Name: טכניקה פשוטה עבור באתרו כריתת של הקרנית ואת הוצאת הקרביים של רקמת רשתית מ גלוב Ocular האדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: למד טכניקה פשוטה לכריתת קרנית והוצאת רשתית מגלוב עיניים אנושי לשימוש בהשתלות ומחקר. השיטה שומרת על איכות הרקמות ומונעת נזק למבנים סמוכים לאחר 18 שנות ניסיון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה בחלקה באמצעות מענקים של ונטו Regione (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 ו Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). המחברים מודים לד&quot;ר ג Griffoni עבור הנתונים 2009/2010 סיכום על השימוש גלובס עיניים אנושיות.

<ol><li>Fay, A. Diseases of the visual system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFay%2C+A+%22Cecil+Medicine%22">Cecil Medicine</a>. Goldman, L., Ausiello, D. , 23rd ed, Saunders Elsevier. Philadelphia, Pa. (2007).</li>
<li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+patents+on+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li>
<li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Eye%3A+The+physiology+of+human+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Britannica+educational+publishing%22%5BJournal%5D)">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li>
<li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLang%2C+G+%22Ophthalmology%3A+A+pocket+textbook+atlas%22">Ophthalmology: A pocket textbook atlas</a>. , 2nd Edition, 115-117 Forthcoming.</li>
<li>Liesbeth, P. els <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+Culture%3A+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li>
<li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li>
<li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li>
<li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. Retina. 30, 1555(2010).</li>
<li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563(2011).</li>
<li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795(2011).</li>
</ol>

החוקרים אין ניגוד עניינים.

שניהם, כריתה נכונה ושמירה נכונה של רקמות הקרנית הרשתית הם קריטיים כמו פגמים קלים כגון נזק האנדותל או מספר גבוה של קפלים של descemet יכול להוביל לכישלון השתל של הקרנית ואילו שינויים בטמפרטורה או טיפולו הכושל יכול להתפשר על שלמות רקמות הרשתית. מטרת מאמר זה היא להראות כיצד רקמות הקרנית ברשתית יכול להיות מבודד באופן אופטימלי, ללא גרימת נזקים או שינויים, אשר עלול לסכן את השימוש בהם להשתלה או למטרות מחקר. המינימום הנדרש תא צפיפות (&lt;2200 תאים / מ&quot;מ 2), מורפולוגיה טובה ...

חומרים כריתה של הקרנית ואת הרשתית. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תאור המוצר </td><td> מידות </td><td> החברה / המוסד </td></tr><tr><td> שמרו הפנויה אזמל </td><td> Blade בגודל 15 </td><td> סוואן, מורטון </td></tr><tr><td> תחבושות סטריליות </td><td> 5 ס&quot;מ על 5 ס&quot;מ, 8 שכבות, 5 יח&#39; </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> מגבת סטרילית רפואי חד פעמי </td><td> 35 X 50 ס&quot;מ </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> עקרות מספריים </td><td> להבים 24 מ&quot;מ / אורכו הכולל. 95 מ&quot;מ מעוגלת, בוטה </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> סטרילית מלקחיים </td><td> נירוסטה -100 מ&quot;מ 11 X 2 הנשלט על ידי השיניים 0.70 מ&quot;מ </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> טופר הקרנית - מכשיר רפואי חד פעמי </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> ההכנות </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> 100 מ&quot;ל PBS [10x] ב 900 (מים מזוקקים) מ&quot;ל ד / ל </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-thiosulphate </td><td> 1 גרם Na-thiosulphate ב 1 ליטר של PBS [1x] </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 5 גרם I-PvP ב 1 ליטר ד / ל </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> טבלה 2. הטבלה מתארת ​​את החומרים המשמשים כריתה של הקרנית ואת הרשתית לבין החברה הם מתקבלים. חומרים עבור אמצעי אחסון (2000 מ&quot;ל). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רכיבי </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td><td> ריכוז </td><td> כמות </td></tr><tr><td> MEM(1X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> נתרן פירובט </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> אנטיביוטיקה / antimycotic </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 מ&quot;ל / ליטר </td><td> 20 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סובך של יילוד בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 40 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> לוח 3. חומרים בינוני האחסון. הכנת אמצעי אחסון להוסיף את כל החומרים באמצעות ריכוזים ספציפיים שניתנו לעיל בצנצנת ומערבבים היטב. לסנן אותםבאמצעות גודל הנקבוביות של 0.2 מיקרון המסנן (Millipore, מילאנו, איטליה) עם עזרה של המשאבה peristaltic. לשמר את המדיום בבקבוקים ב RT. חומרים בינוני הובלה (2000 מ&quot;ל). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רכיבי </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td><td> ריכוז </td><td> כמות </td></tr><tr><td> MEM (1X) נוזלי </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> נתרן פירובט </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2 מ&quot;מ (10 מ&quot;ל / ל &#39;) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> סובך של יילוד בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2% (20 מ&quot;ל / ל &#39;) </tד&gt; <td> 40 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Dextran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> 6% (60 גרם / ליטר) </td><td> 120 גר &#39;/ ל </td></tr></tbody></table> לוח 4. חומר בינוני התחבורה. הכנת אמצעי התחבורה הוסף dextran 6% ב 1.5 ליטר ~ של MEM ולהשאיר אותה בן לילה. מוסיפים את יתר החומרים בכלי התקשורת ולסנן באמצעות 0.2 מיקרון המסנן (Millipore, מילאנו, איטליה) באמצעות משאבת ואקום. לשמר את המדיום בבקבוקים ב RT.

