Name: דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: למדו פרוטוקול ליצירת מודל סרטן קוליטיס-Associated בעכברים באמצעות Azoxymethane ו-DSS. שיטה זו מייצרת גידולים עם מאפיינים מורפולוגיים ומולקולריים הדומים לסרטן אנושי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה בחלקו על ידי DK089016 וL30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS), וP30-DK52574 (לCore אוניברסיטת וושינגטון עיכול מחלות המחקר). AIT היה עמית הווארד יוז רפואי במכון למחקר רפואי הדרכה.

1. אינדוקצית סרטן המעי גס הקשורים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בצד כלובים של מין וגיל 6-8 עכבריו מותאמים בשבוע ישנים שישמש לקבוצות ניסוי ובקרה. עכברים יכולים להיות מתויג באופן אישי, עם סימון זנב או קליפים אוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 0, משקולות בסיסיות תקליטים ולהזריק כל intraperitoneally עכבר (IP) עם 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג של פתרון עובד AOM (1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​בסליין איזוטוני, דילול מפתרון מניית מ&quot;ל 10 מ&quot;ג / בdH2O החזיקו ב -20 מעלות C) . בהתבסס על ניסיון, מינון זה יכול להיות מותאם בין 7-14 מ&quot;ג / ק&quot;ג ו / או חזר בתחילת הניסוי. </li></ol> זהירות: AOM הוא סוכן genotoxic תנודתי וצריך להיות מטופל בזהירות בהתאם לגיליון הבטיחות הנלווה. דילולים צריכים להיות מוכנים בברדס כימי, שמרו על קרח, והושלכו בעקבות פרוטוקולי מוסד ספציפיים. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 2.5% (2.5 g/100 מ&quot;ל) פתרון DSS במים מזוקקים ועוברים דרך F יצטט תאית מיקרומטר 0.22ilter ידי ואקום. מינון זה יכול להיות מותאם בין 1-3.5% בהתאם לעכבר זן והסביבה. פתרון הכין פעם, DSS ניתן לשמור בקירור עד שבוע 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 7, פתרון DSS אספקה ​​לעכברים כמו מי השתייה שלהם. כ 250 מ&quot;ל / כלוב יהיה צורך בכל פעם DSS החדש מסופק למקסימום של 5 עכברים / כלוב, אך אלה רק הערכות וישתנו בהתאם לסוג בקבוקי מים בבית הגידול שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לספק אספקה ​​רציפה של DSS לשבעה ימים, פתרון DSS צריך להיות מוחלף בבקבוקים שלוש פעמים (כל 2-3 ימים) נקיים בתקופה זו. חוקרים אחדים למדוד את כמות DSS צרך לפני ההחלפה עם פתרון חדש כמדד לחשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 14 בכלובים לעבור בחזרה למי שתייה הרגילה לשבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים (1.4) - (1.6) בימים 28 ו 49 לספק מחזור שני ושלישי של DSS. &quot;מחזור&quot; DSS מורכב משבוע אחד של DSS במי השתייהאחרי 2 שבועות של מים רגילים (autoclaved). </li></ol> 2. קוליטיס הערכה קליני והתקדמות גידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים צריכים להישקל / נצפו 2-3 פעמים בשבוע. ירידה במשקל אחוזים יחסית לקו הבסיס משמשת כמדד חלופי של חומרת קוליטיס. הערכות סדירות של דימום רקטלי, שלשולים או צניחה יכולות להתבצע בהתאם למטרות ניסוי ודיווחו על פי מערכות ניקוד שונות. 9, 10 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידה במשקל של עד 10%, יחד עם 2-3 ימים של שלשולים ודימום רקטלי ניתן לצפות בשבוע שלאחר מחזור שלם של DSS (תצפית יומית עשויה להיות שימושית בתקופה המיידית שלאחר זו DSS). </li></ol> יתכן שהחלק מהעכברים לא יכולים להתאושש; עכברים לאבד יותר מ -20% מהמשקל שלהם הם פחות לשרוד ועשויים לדרוש המתת חסד מוקדמת. זריקה אחת IP של 0.5-1.0 מלוחת מ&quot;ל בעכברים כאלה יכול להיות אמצעי יעיל לתיקון תומך flui<html> נפח ד אבד בשל שלשולים. 3. Murine אנדוסקופיה (אופציונלי) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנדוסקופיה לאחר המחזור השני או שלישי של DSS ניתן לבצע כדי לאשר את צמיחת גידול in vivo לפני להקריב. כAOM / מודל DSS הוא די אמין בייצור גידולים, צעד זה הוא בדרך כלל לא הכרחי. רק כמה עכברים צריכים הוערך באמצעות שיטה זו, שכן יש בו הפוטנציאל לשבש גידולי עכבר 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם עכבר עם סדציה נשאפת או בזריקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי העכבר הוא מורדם, לאבטח את העכבר ללוח שטוח עם קלטת בזנב ובחזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קידום אנדוסקופ העכברי לתוך פי הטבעת באמצעות העכבר המלוחה בעדינות כדי לנפח ולהשקות כדי לשפר נוף intraluminal ולהסיר תוכן צואה. (שים לב שאנדוסקופיה יכולה גם להתבצע באמצעות הפחת אוויר כתחליף למלח וטכניקה זו עשויה להציע להדמיה משופרת של הגידול. 12) </li></ol>דואר &quot;עקידה&gt; 4. מאוסה וקצירת קולון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 70, כל עכבר AOM / DSS טופל צריך לטפח גידולי מעי גס מרובים ולהיות מוכן להערכה. תאריך זה יכול להתעכב שבועות עד חודשים, אם גידולים גדולים יותר הם רצויים. (מן ראוי לציין כי עכברים עם רקטלית חמור צניחה ייתכן שיהיה צורך מורדמים מוקדם כדי למנוע אי נוחות מוגזמת לבעלי חיים כמו לכל ועדות טיפול בבעלי חיים מוסדיות.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני נתיחה לאחר המוות, באופן אישי להרדים עכברים עם נקע בצוואר הרחם וisoflurane (או שיטה אחרת שאושרה-מוסדי). משקל סופי ומדידות אחרות יכולים להתבצע בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר בצד גחונה נחשף על קרש חיתוך. כסה את הבטן עם אתנול 70% כדי למנוע את זיהום שערות את תוכן הבטן במהלך החילוץ של המעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים כדי לתפוס את קו האמצע של הבטן ולעשות חתך קטן לחשוף הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את החתך הזה בכל צד של הבטן לאורך costal מרגיn. