Name: אפיון מנגנונים מולקולריים של בחי UVR מושרה קטרקט (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 56 s
Description: חקור מנגנונים מולקולריים של קטרקט מושרה קרינת UV בעכברושים באמצעות PCR בזמן אמת ואימונוהיסטוכימיה. שיטה זו מאפשרת ניתוח ביטוי חלבונים ו-RNA בעדשת העין.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי קרולינסקה KID-מימון הרשות, השבדית להגנה מפני קרינה, קרולינסקה עין קרן מחקר, אקדח och רטיל Stohnes Stiftelse, סנט אריק עין חולי קרן המחקר, Ögonfonden, Konung גוסטב החמישי: של och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.

1. חשיפה לקרינת אולטרה סגולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 דקות לפני החשיפה, להרדים חולדת נקבת ספראג-Dawley בתערובת של 90 מ&quot;ג / קילו Ketalar (קטמין) ומ&quot;ג / הק&quot;ג Rompun 10 (xylazine) על ידי הזרקת intraperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החיה בעוצרת חולדה ולהדק את החגורות עד קיבוע של העכברוש מבלי לגרום לסחוט גזע 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להנחיל Mydriacyl (tropicamide), 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל, בשתי עיניה של חיה כדי לגרום mydriasis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החיה, כך שעין אחת ממוקמת על קורה צר של UVR ב 300 ננומטר 14 עם רוחב 10 ננומטר בחצים המרביים ולגונן על העין הנגדית בסרטים שחורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את החולדה באופן חד צדדי לסף תת מינון 1 kJ / מ 2 UVR-B ב 300 ננומטר ל15 15 דקות. </li></ol> 2. בתור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הפסקת חשיפת הודעה שנקבעה מראש (1, 5, 24 ו 120 שעות), להקריב את העכברוש הזקן של שישה שבועות (משקל &lt;200 ג&#39;) על ידי carboחנק n דו ופריקה של חוליות הצוואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיני Enucleate. לאחר מכן, הכניס את קרנית העין למטה, בצד אחורי למעלה. ואז, אגרוף חור מינימאלי על ידי יישום צינורית מד 27 ולדחוף את נקודת השקה אחת ללובן העין כדי למנוע ניזק לעדשה שהיא מאוד קרוב ללובן העין. לאחר מכן, השתמש במספרי ניתוחים לרפואת עיניים לחתוך circumferentially ממש מאחורי גובל עד החלק האחורי של לובן העין יכול להיות המריא. לאחר מכן, הרם את העדשה עם מלקחיים מעוקלים בוטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שאריות של גוף ריסי מקו משווית העדשה תחת מיקרוסקופ, שמירה על העדשה בתמיסת מלח מאוזנת לא יותר מדקות 5-10. </li></ol> 3. כמותית RT-PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עדשות בתערובת של חיץ 350 μl RA1 תמוגה (NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד ערכה) וβ-mercaptoethanol μl 3.5 בצינור 2 מ&quot;ל אפנדורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור את העדשה בתמהיל זה במהלך 30 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הומוגני העדשה עםמחט עד גרעין קשה בלבד של העדשה לא מהעדשה (קורטקס והקפסולה של העדשה lysed במאגר תמוגה). הסר את הגרעין מהתערובת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות חנות באופן מיידי ב -70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשר את הדגימות ובצעו את הפרוטוקול &quot;טיהור סה&quot;כ RNA מן התאים ורקמות בתרבית&quot; (NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד ערכה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות RNA חנות ב -70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לוודא הסרה מספקת של דנ&quot;א מכל מדגם, לרוץ PCR בתנאים הבאים (שלב 1: 95 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות; שלב 2 במשך 40 מחזורים: 95 מעלות צלזיוס למשך 20 שניות, 55 מעלות צלזיוס למשך 20 שניות, 72 ° צלזיוס במשך 20 שניות; שלב 3: 72 מעלות צלזיוס במשך 7 דקות) עם פריימרים ספציפיים DNA p53, קדימה 5&#39;-ACCCTCTGACCTTTTTCCCA-3 &#39;ו5&#39;-TGCTGGGATCTTAGGCACTC-3 הפוכים &quot;וDNA פולימראז תקי (dNTPack), בהתאם לייצור פרוטוקול. מוצר ה-PCR הצפוי הוא 243 זוגות בסיסים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל 1.5% ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose לזהות מוצר ספציפי PCR DNA של 243 זוגות בסיסים. כדי להכין1.5% agarose ג&#39;ל בTBE חיץ לקחת 3.75 גרם של agarose ולפתור אותה ב250 מ&quot;ל של חיץ TBE. הוסף ethidium ברומיד (0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל) 500 μl ב500 מ&quot;ל של 1.5% פתרון ג&#39;ל agarose. מחמם את התערובת במיקרוגל ומערבב אוון לפתור agarose. </li></ol> אף אחת מהדגימות יש לחשוף את כל מוצרי ה-PCR DNA ספציפיים על 1.5% ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את הריכוז של דגימות RNA (μl 1) והיחס של ספיגת מדגם ב 260 ננומטר (RNA) ו 280 ננומטר (חלבון) בספקטרופוטומטר NanoDrop ND-1000. אם היחס רנ&quot;א לחלבון של ספיגת מדגם RNA הוא 2.0 או יותר ואז מדגם RNA הוא טהור. אם היחס של ספיגת מדגם RNA הוא נמוך יותר מאשר 2.0, לעשות שוב RNA צעד טיהור 3.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח נפח של מדגם RNA מקביל למיקרוגרם 1 ולסנתז cDNA בעקבות ערכת פרוטוקול 1 st סטרנד cDNA הסינתזה (ערכת 1 st סטרנד cDNA סינתזה לRT-PCR). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחסן דגימות cDNA ב -20 ° C(לתקופה של 1 שנה ויותר, בחנות ב -70 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל PCR כמותית בזמן אמת במערכת iCycler MyiQ יחידה צבע בזמן אמת PCR לזיהוי. עומס triplicates על צלחת 96 היטב עם מדגם 1 μl cDNA, TaqMan ביטוי גני מאסטר מיקס, Assay ביטוי גני TaqMan ל3 caspase, על פי הוראות לייצור. עומס triplicates על צלחת 96 היטב אחרת עם מדגם 1 μl cDNA, TaqMan ביטוי גני מאסטר מיקס, Assay ביטוי גני TaqMan ל18s, על פי הוראות לייצור (פרוטוקול Assay ביטוי גני TaqMan). לדלל בסדרת שבריר של cDNA משלוש עדשות שאינן חשופות נבחרו באקראי. הפעל דילולים סידוריים יחד עם cDNA מדגימות בצלחת 96 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשיטת עקומת הסטנדרט לכימות של התוצאות. מספר המחזורים בפלואורסצנטי הסף משמש כמדידה בתוכנת MyiQ. עקומת סטנדרט מבטא מספר המחזורים בסף כפונקציה של ריכוז יחסי של כיל היא established לדילולים הסידוריים בכל צלחת. cDNA משלוש דגימות עדשה טופלו אינן שמש לכיול. מתייחס למספר הסף של מחזורים לכל דגימה לעקומה הסטנדרטית כדי להשיג את הריכוז היחסי של מדגם cDNA נמדד. לבסוף, לקבל את רמת ביטוי של גני המטרה בהבאת הריכוז היחסי של יעד cDNA ל18s הבקרה הפנימי cDNA. </li></ol> 4. Immunohistochemical המכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבעון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את העין ב PBS (Buffered Saline פוספט; pH 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין בצינור מלא paraformaldehyde 4% (PFA) בקור קרח במשך 20 דקות. הכן 4% PFA היום קודם לכן. חנות ב 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש. PFA הוא טרי במשך כשבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PFA עם micropipette. לאחר מכן, לשטוף עם הקרח הקר PBS במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין ב30% סוכרוז ב4 ° C במשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין בכוס מלאה בטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר)-בינונית (רקמות-Tek). שים עין בעמדה מתאימה לחתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפא באוקטובר בינוני על קרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות ב -70 ° C עד שימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטגוריות קיימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את עין cryo-החתך במטוס מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אותו שלושה סעיפים 5 אמצע sagittal עבים מיקרומטר מחלק מרכזי של כל עדשה. השלך לפחות 6 חלקים בין חלקים רציפים, כדי למנוע הכתמה אותו הגרעינים בסעיפים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שסעיף נחתך, מניחים בעדינות שקופיות על גבי זה. הסעיף צריך אז לתקוע לשקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את השקופיות לייבוש באוויר לפני השימוש. שקופיות ניתן לאחסן ב -20 ° C עד הצורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלואורסצנטי אימונוהיסטוכימיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו דגימות להשיג טמפרטורת חדר (5-10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר קצוות סביב דגימות עם PAP-עט (Invitrogen). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הגבול יבש לזמן (10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תייג את שקופיות מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Rehydrate ב1 × PBS במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilize בפתרון בלוק סטנדרטי למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוגדן ראשוני (הארנב caspase-3 polyclonal, בקע נוגדן Asp175 9661; טכנולוגית איתות תא, Inc) דילול 1:3,000 בפתרון בלוק סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות בתא humidified ב4 ° C במשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף ב PBS על ידי pipetting (3 × 5 דקות) או על ידי טבילה באמבטיה גדולה (&gt; 15 דקות, 1-2 שינויים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוגדן שניוני (נוגדן אנטי משני ארנב עם ספקטרום ספציפי קליטה / פליטה) דילול 1:300 בפתרון הבלוק הסטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף ב PBS על ידי pipetting (3 × 5 דקות) או על ידי טבילה באמבטיה גדולה (&gt; 15 דקות, 1-2 שינויים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את משטח פאפ-עט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן בתא humidified בטמפרטורת חדר למשך 3 שעות. הימנע מחשיפה לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף טיפת Vectashield ולמקם את תלוש כיסוי בשקופית. הימנע עושה בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו Vectashield להקשיח (~ 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור לי קטעיםn החושך עד ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל סעיפי הבקרה מעובדים בהעדר הנוגדן ראשוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חפש את התוצאות בתוך כמה שעות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת גרעיני תאי אפיתל &#39;מקידה גרעינית צד אחד לקשת גרעינית הצד השנייה של כל עדשה. להחיל את המסנן הכחול הסטנדרטי כדי לראות את כל גרעיני עדשת אפיתל בכחול ומסנן סטנדרטי שמתאים לפליטה של ​​הנוגדן המשני כדי לראות גרעינים החיוביים caspase-3 בירוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את המספר של כל גרעיני אפיתל העדשה ומספר הגרעינים חיוביים. ספירת התאים שלוש פעמים לכל מקטע. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Brian, G., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataract+blindness%3A+challenge+for+the+21+st+century%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Cataract blindness: challenge for the 21 st century.</a> Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).</li>
<li>Jose, J. G., Pitts, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wavelength+dependency+of+cataracts+in+albino+mice+following+chronic+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure.</a> Experimental Eye Research. 41, 545-563 (1985).</li>
<li>Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+cataract+in+the+rat+after+exposure+to+radiation+in+the+300+nm+wavelength+region.+A+study+of+the+macro-%2C+micro-+and+ultrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol.+%28Copenh%29%22%5BJournal%5D)">Acute cataract in the rat after exposure to radiation in the 300 nm wavelength region. A study of the macro-, micro- and ultrastructure.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh). 66, 141-152 (1988).</li>
