Name: מדידת לחץ חדרית השמאל עכברים עובריים ילודים המאוחרת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: למד מדידת לחץ חדרית שמאל בעכברים עובריים וילודים באמצעות הדרכת אולטרסאונד. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות וחוזרות של לחץ סיסטולי בפיתוח לבבי מוקדם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה, בין השאר, על ידי NIH מענקים HL087653 ו HL105314. כמה שיטות פותחו במעבדה של ד&quot;ר רוברט Mecham באוניברסיטת וושינגטון בית הספר לרפואה.

1. אולטראסאונד מערכת הלחץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפעיל את מערכת אולטרסאונד על פי הוראות היצרן (770 Vevo, Visualsonics). למלא את החללית המתאימה (גיל E18 - P7 = מודל 708, גיל&gt; = P7 דגם 707B) עם מים מזוקקים להתחבר למערכת אולטרסאונד. מניחים את החללית בדוכן מתכווננת על הכיוון המשוער הדרוש כדי להשיג ראייה ארוכת ציר LV על העכבר רכוב על פלטפורמת הדמיה כך איפקס LV הוא הצביע על הזרוע ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערכת הלחץ מורכב מתמר מלא נוזלים בלחץ, מגבר גשר, מערכת נתונים הרכישה ההקלטה נתונים התוכנה (LabChart). חיבורים אלה כוללים 3-way והברזים למיניהם, צינורות, מנעולים luer ו קרסים צינור. מזרק 20 מ&quot;ל מלא מלוחים heparinized 10% שטיפה בקצה אחד. הקצה השני מתחבר מחט וגוף מזרק 3 מ&quot;ל משתנה לשמש מעטפת להחזיק צינורות המחט בזרוע הזרקה (איור 1). </li><lאני&gt; כיול המערכת מתמר לחץ עם מד לחץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר צינורות המחט מעטפת בזרוע הזריקה של מערכת אולטרסאונד. הצמד מתמר הלחץ עמדה טבעת בגובה משוער של פלטפורמת הדמיה. צרף מחט מתאימה לעידן של העכבר (גיל E18 - P3 =, 30G גיל&gt; P3 = 25 גרם) כדי צינורות המחט. מחטים קטנים יותר לקבל סמיך יותר, קשה יותר להתקדם דרך בית החזה, ויש לי זמן תגובה איטי יותר. לפיכך, גודל המחט הגדולה ביותר שמתאים לומן LV משמש בגיל זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים תלולית של ג&#39;ל אולטרסאונד על פלטפורמת הדמיה בזהירות בשורה בדיקה באמצעות מעמד מתכוונן כך את המחט ניתן מתקדמים ישירות תחת במרכז בדיקה הדמיה (איור 2) לתוך הג&#39;ל. המחט צריכה להיות מספיק רחוק מתחת בדיקה לא לנקב את מכסה בדיקה, אבל מספיק קרוב כדי להיות בתוך עומק בדיקה מרחק. במידת הצורך, המחט עשוי להיות כפוף ביד כך שהוא נשאר הדואר המטוס הנכון לאורך כל הנסיעה שלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירה על יישור, לחזור בו מחט ולהעלות את החללית הדמיה למקם העכבר על פלטפורמת הדמיה. לשטוף את המחט כדי למנוע כל ג&#39;ל שאולי נכנס עצה. </li></ol> 2. עכבר הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל השיטות המוצגות פרוטוקול זה אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש. להרדים בהריון בעיתוי (E18) או עכבר בילוד (P1 - 20) על ידי שאיפה מתמדת של 1.5% isoflurane. צינורות שניתן להוסיף חרוט אף תקן כדי להכיל את ראש קטן של עכבר בילוד מוקדם (P1 - 15). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבטיח את העכבר על פלטפורמת הדמיה של מערכת אולטרסאונד במצב משכוב הגב עם איפקס LV מצביע לעבר הזרוע ההזרקה. עבור נשים הרות, החל ג&#39;ל אולטרסאונד לנטר את קצב הלב עם גלאי אק&quot;ג המצורף ולהכניס את המדחום בפי הטבעת עבור משוב של טמפרטורת הגוף. עכברים היילודים הם F קטן מדיאו גלאים אלו, ולכן קצב הלב מנוטר במהלך מדידות לחץ וטמפרטורה הגוף נשמר עם מנורת חום חיצוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער מהבטן של האם בהריון או החזה של העכבר צעיר עם קרם מקריח. עכברים היילודים (P1 - 10) לא דורש שום להסרת שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור נשים הרות, לחתוך לפתוח את הבטן באמצעות מספריים הניתוח, מלקחיים מעוגלים. להחצין קרן אחת במקום הרחם ועל גזה טבולה תמיסת מלח חמים. לתמרן בזהירות עובר למצב הנכון לקבל תצוגה parasternal ציר זמן של LV באמצעות בדיקה אולטרסאונד. למדוד את הלחץ עוברים את כל זה בצד לפני להחצין קרן הרחם השני. הרחק את כל העוברים ואת הבטן של האם לחות בתוספת תקופתית של מי מלח חמימים. </li></ol> 3. מדידת לחץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום prewarmed, ג&#39;ל אולטרסאונד degassed על העכבר עובריים או הילוד. עכברים ילודים שלא היו דepilated צריך כמות קטנה של ג&#39;ל אולטרסאונד שפשף על החזה שלהם לפני ג&#39;ל אולטרסאונד שנותר הוא ליישם כדי לשפר את הצימוד. מנמיכים את החללית הדמיה ולהתאים את זווית פלטפורמת הדמיה לקבל תצוגה אופטימלית parasternal LV ציר זמן. לא לשנות את הזווית של החללית כי יישור מחט יאבדו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך מעקב אחר תמונה LV על המסך אולטרסאונד, לאט לקדם את המחט עד שהוא קרוב לתחתית של החללית. לשנות את מיקום המחט בדיקה, אם יש צורך בכך, כדי לתקן משמרות יישור. לשטוף בעדינות את המחט עם מי מלח. הפעל לחץ הנתונים הקלטה ואפס מתמר לחץ עם תוכנת LabChart. מתמר נסחף עם טמפרטורה עמדה, ולכן חשוב לאפס אותו לפני מדידת לחץ כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט לקדם את המחט עד שניתן לראות בקצה התמונה אולטרסאונד, אך עדיין לא LV. לשנות את מיקום המחט, במידת הצורך, כדי להזין את LV באיפקס. לשנות את מיקום החללית, במקרה הצורך, כדי לשמור על תמונה ברורה של המחט. לקדם את המחט לתוך לומן LV (איור 3), בעת הקלטת נתונים בלחץ וניטור מיקום המחט על תמונת אולטרסאונד. תחילת ההקלטות pulsatile מ מתמר לחץ מאשרת את המיקום בתוך לומן LV (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם המחט נראה ב לומן LV, אבל הקלטות הלחץ לא pulsatile, סומק עם ברז אור על הבוכנה במזרק, רק עד להגביר את הלחץ מזוהה (כ 5-10 בנפח μL). זה אמור לנקות את כל כפכפים שניתן למנוע קריאה מדויקת. אם קריאות הלחץ עדיין לא pulsatile, המחט עשוי להיות מעל או מתחת למישור הנכון ולא להיות מוכנס לתוך לומן LV. חוזר בי את המחט, לשטוף עם מי מלח, ו מראש שוב. אם קריאות pulsatile עדיין לא השיג, לעבור העכבר הבא. השתמש מחט חדשה כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריאות לחץ מוצלחים ניתן לקבל 75%עכברים עובריים בילוד ניסו. קריאות צריך לקחת 5 - 10 דקות כל אחד והנתונים לחץ על העכבר אין לכלול אם קצב