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספריים כדי לחתוך את האגן כך שניתן לקצור את המעי הגס לצומת anorectal. זה חשוב כי פציעת קוליטיס DSS היא גדולה ביותר ברקטום דיסטלי ובמקביל, זה האזור של התפתחות גידול הגדולה ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות נוספות כגון בלוטות הלימפה mesenteric גם יכולות להיות שנקטפו בשלב זה. </li></ol> 5. הכנה לניתוח קולון מאקרוסקופיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מחט gavage 18G מחוברת למזרק 5 מ&quot;ל, שטוף את המעי הגס עם נאגר פוספט קר כקרח כגון סליין (PBS) שיוצא נוזל בכיוון הפיזיולוגי. אם תשמש רקמת מעי גס לרנ&quot;א או חלבון מבוסס ניתוח, זה יכול להישמר בקירור על ידי העסקת מגשי עבודה מראש מצוננים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את המעי הגס הסמוק longitudinally יחד לפדר והצבע שלה על המגש הקר. גידולים הם בקלות רבה יותר כשדמיינו המעי הגס מונח על משטח כהה. לחלופין, 1% Alcian כחול צבע ניתן ליישם כדי להדגיש tumors. הערך את המספר וגודל גידול בסרגל או הדיגיטלי קליפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלקים קטנים של רקמה נורמלית וגידול הסמוך יהיו אפשר להוציא בשלב זה לניתוח בעתיד על ידי רנ&quot;א, חלבונים, או שיטות immunohistochemical (IHC), ומשאירים איזה חלק של המעי הגס שנותר להערכה היסטולוגית. </li></ol> צילום דיגיטלי של דגימות המעי הגסות מייד לאחר צעד 5.2 יכול להיות מועיל עבור ניתוח מדויק של ניטל גידול, במיוחד אם חלקים משמעותיים של המתיישבים שנכרתו לצורות אחרות של ניתוח כפי שתואר לעיל. ניטל גידול (%) ניתן לחשב כאזור מעי גס הכולל אזור גידול / שימוש בתוכנה חופשיה כדוגמת ImageJ. 6. הכנת המעי גס להערכה היסטולוגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 10% פורמלין למעי הגס שנותר על המגש הקר באמצעות מזרק או אצבע. המאפשר את הרקמה כדי לתקן לפחות 30 שניות בצורה זו מאפשרת העברה לאגן הקיבעון. ודא שיורית פורמלין הוא WIPאד מעל לפני צביעת מעי גס נפתח חדש באותו המגש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת נקודותיים לאגן מלא 10% פורמלין ולהצמיד בקצוות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3 שעות של קיבעון, להעביר לנקודותיים אתנול 70%. נקודותיים ניתן לשמר באתנול 70% ללא הגבלה זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה סעיפים אורכים של מעי גס (פרוקסימלי, האמצע, דיסטלי / רקטום) ניתן התייצב באגר 2% והוגשו להטבעת פרפין. הבטח שהמעי הגס הפרוקסימלי ומעי גס דיסטלי / הרקטום הוא בכיוון באופן אחיד לכל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיספלזיה, ניזק קריפטה, ודלקת יכולות להיות מתוארת ומוערך על ידי אדם מנוסה על פי פרוטוקולים שפורסמו בעבר. 10, 13-15 עכברים ניתן הקריב לפני 70 יום אם הנסיין מעוניין באיתור אירועי dysplastic מוקדמים. </li></ol> 7. נציג תוצאות מודל AOM / DSS המתואר כאן מאפשר לחוקר מהימן ליצור גידולים במעי גס בעכברים.גדילת גידול במודל זה מושפע ישירות על ידי התהליך הדלקתי המשויך. חומרת קוליטיס צריכה להיות במעקב קליני על ידי ביצוע ירידה במשקל ונוכחות של שלשול / hematochezia (איור 2). אלה סימנים של פעילות מחלה נוטים להתחיל ביום 5 למחזור DSS ובמשך ארבעה ימים או יותר לאחר DSS הוסר. לעיתים נדיר, עכברים עם ניטל גידול משמעותי רקטלית יכולים לפתח צניחה רקטלית. אחרי שלשול מחזור DSS השני או שלישי עלול להיות עקשן. בדרך כלל גידולים קיימים וזיהוי על ידי קולונוסקופיה העכברית לפני המחזור השלישי של DSS (איור 3). זמן נוסף וכמובן שלישי של תוצאות DSS בגידולים גדולים יותר בזמן הקציר (איור 4). שימוש במריחה על עור Alcian הכחול כתם ניתן להשתמש כדי להדגיש גידולים (איור 5). תצלומים של גידולים במעי גסים יסייעו ביצירת מדידות סרטניות אשר ניתן להשתמש בי כמותית להשוות ייצור וגודל גידולבין קבוצות ניסוי (איור 6). דגימות מעי גס משובצות קבועות ופרפין ואז ניתן להעריך ליסטולוגיה או עם השימוש בimmunohistochemical מכתים (איור 7, 8). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1. סכמטי של AOM וממשל DSS. AOM (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מוזרק ביום 0. בתחילת השבוע השני (יום 7), 2.5% פתרון DSS ניתן לעכברים במי השתייה שלהם. שבעה ימים של DSS אחריו שבועות של מי autoclaved. עוד שני מחזורים נוספים של DSS מנוהלים לפני להקריב. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. משקל יחסית לתחילת מחקר ובממשל AOM DSS מאוס. יצוין, כי בשבוע שלאחר כל מחזור DSS, העכברים לוס<html> דואר 5-10% ממשקל גופם. ירידה במשקל בניסוי זה היא סמן פונדקאי לחומרת קוליטיס. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. צפה של גידולים במעי גס דיסטלי באמצעות אנדוסקופיה עכברית ביום 50 לטיפול AOM / DSS. שים לב ההמונים המרובים פוליפואידית שיבוש לומן של המעי גס דיסטלי (ב, ג) בהשוואה למעי הגס (הנורמלי). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. Longitudinally נפתח מעי גס עכבר ממחיש מראה גולמי של גידולים. שים לב לניטל הגבוה יותר גידול במעי גס דיסטלי / פי טבעת (תמונה עליונה משמאל), ואת מרקם rugated האופייני למעי הגס הפרוקסימלי (תמונה עליונה מימין) עם צמיחת גידול קטנה. תצוגה מעלה קרוב של המעי גס דיסטלי מראה גידולים רבים בגדלים שונים (להלן). ove_content &quot;fo: לשמור-together.within עמודים =&quot; תמיד &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5. גידולים מודגשים על ידי יישום של Alcian כתם כחול. שים לב איך הצבע מדגיש את המרקם הנורמלי של המעי הגס, כמו גם את גבולותיו של כל גידול פרט. הכתמה כזו יכולה להיות מועילה במדידה המדויקת של אזורי גידול על ידי שליט או מדידה דיגיטלית. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig6.jpg" alt="איור 6" /> איור 6. הפצת נציג את המספר הממוצע של גידולים לכל עכבר שטופלו בAOM / DSS. שים לב שרוב הגידולים נמצאים במעי גס דיסטלי והם &lt;2 מ&quot;מ בגודל. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig7.jpg" alt="איור 8" /> איור 7. פרפין מוטבע סעיפים אורכים של מעי גס בקלטת (לעיל)ד בשקופית בעקבות H &amp; E כתם (להלן). שימו לב שAlcian שיורים כחול כתם אינו מתערב עם H &amp; E מכתימה. גידול גדול חג בשקופית התמונה (מוקף בעיגול). הכינויים &quot;דיסטלי&quot;, &quot;הבינוניים&quot;, ו&quot; התוצאה הפרוקסימלי &quot;מחתך כל המעי גס בשלישים בין cecum ופי הטבעת. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig8.jpg" alt="איור 8" /> איור 8. היסטולוגיה נציג של גידול וכתוצאה מממשל AOM / DSS במעי גס דיסטלי. H &amp; E, BrdU, ושקופיות מוכתמות β-catenin ב50x (למעלה פנל) ו400x (פנל תחתון) בהתאמה להפגין שינויים דומים לאדם אדנוקרצינומה של המעי גס dysplastic.

