אנדוקרדיטיס דגם ניסיוני של Methicillin עמיד Staphylococcus aureus (MRSA) ב עכברוש

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבסס מודל אנדוקרדיטיס זיהומי ניסיוני בחולדות. זה מושג על ידי תרבית אאוראוס והכנת צנתרי ניתוח לזיהום. לאחר מכן, מכינים את אזור הניתוח ומרדימים את בעל החיים.

לאחר הרדמת בעל החיים, מוחדר קטטר דרך עורק הצוואר הימני לכיוון הלב. השלב האחרון הוא להדביק בעלי חיים באאוראוס על ידי הזרקת וריד הזנב. בסופו של דבר, רקמות המטרה מנותחות ומוכנות לתרבית כמותית.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כמו מודל אנדוקרדיטיס מהיר, הוא שניתן להשתמש במודל האנדוקרדיטיס האדום עם מערכת ההדמיה in vivo. איבוס. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלת מפתח בתחום הפתוגנזה הפה-אוראלית, כגון אלימות ויעילות של חומר אנטי-מיקרוביאלי. בדרך כלל, אנשים חדשים בטכניקה זו יתקשו מכיוון שההליך הכירורגי מאתגר.

ראשית יש לחסן לולאה מלאה בתרבית M SSA מציר קפוא למארז טריפ דם של כבשים. צלחת מקדחת סויה דוגרת על התרבית למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס לאחר שווידאה שאין זיהום. בחר מושבה אחת מהצלחת והשתמש בה כדי לחסן חמישה מיליליטר של מרק סויה נסה בצינור כובע של 15 מיליליטר.

דגרו את החיסון בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה באינקובטור רועד. הגדר ל-200 סל"ד להכנת צנתרים תחילה. חותכים צינורות פוליאתילן לאורך של 10 ס"מ ומעקרים את הצנתרים בתמיסת חיטוי cex למשך 30 דקות.

לאחר מכן, ממיסים קצה אחד של צינור מעוקר על ידי לחיצה על הקצה עם מלקחיים סטריליים מחוממים כדי ליצור קטטר שיעבור מעורק הצוואר הימני לחדר השמאלי ויגרום נזק לאנדוקרדיום כאשר הלב פועם. לאחר מכן יש להרדים את החולדה על ידי הכנסתה לתא המכיל תערובת חמצן פלואור אחד לאחד עד שחומר ההרדמה נכנס לתוקף. אשר את ההרדמה על ידי בדיקה אם השרירים רפויים ורפלקסים של דוושה נעדרים.

ולשמור על מצב הרדמה במהלך הניתוח באמצעות חרוט אף המחובר לתערובת הגזים. נקו את אזור הניתוח עם בטדין ואתנול 70% בטכניקה סטרילית לאורך כל הניתוח. הנח את החולדה במצב גבי ובצע חתך אנכית דרך שכבת העור של הצוואר מעל עצם החזה באמצעות דיסקציה קהה.

הפרד את הפאשיה כדי לחשוף את עורק הצוואר הימני. עורק הצוואר הימני ממוקם מעט מימין לקו האמצע מעל עצם הבריח. משוך בזהירות את העורק החוצה מחלל הצוואר והנח שני תפרי משי באורך 10 סנטימטרים מתחת לעורק כדי לקשור אותו בקצה הצווארי החשוף.

לאחר מכן הניחו קליפס על העורק כדי למנוע דימום. צור חור קטן בחלק העליון של העורק באמצעות מכניס קטטר באמצעות מלקחיים. הכנס את הקצה הלא אטום של הצנתר דרך החור בעורק.

הסר את הקליפ ודחף את הקטטר כלפי מטה לכיוון הלב. עד שההתנגדות מוחדרת כראוי, הקטטר צריך להימשך ארבעה עד חמישה סנטימטרים לתוך העורק ועליו לפעום עם פעימות הלב של החולדה. לאחר שהקטטר נמצא במקומו, קשרו תפרים רופפים סביב קצה העורק ואבטחו את הקטטר במקומו.

בעזרת תפר משי חותכים את עודפי התפרים וקצוות הצנתר ולאחר מכן מכניסים את הקצוות מתחת לעור הצוואר. סגור את העור בעזרת קליפסים לעור. הניחו את החולדה בכלוב נקי ושמרו אותה במקום חמים עד להתאוששות מההרדמה.

ספקו מזון ומים ובדקו את החולדה לעתים קרובות, הן במהלך ההחלמה והן לאחריה. ניתן לבצע זיהום בין יום לשבעה ימים לאחר הניתוח, אך הזמן צריך להישאר עקבי בתוך הניסויים. נקו את זנב החולדה עם אתנול 70% והזריקו 0.5 מיליליטר מתרבית ה-MRSA בתא הרצוי.

ספרו לתוך וריד הזנב. בעזרת מחט בגודל 27 אינץ', הפעל לחץ על מקום ההזרקה עד להפסקת הדימום לפני החזרת החולדה לכלוב שלה. לאחר הקרבת החולדה, נגב את החזה באתנול 70% ולאחר מכן בצע חתך בצורת V בחזה מתחת לעצם החזה.

חותכים את סחוס הצלעות מכל צד של עצם החזה. כדי לחשוף את הלב, משוך בעדינות את הלב כלפי מעלה והצמד דרך הרקמה הקרובה לאבי העורקים ונתח כלפי מעלה כדי לשחרר את הלב. הניחו את הלב על צלחת פטרי סטרילית מרופדת בגזה של ארבעה על ארבעה סנטימטרים, ואז חתכו את הדופן הפנימית של החדר השמאלי ופתחו את החדר השמאלי.

בדוק כדי לאשר את מיקום הצנתר הנכון ולאחר מכן הסר אותו. בדוק והסר צמחייה מהשסתום בעזרת מספריים ומלקחיים. הסר גם את הכליות והטחול, ולאחר שקילה והומוגניזציה של הרקמות והצמחייה בצע דילולים סדרתיים ב-PBS לתרבית כמותית.

מוצג כאן קטטר הממוקם כהלכה כפי שמצוין על ידי החץ השמאלי ביותר. הוא משתרע על פני המסתם האאורטלי ואל הצד השמאלי של חדר הלב, וצמחייה רבה נראית סביב המסתם האאורטלי כפי שמצוין על ידי החצים האמצעיים והימניים. טבלה זו מספקת דוגמה לאלימות של זן ssus במודל אנדוקרדיטיס של חולדות.

כל בעלי החיים אותגרו עם עינית של 10 לחמישית ו-10 לשישית. CFU פיתח אנדוקרדיטיס עם צפיפות ssus גבוהה בצמחיית הלב כמו גם בכליות ובטחול לאחר שליטה. הליך כירורגי זה יכול להיעשות תוך 10 דקות אם הוא מבוצע כראוי.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על בעל החיים במצב מוערך במהלך הניתוח לאחר הליך זה. לא ניתן לבצע שיטות כמו IVUS כדי לענות על שאלות נוספות כמו ניטור בזמן אמת של יעילותם של חומרים אנטי-מיקרוביאליים וביטוי הגנים in vivo לאחר התפתחותו. טכניקה זו תהיה הדרך לחוקרים בתחום אורוס הצעדים והבדיון לחקור את גורם האלימות הפתוגני שלה בזיהום האנדווסקולרי.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להקים מודל אנדוקרדיטיס ניסיוני בחולדות. אל תשכח שעבודה עם MRA יכולה להיות מסוכנת ביותר ויש לנקוט באמצעי זהירות כגון לבישת מעבדה, מעיל וכפפה בעת ביצוע הליך זה.