טכניקה פשוטה עבור<em&gt; באתרו</em&gt; כריתת של הקרנית ואת הוצאת הקרביים של רקמת רשתית מ גלוב ocular האדם

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

אנוקלציה (Enucleation) היא התהליך של הוצאת גלגל העין מתורם גופה תוך השארת שאר חלקי גלגל העין ללא הפרעה. כריתה (Excision) מתייחסת להוצאת רקמות עיניות, ובמיוחד הקרנייה, על ידי חיתוכה והפרדתה מגלגל העין. אוויסקרציה (Evisceration) היא התהליך של הסרת האיברים הפנימיים, המתייחסים כאן לרשתית. גלגל העין מורכב מהקרנייה, הלובנה (Sclera), הגוף הזגוגית, העדשה, הקשתית, הרשתית, הכורואיד, שרירים וכדומה (תוספת איור 1). כאשר מטופל סובל מנזק לקרנייה, יש להסיר את הקרנייה ולהשתיל קרנייה בריאה באמצעות ניתוחי קרנייה (keratoplastic surgeries). הפרעות גנטיות או פגמים בתפקוד הרשתית עלולים לפגוע בראייה. ניתן להשתמש בגלגלי עיניים אנושיים להליכים כירורגיים שונים, כגון בנק עיניים, השתלת קרנייה או לובנה אנושית ומחקר של רקמות עיניות. עם זאת, קיים מידע מועט על כריתת קרנייה ורשתית אנושית, ככל הנראה בשל הנגישות המוגבלת לרקמות אנושיות. מרבית המחקרים המתארים הליכים דומים בוצעו במודלים של בעלי חיים. מדעים נסמכים על זמינותן של רקמות עיניות שחולקו כהלכה ונשמרו היטב כדי להרחיב את הידע על התפתחות העין האנושית, ההומאוסטזיס ותפקודה. מכיוון שאנו מקבלים כמות גדולה של גלגלי עיניים, שמרביתם (כ-40%, טבלה 1) משמשים למטרות מחקר, אנו מסוגלים לבצע מספר רב של ניסויים ברקמות אלו, ולהגדיר טכניקות לכריתתן ולשימורן באופן קבוע.
הקרנית היא רקמה חסרת כלי דם המאפשרת את העברת האור אל הרשתית, ולצורך כך עליה לשמור תמיד על דרגה טובה של שקיפות. בתוך הקרנית, אזור הלימבוס, המהווה מאגר של תאי גזע, מסייע לשחזור תאי אפיתל ומגביל את גדילת היתר של הלחמית כדי לשמור על שקיפות ובהירות הקרנית. הגודל והעובי של הקרנית הם קריטיים לראייה צלולה, שכן שינויים בכל אחד מהם עלולים להוביל לראייה מטושטשת ולא ברורה. הקרנית מורכבת מ-5 שכבות: א) אפיתליום, ב) שכבת בומן (Bowman's layer), ג) סטרומה, ד) קרום דסמט (Descemet's membrane) ו-ה) אנדותליום. כל השכבות חייבות לתפקד כראוי כדי להבטיח ראייה צלולה4,5,6. הכורויה היא השכבה הביניים שבין הלובן לרשתית, הגבולה מפנים על ידי קרום ברוך (Bruch's membrane), והיא האחראית על זרימת הדם בעין. הכורויה מסייעת גם בוויסות הטמפרטורה ומספקת הזנה לשכבות החיצוניות של הרשתית5,6. הרשתית היא שכבת רקמה עצבית המכסה את החלק האחורי של גלגל העין (נספח איור 1) והיא מורכבת משני חלקים: חלק פוטו-רצפטיבי וחלק שאינו רצפטיבי. הרשתית מסייעת בקליטת האור מהקרנית ומהעדשה וממירה אותו לאנרגיה כימית המועברת בסופו של דבר למוח בעזרת העצב האופטי5,6.
מטרתו של מאמר זה היא לספק פרוטוקול לדיסקציה של רקמות קרנית ורשתית מגלובוסים עיניים אנושיים. מניעת זיהום צולב עם רקמות סמוכות ושמירה על שלמות ה-RNA הן בעלות חשיבות מכרעת, שכן רקמות אלו חיוניות למטרות מחקר השואפות ל-(i) אפיון הטרנסקריפטום של רקמות העין, (ii) בידוד תאי גזע עבור פרויקטים של רפואה רגנרטיבית, ו-(iii) הערכת הבדלים היסטולוגיים בין רקמות מנבדקים בריאים/חולים. במאמר זה אנו מתארים את הטכניקה שבה אנו משתמשים כיום להסרת הקרנית, הכורואיד ורקמות הרשתית מגלובוס עין. להלן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לדיסקציה של גלובוס העין האנושי ולהוצאת רקמות הקרנית והרשתית. הסרטון המצורף יעזור לחוקרים ללמוד טכניקה מתאימה להשגת רקמות אנושיות יקרות שקשה למצוא באופן שוטף.