<ol><li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li>
<li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li>
<li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+inflammation+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Intestinal inflammation and cancer.</a> Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).</li>
<li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysplasia+and+carcinoma+development+in+a+repeated+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model.</a> J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).</li>
<li>Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+colitis-associated+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of colitis-associated carcinogenesis.</a> J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).</li>
<li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li>
<li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+inflammation-related+mouse+colon+carcinogenesis+model+induced+by+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate.</a> Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).</li>
<li>De Robertis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+AOM%2FDSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis%3A+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J. Carcinog. 10, 9(2011).</li>
<li>Wirtz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li>
<li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab Invest. 69, 238-249 (1993).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li>
<li>Shaker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epimorphin+deletion+protects+mice+from+inflammation-induced+colon+carcinogenesis+and+alters+stem+cell+niche+myofibroblast+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion.</a> J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).</li>
<li>Boivin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+mouse+models+of+intestinal+cancer%3A+consensus+report+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations.</a> Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).</li>
<li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysplasia+and+cancer+in+the+dextran+sulfate+sodium+mouse+colitis+model.+Relevance+to+colitis-associated+neoplasia+in+the+human%3A+a+study+of+histopathology%2C+B-catenin+and+p53+expression+and+the+role+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li>
<li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li>
<li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Nambiar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+analysis+of+azoxymethane+induced+colon+tumors+in+inbred+mice+commonly+used+as+transgenic%2Fknockout+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors.</a> Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).</li>
<li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+carcinogenesis%3A+Review+of+human+and+experimental+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies.</a> J Carcinog. 8, (2009).</li>
<li>Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+IDO-1+by+immunostimulatory+DNA+limits+severity+of+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis.</a> J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).</li>
<li>Kerr, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification%3A+A+poly-A+purification+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution.</a> Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li>
<li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((is+required+for+resection-induced+changes+in+apoptosis%2C+proliferation%2C+and+members+of+the+extrinsic+cell+death+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways.</a> Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