הלב שונים משמעותית מהצפוי (5 א &#39;איור). קצב לב יש השפעה משמעותית על צעדים לב וכלי דם קצב הלב שינו מעידים על מצוקה של הלב. מצוקה עוברית מתרחשת בדרך כלל 1 - 1.5 שעות לאחר החצנה הראשונה של הרחם, ולכן המהירות חשובה למדידת הלחצים המלטה שלמה. </li></ol> 4. נציג תוצאות כל התוצאות המוצגות הן עבור עכברים C57BL6J. הדימוי של המחט לומן LV על העכבר P1 ב שמוצג באיור 3. מחט יש צורך לנקב את דופן בית החזה ולהשיג גישה קטן LV לומן, אבל זה מגביר באופן משמעותי את זמן התגובה של המערכת בלחץ. כאשר עלייה לשלב משוער בלחץ מוחל באופן ידני למערכת, זמן להגיע 67% מהלחץ המקסימלי הוא 0.067 SEג עם צינור בלבד (רוב מעיד סביר של זמן אמיתי ליישם את הצעד לחץ), 0.105 שניות עם מחט 25 G ו - 0.529 שניות עם מחט 30 G. עיכוב להגיע הלחץ המרבי ניתן לראות את עקבות שלמים המוצגים 4A הדמות 4C. למרות זמן התגובה הוא איטי יותר עם ​​מחט 30G, צורת הגל נתפס טוב יותר בשלבים עובריים בילוד מוקדם, כי קצב הלב עולה עם הגיל בעכברים 5. למרות מגבלה זו, לחץ סיסטולי ניתן לחשב בהנחה נכון LV הלחץ הדיאסטולי (מינימום) הוא אפס, ואת הלחץ (מרבי) סיסטולי LV פי שניים בלחץ הממוצע LV נקבע מתוך קריאה על מצב יציב (איור 4 ב ו - 4D ) 6. מקובל להניח כי LV הסיסטולי ולחצים העורקים שווים. הלחצים נמדד קצב הלב ומחושב LV עבור הגילאים השונים בין E18 ו P14 מוצגות באיור 5. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig1.jpg" /> באיור 1. תמונה של מתמר לחץ עם 3 כיווני והברזים למיניהם מצורפים, זכר (M) ונקבה (ו) חיבורי luer לנעול, קרסים צינור, צינורות, מזרקים, מחטים. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig2.jpg" /> איור 2. תמונה של הקים כדי ליישר את המחט עם בדיקה הדמיה (א &#39;). פלטפורמת הדמיה הוא הסתובב כך איפקס LV של העכבר עומד בפני הזרוע ההזרקה. החללית הוא רכוב על דוכן מתכוונן על הכיוון המשוער הדרוש כדי להשיג תמונה רב ציר LV. מעטפת צינורות מחט הוא רכוב בזרוע הזריקה. מחט הוא התקדם לתוך תלולית של ג&#39;ל אולטרסאונד על פלטפורמת ההדמיה כדי לקבוע את הזווית הנכונה למצב אנכי ואופקי ביחס בדיקה הדמיה (ב &#39;). <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig3.jpg" /> איור 3. תמונה של המחט (N) התקדם דרך בית החזה (CW) ולתוך לומן LV ב העכבר P1. סרגל קנה מידה = 0.1 מ&quot;מ. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig4.jpg" /> איור 4. Pulsatile דוגמה לחץ קריאות כמו מחט נכנס LV של E18 (א) ו - P14 (C) העכבר. יש עיכוב להגיע למצב יציב בשל זמן התגובה של המערכת עם המחט מחוברת. צפיות זום של קריאות על מצב יציב מוצגים ב &#39;הערה ד&#39; כי המינימום E18 לחצים LV הם כמעט לאפס, אבל צורת גל מלא מאפס הלחץ המקסימלי לא ניתן להקליט את קצב הלב גבוה יותר של p14 בעכברים. הלחצים מתכוון נמדדות על פי הקריאות המצב היציב ואת ההנחה היא כי LV הלחץ הסיסטולי = 2 x נמדד הלחץ אומר. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig5.jpg" /> איור 5 קצב הלב נמדד (א) ומחושב סיסטולי לחצים LV (ב) - E18. P14 עכברים. N = 7 עבור E18, 5 עבור P1, P3 על 22, 23 ו 16 של P7 על P14 <sup&gt; 5-7.