<li>Meyer, L., Dong, X., Wegener, A., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose+dependent+cataractogenesis+and+Maximum+Tolerable+Dose+%28MTD+2.3%3A16%29+for+UVR+-+B+induced+cataract+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Dose dependent cataractogenesis and Maximum Tolerable Dose (MTD 2.3:16) for UVR - B induced cataract in C57BL/6J mice.</a> Experimental Eye Research. 86, 282-289 (2008).</li>
<li>McCarty, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+lifetime+ocular+exposure+to+UV-B%3A+the+Melbourne+visual+impairment+project%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Assessment of lifetime ocular exposure to UV-B: the Melbourne visual impairment project.</a> Developments in Ophthalmology. 27, 9-13 (1997).</li>
<li>Sasaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+cortical+cataract+in+subjects+of+diverse+races+and+latitude%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Localization of cortical cataract in subjects of diverse races and latitude.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 4210-4214 (2003).</li>
<li>Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol.+%28Copenh%22%5BJournal%5D)">Experimental cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh. 68, Suppl 196. 1-77 (1990).</li>
<li>Galichanin, K., Löfgren, S., Bergmanson, J., Söderberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+damage+in+the+lens+after+in+vivo+close+to+threshold+exposure+to+UV-B+radiation%3A+cytomorphological+study+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evolution of damage in the lens after in vivo close to threshold exposure to UV-B radiation: cytomorphological study of apoptosis.</a> Exp. Eye Res. 91, 369-377 (2010).</li>
<li>McCarty, C. A., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+epidemiologic+evidence+linking+ultraviolet+radiation+and+cataracts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A review of the epidemiologic evidence linking ultraviolet radiation and cataracts.</a> Dev. Ophthalmol. 35, 21-31 (2002).</li>
<li>Li, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+epithelial+cell+apoptosis+appears+to+be+a+common+cellular+basis+for+non-congenital+cataract+development+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals.</a> Journal of Cell Biology. 130, 169-181 (1995).</li>
<li>Michael, R., Vrensen, G., van Marle, J., Gan, L., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+rat+lens+after+in+vivo+threshold+dose+ultraviolet+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 13, 2681-2687 (1998).</li>
<li>Ayala, M. N., Strid, H., Jacobsson, U., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53+Expression+and+Apoptosis+In+The+Lens+After+Ultraviolet+Radiation+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+of+visual+science%22%5BJournal%5D)">p53 Expression and Apoptosis In The Lens After Ultraviolet Radiation Exposure.</a> Investigative ophthalmology of visual science. 48, 4187-4191 (2007).</li>
<li>Galichanin, K., Wang, J., Lofgren, S., Soderberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+universal+rat+restrainer+for+ophthalmic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A new universal rat restrainer for ophthalmic research.</a> Acta Ophthalmol. 89 (1), (2011).</li>
<li>Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cataract+after+repeated+exposure+to+ultraviolet+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">In vivo cataract after repeated exposure to ultraviolet radiation.</a> Experimental Eye Research. 70, 451-456 (2000).</li>
<li>Söderberg, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+ultraviolet+radiation+exposure+to+the+lens+expressed+by+maximum+tolerable+dose+%28MTD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Toxicity of ultraviolet radiation exposure to the lens expressed by maximum tolerable dose (MTD).</a> Developments in Ophthalmology. 35, 70-75 (2002).</li>
<li>Michael, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+repair+of+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).</li>
<li>Löfgren, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cataract+from+ultraviolet+radiation%22">Cataract from ultraviolet radiation</a>. , Karolinska Institutet. Stockholm. (2001).</li>
<li>Ayala, M. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Influence+of+exposure+patterns+and+oxidation+in+UVR+induced+Cataract%22">Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract</a>. , Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).</li>
<li>Dong, X. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Safety+limit+estimation+for+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation%22">Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation</a>. , Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).</li>
<li>Löfgren, S., Michael, R., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+age+and+sex+in+ultraviolet+radiation+cataract+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).</li>
<li>Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+exposure+time+for+UV+radiation-induced+cataract%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