טיפול בעכברים עם AOM וDSS מהירות וביעילות מודלי סרטן בבני אדם הקשורים לדלקת מעי גס. השערות לגבי גורמים תורשתיים לסרטן המעי גס הקשורים ניתן ללמוד בקלות בעכברים מהונדסים גנטי. 13, 16 לחלופין, ההשפעה של מטרות תרופתיות בסרטן המעי גס הקשורים ניתן ללמוד על ידי העסקת עכברי סוג פראי. בעוד מודל זה הוא מוערך מאוד על ידי מי שמתעניייין במחקר של התפתחות גידול במעי בהגדרה של דלקת, מגבלות קיימות. היקף המחלה נצפה בעכב...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> עכברי C57BL/6J </td><td> ג&#39;קסון מעבדה </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethane (AOM) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A5486-100 מ&quot;ג </td><td> פתרון המלאי: לדלל עד 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל במים מזוקקים כדי להיות כל זמן ב -20 ° C כמו 0.5-1 aliquots מ&quot;ל. פתרון עובד: לדלל מניות ל1 מ&quot;ג / מ&quot;ל באיזוטוני (0.9%) המלוח </td></tr><tr><td> נתרן סולפט dextran (DSS) </td><td> ייעוץ TdB </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 הכנות KDA ממקורות אחרים הם מקובלים; אותו המגרש שישמש לניסוי בודד) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewמערכת miniendoscopic </td><td> קרל Storz </td><td> מרובה </td><td> ראה בקר et al. להסבר מפורט של ציוד והתקנה. 11 </td></tr><tr><td> TPP ראפיד FILTERMAX 500 בקבוק-מסנן מ&quot;ל, 0.22 מיקרומטר PES </td><td> מערב תיכון מדעי </td><td> TP99500 </td><td> כל מסנן תרבית רקמה הסטנדרטית מקובל </td></tr><tr><td> אתיל אלכוהול 200 ההוכחה ASC / USP </td><td> Pharmaco-AAPER (או אחר) </td><td> 11ACS200 </td><td> לדלל עד 70% במים מזוקקים </td></tr><tr><td> , USP isoflurane </td><td> אספקת לבריאות בעלי החיים באטלר </td><td> 4029405 </td><td> עכבר מקום בצנצנת זכוכית עם גזה או מטלית קטנה טבולה בחומר ההרדמה </td></tr><tr><td> 18G מחט Gavage סטרייט </td><td> בריינטרי מדעי </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> נאגר מלוח פוספט (PBS) </td><td> סיגמאאולדריץ </td><td> P5493 </td><td> מדולל ל1X (0.01 M) במים מזוקקים </td></tr><tr><td> מגש קר (פלייט הרקמות Tek השני הקר) </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> NC9491941 </td><td> חנות ב -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ תוכנה </td><td> NIH (להורדה בחינם) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> פורמלדהיד (37%) </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> F79-500 </td><td> לדלל עד 10% בPBS </td></tr><tr><td> אגר BD Bacto </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> DF0140-01-0 </td><td> השתמש בפלטה חשמלית כדי ליצור פתרון 2% במים מזוקקים </td></tr><tr><td> מלקחי הלבשת Eye Miltex </td><td> MedPlus בע&quot;מ </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> מספרי Eye Miltex </td><td> MedPlus בע&quot;מ </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; נקודות מעוגלות למנוע ניזק למעי גס במהלך פתיחה. </td></tr><tr><td> Alcian הכחול 8GX (אבקה) </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A5268 </td><td> הוסף אבקת 1 גרם לחומצת 100 מ&quot;ל 3% אצטית (חומצה אצטית קרחונית 3 מ&quot;ל + 97 מיליליטר מים מזוקקים) </td></tr><tr><td> מזרק 1 מ&quot;ל טוברקולין עם 26 המצורפים G x 3/8 במחט פוע intradermal </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> להזרקה של AOM </td></tr></tbody></table>

דוגמנות סרטן קוליטיס-associated עם azoxymethane (aom) ונתרן סולפט dextran (dss)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

