמת חיבור סביב הווריד הוא מתפרק באמצעות מלקחיים מעוקלים ולאחר מכן הווריד הוא גבוה באמצעות סרגל פלסטיק סטרילית. קשרי תפרים פתוחים Loose נעשים סביב כל סוף הווריד וצינור קטטר הוא מושחל דרך הקשר העליון וקשור בלולאת חוט התפירה לנוח unclamped בכתף ​​הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקראת כניסה, רטוב הוא 20 מחט מד הכניסה ווריד עם תמיסת מלח סטרילית, כדי להקטין את החיכוך. המחט הוא החזיק במקביל לווריד, והכניסה בעדינות הקרובה לתחתית של הווריד המוגבה (הערה: כ 0.5 סנטימטר של קצה המחט צריך להיכנס לווריד). באמצעות מלקחיים, להחליק את צינור קטטר במורד הפיר של המחט לתוך הווריד. התנגדות הייתה מציינת כי צינוריs בתוך רקמת חיבור ולא בתוך הווריד. Push 0.03 סמ&quot;ק של תמיסת מלח דרך הווריד כדי לוודא שאין נזילות. הדלפות היו מציינות כי הווריד ניתן פירסינג או שמיקום צינור קטטר צריך תיקון. הערה: כדי לבדוק אם הצינורות הם בתוך הווריד, תנסה לגבש קצת דם במזרק המצורף המלוח. אם דם לא יכול ייערך מייד, הווריד או קיר לב ניתן occluding קצה הצנתר, או הווריד לא נקב; להתאים את הצינורות ונסה שוב. מחט Reinsertion עשוי להיות נחוץ אם הדם עדיין לא ניתן אסוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להבטיח את הצנתר במקומו, לדחוף את נורת קטטר לנקודת הכניסה ולהסיר את המחט. לקשור את הקשר התחתון ולאחר מכן למשוך את סומק קטטר נגד הבר לפני קשירת הקשר הימני השנייה לעיל הנורה. בדוק שוב כדי לראות אם ניתן להסיק את הדם ולשחרר מעט את הקשרים במידת צורך. קפל את צינור קטטר מתחת לעור והתפרחתך הגחון סביב צווארו של בעל החיים. החל Polysporin לרפא מהיר באמצעות מוליך סטרילי כותנת טיפ, או כל משחה אנטיביוטית אחרת עדיף המכילה כמה משכך כאבים לחתך הסגור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם החיה בבטנו, הנח את בסיס קטטר מתחת לעור של הגב בתוך החתך שהוכן מראש. ודא שהצינור עודף looped מינימאלי ומסתתר מתחת לבסיס קטטר גם כדי למזער את הסיכוי לחי לעיסה ומשפדים אותו. לתפור את החתך בשני הצדדים של בסיס קטטר, ולהחיל מהירים לרפא Polysporin באמצעות מוליך קצה כותנת סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הקטטר עם 0.03 סמ&quot;ק של פתרון ticarcillin heparinized באמצעות מזרק עם הצינור המודבק אליו (סעיף 3.2). מכסה את הצינורית עם מכסה פלסטיק הצינורית ובורג על עטיפת הקטטר הלבנה. בעכברים אלו שאינם טריים מניתוח, דם יכול לדלוף החוצה של קטטר לפני הצינורית היא כתרים. חשוב החיה מחדש לשטוף וrapidly להחליף את הכובע לפני צינורית דם יש סיכוי לזרום החוצה. בעלי החיים חייבים להיות סמוקים על בסיס יומי כדי לשמור patency קטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שנגב את אזור ההזרקה בין חי גב הרגליים עם אתנול 70%, מתחת לעור להזריק ketoprofen משככי כאבים במינון של 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג בצד אחד, וamikicin האנטיביוטיקה במינון של 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג בצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההרדמה מופסקת, להכניס בעלי חיים להתאושש בכלוב נקי עם גישה קלה למזון ומים במשך 5 עד 7 ימים. עכברים צריכים להיות ממוקמים בארון הלילה מחומם כדי למנוע היפותרמיה לאחר הניתוח. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3739/3739step2.jpg" alt="שלב 2" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/3739/3739step2highres.jpg"/> 5. בדיקת התנהגות - עצמי עירוי לוריד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צנתרי בדיקות התנהגותיות סמוקים סליין סטרילי 0.9%. עכברים מכן הניחוד בתאי אופרנטית ומחובר לקווי העירוי ומשאבות עירוי. לוחץ על הדוושה פעילה לגרום לעירוי 3.2 שניות 18 μl תרופה בשילוב עם התאורה של אור גירוי. כל לחיצת דוושה ואחריו זמן 8 שניות מתקופה שבה אור הגירוי נשאר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות הפגישה אופרנטית, צנתרי עכברים סמוקים עם פתרון ticarcillin heparinized לפני שהוחזר לכלוב בבית שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מותר עצמי לנהל במשך 3 מפגשים רצופים 2-משאבי אנוש בכל מנה. מינונים הוצגו בסדר אקראי לכל עכבר, כפי שמוצגים בסעיף הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> patency צנתר מוערך יומי על ידי הבטחה כי גם תמיסת המלח ואנטיביוטיקה יכולה להיות סמוקה דרך הצנתר. בנוסף, בדיקת קטמין / midazolam יכולה להתנהל כפי שמתוארת בפנייה המצורפת 5. בקיצור, סימנים של הרדמה כגון חוסר תנועה בתוך 5 שניות של עירוי של 0.02-0.03 המ&quot;ל קטמין (15 מ&quot;ג / מ&quot;ל),או midazolam (0.75 מ&quot;ג / מ&quot;ל) midazolam היא עדות לקטטר פטנט 5. </li></ol>