<html> מאמר זה מתאר שיטות המאפשרות לימוד אירועים מולקולריים המתרחשים במהלך UVR-B המושרה קטרקט. בהתחשב, כי רוב המידע זמין לin vivo UVR המושרה קטרקט נגזר מניסויים בבקן ספראג-Dawley 7 חולדות, 16, 17, 18, ​​19, החליט להשתמש בעכבר לבקן ספראג-Dawley במחקר הנוכחי. הגיל של החולדות היה שישה שבועות ישן. המגדר נבחר להיות נשי כי, בניגוד לגברים, לנשים יש פחות שתן אלרגני. יתר על כן, אין הבדל במגדר ביחס לחומר...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> Ketalar </td><td> פייזר </td><td> 150086 </td><td> 50 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Rompun </td><td> אייר </td><td> 022545 </td><td> 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סימפלקס Oculentum </td><td> Apoteket, שוודיה </td><td> 336164 </td><td> 5 גרם </td></tr><tr><td> Mydriacyl </td><td> אלקון </td><td> 00352 </td><td> 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> תמיסת מלח מאוזנת </td><td> אלקון </td><td> 0007950055 </td><td></td></tr><tr><td> 3.5 ul β-mercaptoethanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד הערכה </td><td> Macherey-נגל GmbH &amp; Co, דארן, גרמניה </td><td> 740955.50 </td><td></td></tr><tr><td> פריימרים ספציפיים DNA p53 </td><td> biomers.net GmbH </td><td> Custom made </td><td></td></tr><tr><td> פולימראז תקי-DNA, dNTPack </td><td> רוש </td><td> 04 728 866 001 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> סיגמא </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון רומיד ethidium 0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> סיגמא </td><td> E1385 </td><td></td></tr><tr><td> Nano-Drop ND-1000 ספקטרופוטומטר </td><td> מוצרי NanoDrop </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ערכת 1 st סטרנד cDNA סינתזה לRT-PCR (AMV) </td><td> רוש האבחון GmbH </td><td> 11 483 188 001 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת iCycler MyiQ יחידה צבע בזמן אמת PCR זיהוי </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr> &lt;p&gt; <td> צלחת 96-היטב </td><td> Sarstedt </td><td> 72.1979.202 </td><td></td></tr><tr><td> מיקס מאסטר ביטוי גני TaqMan </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> 4369016 </td><td></td></tr><tr><td> Assay ביטוי הגנים TaqMan ל3 caspase </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> Rn00563902_m1 </td><td></td></tr><tr><td> Assay ביטוי גני TaqMan ל18s </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> Hs99999901_s1 </td><td></td></tr><tr><td> MyiQ תוכנה </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> caspase-3 בקע (Asp175) </td><td> טכנולוגיית תא איתות </td><td> 9661 </td><td></td></tr><tr><td> נגד הארנב IgG </td><td> Abcam </td><td> Ab6798 </td><td></td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> 84097 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Vectashield </td><td> מעבדות וקטור </td><td></td><td></td></tr><tr><td> יוניברסל מיקרוסקופ Axioplan 2 דימות </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> 441244 </td><td></td></tr><tr><td> חיץ 10x TBE </td><td> Promega </td><td> V4251 </td><td></td></tr></tbody></table>