אנשים עם מחלת מעי דלקתית (IBD), כגון מחלת קרוהן (CD) או קוליטיס (UC) נמצאים בסיכון מוגבר להתפתחות סרטן המעי גס (CRC) על אנשים בריאים. סיכון זה הוא פרופורציונלי לזמן וההיקף של מחלה, עם שכיחות מצטברת גבוה כמו 30% אצל אנשים עם UC ארוך שנים עם מעורבות נרחבת של מעי גסה. דיספלזיה חוקן 1 במחלת מעי דלקתי וקוליטיס המשויך הסרטן (CAC) הם האמינו להתפתח כתוצאה מחזורים חוזרים ונשנים של פגיעה בתאי אפיתל ותיקון בזמן שהתאים האלה שוחים בסביבת ציטוקינים דלקתית כרונית. 2 למרות שסרטן המעי גס וספונטני הקשורים לשתף את האיכות להיות אדנוקרצינומה, רצף של אירועים מולקולריים שבבסיס הוא ככל הנראה שונה. 3 זה הבחנה טוענת צורך במודלים של בעלי חיים ספציפיים של CAC. כמה מודלי עכבר קיימים כיום ללימוד CAC. Dextran סולפט Sodiאממ (DSS), סוכן עם השפעות רעילות ישירות על אפיתל של המעי הגס, יכול להינתן במי שתייה לעכברים במחזורים מרובים כדי ליצור מצב דלקתי כרוני. עם משך מספיק, חלק מעכברים אלו יפתחו גידולים. 4 התפתחות גידול היא מהרה במודל זה אם מנוהל באווירה פרו מסרטנת. אלה כוללים עכברים עם מוטציה גנטית במסלולי tumorigenesis (APC, p53, MSH2), כמו גם עכברים שטופלו מראש-עם סוכני genotoxic (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]). 5 שילוב של DSS עם AOM כמודל לסרטן משויך קוליטיס צבר פופולרי לשחזור שלו, העצמה, המחיר נמוך, וקלות השימוש. למרות שיש להם מנגנון משותף, AOM כבר מצא להיות יותר חזק ויציב בתמיסה מDMH. בעוד התפתחות גידול בדגמים אחרים דורשת בדרך כלל מספר חודשים, עכברים שהוזרקו עם AOM, ולאחר מכן טופלו בDSS לפתח גידולים בהולמיםיכולים להינתן כקטן של 7-10 שבועות. 6, 7 לבסוף, AOM וDSS לעכברים מכל רקע גנטי (knock out, מהונדס, וכו &#39;) ללא הכלאות למתח סרטני מסוים. הנה, אנחנו מדגימים את הפרוטוקול לtumorigenesis מעי דלקתי מונע בעכברי ניצול זריקה אחת של AOM אחרי שלושה מחזורים של שבעה ימים של DSS לאורך תקופת שבוע 10. מודל זה גורם לגידולים בשינויים ההיסטולוגיים ומולקולריים דומים מאוד לאלה המתרחשים בCAC האנושי ומספק מודל יקר מאוד ללימוד oncogenesis ומניעה כימית במחלה זו. 8

אנחנו מדגימים את פרוטוקול שבו ממשל של azoxymethane הסוכן genotoxic (AOM) ואחרי שלושה מחזורים של נתרן פרו דלקתי סוכן dextran סולפט (DSS) במהירות ובעקביות יוצר גידולים במעי גס בעכברים עם דמיון מורפולוגיים ומולקולרי לאלו שנראו בקוליטיס האנושי -קשור לסרטן.

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

אנשים עם מחלה דלקתית של המעי (IBD), כגון מחלת קרוהן (CD) או קולוניטיס כיבית (UC), נמצאים בסיכון מוגבר לפיתוח סרטן המעי הגס והחך גס...

