Name: פוליוויניל אלכוהול ספוג דגם השרשה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: למדו שיטת ספוגי פוליוויניל אלכוהול לדגם ריפוי פצעים בעכברים. הטכניקה מאפשרת השתלה, הזרקת טיפולים וניתוח כמותי של תהליכי הריפוי הביולוגיים בצורה מבוקרת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

במימון מכוני הבריאות הלאומיים (NIH) מענק R01-HL088424; לענייני יוצאי צבא פרס הוקרה PPy.

1. ספוג הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוגים מימה על ידי ערבוב בין לילה ב% 0.9 (W / V) בתמיסה מימית נתרן כלורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר ספוגים hydrated ידי מעוקר אותם. החיטוי של 75 מ&quot;ל, במשך 25 דקות ב 121 ° C. </li></ol> הערה: ספוגים טוען עם הטיפול כפי שיפורט בהמשך הוא אופציונלי. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשכונה סטרילי עם מכשירים סטריליים, לקחת את אחד ספוג מפתרון באמצעות פינצטה. לסחוט את הספוג עם פינצטה את ולהשתמש עצה ואקום להסיר הפתרון ככל האפשר מן הספוג. מניחים את סחטה ספוג בצלחת תרבית רקמה, נזהרת להשאיר רווח בין ספוגים. גם הצלחות מרובות ניתן להשתמש כדי להפריד בין טיפולים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה פתרון טיפול ישירות על גבי במרכז ספוג. לחצו בעדינות על ספוג עם קצה פיפטה אחרי הפתרון הושם על ספוג, זה עוזר ספוג לקלוט את הפתרון. הערה: 6 מ&quot;מקוטר של 2.75 מ&quot;מ ספוגים עבים שאנחנו מעסיקים מסוגלים להכיל עד 25 μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל ספוגים נטענים, צלחת הם יכולים להיות מאוחסנים על הקרח עד שהם מושתלים העכבר. </li></ol> 2. נוהל כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כראוי להרדים חיות ולנהל מנע כאבים. התהליך כולו יימשך כ 20 דקות לכל בעל חיים. במשך 30 גרם 1.5 ליטר עכבר בדקה של חמצן עם 1.5% Isoflurane משמש כדי לעורר ולשמר הרדמה. כאשר בעל החיים אינו מגיב במבחן קמצוץ רפלקס, מקום חרוט האף במצב שכיבה. להשתמש במכונת גילוח חשמלית לגלח 1 פנימה על ידי 1 פנימה לאזור בצד הגחון נמוך מתחת לכלוב הצלעות. נגב נקי של שיער קצוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את האזור מגולח על ידי ניקוי בבטאדין ואחריו אלכוהול 70%. חזור על טיהור בבטאדין אלכוהול שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך כדי לחיצה העור לימד, השתמש אזמל לעשות חתך אנכי 1.5-2 פעמים Diaמטר של ספוגים כדי להיות מוכנס, להיות זהירים לא לחתוך דרך חלל הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש כמה פינצטה להחזיק את הקצה של העור ולאט לאט מתחילים להפריד את העור שרירים משני צידי החתך באמצעות מספריים Metzembaum. כיס צריך ללכת לרוחב של העכבר ומתוך כלוב הצלעות על הרגליים האחוריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש כמה פינצטה להרים את הספוג 1 להציב חיה על ידי צובט אותה הצדדים. להעביר את הספוג על כמה פינצטה ישרים כך מוחזק מהחלק העליון והתחתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בפינצטה כדי להחזיק את הקצה של העור ולהרים אותו כך את הספוג יכול להיות מוכנס. לאט לאט להכניס את הספוג מנסה להימנע מלגעת העור או השרירים שמתחת כמו ספוג יהיה קשה לעבור את זה פעם אחת נגע רקמות. חזור על הפעולה עבור כל ספוגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל ספוגים היה מוכנס, במקום שניים או שלושה תפרים כדי לסגור את החתך. השתמש פינצטה להחזיק את שני הצדדים של החתך יחד חוט sutu<html> מחדש באמצעות שתי שכבות של עור. להדק לזרוק 1 מספיק כדי לסגור את הקצוות העור. לסיים את הקשר מרובע עם עוד לזרוק מהכיוון השני, הפעם משיכת קשר הדוק. ואז לקשור שני קשרים יותר רבועים לסיים תפר (איור 2). מניחים התפרים נוספות כדי לסגור את החתך כולו. אחרים מליטה שיטות הפצע ניתן להשתמש כגון dermabond, קליפים הפצע, או סיכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של בעלי חיים ממערכת הרדמה ולנטר תוך התודעה יתחדש. בעלי חיים צריך להתחיל מהר ambulating ולחזור ניידות מראש אופ. להבטיח כי הם יכולים להגיע מספיק מזון ומים. מעט מזון לח עשוי להיות ממוקם בתחתית הכלוב כדי לסייע להחלמה. להמשיך ולעקוב אחר בעלי חיים מדי יום בחיפוש אחר סימנים של מצוקה או אי נוחות, ולבדוק את האתר החתך על, זיהום בקיעה דלקת. קח את הפעולה המתאימה אם סיבוכים עד להחלמה