<ol><li>Rocha, B. A., Ator, R., Emmett-Oglesby, M. W., Hen, R. Intravenous Cocaine Self-Administration in Mice Lacking 5-HT1B Receptors. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 57 (3), 407-412 (1997).</li>
<li>Zapata, A., Chefer, V. I., Ator, R., Shippenberg, T. S., Rocha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+sensitization+and+enhanced+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+after+intravenous+cocaine+self-administration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Behavioural sensitization and enhanced dopamine response in the nucleus accumbens after intravenous cocaine self-administration in mice.</a> European Journal of Neuroscience. 17 (3), 590-596 (2003).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoogstraten-Miller%2C+SL+%22Techniques+in+Aseptic+Rodent+Surgery+Current+Protocols+in+Immunology%22">Techniques in Aseptic Rodent Surgery Current Protocols in Immunology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. 1.12-1.14 (2001).</li>
<li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Intravenous+Drug+Self-Administration+in+Rats+and+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience.+%22%5BJournal%5D)">Chronic Intravenous Drug Self-Administration in Rats and Mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. . 9, 20.1-20.40 (2005).</li>
<li>Gill, K. J., Boyle, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confirmation+of+quantitative+trait+loci+for+cocaine+induced+activation+in+the+AcB%2FBcA+series+of+recombinant+congenic+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogenetics%22%5BJournal%5D)">Confirmation of quantitative trait loci for cocaine induced activation in the AcB/BcA series of recombinant congenic strains.</a> Pharmacogenetics. 13, 329-338 (2003).</li>
<li>Gill, K. J., Boyle, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influences+on+drug-induced+psychomotor+activation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Genetic influences on drug-induced psychomotor activation in mice.</a> Genes, Brain & Behavior. 7, 859-868 (2008).</li>
<li>Boyle, A. E., Gill, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+AXB%2FBXA+recombinant+inbred+lines+of+mice+to+the+locomotor+activating+effects+of+cocaine%3A+A+QTL+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogenetics%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of AXB/BXA recombinant inbred lines of mice to the locomotor activating effects of cocaine: A QTL analysis.</a> Pharmacogenetics. 11 (3), 255-264 (2001).</li>
<li>Boyle, A. E., Gill, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+verification+of+previously+identified+QTLs+for+cocaine-induced+activation+using+a+panel+of+B6.A+chromosome+substitution+strains+%28CSS%29+and+A%2FJxC57Bl%2F6J+F2+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">A verification of previously identified QTLs for cocaine-induced activation using a panel of B6.A chromosome substitution strains (CSS) and A/JxC57Bl/6J F2 mice.</a> Psychopharmacology. 207 (2), 325-3234 (2009).</li>
<li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychomotor+stimulant+effects+of+cocaine+in+rats+and+15+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Psychomotor stimulant effects of cocaine in rats and 15 mouse strains.</a> Experimental and Clinical Psychopharmacology. 19 (5), 321-341 (2011).</li>
<li>Thomsen, M., Caine, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+drug+self-administration+in+mice%3A+practical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+genetics%22%5BJournal%5D)">Intravenous drug self-administration in mice: practical considerations.</a> Behavior genetics. 37 (1), 101-118 (2007).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