אפיון מנגנונים מולקולריים של<em&gt; בחי</em&gt; uvr מושרה קטרקט

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם 1. ארגון הבריאות העולמית מגדיר את הקטרקט כערפול של עדשת העין שמעכבת את ההעברה של אור. קטרקט הוא מחלה רבה עצרת קשורה עם סוכרת עישון קרינה, אולטרה סגול (UVR), אלכוהול, קרינה מייננת, סטרואידים ויתר לחץ דם. יש ראיות 2-4 ניסיוניות ואפידמיולוגי חזקות 5,6 שUVR גורם קטרקט. פתחנו מודל חיה לUVR B מושרה קטרקט בשני 7 מורדמים וחיות שאינן מורדמות 8. התרופה היחידה לקטרקט היא ניתוח, אבל הטיפול הזה אינו נגיש לכל. ההערכה הוא, כי עיכוב של הופעת הקטרקט במשך 10 שנים יכול להפחית את הצורך בניתוח קטרקט על ידי 50% 9. כדי לעכב את השכיחות של קטרקט, הוא נחוץ כדי להבין את המנגנונים של היווצרות קטרקט ולמצוא strat מניעה היעילהegies. בין המנגנונים להתפתחות קטרקט, אפופטוזיס ממלא תפקיד מכריע בייזום של קטרקט בבני אדם ובעלי החיים 10. ההתמקדות שלנו הייתה לאחרונה אפופטוזיס בעדשה כמנגנון לקטרקט פיתוח 8,11,12. זה צפוי כי הבנה טובה יותר של ההשפעה של UVR על מסלול אפופטוזיס תספק אפשרויות לגילוי של תרופות חדשות למניעת קטרקט. במאמר זה, אנו מתארים כיצד קטרקט יכול להיגרם על ידי ניסוי בחשיפת vivo לUVR-B. בהמשך RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה מוצגים ככלים ללמוד מנגנונים מולקולריים של UVR-B המושרה קטרקט.