נמצאים. </li></ol> 3. אופציונלי הזרקת ילדה = &quot;jove_content&quot;&gt; הערה: לאחר ספוגים היו מושתלים לתוך חיים שהם יכולים להיות מוזרק עם תמיסה של תאים, תרופות, גורמי גדילה וכו &#39;זה מאפשר ניתוח של ההשפעות של החומר המוזרק במהלך זמני אספקה ​​מגוונים ומנהל משטרים. אם זריקות מתבצעים השליטה יש להשתמש תמיד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את הספוג עם פתרון הרצוי, 1 לקבוע את כמות החומר לנהל את העכבר. החומר צריך להיות מרוכז כל כך את עוצמת הזריקה היא פחות ממחצית הנפח הכולל ספוג יכול להכיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין מזרק להזרקה (על עכברים בהם אנו משתמשים מחט 28 G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בעלי החיים כדי לקבל את זריקות הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר בעל החיים כבר לא מגיב למבחן קמצוץ ההזרקה יכולה להינתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לתת זריקת לדחוף את המחט על העור 45 ° זווית יסודי במרכז ספוג. ואז לדחוף את המחט אל תוך הספוג רק הולך חצי דרךדרך עובי שלה. המטרה היא להזרים למרכז המדויק של הספוג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבדוק כדי לוודא שהמחט נמצאת ספוג, לאט להרים את המחט בצורה אנכית. אם המחט הוא ספוג, ספוג צריך לעלות עם המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק לתוך הספוג ולהסיר את המחט. אם יש ספוגים רבים המחייבים זריקות יתכן כי חלק הנוזל מוזרק יהיה דחף את האתרים קודמות של ההזרקה. </li></ol> 4. ספוג להסרת הערה: במהלך הסרת ספוג, ספוג להתמודד עם משנה זהירות. למנוע חדירה ספוג עם מכשירי ניתוח ומניעת דימום יתר לתוך הספוג על ידי הימנעות העורקים הגדולים סביב הרקמה הסובבת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי החיה היא המתת חסד, להסיר את הספוג על ידי לחיצה העור באמצעות כמה פינצטה ועושה חתך לסגור את הספוג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להפריד בין ספוגים מן הקפסולה מסביב<html> ND למנוע קצירת רקמה נוספת סביב הספוג. מבחני כגון משלוח סמים או morphometry, דיוק פחות נדרשת כריתה. </li></ol> 5. נציג תוצאות ספוגים שהוסרו ניתן לאחסן בתנאים שונים בהתאם לסוג הניתוח הזה יבוצע. עבור חתך, ספוגים את שאוחזרו יכול להיות מוטבע בינוני על הקפאת כגון טמפרטורה אופטימלית חיתוך מתחם (אוקטובר) או להציב 10% פורמלין להטבעת ו חתך בבלוקים פרפין (איור 3 א &#39;וב&#39;). התוצאות הטובות ביותר עבור חתך מתקבלים כאשר ספוג נחתך במחצית פני בקוטר ומוטבעים לחתוך את פני השטח (איור 4 א &#39;וב&#39;). קטעי ספוג צריך לקחת כל כך לכל רוחב הספוג הוא ההווה. איור 3 א מציג שני ספוגים, ספוג השמאלית מוטבע / מחולק בצורה לא נכונה ו ספוג הנכון היה מעובד כראוי. אף אוזן גרון &quot;&gt; לניתוח, ספוגים ניתן לשים צינור Eppendorf ומאוחסנים ב -20 ° C עד מוכן עיבוד RNA כמותי בזמן אמת ה-PCR ספוגים ניתוח צריך להיות ממוקם בתוך צינור Eppendorf, פלאש קפוא, ומאוחסנים ב. - 80 ° C. בנוסף, חומר משמר RNA, כמו RNAlater מ QIAGEN, ניתן להשתמש בהם כדי לייצב את RNA לאחסון בטוח בטמפרטורות גבוהות. נוזל פצע ניתן לאסוף על ידי כיווץ את ספוגים מעל הצינור, וצירוף יחד נוזל ספוגים מרובים כדי להשיג מדגם מייצג. תאים חיים, כגון מקרופאגים, פיברובלסטים ו לימפוציטים, ניתן להפיק את ספוגים. לאחר הסרת מבעל חיים, ספוגים יכול להיות מקום כ המדיה המתאימה לסוג הרצוי של תאים. ספוגים יכול להיות מעובד לשחרר את התאים על ידי פיזיים (כלומר collagenase) שיטות (כלומר מתייפייף) או אנזימטי. <img alt="באיור 1." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig1.jpg" /> באיור 1. Dehydraטד PVA ספוג דיסקים בשלושה גדלים שונים. <img alt="איור 2." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig2.jpg" /> איור 2. תמונה של מודל העכבר ריפוי הפצע מראה המיקום של הפצע לרוחב וארבעה ספוגים PVA. <img alt="איור 3." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig3.jpg" /> איור 3. (א) H &amp; E מכתים ב 4x ו (ב) מכתים Trichrome בהגדלה של 10X של ספוגים פרפין מחולקות למדורים משובצים. <img alt="באיור 4." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig4.jpg" /> באיור 4. (א) תמונה של חתך ספוג במחצית לאורך הקוטר. (ב &#39;) 1/2 PVA ספוג, מוטבע לחתוך בצד למטה אוקטובר