מודלים של בעלי חיים של שימוש בסמים הם שימושיים במיוחד בהבנת הבסיס הגנטי להתנהגויות הקשורות לתרופה. למשל, בעכברים עם פרופילים גנטיים שונים מראים הבדלים תורשתיים ברגישות שלהם לקוק 6-8 ותעזרו מועמדי גנים לזהות פוטנציאל תיווך ההשתנות פנוטיפית נצפתה 9. נהלי הצנתור תוך הוורידים המתוארים במאמר זה היו בשימוש בהצלחה לא מבוטלת לבחון IVSA סמים בזנים שונים של עכברים, כמו גם עכברים בעלי רקע שונה גנטי 10. הנהלים המוצגים בסרטון זה מדגישים גורמים חשובים להתמקד בבמהלך ולאחר ניתוח הצנתור על מנת לקבל נתונים אמינים תוך ורידים לניהול עצמי. ראשית, המיקום של צנרת הצנתר תוך העלייה הימנית הוא חיוני, כדי למנוע כישלון קטטר מקרישי כתם. במהלך ניתוח, חשוב לוודא כי הצנתרהסוף הוא הפרעה, ולא על ידי מי מסוגרות לב או רקמת וריד. שנית, שטיפת קטטר יומית נדרשה לפני ואחרי המפגשים אופרנטית כדי למנוע חסימות. לבסוף, צינורית הקטטר חייבת להיות מכוסית כל זמן עם שני הכובעים וצינורית הגביש מכסים כאשר החיות נמצאות בכלובים הביתיים שלהם, כדי למנוע הכניסה של פסולת. חסימה קלה של צינורית הקטטר עלולה להיעקר באמצעות מחט מד 26 משובחת, עם זאת כל יום שטיפה בתמיסת האנטיביוטיקה heparinized נדרשה, במיוחד בימים בם בעלי החיים לא נבדקו IVSA. כדי לבצע ניתוח הישרדות בעלי חיים, ידע טוב של טכניקות אספטיים, שיכוך כאבים והרדמה הוא הכרחי. אמנם סרטון זה אינו מחליף הכשרה כירורגית נאותה, הוא עשוי לשמש כמדריך לחוקרים המעוניינים לרכוש את הטכניקות הדרושות לפרדיגמה זו.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> Ticarcillin disodium מלח </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> T5639-1G </td><td> בקבוק 1 גרם </td></tr><tr><td> דמעות Naturale PM (סיכת עין) </td><td> אלקון </td><td> N / </td><td> צינור גרם 3.5 חומר סיכת עין זה ניתן למצוא ברוב בתי המרקחת. כל חומר סיכת עין עיניים יכולה לשמש. </td></tr><tr><td> קוק </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 0723-06 </td><td> בקבוק 1 גרם </td></tr><tr><td> קטמין </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 1754-04 </td><td> בקבוק גרם 25 </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td> Medisca Pharmaceutique </td><td> 2519-06 </td><td> בקבוק 1 גרם </td></tr><tr><td> HEPAמלח נתרן rin </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> H4784-טבליות של 250 </td><td> בקבוק 250 גרם </td></tr><tr><td> Ketoprofen </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> K1751-1G </td><td> בקבוק 1 גרם </td></tr><tr><td> Amikicin סולפט מלח </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A2324-5G </td><td> בקבוק 5 גרם </td></tr><tr><td> מגיב ACS סוכרוז </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> S5016-500G </td><td> בקבוק 500 גרם </td></tr><tr><td> צנתרי עכבר רגילים עם רשת רכה </td><td> CamCaths </td><td> MIVSA/20/26/BC-1S </td><td> מפרטי צינורות: 26SWG; 0.451 0.254; </td></tr><tr><td> מוליך כובע קריסטל </td><td> HRS מדעי </td><td> 313CAC </td><td> זה כובע קטטר הלבן. </td></tr><tr><td> Tygon מייקר Bore אבובים </td><td> תומאס מדעי </td><td> 9561S41 </td><td> מפרטי צינורות (משעממים x OD x עובי קיר בסנטימטרים): .01 x .03 x .01 </td></tr>
 </tbody>
</table>