המקורות השונים של שונות במדידות נאמדו בניתוח שונה ונמצא כי שוקל שלוש מדידות לבעלי חיים שונים למדידות הייתה על הסדר של 15% כי לבעלי חיים. לפיכך, בהתחשב בניתוח עדשה כולה, לא ניתן להגדיל את הדיוק. בדיקות אורתוגונלית הובהרו ניגוד מובהק ל- 3 caspase מסר בין מרווח 120 שעתי השהיה לעומת מרווחי השהיה קצרות יותר. בחשיפת UVR vivo גורם ביטוי caspase-3. <p class="jove_content" style=";text-align:right;di...

קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם. קרינת אולטרה סגולה שמש (UVR) הוא גורם הסיכון העיקרי להתפתחות קטרקט. מודל חיה של הרבה UVR-B המושרה קטרקט פותח. במאמר זה אנו מתארים שיטות לחקירה של היווצרות קטרקט: חשיפה לUVR, כמותית RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה.

אפיון מנגנונים מולקולריים של<em&gt; בחי</em&gt; UVR מושרה קטרקט

קטראקט הוא הגורם המוביל לעיוורון בעולם 1. ארגון הבריאות העולמי מגדיר קטראקט כעכירות של עדשת העין אשר...

סרטון זה מדגים שיטה להשראת קטרקט באמצעות קרינת ultraviolet בחולדה. המנגנונים המולקולריים המעורבים בהתפתחות הקטרקט נחקרים לאחר מכן באמצעות quantitative real-time PCR ו-immuno cyto immunochemistry. ראשית, עין החולדה נחשפת לקרינת ultraviolet כדי להשריץ היווצרות קטרקט.העין השנייה משמשת כביקורת. לאחר מכן, העדשות מבודלות בדיסקציה ומעובדות להשגת RNA לצורך הערכת שלוש רמות הביטוי של CAS B באמצעות quantitative real-time PCR, או נצבעות באמצעות נוגדן נגד caspase cleaved 3 כדי להעריך את הביטוי והמיקום של החלבון הפעיל.בסופו של דבר, התוצאות מבדיקות אלו מאששות עלייה ב-mRNA של caspase three וביטוי של החלבון הפעיל בגרעין של תאי העדשה בעקבות חשיפה ל-UVR. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה על פני שיטות קיימות הוא השימוש במקור UVR ייחודי בעל פס צר ובמכשיר קיבוע אוניברסלי לחולדות, המאפשרים לנו לחשוף בעלי חיים באופן בטוח ומדויק לספקטרום ומינון UV מוגדרים היטב. יתרה מכך, יישמנו טכניקות ביולוגיות מודרניות, quantitative R-T-P-C-R ואימונוהיסטוכימיה, כדי לחקור אפופטוזיס בעדשה; שיטה זו יכולה לספק מידע על המנגנונים המולקולריים של קטרקט המושרה על ידי קרינה על-סגולה.ניתן ליישם זאת גם במודלים ניסיוניים אחרים כגון סרטני עור המושרים על ידי קרינת ultraviolet, מדעי המוח ההתנהגותיים בחולדות, ומחקרים ניסיוניים על העין המתמקדים באפופטוזיס. התחילו את הפרוטוקול על ידי הנחת נקבת חולדת Sprague dolly הרדומות במכשיר קיבוע לחולדות, והדקו את הרצועות עד שהחולדה מקובעת, תוך הקפדה על אי-לחיצה על הגו. כדי להשרות מידריאזיס או הרחבה של האישון, טפטפו אחת עד שתיים טיפות של תמיסת tpic aide בריכוז 10 milligram per milliliter לכל עין.לאחר מכן, מרחו משחה על העין שאינה חשופה וכסו אותה בסרט שחור כדי לחסום את ה-uv. לאחר מכן, מקמו את בעל החיים במכשיר הריסון כך שהעין הלא-מכוסה תהיה ממוקמת לקבלת קרן צרה של קרינת אולטרה-סגול באורך גל של 300 nanometers עם רוחב חצי מקסימום של 10 nanometer הנוצרת ממנורת כספית בלחץ גבוה. חשפו את החולדה באופן חד-צדדי למינון תת-ספי שער של one kilojoule per meter squared של UVRB למשך 15 דקות לאחר החשיפה.הסיר את הסרט מהעין שלא נחשפה ומרח משחה בשתי העיניים. החזר את בעל החיים לכלובו וכסה אותו בנייר רך כדי לשמור על חום גופו. עקב אחר בעל החיים עד שיחזור להכרה מספיקה כדי לשמור על שכיבה על הבטן (sternal recumbent).לאחר מכן, החזירו את החולדה שהתאוששה לכלוב עם שאר החולדות. 1, 5, 24 ו-120 שעות לאחר החשיפה.הניחו את העין שהוצאה מהחולדה שהורדמה, כאשר הקרנית פונה כלפי מטה והצד האחורי פונה כלפי מעלה, על נייר סופג רך. לאחר מכן, בעבודה תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמשו בקנולה במידה 27 gauge כדי ליצור חור קטן על ידי דחיפה משיקית לסקלרה (lutea), כדי למנוע פגיעה בעדשה הנמצאת קרוב מאוד לסקלרה.בשלב הבא, בעזרת מספריים לניתוח עיניים, בצעו חיתוך היקפי ממש מאחורי הלימבוס עד שניתן להרים את החלק האחורי של הסקלרה. לאחר מכן, בעזרת פינצטה מעוקלת קהה, הרימו את העדשה, הניחו את העדשה בתמיסת מלח מאוזנת (balanced salt solution) והסירו שאריות של הגוף הריסני מהעדשה. אין להשאיר את העדשה בתמיסת המלח המאוזנת למשך יותר מ-10 דקות.לאחר הניתוח, העבר עדשה לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה בנפח 2 ml המכילה 350 µl של ra, one lysis buffer מתוך ערכה לבידוד RNA כולל מסוג nucleo spin RNA two ו-3.5 µl של Beamer keto ethanol. דגריר למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הדגירה, השתמש במחט כדי לבצע הומוגניזציה מכנית לעדשה עד שנותרה רק הגרעין הקשיח. קליפת העדשה (cortex) והקפסולה יעברו ליזיס על ידי תמיסת הליזיס.הוצא את הגרעין מהתערובת והשלך אותו. אחסן את הדגימות באופן מיידי בטמפרטורה של 70- °C. ניתן לאחסן את הדגימות למשך עד שנה עד למועד המשך התהליך.סננו את הדגימות וטהרו את ה-RNA בהתאם לפרוטוקול של בידוד וטיהור RNA כולל מתאי תרבית ומרקמות המצורף לערכה. אחסנו את דגימות ה-RNA בטמפרטורה של 70- מעלות צלזיוס. כדי לוודא הסרה מספקת של DNA מכל דגימה, הגבירו את ה-DNA באמצעות פריימרים ספציפיים ל-P 53 DNA בתנאים הבאים.שלב 1: 95 °C למשך שתי דקות. שלב 2: למשך 40 מחזורים, 95 °C למשך 20 שניות. 55 °C למשך 20 שניות.72 °C למשך 20 שניות. שלב 3: 72 °C למשך שבע דקות. עם סיום התהליך, יש להריץ את התוצרים על ג'ל agarose בריכוז 1.5%.