<ol><li>Efron, D. T., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+sponge+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous sponge models.</a> Methods Mol. Med. 78, 83-93 (2003).</li>
<li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+use+in+wound+healing+research%3A+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair. 8, 83-96 (2000).</li>
<li>Sprugel, K. H., McPherson, J. M., Clowes, A. W., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+growth+factors+in+vivo.+I.+Cell+ingrowth+into+porous+subcutaneous+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effects of growth factors in vivo. I. Cell ingrowth into porous subcutaneous chambers.</a> Am. J. Pathol. 129, 601-613 (1987).</li>
<li>Alaish, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+polyvinyl+alcohol+sponge+and+expanded+polytetrafluoroethylene+subcutaneous+implants+as+models+to+evaluate+wound+healing+potential+in+human+beings%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Comparison of the polyvinyl alcohol sponge and expanded polytetrafluoroethylene subcutaneous implants as models to evaluate wound healing potential in human beings.</a> Wound Repair. 3, 292-298 (1995).</li>
<li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Dermatol.+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models for wound repair.</a> Arch. Dermatol. Res. 290, 1-11 (1998).</li>
<li>Alfaro, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sFRP2+suppression+of+bone+morphogenic+protein+%28BMP%29+and+Wnt+signaling+mediates+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29+self-renewal+promoting+engraftment+and+myocardial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">sFRP2 suppression of bone morphogenic protein (BMP) and Wnt signaling mediates mesenchymal stem cell (MSC) self-renewal promoting engraftment and myocardial repair.</a> J. Biol. Chem. 285, 35645-35653 (2010).</li>
<li>Andrade, S. P., Ferreira, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sponge+implant+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The sponge implant model of angiogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 467, 295-304 (2009).</li>
<li>Diegelmann, R. F., Lindblad, W. J., Cohen, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subcutaneous+implant+for+wound+healing+studies+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A subcutaneous implant for wound healing studies in humans.</a> J. Surg. Res. 40, 229-237 (1986).</li>
<li>Efron, D. T., Most, D., Shi, H. P., Tantry, U. S., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+studying+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel method of studying wound healing.</a> J. Surg. Res. 98, 16-20 (2001).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