<ol><li>Ji, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+ventricular+diastolic+function+correlate+with+changes+in+ventricular+myoarchitecture+in+normal+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos.</a> Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).</li>
<li>Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+nonuniformity+of+geometric+and+mechanical+properties+of+mouse+aorta+is+increased+during+postnatal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).</li>
<li>Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+blood+pressure+and+baroreflex+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice.</a> Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).</li>
<li>Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+aortic+diameter+and+compliance+precedes+blood+pressure+increases+in+postnatal+development+of+elastin-insufficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vessel+elasticity+alters+cardiovascular+structure+and+function+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice.</a> Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+elastin+to+aortic+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of elastin to aortic development in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).</li>
<li>Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microfibrils+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular microfibrils in development and disease.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).</li>
<li>Li, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease%2C+supravalvular+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

הפרוטוקול המובא כאן מספק שיטה למדידת לחץ LV ב עובריים בסוף שנות ועכברים בילוד מוקדם. המגבלה העיקרית של פרוטוקול זה הוא הפתרון הזמני של המערכת לחץ. אותות הלחץ דיכא כפי שהוא נוסע מ LV באמצעות מחט כדי מתמר, ורק אומר ערכי לחץ ניתן להקליט. דעיכת ניתן למזער באמצעות מחט הגדול ביותר האפשרי, אבל המחט חייב להתאים לומן LV על עכברים בגיל שונים. בגלל הלחץ הדיאסטולי ניתן מקורב כמו אפס, LV ואת הלחץ הסיסטולי עורקים וכתוצאה מכך ניתן לחשב את המידות מתכוון LV לחץ. אף על פי משתנים נוספים העורקים יהיה...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> ברזולוציה גבוהה אולטרסאונד מערכת </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> או אולטרסאונד אחרת המערכת המתאימה </td></tr><tr><td> אולטרסאונד בתדירות גבוהה בדיקות </td><td> Visualsonics </td><td> 708 ו 707B </td><td></td></tr><tr><td> פלטפורמת הדמיה והזרוע זריקה </td><td> Visualsonics </td><td> הדמיה תחנה 2 </td><td> עם אק&quot;ג משוב בקרת טמפרטורה של פלטפורמת </td></tr><tr><td> לחץ מתמר </td><td> אלצהיימר מכשירים </td><td> MLT 844 </td><td></td></tr><tr><td> גשר מגבר </td><td> אלצהיימר מכשירים </td><td> ML221 </td><td></td></tr><tr><td> נתוני מערכת הרכישה </tד&gt; <td> אלצהיימר מכשירים </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> נתונים ההקלטה תוכנה </td><td> אלצהיימר מכשירים </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> טבעת לעמוד לצבוט </td><td> ספקים שונים </td><td></td><td> להחזיק מתמר הלחץ במהלך המדידות </td></tr><tr><td> 3-way והברזים למיניהם עם קשרים luer, נעילת זכר </td><td> קול בן הזוג </td><td> 30600-02 </td><td></td></tr><tr><td> 1/16 &quot;ID Tubing Tygon </td><td> קול בן הזוג </td><td> 06408 </td><td></td></tr><tr><td> Luers זכר ונקבה w / 1/16 &quot;ברביטורטים צינור </td><td> קול בן הזוג </td><td> 45510-50 45510-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 &quot;עם צינורות luer זכר ונקבה בכל קצה </td><td> קול בן הזוג </td><td> 30600-60 </td><td></td></tr><tr><td> 3 ו 10 מ&quot;ל מזרקים </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 ו 25 גרם מחטי </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> 1.5 ס&quot;מ אורך </td></tr><tr><td> ביג בן מנומטר </td><td> Riester </td><td> 1456-100 </td><td></td></tr><tr><td> מלוח </td><td> ספקים שונים </td><td></td><td></td></tr><tr><td> הפרין </td><td> ספקים שונים </td><td></td><td></td></tr><tr><td> אולטראסאונד ג&#39;ל </td><td> פרקר </td><td> Aquasonic 100 </td><td></td></tr><tr><td> מסיר שיער קרם </td><td> נאיר </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת לחץ חדרית השמאל עכברים עובריים ילודים המאוחרת

Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice

לחץ הדם עולה באופן משמעותי במהלך ההתפתחות העוברית ואחרי לידה אצל בעלי חיים בעלי חוליות. בשנת העכבר, זרימת הדם ניתן לזהות 1 סביב יום עובריים (E) 8.5 1. סיסטולי שמאל (LV) החדר הוא 2 מ&quot;מ כספית על E9.5 ו 11 מ&quot;מ כספית על E14.5 2. על אלה באמצע בשלבים עובריים, LV נראה בבירור דרך בית החזה למדידות לחץ פולשניים, כי הצלעות ועור לא מפותחת. בין E14.5 ולידה (כ E21) שיטות הדמיה יש להשתמש כדי להציג LV. לאחר הלידה, כלומר עליית לחץ הדם של 30 - 70 מ&quot;מ כספית מיום הלידה (P) 2-35 3. מעבר P20, לחץ הדם ניתן למדוד עם מצב מוצק צנתרים (כלומר מילר או Scisense). לפני P20, צנתרים אלו גדולים מדי לפיתוח עורקי של העכבר או לחץ הדם יש למדוד את משך מותאם אישית קטטר פלסטיק המחוברים מלאות נוזל מתמרים לחץ 3 או זכוכית micropipettes עו&quot;דכאב כדי סרוו מתמרים לחץ ריק 4. העבודה האחרונה שלנו הראו כי העלייה הגבוהה ביותר בלחץ הדם מתרחשת במהלך העוברי המאוחרות ועד לתקופה שלאחר הלידה המוקדמת בעכברים 5-7. זו עלייה גדולה בלחץ הדם עשויה להשפיע על השריר החלק הנייד (SMC) פנוטיפ בעורקים מתפתחות להפעיל אירועים mechanotransduction חשובים. המחלה האנושית, שבו תכונות מכניות של עורקים המתפתחות נמצאים בסכנה בשל פגמים חלבונים תאי מטריקס (תסמונת כלומר של מרפאן 8 ו היצרות מסתם אאורטלי Supravalvular 9) שינויים מהירים בלחץ הדם בתקופה זו עשויים לתרום פנוטיפ המחלה וחומרת באמצעות שינויים mechanotransduction אותות. לכן, חשוב להיות מסוגל למדוד את לחץ הדם משתנה במהלך עובריים בסוף שנות ותקופות היילודים בעכברי מודל למחלה האנושית. אנו מתארים שיטה לחץ LV מדידה בסוףהעוברית (E18) ו המוקדמות לאחר הלידה (P1 - 20) עכברים. המחט מחוברת מתמר מלא נוזלים בלחץ מוכנס לתוך LV בהנחיית אולטרסאונד. הטיפול נלקח כדי לשמור על תפקוד הלב תקין במהלך פרוטוקול הניסוי, במיוחד עבור עכברים עובריים. הנתונים מייצגים מוצגים ואת המגבלות של פרוטוקול הם דנו.

מדידת לחץ חדר שמאל (LV) בעכברים עובריים בילוד מתואר. הלחץ נמדד על ידי החדרת מחט מחוברת מתמר מלא נוזלים לתוך LV בהנחיית אולטרסאונד. יש להקפיד לשמור על תפקוד הלב תקין במהלך פרוטוקול הניסוי.

לחץ הדם עולה באופן משמעותי במהלך ההתפתחות העוברית והפוסטנטלית בבעלי חוליות. בעכבר, זרימת דם ניתנת לזיהוי לראשונה...