כדי לזהות את תוצר ה-PCR הספציפי של ה-DNA באורך 243 זוג בסיסים, יש לוודא שכללת דגימות ביקורת חיובית ושלילית. אם ה-DNA הוסר בהצלחה, תוצרי ה-PCR לא ייראו. פס אמור להופיע רק בנתיב של ביקורת החיובית, תוך שימוש בספקטרופוטומטר NanoDrop למדידת ריכוז דגימות ה-RNA וקביעת היחס בין RNA לחלבון.אם היחס בין בולענות ה-RNA לחלבון של דגימת ה-RNA, או יחס 260/280, הוא 2.0 או יותר, הרי שדגימת ה-RNA טהורה. לאחר מכן, באמצעות מיקרוגרם אחד של RNA, סנתז cDNA באמצעות ערכה לסנתז הגדיל הראשון של cDNA עבור RT-PCR; אחסן את דגימות ה-cDNA בטמפרטורה של 20- °C. כדי לבצע quantitative real-time PCR, העבר את הדגימות בשלוש חזרות (triplicate) לצלחת 96 בארות.בכל באר יש להכניס 1 µL של דגימת CD NNA בשילוב עם TAC man gene expression, כאשר ה-master mix של ה-tac man gene expression assay עבור caspase three יוכן בלוח נפרד. יש להשתמש באותן דגימות, אך עם ה-TAC man gene expression assay עבור 18 s. לאחר מכן, כדי ליצור עקומת סטנדרט לצורך ניתוח, יש לבצע דילול טוריות של 1 µL של CDNA משלוש עדשות שנבחרו באופן אקראי ולא נחשפו.בצעו מהלולי דילול במקביל ל-CDNA מהדגימות. בתוך פלטה של 96 בארות בכל פלטה. סובבו את הפלטה במסבב (spin down), ולאחר מכן הריצו אותה במערכת i cycler my iq, מערכת לגילוי PCR בזמן אמת בעלת צבע בודד.לאחר ההרצה, באמצעות תוכנת ה-IQ שלי, הגדירו עקומת סטנדרט המביעה את מספר המחזורים בסף (threshold) כפונקציה של הריכוז היחסי של הכליברטור עבור הדילולות הסדרתיות בכל פלטה. השתמשו בעקומת הסטנדרט כדי לקבוע את הריכוז היחסי של דגימת ה-CDNA שנמדדה באמצעות מספר מחזורי הסף עבור כל דגימה.לבסוף, קבע את רמת הביטוי של הגנים המטרה על ידי התייחסות של הריכוז היחסי של ה-cDNA של הגן המטרה ל-cDNA של בקרת הפנים 18 s. כדי לבצע צביעה אימונוהיסטוכימית, בצע דיסקציה של העין והנח אותה ב-PBS לאחר הדיסקציה. העבר את העין למבחנה מלאה ב-4% para formaldehyde והדגר על קרח למשך 20 דקות.בעזרת מיקרופיפט, הסירו את הפאראפורמאלדהיד. לאחר מכן, העבירו את העין לשפופרת אפנדור (Eppendorf) של 2 מיליליטר המכילה 1 מיליליטר של PBS קר מאוד, והדגירו למשך 20 דקות על קרח. לאחר מכן, העבירו את העין לשפופרת אפנדור המכילה 30% sucrose.דגרו בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך לילה. למחרת, השתמשו בפינצטה כדי להעביר את העין לכלי מלא בתווך OCT (Optimal Cutting Temperature). הניחו את העין במנח ישר לצורך חיתוך.לאחר מכן, הניחו את הכוס על קרח יבש לאחסון בהקפאה בטמפרטורה של 70- °C עד לשימוש, לצורך חיתוך של העין עבור אנליזה במיקרוסקופיה פלואורסצנטית. התחילו במיקום העין הטבולה ב-OCT על צ'אק בתוך קריוסטט לצורך חיתוך קריוגני. נסו ליישר את הצד השטוח ביותר של עדשת העין במקביל לקצה הסכין.חתכו שלושה נתחים סגיטליים מרכזיים בעובי של 5 מיקרון מחלקו המרכזי של כל עדשה. השליכו לפחות שישה נתחים בין נתחים עוקבים כדי למנוע צביעה של אותם גרעינים בנתחים שונים. לאחר חיתוך נתח, הניחו בעדינות זכוכית כיסוי מעליו.כעת הסבך אמור להיצמד לזכוכית. יש להשאיר את הזכוכית להתייבש באוויר לפני השימוש. ניתן לאחסן את הזכוכית בטמפרטורה של 70- degrees Celsius עד למועד הצביעה.המתינו עד שהשקופיות יחזרו לטמפרטורת החדר. לאחר מכן, בצעו צביעה בנוגדנים לזיהוי cleaved CAS phase three כפי שמתואר במסמך המצורף. תוך מספר שעות, בחנו את השקופיות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנציה. ספרו את כל גרעיני תאי האפיתל של העדשה.רשמו את מספר כל גרעיני תאי האפיתל של העדשה על ידי ספירת התאים הצבועים ב-DAPI, ואת מספר הגרעינים החיוביים ל-caspase three על ידי ספירת התאים המסומנים ב-active caspase three. ספרו את התאים שלוש פעמים עבור כל חיתוך.Caspase three היא פרוטאז מרכזי בשלב הביצוע של אפופטוזיס. מיקרוסקופיה אלקטרונית חודרת. מחקרים תומכים בכך ש-UVR משרה אפופטוזיס בעדשה.מחקרים ניסויים על אפופטוזיס מאשרים כי caspase three הוא סמן מהימן לאפופטוזיס. כדי לקבוע האם חשיפה ל-UVR in vivo מעוררת ביטוי של caspase three, נמדד ביטוי של mRNA בעדשת העין באמצעות QPCR בנקודות זמן של 1, 5, 24 ו-120 שעות לאחר חשיפה in vivo ל-1 kJ/m² של UVR באורך גל של 300 nm. לאחר מכן, שורטט עבור כל נקודת זמן היחס הממוצע בין CASP three mRNA ל-18S rRNA בין העדשה שנחשפה לבין העדשה הנגדית שלא נחשפה.איור זה מתאר את ביטוי ה-mRNA של caspase three לאורך זמן ומדגים את התעתוק של אפופטוזיס. בדיקה אורתוגונלית של הסמן caspase three בעדשה in vivo לאחר חשיפה ל-far UVR הניבה ניגוד מובהק סטטיסטית עבור אות ה-mRNA של caspase three ברווח השהיה של 120 שעות לעומת רווחי השהיה קצרים יותר. ביטוי caspase three בעדשה שנחשפה לעומת עדשה שלא נחשפה הושווה גם באמצעות מיקרוסקופיה של אימונופלואורסצנציה, כפי שמוצג בתמונות אלו 24 שעות לאחר החשיפה; הגרעינים מסומנים, מה שמעיד על נוכחות של caspase three פעיל.שיטת צביעה אימונוהיסטוכימית זו מספקת מידע בעל ערך על ההתפלגות המרחבית של תאי אפיתל המסומנים במרקר האפופטוזיס caspase three בעדשה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכישו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשרות ניסויית קטרקט המושרה על ידי UVR, ולחקור את המנגנון המולקולרי של קטרקט המושרה על ידי UVR באמצעות qPCR ואימונוהיסטוכימיה.