<p class="jove_content"&gt; מודל ספוג של ריפוי פצעים יש וריאציות רבות: היא יכולה להתבצע מינים שונים רבים, כולל בני האדם ואת ספוגים יכול גם להיות מושתל dorsally<sup&gt; 1,2,8</sup&gt;. למחקרים בבני אדם וכמה מינים אחרים, ספוגים ייתכן שיהיה צורך להציב צינורות סיליקון נקבובי כדי למנוע את הספוג מלהיות במארז ולאפשר הקלות של הסרת<sup&gt; 4,8</sup&gt;. המיקום של ההשתלה את הספוג ניתן לשנות על פי התוצאות הרצויות והמיומנות של הטכנאי. השתלת הגבי יכולים להרשות ספוגים לנוע מתחת לעור, ואילו שתלים הגחון קשה יותר עקב ההסתברות של חיתוך דרך חלל הבטן. ספוגים ניתן להגדיר עם קטטר כדי החדרת תרופות קבוע ומבוקר, ביטול הצורך זריקות מרובות<sup&gt; 9</sup&gt;. קטנים יותר, ספוגים צינורי יכול אפילו להיות מוזרק באמצעות מחט<sup&gt; 8</sup&gt;. הרכב של ספוגים לא רק אלכוהול פוליוויניל בלבד. הם יכולים להיות מוכנים מחומרים רבים באופן בלעדי או בשילוב<sup&gt; 7</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; חשוב מאוד להכנת ספוג והמיקום של בעל החיים כדי להיות עקביים הובנו כראוי. אם ספוגים נחתכים מתוך גליונות הם חייבים להיות משקל דומה להשוואה. אם הספוג הוא להיות טעון עם תאים או טיפול, כמות להציב ספוג זה חייב להיות מדויק. תהליך ההחלמה יכול להשתנות בהתאם למיקום של המיקום של הספוג של בעלי חיים וריפוי תקטין את המרחק מן העליות ראש<sup&gt; 1,10</sup&gt;.</p

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם החומר </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> PVA ספוג </td><td> מדטרוניק </td><td> CF120 </td><td> גודל הנקבוביות של ספוג תלוי בניסוי </td></tr><tr><td> להב גודל אזמל 15 </td><td> המדיאלי BD </td><td> 371115 </td><td></td></tr><tr><td> Metzembaum מספריים </td><td> Thermo Scientific </td><td> 79-211 </td><td></td></tr><tr><td> Hemostat מלקחיים </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 13004-14 </td><td></td></tr><tr><td> מחט בעל </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 12004-16 </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 ניילון תפר </td><td> Ethilon </td><td> 698 </td><td></td></tr><tr><td> אוקטובר compouND </td><td> רקמת-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr></tbody></table>

