Name: הכנת פרוסות Parasagittal לחקירת ארגון הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי מכרסמים entorhinal (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: חקור את ארגון התכונות האלקטרופיזיולוגיות של נוירונים בקורטקס האנתורינלי המדיאלי בעכברים באמצעות פרוסות פרסגיטליות וטכניקת patch clamp. שיטה זו מאפשרת מיפוי מדויק של תכונות תאי הכוכב בקנה מידה גבי-גחוני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנחנו מודים הבאים על תמיכתם: חבר העמים ועדת מלגות בבריטניה מימון (HP), EPSRC (HP), BBSRC (MFN) והאיחוד האירופי מארי קירי פעולות (MFN).

<ol><li>O'Donnell, C., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+responses%3A+an+organizing+principle+for+optimization+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits.</a> Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).</li>
<li>Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+of+synaptic+integration+in+the+medial+entorhinal+cortex+to+the+organization+of+grid+cell+firing+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tuning of synaptic integration in the medial entorhinal cortex to the organization of grid cell firing fields.</a> Neuron. 60, 875-889 (2008).</li>
<li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> Journal of Neuroscience. 25, 1924-1934 (2005).</li>
<li>Hafting, T., Fyhn, M., Molden, S., Moser, M. -B., Moser, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructure+of+a+spatial+map+in+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microstructure of a spatial map in the entorhinal cortex.</a> Nature. 436, 801-806 (2005).</li>
<li>Sargolini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjunctive+representation+of+position%2C+direction%2C+and+velocity+in+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Conjunctive representation of position, direction, and velocity in entorhinal cortex.</a> Science. 312, 758-762 (2006).</li>
<li>Fyhn, M., Hafting, T., Witter, M. P., Moser, E. I., Moser, M. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grid+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Grid cells in mice.</a> Hippocampus. 18, 1230-1238 (2008).</li>
<li>Giocomo, L. M., Zilli, E. A., Fransén, E., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+frequency+of+subthreshold+oscillations+scales+with+entorhinal+grid+cell+field+spacing%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Temporal frequency of subthreshold oscillations scales with entorhinal grid cell field spacing.</a> Science. 315, 1719-1722 (2007).</li>
<li>Giocomo, L. M., Hasselmo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+constants+of+h+current+in+layer+II+stellate+cells+differ+along+the+dorsal+to+ventral+axis+of+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time constants of h current in layer II stellate cells differ along the dorsal to ventral axis of medial entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 28, 9414-9425 (2008).</li>
<li>Burgalossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcircuits+of+functionally+identified+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microcircuits of functionally identified neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Neuron. 70, 773-786 (2011).</li>
<li>Dodson, P. D., Pastoll, H., Nolan, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal-ventral+organization+of+theta-like+activity+intrinsic+to+entorhinal+stellate+neurons+is+mediated+by+differences+in+stochastic+current+fluctuations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Dorsal-ventral organization of theta-like activity intrinsic to entorhinal stellate neurons is mediated by differences in stochastic current fluctuations.</a> J. Physiol. (Lond). 589, 2993-3008 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Dudman, J., Dodson, P., Santoro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HCN1+channels+control+resting+and+active+integrative+properties+of+stellate+cells+from+layer+II+of+the+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">HCN1 channels control resting and active integrative properties of stellate cells from layer II of the entorhinal cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27, (2007).</li>
<li>Boehlen, A., Heinemann, U., Erchova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+range+of+intrinsic+frequencies+represented+by+medial+entorhinal+cortex+stellate+cells+extends+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The range of intrinsic frequencies represented by medial entorhinal cortex stellate cells extends with age.</a> Journal of Neuroscience. 30, 4585-4589 (2010).</li>
<li>Klink, R., Alonso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+characteristics+of+layer+II+projection+neurons+in+the+rat+medial+entorhinal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Morphological characteristics of layer II projection neurons in the rat medial entorhinal cortex.</a> Hippocampus. 7, 571-583 (1997).</li>
<li>van Groen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+mouse%3A+cytoarchitectonical+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the mouse: cytoarchitectonical organization.</a> Hippocampus. 11, 397-407 (2001).</li>
<li>Dolorfo, C. L., Amaral, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entorhinal+cortex+of+the+rat%3A+organization+of+intrinsic+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Entorhinal cortex of the rat: organization of intrinsic connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 398, 49-82 (1998).</li>
</ol>

אין מה לחשוף.