המטרה הכללית של הליך זה היא למדוד את הלחץ בחדר השמאלי (LV) בעכברים בשלבים העובריים המאוחרים ובשלבי היילוד. ראשית, מכינים את הציוד. יש ליישר מחט המחוברת למתמר לחץ עם גשש אולטרסאונד.לאחר מכן מכינים עכבר ומבצעים הדמיית אולטרסאונד של ה-LV שלו. לאחר מכן מחדירים את המחט אל תוך חלל ה-LV ומתעדים מדידות של לחץ פולסטילי. לבסוף, התוצאות מראות לחצים סיסטוליים בעכברים בשלבי העובר המאוחרים ובשלבים נאו-נטליים מוקדמים באמצעות קטטריזציה זו של נוזלים בהנחיית אולטרסאונד.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון servo, מדידות ללא לחץ או קטטרים במצב מוצק, הוא שניתן למדוד לחץ בעכברים בשלבים עובריים מאוחרים ובשלב היילוד באופן חסון וחזרתי. באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בטכניקה זו יתקשו בביצועה, מכיוון ששמירה על אוריינטציית העובר בתוך שק העובר היא מאתגרת, שכן העובר נוטה להסתובב. ביישום של מתמר האולטרסאונד, בהתאם לשלב העובר של העכבר הנחקר, יש לבחור מתמר ולמלא אותו במים מזוקקים.מקמו את המתמר במעמד המתכוונן של מערכת האולטרסאונד. כווננו את המעמד כך שיספק תצוגת ציר ארוך של ה-LV של עכבר המקובע לפלטפורמה, כאשר חוד ה-LV מופנה לעבר זרוע ההזרקה. מערכת הלחץ מורכבת ממגבר גשר למתמר לחץ מלא בנוזל, מערכת לרכישת נתונים ו-lab chart.חבילת תוכנה, מזרק של 20 מיליליטר מלא בתמיסת מלח עם 10% heparin משמשים לשטיפת הצינורות. ודאו שבועות אוויר אינן נלכדות בצינורות או מעל המתמר. הצינורות למתמר מחוברים באמצעות ברזי עצירה תלת-כיווניים, מחברי lure locks ומחברי hose barbs.כייל את מערכת חיישן הלחץ באמצעות מנומטר, והרכב את צינורית המחט ואת המעטפת בזרוע ההזרקה. החלף את המנומטר במעטפת שתחזיק את הצינורית לזרוע ההזרקה. המעטפת היא פשוט גוף של מזרק של שלושה מיליליטר שעבר התאמה.קבע את חיישן הלחץ בטבעת. עמוד בגובה המקורב של פלטפורמת ההדמיה כדי למנוע סתימות. חבר את המחט בגודל המקסימלי האפשרי לצינור המחט והזרק תמיסת סלין עם הפרין עד להופעת מספר טיפות.הוצא את המחט שוב. ודא שלא נלכדו בועות בתוך הצינורית או מעל המתמר. כעת, הנח תלולית של ג'ל אולטרסאונד על פלטפורמת ההדמיה.סובבו את המחט מגוף המזרק של 3 ml כך שהקצה המשופע של המחט פונה כלפי מעלה. לאחר מכן, באמצעות המעמד המתכוונן, יישרו בזהירות את הגשש כך שניתן יהיה להחדיר את המחט ישירות אל תוך הג'ל. תחת מרכז גשש הדימוי, על המחט להימצא מספיק נמוך מתחת לגשש כדי לא לנקב את כיסוי הגשש, אך קרובה מספיק כדי להיות בתוך עומק המוקד של הגשש.במידת הצורך, ניתן לכופף את המחט ביד כך שתישאר במישור הנכון לאורך כל מסלולה. תוך שמירה על היישור, יש להסוג את המחט ולהרים את מתמר ההדמיה כדי להניח עכבר על פלטפורמת ההדמיה. יש להחליף את המחט לפני שמתקדמים להרדמת העכבר.עכברה גבולה בהריון או עכבר ניאונטלי מושמים תחת הרדמה רציפה באמצעות שאיפה של 1.5% Isof fluorine; ניתן להכניס צינורית לתוך קונוס אף סטנדרטי כדי להתאימו לראשו הקטן של עכבר ניאונטלי בשלביו המוקדמים. עבור עכברים ניאונטליים, קבעו את העכבר לפלטפורמת ההדמיה של מערכת האולטרסאונד במצב שכיבה גבית (dorsal decubitus), כאשר חוד ה-LV פונה לכיוון זרוע ההזרקה. עבור עכברים ניאונטליים, שמרו על טמפרטורת גופם באמצעות מנורת חימום חיצונית.עכברים בהריון דורשים הכנה רבה יותר. מרחו ג'ל אולטרסאונד על הגפיים כדי לספק חיבור לגלאי ה-ECG המחובר, ועקבו אחר קצב הלב. הכניסו את מד החום הרקטלי לצורך משוב.