שיטות לניהול עצמי תוך ורידים במודל של עכברים

Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model

מודלים של בעלי חיים פותחו כדי לחקור את ההשפעות של תרופות לחיזוק, ובכלל זה ניהול עצמי הפרדיגמה תוך ורידים (IVSA). היתרונות של שימוש בפרדיגמה IVSA כדי ללמוד את תכונות החיזוק של תרופות של התעללות כגון קוק כוללים את העובדה שהסמים הם עצמי בניהול במקום הנסיין בניהול, תזמון החיזוקים ניתן לשנות, ומדידה מדויקת של הכמויות תרופה נצרכת כמו גם העיתוי והדפוס של IV זריקות ניתן להשיג. יתר על כן, המסלול תוך הוורידים של ממשל נמנע מקעקע פוטנציאלי הקשורות לחילוף חומרים עוברים ראשון או טעם, ומייצר גידול מהיר בדם ורמות תרופה במוח. כפי שמתואר בסרטון הזה, מנהל עצמי תוך ורידים ניתן להשיג ללא הגבלת מזון לפני אימון או סמים לפני בעקבות מיקום קטטר זהיר במהלך הניתוח וקטטר היומי הקפדני שטיפה ואחזקה. פרוצדורות מפורטות בזהעיתון כולל תיאור של דיור חיה ושיטות הסתגלות, הכשרה אופרנטית באמצעות פתרוני חלב ממותקים, וניתוח השתלת צנתר.

<img src="/files/ftp_upload/3739/3739fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1. הדפוס להגיב למנהל עצמי בסמים תוך ורידים משתנה בהתאם לתרופה, טווח מינונים ועכבר זן המועסק. הדמות הוצגה מציגה נתוני ניהול עצמי קוק בעקבות ניתוחי צנתור מוצלחים באמצעות ההליך המתואר בוידאו. האיור מציג את אומר (± SEM) חליטות קוק הרוויחו ואומרות (± SEM) צריכת קוק (מ&quot;ג / קילו משקל גוף) על פני טווח של 4 מנות קוק שהוצגו בבסדר אקראית בFR1 תזמון החיזוקים. Abscissa: מינון של תרופה לניהול עצמית לעירוי. Ordinate שמאל: מספר כולל של חליטות הרוויח במהלך הפגישה אופרנטית 2-HR. Ordinate ימני: סך צריכת קוק במ&quot;ג / ק&quot;ג במהלך פגישת בדיקות 2-HR. כל 13 הצנתרים נשארו פטנט לתקופת המחקר (4 שבועות). ANOVA חד כיווני שנערך על מינון גילה כי מיקרופוןדואר ובצע את הקוק באופן תלוי במינון [F (1,12) = 42.8, p &lt;0.05]. יש גידול בצריכת הקוק בעקומת מנת התגובה [F (3,36) = 29.6, p &lt;0.05] למרות ירידה במנוף לחיצה במינון הגבוה יותר. כל נקודת נתונים מייצגת את הממוצע של 3 מפגשי בדיקות בכל מנת קוק (± SEM) נאספה בCD-1 עכברים (n = 13 / מינון, זכרים ונקבות גם יחד). השוואות של מנוף פעיל (תרופה מחוזקת) לעומת פעיל להגיב לאורך עקום התגובה במינון נעשו באמצעות ANOVA דו כיוונית על מנת להבטיח כי לעכברים היו להיפלות בין שני מנופים. לCD1 עכברים, הניתוח גילה העדפה למנוף הפעיל [F (1,12) = 10.255, P &lt;0.05] על עקומת מנת התגובה השלמה (מידע לא מוצג כאן).