כדי להקל על החקירה של נכסים MEC מעגלים הבאים הארגון הגב, הגחון שתיארנו כאן בפירוט תהליך ייצור הכנת פרוסת parasagittal שמשמר את מידת הגבי-הגחון של MEC. צעדים קריטיים הסרת המוח של החיה. לטפל בפרט, כדי למנוע הפעלת לחץ על המוח. זה חשוב יותר להסרה מהירה של המוח. <stron...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> חיתוך ACSF (מ&quot;מ) </td><td> תקן ACSF (מ&quot;מ) </td><td> פתרון פנימי (מ&quot;מ) </td><td> CASNumber </td><td> קטלוג הספק מספר </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 86 </td><td> 124 </td><td></td><td> 7647-14-5 </td><td> סיגמא S9888 </td></tr><tr><td> לאא 2 PO 4 </td><td> 1.2 </td><td> 1.2 </td><td></td><td> 13472-35-0 </td><td> סיגמא 71505 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 2.5 </td><td> 2.5 </td><td> 10 </td><td> 7447-40-7 </td><td> סיגמא P3911 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td></td><td> 144-55-8 </td><td> פישר S/4240 </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> 25 </td><td> 20 </td><td></td><td> 50-99-7 </td><td> סיגמה G5767 </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> 75 </td><td></td><td></td><td> 57-50-1 </td><td> סיגמא S5016 </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> 0.5 </td><td> 2 </td><td></td><td> 10043-52-4 </td><td> VWR 190464K </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 7786-30-3 </td><td> סיגמא 63020 </td></tr><tr><td> K gluconate </td><td></td><td></td><td> 130 </td><td> 299-27-4 </td><td> סיגמה G4500 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 7365-45-9 </td><td> סיגמא H3375 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 0.1 </td><td> 67-42-5 </td><td> סיגמא E4378 </td></tr><tr><td> Na 2 ATP </td><td></td><td></td><td> 2 </td><td> 34369-07-8 </td><td> סיגמא A7699 </td></tr><tr><td> Na 2 GTP </td><td></td><td></td><td> 0.3 </td><td> 36051-31-7 </td><td> סיגמה G8877 </td></tr><tr><td> NaPhospho-קריאטין </td><td></td><td></td><td> 10 </td><td> 19333-65-4 </td><td> סיגמא P7936 </td></tr><tr><td> Biocytin (לא חובה) </td><td></td><td></td><td> 2.7 </td><td> 576-19-2 </td><td&gt; סיגמא B4261 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. חיתוך ACSF, רמת ACSF ו K-gluconate מתכונים פתרונות פנימיים.

הכנת פרוסות parasagittal לחקירת ארגון הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי מכרסמים entorhinal

Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex

חישוב במוח מתבסס על הנוירונים ותגובה הולמת לכניסות הסינפטיים שלהם. נוירונים נבדלים המשלים שלהם והפצה של יון ערוצי קרום שקובעים איך הם מגיבים תשומות סינפטיים. עם זאת, הקשר בין מאפיינים אלה סלולריים תפקוד עצבי של התנהגות בעלי החיים אינה מובנת היטב. גישה אחת לבעיה זו הוא לחקור מעגלים עצביים המאורגנים טופוגרפית שבה עמדת מפות נוירונים בודדים על גבי המידע שהם לקודד או חישובים שהם נושאים את 1. ניסויים בגישה זו מצביעים על עקרונות כוונון של תגובות סינפטיים שבבסיס קידוד המידע מעגלים חושיות קוגניטיביות 2,3. ארגון טופוגרפי של ייצוגים מרחביים לאורך הציר הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי entorhinal (MEC) מספקת הזדמנות ליצור קשרים בין מנגנוני זמן מחשב הסלולר אניmportant על קוגניציה מרחבית. הנוירונים בשכבה השנייה של MEC מכרסם לקודד המיקום באמצעות הרשת, כמו ירי שדות 4-6. עבור נוירונים שנמצאו בעמדות הגב ב MEC המרחק בין שדות ירי בודדים היוצרים ברשת היא בסדר גודל של 30 ס&quot;מ, ואילו נוירונים ב עמדות בהדרגה הגחון יותר מרחק זה עולה ל מ גדול מ 1. מספר מחקרים גילו תכונות הסלולר של הנוירונים בשכבה השנייה של MEC, שכמו המרווח בין שדות הרשת ירי, גם משתנים בהתאם למיקום שלהם הגבי-הגחון, טוען כי נכסים אלה הסלולר חשובים לצורך חישוב מרחבי 2,7-10. כאן נתאר את הליכי הכנה הקלטה אלקטרו מן פרוסות המוח השומרים על מידת הגבי-הגחון החקירה המאפשר MEC של ארגון טופוגרפי של נכסים biophysical ו האנטומי של נוירונים MEC. עמדה הגב, הגחון של n מזוההeurons יחסית ציוני דרך אנטומיים קשה לקבוע במדויק עם פרוטוקולים המשתמשים פרוסות אופקיות של MEC 7,8,11,12, שכן קשה לקבוע נקודות התייחסות המיקום הגבי-הגחון המדויק של הפרוסה. הנהלים אנו מתארים לאפשר מדידה מדויקת ועקבית של מיקום של תאים שנרשמו לאורך הציר הגבי-הגחון של MEC, כמו גם להדמיה מולקולרית של הדרגתיים 2,10. הנהלים שפותחו לשימוש עם עכברים בוגרים (&gt; 28 יום) ואת כבר מצליחים עם עכברים עד 1.5 שנים. עם התאמות ניתן לעשות בהם שימוש עם עכברים צעירים יותר או מינים מכרסמים אחרים. מערכת סטנדרטית של הכנה ומדידה יסייעו חקירה שיטתית של תכונות הסלולר microcircuit של אזור זה.