בקרת טמפרטורת הגוף. הסר את הפרווה מהבטן באמצעות קרם להסרת שיער ושטוף במים. בצע חיתוך של הבטן באמצעות מספרי דיסקציה ופינצטה קמורה.הוצאו החוצה קרן רחם אחת והניחו אותה על פד גזה טבול בתמיסת סליין חמימה. לאורך כל ההליך, שמרו על לחותם של כל העוברים ושל בטנה של האם. באמצעות הוספות תקופתיות של סליין חמים, מנמיקו בזהירות עובר למנח המתאים כדי לקבל תמונת ציר אורך פארא-סטרנלית של ה-LV. בעת השימוש במ probe האולטרסאונד, ניתן להיעזר בגליל גזה כדי לסייע בשמירה על אוריינטציית העובר.המשיכו במדידת הלחץ בכל העובריים בקרן רחמית אחת לפני חזרה על התהליך בקרן הרחמית השנייה. התחילו במריחת ג'ל אולטרסאונד Degas שחומם מראש על עכבר עוברי או ניאונטלי. הורידו את גשש ההדמיה וכוונו את זווית פלטפורמת ההדמיה כדי להשיג תצוגת ציר ארוך אופטימלית של ה-LV במיקום פאראסטרנלי.אין לשנות את זווית הפרוב שמאחר וכך תאבד יישור המחט. תוך כדי ניטור תמונת ה-LV על מסך האולטרסאונד, התקדם באיטיות עם המחט עד שתהיה קרובה לבסיס הפרוב. במידת הצורך, התאם את מיקום המחט והפרוב כדי לתקן הסטות ביישור.התמונה מהעכבר הרך (neonatal mouse) מראה אוריינטציה אידיאלית עבור ה-lv, שקשה להשיג בעובר. התחל בהקלטת נתוני הלחץ. שטוף בעדינות את המחט בתמיסת סליין וסגור את ברז המעבר (stop cock) למזרק של 20 milliliter ול атмосפירה.עקבו אחר הלחץ. הגבירו בתוכנה כדי להבטיח שמופעל לחץ מינימלי על המחט. התקדמו באיטיות עם המחט עד שניתן לראות אותה בקצה תמונת האולטרסאונד, אך עדיין לא ב-lv.במידת הצורך, התאימו את מיקום המחט כדי להיכנס ל-LV דרך הקודקוד (apex). התאימו את מיקום המתמר במידת הצורך כדי לשמור על תמונה ברורה של המחט. התקדמו עם המחט אל תוך חלל ה-LV תוך כדי הקלטת נתוני לחץ ומעקב אחר מיקום המחט בתמונת האולטרסאונד.תחילתן של הקלטות פולסטיליות ממתמר הלחץ מאשרת את המיקום בתוך חלל ה-LV. אם המחט נראית כנמצאת בחלל ה-LV, אך הקלטות הלחץ אינן פולסטיליות, יש לשטוף את המחט באמצעות נקישה קלה על בוכנת המזרק עד לגילוי עלייה בלחץ. שטיפת הנוזל חייבת להיות מינימלית כדי למנוע שינוי בהתנהגות הלב במהלך מדידות הלחץ.אם קריאות הלחץ עדיין אינן פולסטיליות, ייתכן שהמחט נמצאת מעל או מתחת למישור הנכון ולא הוחדרה לתוך חלל ה-LV. החזיר את המחט, שטוף אותה בתמיסת סליין והחדר אותה פעם נוספת.אם עדיין לא התקבלו קריאות פולסטיליות, עברו לעכבר הבא והשתמשו תמיד במחט חדשה עבור כל עכבר חדש. יש לבצע את הפרוצדורה כולה במהירות המקסימלית כדי למזער את הסטרס עבור העוברים וה新生-עכברים (neonates) לאורך משך הניסוי. לחץ החדרים של עכברי C 57 Black six J נמדד בעכבר בשלב E 18.כצפוי, הלחץ היה קרוב לאפס כאשר המחט הייתה מחוץ ל-LV, והלחץ הראה קריאה פולסטילית כאשר היא הייתה בתוך ה-LV עבור עכבר P 14 מבוגר יותר. קריאת הלחץ הייתה מרוסנת כיוון שעוצמת הלחץ הייתה גבוהה יותר וקצב הלב היה מהיר יותר. קצבי הלב נקבעו על סמך התדירות של קריאות הלחץ הפולסטיליות עבור גילאים שונים שבין E 18 ל-P 14.קצבי הלב נמדדו ולחצי ה-LV הסיסטוליים חושבו. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להרטיב את העוברים באופן תקופתי ולבדוק את מצבה של האם. טכניקה זו סוללת את הדרך עבור חוקרים בפיזיולוגיה קרדיווסקולרית לחקור שינויים בלחץ הדם בעכברים מתפתחים.