פוליוויניל אלכוהול ספוג דגם השרשה

The Polyvinyl Alcohol Sponge Model Implantation

ריפוי הפצע הוא תהליך מורכב, רב שלבי מעורבים סוגי תאים רבים, גורמי גדילה ותרכובות 1-3. בגלל המורכבות הזאת, המחקרים ריפוי הפצע הם המקיף ביותר כאשר בוצע in vivo. יש הרבה מודלים זמינים ב vivo ללמוד ריפוי פצעים חריפה, כולל incisional שטח, excisional מת, וכוויות. מודלים שטח מת הם מלאכותיים, שתלים נקבוביים המשמשים ללמוד היווצרות רקמות ההשפעות של חומרים על הפצע. כמה דגמים נפוצים כוללים שטח מת פוליוויניל אלכוהול (PVA) ספוגים, תיל פלדה צילינדרים רשת, הרחיבה חומר polytetrafluoroethylene (ePTFE), ו 1,2 Cellstick. כל דגם שטח מת יש מגבלות משלה המבוססים על הרכב החומר של שיטות ההשתלה שלו. תיל פלדה רשת דגם גליל יש שלב השהיה של הסתננות לאחר ההשתלה דורש כמות ארוכה של זמן עד היווצרות רקמות פרור begiNS 1. בשלבים מאוחרים יותר של ריפוי פצעים מנותחים הטוב ביותר באמצעות מודל 1,4 ePTFE. Cellstick הוא ספוג תאית בתוך המודל צינורית סיליקון אשר משמש בדרך כלל לחקר פצעי הניתוח האדם בסופו של נוזלים 2. ספוג PVA מוגבלת מחקרים חריפה כי עם הזמן הוא מתחיל לעורר תגובת גוף זר הגורם התגובה תא ענק חיה 5. שלא כמו חומרים אחרים, ספוגים PVA קל להוסיף ולהסיר, עשויים מחומרים אינרטיים ולא מתכלה ועם זאת רכים מספיק כדי להיות מחולק לניתוח היסטולוגית 2,5. בתוך הפצע לריפוי ספוג PVA הוא מאוד שימושי עבור ניתוח רקמות היווצרות פרור, בתצהיר קולגן, נוזל הרכב הפצע, את ההשפעות של חומרים על תהליך הריפוי 1,2,5. בנוסף השימוש בו לומדים מגוון רחב של תכונות של ריפוי פצעים, ספוג PVA כמו כן נעשה שימוש בסוגים רבים אחרים של מחקרים. זה חכמו נוצלו לחקור אנגיוגנזה הגידול, החדרת תרופות בתאי גזע הישרדות engraftment 1,2,6,7. עם alterability הרבה, שימוש רב מראש, והתוצאות לשחזור, ספוג PVA הוא מודל אידיאלי 1,2 מחקרים רבים. כאן, נתאר, הכנת ההשתלה ואחזור של דיסקים PVA ספוג (איור 1) במודל של עכברים של ריפוי הפצע.

כלי שימושי כדי לנתח את ההשפעות של תרופות, גורמי גדילה, ו / או תאים מניפולציות במודל חיה של תיקון הפצע מתואר. שיטה זו מנצלת את המאפיינים של ספוג אלכוהול (PVA) פוליוויניל לספק ולהכיל את הטיפול הרצוי וגם לתת במה שיש נכרת ונותחו.