ביום אפס, הוזרק למייר azoxymethane או OM בשבוע שלאחר מכן. מי השתייה שלהם מוחלפים בתמיסה המכילה dextran sulfate sodium או DSS. בשבוע השלישי, העכברים מקבלים מים למשך השבועיים הבאים.מחזור מים זה של DSS חוזר על עצמו פעמיים נוספות. לאחר מחזור ה-DSS השני, ניתן לבחון את העכברים לאיתור גידולים באמצעות אנדוסקופיה של השוקה.לאחר שבוע 10, העכברים נשחטים והמעי הגס נאסף. המעי הגס נשטף ונפתח לאורכו. המעי הגס נבדק להערכת גודל הגידולים ומספרם.ניתן להטמיע חתךlongitudinal של המעי הגס בשלישים ולהעבירו לאנליזה היסטולוגית. באמצעות מיקרוסקופיית אור ניתן לספור ולסווג גידולים. אנו מדגימים פרוטוקול שבו מתבצעת מתן של החומר הגנוטוקסי OM, ולאחריו שלושה מחזורים של החומר הפרו-דלקתי.DSS גורם להיווצרות מהירה ועקבית של גידולי מעי הגס בעכברים, בעלי דמיון מורפולוגי ומולקולרי לאלו הנראים בסרטן המעי הגס הקשור לקוליטיס בבני אדם. סמנו את העכברים באופן פרטני באמצעות סימוני זנב או תיוג אוזן ביום אפס, רשמו בטבלה את משקל הבסיס של כל עכבר, ולאחר מכן מזריקו לכל עכבר תמיסה של 10 mg/kg של OM exercise. יש לנקוט זהירות בעבודה עם OM כיוון שמדובר בחומר גנוטוקסי. ביום השביעי, ספקו לעכברים תמיסת 2.5% DSS כמי השתייה שלהם לשבוע הבא. להכנת תמיסה זו, הוסיפו אבקת DSS למים מזוקקים וערבבו עד להמסה מלאה.התמיסה מוכנה לאחר סינונה דרך מסנן Cellulose acetate של 0.2 micron. כדי להבטיח אספקה רציפה של תמיסת DSS למשך שבעה ימים, יש להחליף את ה-DSS מדי יומיים עד שלושה ימים.לאחר תקופה זו, העבירו את הכלובים בחזרה למים למשך שבועיים. שקלו את העכברים פעמיים עד שלוש פעמים בשבוע ועקבו אחר דימומים רקטליים ושלשולים. עכברים עם גידולים גדולים עשויים לפתח זמנית פרולפס רקטלי, אם כי בדרך כלל הדבר אינו מפחית את אחוז ההישרדות.ירידה במשקל ביחס לקו הבסיס משמשת כמדד עקיף לחומרת הקוליטיס. ניתן לצפות לירידה במשקל של עד 10% יחד עם שלשולים ודימומים רקטליים למשך יומיים עד שלושה ימים בשבוע שלאחר מחזור מלא של DSS. ניתן לבצע מחזור שני או שלישי של DSS כדי לאשר צמיחת גידול in vivo לפני ההקרבה.מכיוון שמודל A-O-M-D-S-S הוא אמין למדי ביצירת גידולים, שלב זה בדרך כלל אינו נחוץ. יש להעריך רק מספר קטן של עכברים באמצעות שיטה זו, שכן היא עלולה לשבש את הגידולים בעכברים. אזור העבודה שלך צריך לכלול כוס כימית של תמיסת פוספט רב-ערכית סטרילית (PBS) וכן כוס כימית ריקה.כדי להסיר PBS משומש, שאבו 8 עד 10 milliliters של PBS לתוך מזרק וחברו אותו לקצה האנדוסקופ עבור כל שימוש. לצורך שטיפת תכנים תוך-לומנליים, הרדימו כל עכבר באמצעות הרגעה בשאיפה או בהזרקה וקבעו את העכבר ללוח שטוח באמצעות סרט דביק בזנב ובחזה; ניתן לצבוט את כריות כפות הרגליים של העכבר. כדי להבטיח הרגעה מספקת, השתמשו באגודל ובאצבע המורה כדי לצבוט את הבטן התחתונה של העכבר לחשיפת פי התחת, והחדירו את אנדוסקופ muren לרקטום של העכבר.יש להשתמש ב-PBS בעדינות כדי לנפח ולהשקות את המעי, במטרה לשפר את התצפית התוך-לומנלית ולהסיר תוכן צואי. יש להמשיך להחדיר את האנדוסקופ באיטיות תוך התבוננות במסך. לנוכחות של גידולים גסים ביום ה-70, כל עכבר שטופל ב-A-O-M-D-S-S אמור לשאת מספר גידולי מעי ולהיות מוכן להערכה.ניתן לדחות מצב זה בשבועות עד חודשים אם מעוניינים בגידולים גדולים יותר. הכינו מזרק מלא ב-PBS המחובר למחט גavage. מזרק טעון ב-10% formalin, מספריים כירורגיים בסיסיים ומספריים בעלי קצוות מעוגלים.מזרק קטן טעון בתמיסת 1%Ian Blue ופינצטה עדינה. כמו כן, הכינו מגש קר, סירת העברה המכילה PBSA מקורר, תער חדש לחיתוך וגיגית קיבוע מלאה ב-10%formalin. יש לבצע הרדמה של כל עכבר באמצעות isof, fluorine ופריקה צווארית או שיטה אחרת המאושרת על ידי המוסד. ניתן לבצע מדידת משקל סופית ומדידות אחרות.בשלב זה, הניחו את העכבר על קרש חיתוך כאשר צדו הגחוני חשוף. רססו את הבטן ב-70% ethanol כדי למנוע מהפרווה להגיע לאזור הניתוח. השתמשו בפינצטה כדי לתפוס את קו האמצע של הבטן ובצעו חתך קטן דרך העור כדי לחשוף את הפריטונאום.הפעיל מתיחה עדינה כדי להפריד את העור מהפריטונאום (Kuper's membrane) ולחשוף את כל חלל הבטן. בצע חתך בפריטונאום והרחב חתך זה לאורך השוליים הצלעיים משני הצדדים. השתמש במספריים סגורים כדי להזיז את המעי הדק והמעי הגס הצידה.פעולה זו תחשוף את קשרי הלימפה המזנטריים, אותם ניתן לאסוף במידת הצורך. לצורך הערכה, הזיזו את דרכי השתן והמין כלפי מטה כדי לחשוף את המעי הגס היורד ואת הרקטום, והסִירו את שלפוחית השתן ואת איברי הרבייה ככל שנדרש כדי לחשוף עוד יותר את האגן. יש להיזהר לא לפגוע ברקמות סמוכות.