ניהול עצמי הפרדיגמה תוך הוורידים (IVSA) נחשבת לסטנדרט זהב בבוחן את מאפייני החיזוק של תרופות של התעללות במכרסמים. כתב יד זה מתאר הפרוצדורות וטכניקות כירורגיות הדרושות כדי להשיג נתוני IVSA אמינים. בפרט, השתלת צנתר מוקפדת ותחזוקה מודגשות.

פותחו מודלים של בעלי חיים כדי לחקור את ההשפעות המחזקות של סמים, כולל פרדיגמת ההזרקה העצמית תוך-ורידית (IVSA). היתרונות...

שלום, שמי אליזבת קוטיק ואני כאן מהמעבדה של ד"ר קתרין גיל ביחידה להתמכרויות של המרכז הרפואי של אוניברסיטת מקגיל. היום אראה לכם כיצד לבצע את ניתוח השחלת הקטטר הדרוש לעריכת מחקרי ניהול עצמי של חומרים בווריד. אדגים לכם כיצד להחדיר את הקטטר, וכן אבוא לכם בכמה טיפים לשמירה על פתיחות הקטטר.במהלך מפגשי הזרקה עצמית תוורידית של ניקוטין, החיות מחוברות למערכת Tai באמצעות צינוריות פלסטיק, והזרקות ניקוטין מועברות על ידי משאבות ההזרקה המחוברות. תיבות אופרנט נקנו מחברת med associates. כל תיבה מצוידת בשני ידיות עכבר רגישות במיוחד.ישנם מספר פריטים שיש להכין לפני הניתוח על מנת להחדיר את הקטטר אל תוך הווריד. יש להתאים מחט בכיcurrentPlayer 20 כדי להחליק את הצינור אל תוך הווריד. גדלו כ-2 cm מהחלק העליון של גוף המחט, כדי ליצור תעלה שתשמש להנחיית צינור הקטטר אל תוך הווריד.בשלב הבא, הכינו את המזרקים לשטיפה ובדיקה של הקטטר. צינור באורך 12 סנטימטרים מחובר מקצה אחד למחט במידה 26 של המזרק, בעוד הקצה השני מתוח על מחט במידה 23. כדי להקל על חיבור הצינור לקנולה של הקטטר, תזדקקו לשני מזרקים דומים לזה: אחד מלא בתמיסת heparinized T carcin והשני בתמיסת סליין.לבסוף, הכינו את מכסה הקנולה של הקטטר. יש לסגור את הקנולה של הקטטר באמצעות מכסה כדי למנוע חדירת לכלוך. מכסים אלו מיוצרים על ידי מתיחת צינור פלסטיק מעל מחטים במידה של 23 gauge.את הפחית חותכים סנטימטר אחד מקצה המחט והקצה הפתוח מותך כדי לאטום את הפחית. דוחפים תמיסת סליין דרך המחט כדי לוודא שאין דליפות במכסים. קטטרים לעכברים נרכשו מ-Cam Cs בבריטניה. חותכים את עודפי הפחית מהקטטר כך שנותרים 1.2 סנטימטרים מקצה בולבית הקטטר.בשלב הבא, חברו את המזרק המכיל תמיסת סליין לקנולה המתכתית החיצונית של הקתטר והזרימו נוזלים כדי לבדוק דליפות. העכברים מורדמים באמצעות גז isoflurine מעורבב עם חמצן ונשארים תחת הרדמה לאורך כל הניתוח. באמצעות צינור נשימה, רמות החמצן וה-isoflurine נקבעות בהתאם למשקל הגוף של החיה ומוסדרות לפי הצורך במהלך הניתוח; ודאו שהחיה מורדמת כראוי על ידי צביטה של רגליה האחוריות עם הפורספס, ועקבו אחר העכבר לאורך הניתוח כדי לזהות מצוקה נשימתית ואת עומק ההרדמה.