העיתון מתאר שיטה פשוטה כדי הקרנית בלו וכדי להוציא את העקר רקמות רשתית העין מן העולם של תורמים גווייה אדם. הטכניקה המתוארת כאן יעזור ובלו רקמות באיכות טובה כדי לשמש להשתלה, למטרות מחקר או ניתוח מבלי לפגוע ברקמות אחרות של הגלובוס העין.

טכניקה פשוטה עבור<em&gt; באתרו</em&gt; כריתת של הקרנית ואת הוצאת הקרביים של רקמת רשתית מ גלוב Ocular האדם

אנוקלציה (Enucleation) היא התהליך של הוצאת גלגל העין מתורם גופה תוך השארת שאר חלקי הגלגל ללא הפרעה. כריתה (Excision) מתייחסת ל...

כיום אנו מדגימים טכניקה מפושטת להוצאת קרנית ורקמת רשתית מגלגל עין אנושי של תורמי גופות. הטכניקה המתוארת תסייע בהשגת רקמה באיכות גבוהה לשימוש לצורכי השתלה, ניתוחים ומחקר, מבלי לפגוע ברקמות אחרות של גלגל העין. עם ניסיון של 18 שנים ומאות השתלות קרנית מדי שנה, שמרנו על רמה גבוהה של עבודתנו על ידי פיתוח טכניקות חדשות ושיפור מיומנויותינו מדי יום.כדי להשיג זאת, אנו מבצעים תחילה כריתה של הקרנית, ולאחר מכן הוצאה של הרשתית. הקרנית היא רקמה חסרת כלי דם המאפשרת את מעבר האור אל הרשתית, ולצורך כך, עליה לשמור תמיד על דרגה טובה של שקיפות. הקרנית מורכבת מחמש שכבות: האפיתל, שכבת באומן (Bowmans layer), הסטרומה, ממברנת דססמט (descemet membrane) והאנדותל.אם הקרנית פגועה, ניתן להחליפה בעזרת קרנית תורם מתאימה. הכורויה היא הרקמה הבינונית בין הלובנה לרשתית, הגבולה בחלקה הפנימי על ידי ממבראת ברוס והיא האחראית על זרימת הדם בעין. השלקה נאותה של הכורויה חשובה באותה מידה כמו הסרת הרשתית.הרשתית מסייעת בקליטת האור המגיע מהקרנית ומהעדשה וממירה אותו לאנרגיה כימית המועברת בסופו של דבר למוח. בשל העובדה שהעצב האופטי הוא שקוף ועדין, יש להוציא אותו באופן שיטתי כדי להבטיח איכות רקמה טובה. הפעל את תא הזרימה הלמינרית.נקה את מapay הזרם הלמינרי באמצעות אלכוהול איזופרופיל 70%. לבש ביגוד מגן אישי כגון כיסוי ראש כירורגי, כפפות

a-simplified-technique-for-situ-excision-cornea-evisceration-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

טכניקת הנתיחה ממחישה enucleation של עין העכבר לקיבוע רקמות כדי לבצע phenotyping במסכי תפוקה גבוהה.