גזרו דרך הענפים הפוביים התחתון והעליון (inferior and superior pubic rami) כדי לחשוף את נקודת החיבור של פישרית המעי הגס והפישריט (anal rectal junction). גזרו את העור מסביב לחיבור זה כדי לשחרר את המעי הגס, תוך הפעלת מתיחה עדינה כלפי מעלה. באמצעות פינצטה מזנטרית (forceps mesenteric), ניתן להסיר או להפריד את ההיצמדוּת של המעי הגס.חשוב לשמר חלק מהעור במעבר שבין פיס המעי הגס לפיס השבע, כיוון ששטח זה מושפע לעיתים קרובות מדיספלזיה. בצעו חיתוך של המעי הגס מהמעי הדק, מיד פרוקסימלית למעי העיוור (cecum). הפרידו את המעי העיוור מהמעי הגס הסמוך לו באמצעות מחט גavage בקוטר 18 gauge המחוברת למזרק של 5 mL.שטפו את המעי הגס ב-PBS קר מאוד, כך שהנוזל ייצא בכיוון הפיזיולוגי, באמצעות מספריים עם קצוות מעוגלים. פתחו את המעי הגס לאורכו של המזנטריום. העבירו את המעי הגס הפתוח אל המגש הקר.וודאו שהמגש הפשיר מספיק כדי לא להקפיא את הרקמה. מרחו מספר טיפות של 1%Ian Blue באמצעות אצבע כדי להקל על ויזואליזציית הגידולים. העריכו את מספר הגידולים ואת גודלם בעזרת סרגל, או צלמו תמונות לצורך ניתוח דיגיטלי.בשלב זה ניתן להוציא מקטעים קטנים של הגידול ושל רקמה נורמלית סמוכה לצורך אנליזות עתידיות בשיטות של RNA, חלבון או אימונוהיסטוכימיה, תוך השארת חלק מהמעי הגס להערכה היסטולוגית. יש להחיל 10% formal על שאר המעי הגס במגש הקירור באמצעות מזרק או אצבע, ולאפשר לרקמה להיקבע למשך 30 seconds לפחות. באופן זה, תתאפשר העברה קלה יותר לאגן הקיבוע.יש לוודא ששאריות פורמלין נגובות לפני צביעת מעי גס פתוח חדש על אותה תבנית. העבירו את המעי הגס לאגן מלא ב-10% formalin ונעצרו אותו בפינות באמצעות סיכות. לאחר שלוש שעות של קיבוע, השליכו את ה-formin והחליפו אותו ב-70% ethanol.ניתן לשמר מעיים הגסים ב-70% ethanol ללא הגבלה. השתמשו בחום נמוך להכנת תמיסת 2% agar והניחו זכוכית למשקוק נקייה על פלטת זכוכית. חתכו את המעי הגס המקובע לשלישים והחזירו את החלקים שלא נעשה בהם שימוש לאגן ה-ethanol.יש לקצץ את מקטעי המעי הגס לגודל אחיד באמצעות שני תערי. יש להטמיע את מקטעי המעי הגס והשכבות באגר על גבי השקף הנקי. חזור על תהליך זה עבור המעי הגס הבא.בצעו חיתוך של המקטע, הסירו עודפי אגר, והניחו את המעי הגס המוטמע בתוך קסטה לצורך עיבוד וצביעה ב-hematin ו-eoin. איור 1 מפרט את הפרוטוקול להשראת סרטן הקשור לקוליטיס. איור 2 מציג את משקל העכבר ביחס לקו הבסיס במהלך מתן OM ו-DSS.שימו לב כי בשבוע שלאחר כל מחזור של DSS, העכברים מאבדים 5% עד 10% ממשקל גופם. איבוד המשקל בניסוי זה מהווה מדד עקיף לחומרת הקוליטיס. איור 3 מציג מבט על גידולים במעי הגס הדיסטלי באמצעות אנדוסקופיה לעכברים ביום ה-50 של טיפול A-O-M-D-S-S.שימו לב למסות הפוליפואידיות המרובות החוסמות את הלומן של המעי הגס הדיסטלי בלוחות B ו-C בהשוואה למעי הגס התקין. בלוח a, איור ארבע מציג מעי גס של עכבר שנפתח לאורכו, הממחיש את המראה המאקרוסקופי של הגידולים. שימו לב לעומס הגידולי הגבוה יותר במעי הגס הדיסטלי ולמרקם האופייני של המעי הגס הפרוקסימלי עם צמיחה גידולית מועטה.איור חמש מציג גידולים המודגשים באמצעות יישום של lc וצבע כחול. שימו לב כיצד הצבע מדגיש את המרקם הנורמלי של המעי הגס וכן את הגבולות של כל גידול בנפרד. צביעה כזו יכולה לסייע במדידה מדויקת של שטחי הגידולים באמצעות סרגל או מדידה דיגיטלית.איור שש מציג את ההתפלגות המייצגת של מספר הגידולים הממוצע לעכבר שטופל ב-OM ו-DSS. שימו לב שמרבית הגידולים ממוקמים במעי הגס הדיסטלי וגודלם פחות משני מילימטרים. איור שבע מציג חתכים אורך של מעי גס הטמיעים בפרפין בתוך קסטה ושקופית צבועה ב-h and E.שימו לב כי שאריות של S וצבע כחול אינן מפריעות לצביעת h ו-e. גידול גדול מסומן במעגל בתמונת הפריסה. הסימונים distal, middle ו-proximal נובעים מחיתוך של המעי הגס כולו לשלישים בין העיוור (cecum) לפי התאנוס.איור שמונה מציג היסטולוגיה מייצגת של גידול שנוצר כתוצאה ממתן OM ו-DSS במעי הגס הדיסטלי. המיקרוגרפיה המוצגת נצבעה ב-H ו-E-B-R-D-U ובבטא-קטנין, והיא מדגימה שינויים דיספלסטיים דומים לאדנוקרצינומות של מעי הגס בבני אדם. בסרטון זה, הדגמנו פרוטוקול ליצירת גידולים במעי הגס המונעים על ידי דלקת בעכברים, תוך שימוש בהזרקה בודדת של OM ולאחריה שלושה מחזורים של שבעה ימים של DSS.במהלך תקופה של 10 שבועות, מודל זה משרה גידולים עם שינויים היסטולוגיים ומולקולריים הדומים מאוד לאלו המתרחשים בסרטן מעי גדול הקשור לקוליטיס בבני אדם, ומספק מודל בעל ערך רב למחקר של קרצינוגנזה ומניעה כימית של מחלה זו.