מכיוון שהניתוח נמשך בין 20 ל-30 דקות, יש למרוח חומר סיכה לעיניים בשתי העיניים. את העכבר גוזזים לפני הניתוח. הכינו מקום לבסיס הקטטר על גבו של בעל החיים.הרם בעדינות את העור מגב בעל החיים ובצע חתךlongitudinal קטן באזור השכמה, באורך של כשני סנטימטרים. התחל במרכז הגב והאריך את החתך עד לאזור שמתחת לצוואר. הרחק בעזרת כוח רקמות חיבור כדי לפנות מקום לבסיס הקטטר, ומרח סלין על החתך.משכו בעדינות את העור משני צדי החתך יחד והפכו את בעל החיים. וריד התגולום (tegular vein) הימני נמצא באופן שטחי תחת עור הצוואר וניתן לחשוף אותו על ידי ביצוע חתך רדוד. בצעו חתך אלכסוני באורך של כ-1 עד 2 סנטימטרים, המשתרע מאזור הבריח הימני כלפי מעלה לכיוון לסתו של בעל החיים.יש להעביר את הפיתול מבסיס הקטטר דרך החתך הגבגבי (ventral) בצוואר כדי שיהיה נגיש להחדרה לווריד. הנחילו את הפינצטה מתחת לעור הכתפיים והפרידו את רקמת החיבור. כדי להגיע לחתך הגבי, משכו את הפיתול דרך העור אל הפתח הגבגבי סביב צווארו של בעל החיים.אחזו בקצה הפיתול באמצעות תפסים עורקיים והשאירו אותו סגור לצד ימין של בעל החיים. מרחו סליין על החתך ובודדו את הווריד הג'וגולרי הימני. הסירו בעדינות רבה כל רקמת חיבור או רקמת שומן העשויה להסתיר את השטח ואתרו את הווריד.הרימו בעדינות את הוריד בחלקו העליון והשתמשו בפינצטה קמורה כדי להפריד את הרקמה השומנית והרקמה החיבורית שסביב וממתחת לוריד. מקמו את הפינצטה הקמורה מתחת לוריד ופתחו אותה בעזרת היד החופשית. העבירו מוט פלסטיק סטרילי מתחת לוריד.לאחר הרמת הווריד, הסירו כמות קטנה של שומן כדי להבטיח ראות ברורה וללא הפרעות של הווריד. טפטפו תמיסת סליין על הווריד החשוף מדי פעם כדי לשמור עליו רטוב. הכינו קשרי תפירה מסביב לווריד כדי שתוכלו לקבע את צינור הקטטר במקומו לאחר השחלתו לתוך הווריד הג'וגולרי.בצעו תפירה מתחת לווריד בשני הקצוות וקשרו קשר פתוח אחד ורפוי מאוד בכל קצה. השחילו את צינור הקתטר דרך הקשר העליון והעבירו אותו בלולאה מעל חוט התפר לשאר אזור הכתף הימנית. דחפו תמיסת סלין דרך הקתטר כדי להכביד על הצינור לצורך השחלתו של צינור הקתטר אל הווריד הג'גולרי.השתמשו במחט במידה 20 gauge המותאמת כדי לדקור את הווריד, הרטיבו הן את הווריד והן את מחט ההחדרה בתמיסת סלין כדי להפחית את החיכוך במהלך ההחדרה, משכו בעדינות את מוט הפלסטיק והחדירו את המחט קרוב לחלקו התחתון של הווריד. החדירו אותה עד שחצי סנטימטר מהמחט יהיה בפנים. החליקו את צינור הקטטר במורד המחט אל תוך הווריד.