אנו מתארים הליכי הכנה הקלטה אלקטרו מן פרוסות המוח השומרים על הציר הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי entorhinal (MEC). בגלל קידוד עצבי של מיקום כדלקמן הארגון הגב, הגחון בתוך MEC, נהלים אלה להקל על החקירה של מנגנונים תאיים חשובים לניווט וזיכרון.

הכנת פרוסות Parasagittal לחקירת ארגון הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי מכרסמים entorhinal

חישוב במוח נשען על תגובות הולמות של נוירונים לקלטים הסינפטיים שלהם. נוירונים נבדלים בהרכבן ובפיזורן של...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבחון את הארגון הטופוגרפי של תכונות סינפטיות ואינטגרטיביות של נוירונים בקליפת המוח medial enter RH. מטרה זו מושגת על ידי הכנת פרוסות של קליפת המוח medial enter RH המכוונות במישור דורסלי-ונטרלי. כשלב שני, מבוצעות הקלטות patch clamp של נוירונים ב-mento RH cortex כדי לחקור את תכונותיהם הסינפטיות והאינטגרטיביות.בשלב הבא, נקבע מיקומו של הנוירון ממנו הוקלטה המידה כדי להעריך את הארגון הדורסלי-ונטרלי של התכונות שנמדדו באופן אלקטרופיזיולוגי. התוצאות המתקבלות מראות את הארגון הטופוגרפי של התכונות הפנימיות של תאי stellate בשכבה שתיים, בהתבסס על מדידות של התנגדות הקלט, קבוע הזמן של הממברנה וסף פוטנציאל הפעולה שלהם. את הפרוצדורה תדגים Hugh Pastel, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון פרוסות מוח במכוונות אופקית, הוא שניתן לתעד במדויק את מיקומו של הנוירון המוקלט לאורך הציר הדורסלי-ונטרלי של הקורטקס האנטרלי.כדי להתחיל בפרוצדורה זו, הוצא את המוח מהעכבר והנח אותו מיד בתמיסת חיתוך קרה של נוזל מוחי שדרתי (CSF) מלאכותי המועשר בבועות של קרבוגן. לאחר שלוש דקות, הוצא בזהירות את המוח מנוזל ה-CSF באמצעות שפכטל.הנח אותו בעדינות במצב זקוף על נייר סינון שהורטב ב-cutting A CSF. לאחר מכן, השתמש בתער או בסכין מנתחים כדי להסיר כמה שיותר מה

preparation-parasagittal-slices-for-investigation-dorsal-ventral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הסרטון מדגים הכנת פרוסות מוח קוליקולו-תלמוקורטיקליות ממוחות של גורי עכברים. מוח מבודד מיושר על שקופית מסומנת ונחתך בזווית כדי ליישר את המוח התיכון השמיעתי ואת המוח הקדמי באותו מישור. לאחר מכן חותכים את המוח באמצעות ויברטום, והפרוסות המכילות את מבני המוח התיכון והמוח הקדמי השמיעתיים העיקריים מועברות לתא אחיזה לשימור.

הכנת פרוסות קוליקולו-תלמוקורטיקליות ממוח גור עכבר

סרטון זה מדגים פרוטוקול מפורט להכנת פרוסות מוח אופקיות בהיפוקמפוס מעכברים, תוך התמקדות בשמירה על שלמות מסלולי סיבי ההיפוקמפוס. התהליך כולל חיתוך ואבטחה קפדניים של המוח, שימוש בויברטומה לחיתוך, ושמירה על תנאי רקמה אופטימליים עם נוזל קרבוגני, וכתוצאה מכך פרוסות מוח בהיפוקמפוס מוכנות לניסויים נוספים.

השגת פרוסות מוח אופקיות של עכבר היפוקמפוס

הסרטון מדגים את הכנת פרוסות פיתול החגורה התלמוס-קדמי המדיאלי (MT-ACC) ממוחות עכברים. מוחו של עכבר מנותח, חתכים נעשים כדי לחשוף את מסלול MT-ACC, ופרוסות נוצרות באמצעות ויברטום. פרוסות MT-ACC נשמרות לאחר מכן בנוזל מוחי מלאכותי מחומצן.