modeling-colitis-associated-cancer-with-azoxymethane-aom-dextran

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Dextran נתרן סולפט (DSS) מנוהל במי השתייה הוא מודל הוקמה Murine פגיעה דלקתית חריפה של קוליטיס. פרוטוקול זה מתאר את שיטת הטיפול DSS והכנת רקמות.

קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

דגמים ניסיוניים של מחלות מעי דלקתיות אפשרו לנו לבחון את התגובות מורכב החיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות הקשורים בפתוגנזה. באמצעות הניקוד היסטולוגית, כימות של תומכי ציטוקינים דלקתיים ופעילות myeloperoxidase, אפשר להתחיל להעריך את התגובות הללו לראות מחלות מעי דלקתיות.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת מודל מורין המושרה על ידי כימיקלים של קוליטיס - מחלת מעי דלקתית. העכבר רשאי לצרוך תמיסת דקסטרן נתרן סולפט (DSS) למשך זמן הולם. עם הצריכה, DSS פוגע במחסום הריר ושכבת האפיתל במעי הגס, ומאפשר לחיידקי המעי להיכנס לרקמה הבסיסית - שם הם חשים על ידי תאי החיסון המקומיים כדי לתווך תגובה חיסונית מוגזמת, וכתוצאה מכך דלקת.

טכניקה ליצירת מודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט נתרן

קוליטיס המושרה DNBS / TNBS מציע אלטרנטיבה ושיטה זולה ללמוד pathobiology של מחלות מעי דלקתיות. הפרוטוקול שנדון במאמר זה מתאר את היישום המוצלח של DNBS כדי לגרום לדלקת מעי גסה בעכברים וחולדות ומאפשר לאדם ללמוד ביסודיות את תגובות מעיים בתיווך מארחת.

מודלים DNBS / TNBS קוליטיס: מתן תובנות מחלת מעי דלקתי והשפעות של התזונה שומן

אנו מתארים שיטות לניטור אורך של יעילות הטיפולים לטיפול בפתולוגיות של המעי הגס בעכברים באמצעות אנדוסקופ קשיח. פרוטוקול זה יכול לשמש בקלות לאפיון התגובה הטיפולית של גידול בודד בעכברים חיים וגם לניטור הישנות פוטנציאלית של המחלה.

הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו Therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים

הפרוטוקול המוצג מתאר הסרה כירורגית נתיישב של התוספתן (טלאי caecal) בעכבר ואחריו אינדוקציה של מחלת המעי הגס מחלות הקיבה הקשורים סרטן. המודל להסרת התוספתן של murine מאפשר חקירה של התפקיד הביולוגי של התוספתן בפתוגנזה של מחלת העיכול האנושית.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

פרוטוקול זה מספק מודל עכברי של סרטן המעי הגס הקשור לקולופרוקטיטיס כיבית המושרה על ידי אזומתאן בשילוב עם דקסטרן סולפט נתרן. המודל שימש להערכת היעילות של תרכובות הרפואה הסינית המסורתית במניעה וטיפול בסרטן המעי הגס.

ביסוס מודל סרטן קולופרוקטיטיס בעכברים והערכת ההשפעה הטיפולית של הרפואה הסינית

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

מודלים של פלישת תאים סרטניים לתוך מטריצה ​​תלת ממדי תאיים לשקף טוב יותר...

מידול והדמיה 3-Dimensional Cell קיבוציים Invasion

Heterotypic תלת ממדי<em&gt; במבחנה</em&gt; מידול של אינטראקציות stromal-אפיתל בייזום והתקדמות סרטן השחלות

למדו פרוטוקול ליצירת מודל סרטן קוליטיס-Associated בעכברים באמצעות Azoxymethane ו-DSS. שיטה זו מייצרת גידולים עם מאפיינים מורפולוגיים ומולקולריים הדומים לסרטן אנושי.

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

גלה סרטונים נוספים