measuring-left-ventricular-pressure-late-embryonic-neonatal

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

מוות עובר ולידה הוא תכונה נפוצה כאשר לומדים שינויים גנטיים המשפיעים על התפתחות לב. הדמית אולטרסאונד בתדר גבוה השתפרה רזולוצית 2-D ויכולה לספק מידע מצוין על התפתחות מוקדמת ולב היא שיטה אידיאלית כדי לזהות את ההשפעה על מבנה ותפקוד לב לפני המוות.

אקו העוברי Murine

פרוטוקול ספציפי ומהיר במקביל לחקירת פונקציה נכונה לב, דלקת ריאות, והתגובה החיסונית מתואר ככלי למידה. וידאו ודמויות מתארים פיזיולוגיה וטכניקות microdissection בצוות גישה מאורגנת שניתנת להתאמה לשימוש לקטן למחקרים בגודל גדולים.

מדידות נכונות חדרית סיסטולי לחץ בשילוב עם קציר של ריאה ודגימות רקמה חיסוניות בעכברים

מאמר זה מספק פרוטוקול להערכת אקו בגודל חדר ממני ויתר לחץ דם ריאתי בעכברים. יישומים כוללים קביעת הפנוטיפ והערכה סידורי במהונדס ומודלי עכבר מושרה רעל של קרדיומיופתיה ומחלת כלי דם ריאתי.

אקו הערכה של הלב הימני בעכברים

תפקוד לקוי של חדר ממני (RV) הוא קריטי בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם, אך מתודולוגיות מוגבלות זמינות להערכתו. ההתקדמות שחלה באחרונה בתחום ההדמיה אולטרה סאונד מספקת אפשרות פולשני ומדויקת עבור מחקר RV אורך. בזאת, אנו פירוט שיטת אקו צעד אחר צעד תוך שימוש במודל עכברי של עומס יתר לחץ RV.

הערכה של מבנה הנכון חדרית ותפקוד בעכבר הדגם של תעוקת עורק ריאה על ידי Transthoracic אקו

אי ספיקת לב היא הגורם המוביל לאשפוז וגורם עיקרי לתמותה. מודל של קשירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בעכברים מיושם כדי לחקור עיצוב מחדש של החדרים ותפקוד לקוי של הלב לאחר אוטם שריר הלב. מוצגת הטכניקה של מדידות המודינמיות פולשניות בעכברים.

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

מאמר זה מתאר את מדידת תפקוד החדר השמאלי של העכברים באמצעות ניתוח לחץ/נפח בקצב לב שונה.

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

כתב יד זה מתאר פרוטוקול מפורט לאיסוף נתונים לחץ-נפח מהעכבר.

מדידת לולאות נפח לחץ העכבר

הפרוטוקול הבא מתאר את המתודולוגיה לרכישה וניתוח תמונות אקו על מנת לקבל את נפח פרוזדורי שמאל (LAV), אב עורקי קוטר (Ao), ואת עורק ריאה (PA) בקוטר בעכברים. טכניקה זו היא הליך פולשני, שאינו מסוף המאפשר הערכה של תפקוד לב-ריאה.

אקו Murine של השמאל אטריום, אבי העורקים, ו עורק הריאה

אולטראסאונד בתדירות גבוהה הדמיה של העכבר עוברית השתפרה דימות ברזולוציה, יכול לספק אפיון פולשני מדויק של התפתחות הלב, פגמים מבניים. פרוטוקול המתוארים במסמך זה מיועדת לביצוע בזמן אמת עוברי עכברים אקוקרדיוגרפיה ויוו.

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

כאן אנו מתארים ומשווים שתי עמדות לקבלת השקפה של ארבעה קאמריים בעכברים. תנוחות אלה מאפשרות את כימות התפקוד הימני של הפונקציה, לספק תוצאות דומות, ניתן להשתמש לסירוגין.

המדידה האקוקרדיוגרפית של פרמטרים של הימני החדרית בעכבר

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הערכה אקוקרדיוגרפית של מורפולוגיה של חדר שמאל, תפקוד וזרימת דם כלילית בעכברים בני 7 ימים.

אפיון אקוקרדיוגרפי של מבנה החדר השמאלי, תפקודו וזרימה כלילית בעכברים ילודים

למד מדידת לחץ חדרית שמאל בעכברים עובריים וילודים באמצעות הדרכת אולטרסאונד. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות וחוזרות של לחץ סיסטולי בפיתוח לבבי מוקדם.

מדידת לחץ חדרית השמאל עכברים עובריים ילודים המאוחרת

גלה סרטונים נוספים