יצירת פרוסות קליפת החגורה התלמוס-קדמית האמצעית ממוחות עכברים

הסרטון מתאר את ההקלטה האלקטרופיזיולוגית של סינפסות רטינוגניקולאט וקורטיקוגניקולאט בפרוסות מוח של עכבר. הפרוסות המכילות את גרעין הגניקולאט הגבי הצידי (dLGN) ממוקמות בתא הקלטה. פיפטה מגרה ממוקמת על מערכת הראייה כדי לעורר תאי גנגליון ברשתית (RGCs) ולחקור סינפסות רטינוגניקולאט, או את גרעין הרשתית תלאמי כדי לעורר נוירונים בקליפת המוח ולחקור סינפסות קורטיקוגניקולטיות. עם הגירוי, ה-RGCs והנוירונים בקליפת המוח משחררים מוליכים עצביים מעוררים, אשר מייצרים זרמים סינפטיים בנוירוני ממסר LGN. זרמים אלה...

מחקר אלקטרופיזיולוגי של סינפסות רטינוגניקולאט וקורטיקוגניקולאט בפרוסות מוח עכבר

סרטון זה מדגים את השראת אירועי ictal בפרוסות קליפת המוח העטרה מעכבר טרנסגני המבטא תעלות קטיון המופעלות על ידי אור בנוירונים פירמידליים מעוררים בקליפת המוח. הפרוסה מונחת בתא הקלטה, ואלקטרודת הקלטה מוכנסת לשכבת קליפת המוח השטחית. עם זלוף עם תרופה הגורמת להתקפים החוסמת תעלות אשלגן, הנוירונים הופכים למעוררי יתר ומייצרים אירועים איקטליים ספונטניים. כדי ליצור אירועים איקטליים לפי דרישה, נעשה שימוש בפולס אור קצר להפעלת תעלות הקטיונים בנוירונים פירמידליים, מה שמפעיל שחרור של נוירוטרנסמיטורים מעוררים,...

יצירת אירועי ictal ספונטניים ולפי דרישה בפרוסות קליפת המוח של עכבר

פתחנו תכשיר חתך אופקי של הרשתית היונקת הבוגרת עם המטוס של חתך במקביל לפני שטח הרשתית. שדות דנדריטים של נוירונים ברשתית אוריינטציה nonradially לא היו מקוצץ, המאפשר חקר עיבוד אותות עם טכניקות תיקון- clamp והדמיה.

הכנת פרוסות אופקיות של רשתית למבוגרים עכבר עבור אלקטרו מחקרים

מאמר זה מתאר מתודולוגיה מפורט כדי להשיג מקטעים וצורניים שעברו שיטוח של יונקים cortices והמחש מודולים בקליפת המוח באמצעות פתולוגיה ושיטות immunohistochemical.

ויזואליזציה של מודולי קורטיקליים Cortices יונקים שעברו שיטוח

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים להכנת פרוסות מוח חריפה המכילים את הגרעין הגנוקה לרוחב ואת החקירה אלקטרופיסיולוגית של הפונקציה retinogeniculate ותפקוד הסינפסות. פרוטוקול זה מספק דרך יעילה לחקר הסינפסות עם שחרור גבוה והסתברות נמוכה של שחרור באותן פרוסות מוח חדות.

החקירות האלקטאליות של הפונקציה Retinogeniculate ו Corticogeniculate סינפסה

מאמר זה נועד לתאר פרוטוקול שיטתי כדי להשיג פרוסות מוח היפוקמפוס אופקי בעכברים. מטרת מתודולוגיה זו היא לשמר את השלמות של מסלולי סיבים בהיפוקמפוס, כגון הנתיב המחורר ודרכי הסיבים הטחובים להערכת תהליכים נוירולוגיים הקשורים לgyrus.

פרוסות היפוקמפוס אופקיות של מוח העכבר

אנו מציגים פרוטוקול להכנת פרוסות חריפות מההיפוקמפוס הגבי-ביניים של עכברים. אנו משווים הכנה רוחבית זו עם חתך קורנל במונחים של איכות הקלטות ושמירה על תכונות מורפולוגיות של נוירונים מוקלטים.

הכנת פרוסות חריפות מהיפוקמפוס הגבי להקלטה של תא שלם ושחזור עצבי בGyrus דנטאטה של עכברים בוגרים

חקור את ארגון התכונות האלקטרופיזיולוגיות של נוירונים בקורטקס האנתורינלי המדיאלי בעכברים באמצעות פרוסות פרסגיטליות וטכניקת patch clamp. שיטה זו מאפשרת מיפוי מדויק של תכונות תאי הכוכב בקנה מידה גבי-גחוני.

הכנת פרוסות Parasagittal לחקירת ארגון הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי מכרסמים entorhinal

גלה סרטונים נוספים