Enucleation עיני העכבר לphenotyping מרחוק תפוקה גבוהה

סרטון זה מדגים שיטה לגרימת דלקת בפני השטח של העין ותפקוד לקוי של בלוטת המייבומיאן במודל מורין. גירוי המערכת החיסונית של העכבר באמצעות אימונוגן ולאחר מכן רסטימולציה עם אותו אימונוגן מקדם דלקת פני העין, הגורמת לסתימת הפרשת בלוטת המייבומיאן דרך aggNET המיוצר על ידי נויטרופילים ומובילה למחלת עין יבשה.

שיטה לגרימת דלקת פני העין במודל מורין

הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה מאוד לביצוע באנוקלאציה vivo.

שיטה מאוד לשחזור וישיר לביצוע בVivo Ocular Enucleation בעכבר לאחר פתיחת העיניים

מטרת פרוטוקול זה היא להראות טכניקה יעילה לבידוד ליבת הזגוגית וקליפת המוח השלמה והשלמה מעיני חזיר שעברו גרעין לאחר המוות.

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

מחקר זה נועד לפתח מודל תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית חדשנית (HORC) המונעת פגיעה בשלמות הרשתית במהלך טיפול בהסבר. זה מושגת על ידי פולחן הרשתית עם הזגוזית יתר על המידה ואת אפיתל הפיגמנט ברשתית הבסיסית-choroid (RPE-choroid) ו sclera.

אפיון טכניקה חדשנית של תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית

שינוי של מערך multielectrode קיים או ציוד מהדק תיקון עושה את ex vivo electroretinogram נגיש יותר. שיטות משופרות לתיעוד ושמירה על תגובות אור ex vivo מקלות על חקר תפקוד התאים הפוטורצפטורים וה-ON-דו-קוטביים ברשתית הבריאה, מודלים של בעלי חיים של מחלות עיניים ורשתיות של תורמים אנושיים.

אופטימיזציה של ההגדרה והתנאים עבור אלקטרורטינוגרמה של Ex Vivo כדי לחקור את תפקוד הרשתית בעיניים קטנות וגדולות

פרוטוקול זה מציג ומתאר שלבים לבידוד, דיסקציה, התרבות והכתמה של צמחי רשתית המתקבלים מעכבר בוגר. שיטה זו מועילה כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות שונות ברשתית כגון רטינופתיה סוכרתית.

השתלת הרשתית של הרשתית של עכבר בוגר כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות ברשתית

מאמר זה מציג פרוטוקול למיקרו-דיסקציה עינית במכרסמים. התהליך כולל את האינקולציה של גלגל העין יחד עם הממברנה הניקטיבית (כלומר, העפעף השלישי). לאחר מכן מתבצעת הפרדה של המשקפיים האחוריים והקדמיים.

מיקרודיסקציה של עין המכרסם

אנו מתארים שיטה להפרדה יעילה של אפיתל פיגמנט הרשתית (RPE) מהרשתית בעיניים אנושיות ויצירת שטוחים שלמים של RPE/כורואידים לצורך ניתוחים היסטולוגיים ומורפומטריים של ה-RPE.

ייצור יעיל ועקבי של אפיתל פיגמנט רשתית/כורואיד שטוח מעיני אדם לניתוח היסטולוגי

כאן, אנו מספקים מתודולוגיה מפורטת לבידוד הרשתית מעין העכבר לניסויים ממושכים ex vivo . פרוטוקול זה מדגיש את הנגשת הגישה התובענית מבחינה טכנית לחוקרים המעוניינים לנצל את דרכי המחקר הניתנות על ידי שמירה על גליה ברשתית באתרה ברקמה חיה.

מודל ex vivo explant לחקר אינטראקציות גליה ברשתית העכבר

למד טכניקה פשוטה לכריתת קרנית והוצאת רשתית מגלוב עיניים אנושי לשימוש בהשתלות ומחקר. השיטה שומרת על איכות הרקמות ומונעת נזק למבנים סמוכים לאחר 18 שנות ניסיון.

טכניקה פשוטה עבור

גלה סרטונים נוספים