characterization-molecular-mechanisms-vivo-uvr-induced

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הפגנה רשמית של דיסקציה של העין עכבר, וכתוצאה מכך הר שלם של אפיתל הפיגמנט ברשתית.

Dissection העין עכבר על הר שלם של האפיתל פיגמנט רשתית

הפעלת המיקרוגלים וmicrogliosis הן תגובות מפתח לניוון של מערכת עצבים כרוניות. כאן, אנו מציגים שיטות לin vivo, הדמיה לטווח הארוך של תאים ברשתית microglial CX3CR1-GFP + על ידי ophthalmoscopy confocal, ולסף וmorphometric מנתח לזהות ולכמת ההפעלה שלהם. אנו עוקבים אחר שינויי microglial בגלאוקומה הקשורות לגיל שלבים מוקדמים.

בVivo הדינמיקה של רשתית microglial הפעלה במהלך מוחיה: Confocal Ophthalmoscopic הדמיה וMorphometry הסלולרי בעכבר גלאוקומה

אנו מתארים פרוטוקול מפורט את assay מוטציה cII למדא בחר בתאים בתרבית של מכרסמים הטרנסגניים או החיות המקביל שטופלו עם סוכן כימי/פיזי של עניין. גישה זו כבר בשימוש נרחב לניסויים המוטגניות של חומרים מסרטנים בתאי יונקים.

למדא בחר cII מערכת איתור מוטציה

פרוטוקול זה מדגים את הזיהוי הסימולטני של מינים חמצן תגובתי (ROS), תאים חיים, ותאים מתים בתרבויות הראשיות חי מפני העכבר משטח העינית תאים. 2 ', 7 '-diלורופלוט אצטט, propidium יודיד, וכתמים הופסט משמשים כדי להעריך את רוס, תאים מתים, ותאים חיים, בהתאמה, ואחריו הדמיה וניתוח.

הערכה של נזק חמצוני בעכבר הראשי פני השטח העינית/תאים גזע בתגובה אולטרה סגול (UV-C) נזק

בדו"ח זה אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקר ליצור מודל עכבר של אובאיטיס תוך עינית. מודל מבוסס זה, המכונה בדרך כלל אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU), לוכד היבטים רבים של מחלות אנושיות. במאמר זה נתאר כיצד לגרום ולנטר את התקדמות המחלה באמצעות מספר קריאות.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

דלקת במשטח העין פוגעת ברקמות פני השטח של העין ופוגעת בתפקודים חיוניים של העין. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה להשראת דלקת עיניים ולאיסוף רקמות פגועות במודל עכברי של תפקוד לקוי של בלוטת Meibomian (MGD).

אינדוקציה של דלקת פני השטח של העין ואיסוף של רקמות מעורבות

מודלים של עכברים יכולים להיות כלים שימושיים לחקר הביולוגיה של אפיתל פיגמנטי ברשתית (RPE). נקבע כי עכברים יכולים לפתח מערך של פתולוגיות RPE. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פנוטיפ כדי להבהיר ולכמת פתולוגיות RPE בעכברים באמצעות אור, אלקטרונים הולכה ומיקרוסקופ קונפוקלי.

פרוטוקול להערכה וכימות של פתולוגיות אפיתל פיגמנטי ברשתית במודלים עכבריים של ניוון מקולרי הקשור לגיל

שיטה זו מדגימה ניתוח קטרקט in vivo על ידי הסרת תאי סיבי עדשה מעכברים בוגרים והשארת שקית הקופסית עם תאי אפיתל מחוברים לעדשה (LECs). תגובת הפציעה מוערכת בזמנים שונים לאחר הניתוח באמצעות קריטריונים מולקולריים ומורפולוגיים.

דוגמנות ניתוח קטרקט בעכברים

אנו פרט חדש קרוב אינפרא אדום (NIRF) קטטר פלואורסצנציה הדמיה 2 מימדי intravascular מולקולרית של ביולוגיה...

בשנת vivo קרוב אינפרא אדום דימות פלואורסצנטי intravascular (NIRF) מולקולרית של רובד דלקתיות, גישה multimodal כדי הדמיה של טרשת עורקים

In vivo מכרסמים דגם של פגיעה הנגרמת על התכווצות ולא פולשנית לניטור של התאוששות

חקור מנגנונים מולקולריים של קטרקט מושרה קרינת UV בעכברושים באמצעות PCR בזמן אמת ואימונוהיסטוכימיה. שיטה זו מאפשרת ניתוח ביטוי חלבונים ו-RNA בעדשת העין.

אפיון מנגנונים מולקולריים של

גלה סרטונים נוספים