ריפוי פצעים הוא תהליך מורכב ורב-שלבי המערב סוגים רבים של תאים, גורמי גדילה ותרכובות1-3. בשל מורכבות זו, ריפוי פצעים...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשתמש בספוג פוליביניל אלכוהול כדי לדמות ריפוי פצעים בעכברים. הדבר מושג תחילה על ידי הידרציה וטעינה של הספוג לצורך השתלה. לאחר מכן, הספוג מוחדר לכיס שבין שרירי הבטן לעור העכבר.לאחר ההשתלה, ניתן להזריק לכל ספוג טיפול. השלב הסופי הוא הוצאת הספוגים מהעכבר. לבסוף, ניתן לבצע חיתוך, צביעה ובדיקות כמותיות כדי לבחון שינויים ושונות בתהליך ריפוי הפצע.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי ריפוי פצעים, ניתן ליישמה גם בתחומי מחקר אחרים, כגון אנגיוגנזה של גידולים, הולכת תרופות, הישרדות של תאים מושתלים והשתרשותם. התחילו בהשריה של הספוגים באמצעות ערבוב למשך לילה בתוך תמיסת נתרן כלורי מימי בריכוז 0.9%. לאחר מכן, בצעו אוטוקלאב ל-75 milliliters של תמיסת הספוגים המורטבים למשך 25 דקות בטמפרטורה של 121 °C.כדי לעקר את הספוגים, העבירו את תמיסת הספוגים שעברה עיקור באוטוקלאב למנדף סטרילי, ולאחר מכן השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להרים ספוג אחד, סחטו את הספוג באמצעות הפינצטה והשתמשו בקצה ואקום כדי להסיר מהספוג כמה שיותר מהתמיסה. כעת, הניחו את הספוג הסחוט בתוך פלטת תרביות רקמה, תוך הקפדה להשאיר מרווח בין הספוגים, וטפטפו באמצעות פיפטה את תמיסת הטיפול ישירות למרכז הספוג. לאחר מכן, לחצו בעדינות על הספוג באמצעות קצה הפיפטה כדי לסייע לספיגת התמיסה בספוג.לאחר טעינת כל הספוגים, אחסנו את הפלטה על קרח עד להשתלת הספוגים בעכבר. לאחר אישור הסדציה באמצעות בדיקת רפלקס צביטה, התחילו בהנחת העכבר בתוך חרוט אף במצב שכיבה על הגב (supine). לאחר מכן, באמצעות מכשיר גילוח חשמלי, הסירו את הפרווה משטח של כאינץ' על אינץ' בחלק הבטני התחתון של העכבר, מתחת לכלוב הצלעות.ניקוי האזור משערים גזורים לאחר מכן. עיקור האזור הגזור באמצעות Betadine, ולאחריו 70% alcohol. לאחר מכן, מתיחה של העור.השתמשו בסכין המנתח (scalpel) כדי לבצע חתך אנכי, באורך של פי פעם וחצי עד פעמיים מקוטר הספוגים שיש להחדיר. היזהרו לא לחתוך דרך חלל הגוף. השתמשו בפינצטה כדי לתפוס את קצה העור.לאחר מכן, השתמשו במספרי Metzenbaum כדי להפריד לאט את העור מהשריר משני צידי החתך. הרחיבו את התהליק לרוחב העכבר ומבית הצלעות ועד לרגליים האחוריות. כעת, השתמשו בפינצטה כדי להרים את הספוג הראשון המיועד להשתלה בבעל החיים על ידי לחיצה עליו מהצדדים.לאחר מכן, העבירו את הספוג לזוג פינצטות ישרות כך שיוחזק מהחלק העליון והתחתון. לאחר מכן, אחזו והרימו את קצה העור עם זוג פינצטות נוסף, והחדירו באיטיות את הספוג, תוך הימנעות ממגע עם העור או עם השריר שמתחתיו. לאחר שהוחדרו כל הספוגים, השתמשו בזוג פינצטות כדי להחזיק את שני צדי החתך יחד, ולאחר מכן השחילו את התפר דרך שתי שכבות העור.הדק את הקשר הראשון רק מספיק כדי לסגור את שולי העור, והשלם את הקשר הריבועי באמצעות קשר נוסף מהכיוון ההפוך. הפעם משוך את הקשר חזק. לאחר מכן, קשור שני קשרי ריבוע נוספים כדי להשלים את התפר.יש להוסיף תפרים כדי לסגור את כל החתך. לבסוף, הוצא את החיה ממערכת ההרדמה ועקוב אחריה עד להחזרת הה kesh consciousness. העכבר אמור להתחיל לנוע במהירות ולחזור לרמת הניידות שהייתה לו לפני הניתוח.התחילו במילוי מזרק בתמיסה הרצויה וחברו למזרק מחט בכילוי (gauge) 28. לאחר אישור הסדציה באמצעות צביטה בבהונות, הכניסו את המחט לגוף בע góc של 45 מעלות דרך העור במרכז הספוגים, כדי לוודא שהמחט נמצאת בתוך הספוג. הרימו את המחט לאט באופן אנכי.אם המחט נמצאת בתוך הספוג, הספוג יעלה יחד עם המחט. לאחר מכן, הזרקו באיטיות את החומר אל תוך הספוג והוציאו את המחט. לאחר השחיטת בעל החיים, החזיקו את העור באמצעות פינצטה ובצעו חתך סמוך לספוג הרצוי.לבסוף, הפרד בזהירות את הספוגים מהקפסולה הסובבת, תוך הימנעות מקצירה של רקמה נוספת המקיפה את הספוג שהוצא. ניתן לשמור את הספוגים בתנאים שונים בהתאם לסוג הניתוח שיבוצע. לצורך חיתוך, ניתן להטמיע את הספוגים שהוצאו במדיום הקפאה, כגון optimal cutting temperature compound, או להניחם ב-10% formalin לצורך הטמעה וחיתוך בבלוקים של paraffin, כפי שנעשה עבור ספוגים אלו שצבעו ב-h and e.ובסרטים אלו של ספוגים שנצבעו בשיטת trireme, התוצאות הטובות ביותר לחיתוך מתקבלות כאשר הספוג נחתך לחצי לאורך הקוטר כפי שמוצג כאן, ולאחר מכן מוטמע כשהצד החתוך פונה כלפי מטה. כפי שמוצג כאן, יש לקחת סרטים של הספוג כך שכל רוחב הספוג יופיע בדמות זו. הספוג משמאל הוטמע או נחתך באופן שגוי, כפי שניתן לראות מגבול הרקמה המופרע לאורך הצד הימני של הסרט, בעוד שהספוג השלם מימין עובד באופן נכון.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ההכנה, ההשתלה, ההזרקה וההסרה של ספוגי polyvinyl alcohol לצורך חקר ריפוי פצעים בעכברים.