לא אמורה להיות התנגדות. התנגדות תעיד על כך שנמצאים ברקמה חיברית. כדי לוודא שאתם בתוך הווריד, נסו למשוך חזרה את המזרק של הקטטר כדי לבדוק אם ניתן לשאוב דם.לאחר שהצינורית במקומה, הוציאו את המחט והדחפו את בלונית הקטטר אל נקודת ההחדרה. קשרו את הקשר התחתון וודאו שצינורית הקטטר צמודה למוט לפני קשירת הקשר השני מעל לבלונית. פעולה זו תבטיח את קיבוע הקטטר במקומו.הסרו את המנח ומסרו קשר שני בכל קצה. הכניסו את צינור הקטטר ואת חוטי התפרים מתחת לעור לפני התפירה. השתמשו בתופסן העורקים כדי להוביל את מחט התפירה דרך העור ולסגור את החתך.מספר התפרים ישתנה בהתאם לגודל החתך. כאשר בעל החיים שוכב על בטנו, מקמו את בסיס הקטטר על גבו של בעל החיים. מרחו סליין על החתך והחליקו את בסיס הקטטר תחת העור.וודאו שהפרוק הוא במינימום לולאות ונמצא מתחת לבסיס כדי לצמצם את הסיכויים לדקירה שלו. תפרו את העור מסביב לבסיס הקטטר. מספר התפרים יהיה תלוי בגודל החתך.בדרך כלל שלושה עד ארבעה תפריקים מספיקים. ודאו שניתן עדיין לשאוב דם מהקטטר. לבסוף, שטפו את הקטטר עם תמיסת ההפרין למניעת זיהום והיווצרות קרישי דם.שחררו את הפיתול המחובר לקנולה של הקטטר. לאחר מכן, הסירו את צינור התמיסה המלחית והחליפו אותו במהירות בפיתול מהמזרק המכיל את תמיסת ה-T Carin ההפרינית. שטפו את הקטטר עם 0.03 עד 0.05 ccs של התמיסה.שוב, שחררו את הפיתול המחובר לקנולה. אחזו במכסה הקטטר בעזרת הפינצטה, ובתנועה אחת מהירה, הסירו את הפיתול מהקנולה והחליפו אותו במכסה הקטטר. יש לבצע שלב זה במהירות כדי למנוע עלייה של דם.הבריגו את כיסוי הקטטר הלבן, וודאו שהכיסוי מהודק ללא דקירה של קצה הקנולה. החדירו לעכבר זריקות תת-עוריות של משכך כאבים ואנטיביוטיקה. מזריקים את משכך הכאבים ketoprofen בצד אחד במינון של five milligrams per kilogram ואת האנטיביוטיקה amikacin בצד השני במינון של 10 milligrams per kilogram.לאחר הפסקת ההרדמה, יש לאפשר לעכבר להתאושש בכלוב נקי עם גישה נוחה למזון ומים. ניתן להשיג נתונים מהימנים של ניהול עצמי תוך-ורידי על ידי ביצוע הטכניקות המוצגות בסרטון זה. עם זאת, חשוב לשמור על פתיחות הקטטר.דבר זה מושג באמצעות הצבה מדויקת של הקטטר בעלייה הימנית, שטיפה יומית של הקטטר לפני ואחרי מפגשי הניתוח, והבטחה שקניית הקטטר מכוסה תמיד במכסה כדי למנוע כניסת פסולת.