the-polyvinyl-alcohol-sponge-model-implantation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אדם בתאי גזע perivascular (PSCs) הם גזע הרומן הסלולרי בכיתה לשחזור רקמות השלד דומה בתאי גזע mesenchymal (MSCs). PSCs יכול להיות מבודד על ידי FACS (תא הקרינה מיון פעיל) מרקמת השומן רכש במהלך הליכים סטנדרטיים שאיבת שומן, בשילוב מכן עם פיגום osteoinductive להשיג היווצרות...

שימוש בתאי גזע לשחזור עצם Perivascular

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של שומן הנגזר מתאי סטרומה lipoaspirate ויצירת 4 calvarial פגם קריטי בגודל מ"מ להעריך התחדשות שלד.

תיקון של דגם פגם Calvarial הקריטי בגודל תאי שומן באמצעות נגזרת סטרומה נקטפו מן Lipoaspirate

מקור:אושן א. קלארק1, רומי א. דופ1, טום האסל1, ג'ואן ל. פותרגיל1, דניאל ר. ניל21אוניברסיטת ליברפול, 2 אוניברסיטת דנדיסרטון זה מדגים את השימוש במכשיר מודפס בתלת מימד ומצופה סיליקון המחקה את המשטח הפנימי של צנתרי שתן כדי לדמות זיהום בדרכי השתן הקשור לצנתר.

מכשיר מצופה סיליקון שהודפס בתלת מימד למודל זיהום בדרכי השתן הקשור לצנתר

בסרטון הזה, נדגים טכניקות שינוי לשתלים מתכתיים נקבוביים כדי לשפר את הפונקציונליות שלהם ולשלוט בנדידת תאים. טכניקות כוללות פיתוח הדרגתיים נקבובית כדי לשלוט בתנועת תא ב3D וייצור של קרום במרתף מחקה כדי לשלוט בתנועת תא ב2-D. כמו כן, שיטה המבוססת על HPLC בשילוב שתל ניטור ב-vivo באמצעות ניתוח של חלבונים בדם מתוארת.

שינוי רב היקף של שתלים מתכתיים עם מילויים נקבוביים, Polyelectrolytes וניטורם העקיף<em&gt; בvivo</em

פיגומים המסוגלים להתאים לפגמים בעצם הגולגולת-לסת (CMF) תוך הפגנת מוליכות אוסטאו-מוליכות ופעילות ביולוגית מעניינים. פרוטוקול זה מתאר הכנת פיגום זיכרון צורה המבוסס על פוליקפרולקטון דיאקרילט (PCL-DA) בשיטת שטיפת חלקיקים יציקת ממס (SCPL) המשתמשת בתבנית מלח התמזגה ויישום ציפוי פולידופמין ביו-אקטיבי.

ייצור של זיכרון מבוסס PCL יו, &quot;עצמית הולם&quot; צורת פולימר פיגום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להעריך ביופילמים אוראלי על חומרי טיטניום, אסתטיים תותבת שיניים abutments, כולל הניתוח של תאים חיידקיים הכדאיות ומאפיינים מורפולוגי. בחיי עיר מודל המשויך טכניקות במיקרוסקופ עוצמה משמשת לניתוח biofilm אוראלי.

ביופילמים אוראלי על חומרים שונים עבור שתלים דנטליים

המספר של הרומן biomaterials מתוכנן עבור תיקון גדול עצמות נגעים מתרחבת באופן רציף, במטרה לשפר את עצם ריפוי ולהתגבר על הסיבוכים עם השתלת עצם. כאן, אנו מציגים אסטרטגיה רב תחומיים לניסויים קליניים הביו של biomaterials לתיקון העצם.

פרופיל תאימות ביולוגית על Biomaterials עבור התחדשות העצם

המתואר להלן הוא שיטה עבור השרשה של מערכי האלקטרודה מרובים פולימר ברחבי אזורים מרוחקים מבחינה אנטומית עבור הקלטה אלקטרופיסיולוגית כרונית בחופשיות הזזת חולדות. הכנה והשתלות כירורגיות מתוארות בפרוטרוט, בדגש על עקרונות עיצוב להנחות את השיטות לשימוש במינים אחרים.

השרשה כרונית של מערכים גמישים אלקטרודה מרובים

הפרוטוקול מתאר מודל עכבר in vivo חדשני של זיהום שתל בעמוד השדרה שבו שתל חוט K מפלדת אל-חלד נגוע בסטפילוקוקוס אאורוס Xen36 ביולומינסנטי. עומס חיידקי מנוטר לאורך עם הדמיה ביולומינסנטית ומאושר עם ספירת יחידות יוצרות מושבה לאחר המתת חסד.

במודל עכבר Vivo של זיהום שתל בעמוד השדרה

כאן, שני מודלים מורתיים ריפוי הפצע מתוארים, אחד שנועד להעריך את התגובה התאית הפצע ריפוי והשני כדי לכמת את שיעור סגירת הפצע. שיטות אלה ניתן להשתמש עם דגמי מחלות מורכבות כגון סוכרת כדי לקבוע מנגנונים של היבטים שונים של ריפוי הפצע המסכן.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

רקמות לב תלת-ממדיות שהונדסו ביולוגית באמצעות קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע התגלו כמודלים מבטיחים לחקר שריר הלב האנושי הבריא והחולה במבחנה תוך שחזור היבטים מרכזיים של נישת הלב הטבעית. כתב יד זה מתאר פרוטוקול לייצור וניתוח רקמות לב מהונדסות בעלות תוכן גבוה שנוצרו מקרדיומיוציטים פלוריפוטנטיים המושרים על ידי תאי גזע המושרים על ידי בני אדם.

תכנון ביוריאקטור לשיפור איסוף הנתונים והפקת מודלים של רקמות לב מהונדסות

למדו שיטת ספוגי פוליוויניל אלכוהול לדגם ריפוי פצעים בעכברים. הטכניקה מאפשרת השתלה, הזרקת טיפולים וניתוח כמותי של תהליכי הריפוי הביולוגיים בצורה מבוקרת.

פוליוויניל אלכוהול ספוג דגם השרשה

גלה סרטונים נוספים