methods-for-intravenous-self-administration-in-a-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בדיקות פרה יסודית של תרופות הפועלות על מערכת העצבים המרכזית כרוך לעתים קרובות בהערכת השוואת biodistribution התרופה בשיתוף עם מסלולים ספציפיים של הממשל. הנה שלוש שיטות נפוצות של משלוח מערכתית (תוך ורידי, intraperitoneal, ובעל פה), כמו גם שיטה למסירה מקומית (הסעה משופרת משלוח) הם הוכיחו בעכברים.

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

בסרטון זה אנו מתארים שיטה להשתלת קטטר בווריד הצוואר של מודל עכברי שדרכו ניתן להעביר חומרים ניסיוניים כגון תרופות וצבעי נותב דרך הווריד in vivo. סידור כזה, כאשר הוא מחובר למערכות אחרות, יכול לשמש גם לניטור המודינמיקה ודגימת דם.

הזרקה תוך ורידית מבוססת צנתר של חומרים ניסיוניים: טכניקה להעברת חומרים ניסיוניים תוך ורידי דרך וריד הצוואר במודל עכבר

מקור: Kanazawa, T., et al. שיטות חדשניות למתן תוך-אף בהרדמה באינהלציה להערכת מתן תרופות מהאף למוח. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים מתן תוך-אף של תרופות עם תווית רדיו בעכבר מורדם כדי להשיג העברת תרופות מהאף למוח. הוא מסביר כיצד תרופות חוצות את אפיתל האף ונעות דרך מסלולים עצביים כדי להגיע למוח, כמו גם כיצד תנועת הריסים משפיעה על שימור ופינוי תרופות. בנוסף, הסרטון מתאר שיטת קנולציה הפוכה חלופית, הכוללת החדרת צינורית דרך הוושט כדי להעביר תרופות כנגד תנועת הריסים, שיפור השמירה ושיפור יעילות ההובלה.

מתן תרופות תוך-אף בעכברים באמצעות פיפטה וקנולציה הפוכה להעברת תרופות מאף למוח

מודלים של בעלי חיים למחלות ילדים יכולים לחוות התפרצות מוקדמת והתקדמות מחלה אגרסיבית. מבחינה קלינית משלוח טיפול רלוונטי למודלים של עכברים צעירים יכול להיות קשה מבחינה טכנית. פרוטוקול זה מתאר שיטת הזרקה תוך ורידית לא פולשנית לעכברים שזה עתה נולדו בתוך שני הימים לאחר הלידה הראשונה של חיים.

זריקות תוך ורידים בעכברים בילוד

פרוטוקול זה מספק הליך שלב אחר שלב לביצוע מתן מינון בולוס תוך ורידי מרובים וניטור המודינמי פולשני בעכברים. חוקרים יכולים להשתמש בפרוטוקול זה לבדיקת תרכובת טיפולית עתידית ליתר לחץ דם בעורק הריאה.

מינון בולוס תוך ורידי מרובים והערכה המודינמית פולשנית במודל יתר לחץ דם של עורק ריאתי בעכבר הנגרם על ידי היפוקסיה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך רדיולוגיה התערבותי שנקבע להזרקה תוך-תימית בעכברים כדי למנוע את הסיכון לניתוח פתוח ולשפר את הדיוק של זריקות מלעוריות עיוורות.

טכניקה זעיר פולשנית, מדויקת ויעילה להזרקה תוך-תימית בעכברים

כאן מתוארת גישה פשוטה ומהירה לביצוע הזרקות תוך-מוחיות בעכברים בגישה של יד חופשית (כלומר, ללא מכשיר סטריאוטקסי).

זריקות תוך-מוחיות ביד חופשית בעכברים

תרופות עצמית הממשל קולות קולי (USV) משמשים הערכות התנהגותיות במחקר בבעלי חיים, אך לעתים רחוקות בשילוב. מטרת מאמר זה היא לתאר את היתרונות של USVs ההקלטה במהלך מינהל עצמי נהלים סמים כדי להעריך את התגובה הרגשית לחוות סמים.

הערכת קולות Ultrasonic במהלך והתרופות עצמית הממשל חולדות

למדו שיטות ניתוח להשתלת קתטרים בעכברים לניהול עצמי תוך ורידי. הטכניקות מספקות הנחיות מפורטות לשמירה על פתיחות הקתטר ולאמינות הניסוי במחקרי התמכרות.

שיטות לניהול עצמי תוך ורידים במודל של עכברים

גלה סרטונים נוספים