Name: Microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: למדו מיקרודיאליזה של אתנול במוח עכברושים במהלך נחישות עצמית באמצעות כרומטוגרפיית גז. שיטה זו מאפשרת ניטור רציף ומינימלי של ריכוז האתנול במוח תוך כדי ביצוע משימות התנהגותיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהמכון הלאומי לבריאות / NIAAA (AA11852 וAA007471).

<ol><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880(2008).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+core-shell+border+differs+from+that+in+the+core+and+shell+during+operant+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">The dopamine response in the nucleus accumbens core-shell border differs from that in the core and shell during operant ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 33, 1355-1365 (2009).</li>
<li>Doyon, W. M., York, J. L., Diaz, L. M., Samson, H. H., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+activity+in+the+nucleus+accumbens+during+consummatory+phases+of+oral+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Dopamine activity in the nucleus accumbens during consummatory phases of oral ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 27, 1573-1582 (2003).</li>
<li>Pettit, H. O., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+dose+on+cocaine+self-administration+behavior+and+dopamine+levels+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of dose on cocaine self-administration behavior and dopamine levels in the nucleus accumbens.</a> Brain Res. 539, 94-102 (1991).</li>
<li>Paxinos, G., Kus, L., Ashwell, K. W. S., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Chemoarchitectonic+Atlas+of+The+Rat+Forebrain%22">Chemoarchitectonic Atlas of The Rat Forebrain</a>. , Academic Press Inc. (1998).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc. (1986).</li>
<li>Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkoog%2C+DA+%22Principles+of+Instrumental+Analysis%22">Principles of Instrumental Analysis</a>. , 5th Edition, Thomson Learning, Inc. (1998).</li>
<li>Doyon, W. M., Anders, S. K., Ramachandra, V. S., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+operant+self-administration+of+10%25+ethanol+plus+10%25+sucrose+on+dopamine+and+ethanol+concentrations+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Effect of operant self-administration of 10% ethanol plus 10% sucrose on dopamine and ethanol concentrations in the nucleus accumbens.</a> J Neurochem. 93, 1469-1481 (2005).</li>
<li>Carrillo, J., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+exposure+to+voluntary+ethanol+self-administration+produces+adaptations+in+ethanol+consumption+and+accumbal+dopamine+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">A single exposure to voluntary ethanol self-administration produces adaptations in ethanol consumption and accumbal dopamine signaling.</a> Alcohol. 45, 559-5566 (2011).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Duvauchelle, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+shell+of+the+nucleus+accumbens+has+a+higher+dopamine+response+compared+with+the+core+after+non-contingent+intravenous+ethanol+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The shell of the nucleus accumbens has a higher dopamine response compared with the core after non-contingent intravenous ethanol administration.</a> Neuroscience. 154, 1042-1053 (2008).</li>
<li>Robinson, D. L., Lara, J. A., Brunner, L. J., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Ethanol+Concentrations+in+the+Extracellular+Fluid+of+the+Rat+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Quantification of Ethanol Concentrations in the Extracellular Fluid of the Rat Brain.</a> J. Neurochem. 75, 1685-1693 (2000).</li>
<li>Gonzales, R. A., McNabb, J., Yim, H. J., Ripley, T., Bungay, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Microdialysis+of+Ethanol+in+Rat+Striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative Microdialysis of Ethanol in Rat Striatum.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 22, 858-867 (1998).</li>
</ol>

מאמר זה מומן על ידי מד Associates, Inc

יישומים ומגבלות ניהול עצמי תרופה משמש במכרסמים להתמכרות לסמי מודל. תרופות רבות של התעללות שהם מודל בצורה זו ניתן בהזרקה לוריד, שבו התרופה ישירות לתא המרכזי. זה מאפשר מעקב צמוד של מינון מעל המושב מנהל עצמי. מאז אתנול הוא בדרך כלל דרך פה לניהול עצמי, זה הרבה יותר קשה לעקוב אחר רמות תרופה בשל הבדלים אישיים בספיגה וחילוף חומרים. באמצעות microdialysis לדגימה מהאזור במוח של עניין, אנחנו לא רק יכולים לעקוב אחר הדפוס של אתנול להגיע לאזור, אבל אנחנו גם מסוגלים בו זמנית לעקוב אחר שינויי מוליך עצבי באותו האזור לאורך זמן בכל שלב ניהול עצמי. שינויי neurochemical ותגובות סמים במוח קשורים לשימוש בסמים ותלות, ולכן יכולת mea מקבילנוירוכימי בטוח וריכוז תרופה בשלבים מסוימים לניהול עצמי מספקים כלי רב עצמה וייחודי. נושא אחד שכדאי לזכור לcorrelating ריכוזי dialysate של analytes עם התנהגות הוא המאפיינים הפיסיים של צנרת microdialysis. באופן ספציפי, את הזמן שנדרש כדי שהנוזל הועבר מלומן של חללית microdialysis לצינור האיסוף הוא קריטי, וזמנים קצרים יותר הם טובים יותר. במעבדה שלנו, ואנחנו בונים את הבדיקות כך שהזמן הוא כ 90 שניות. שימוש בתנאים אלה, מצאו שיש עליית דופמין accumbal בייזום של צריכת אתנול, אשר מקטינה במהלך את המשקה ולאחר משקה התקופות של עליות ריכוז אתנול dialysate. 2,3,8,9 ניסויים אלה , בשילוב עם נתונים ממחקרים פרמקולוגיים, אפשר לנו לנתח את ההשפעות בהחלט פרמקולוגיים של אתנול ומנהל עצמי רמזים סביבתיים הקשורים בפרקAnges בריכוזי שליחים עצביים. יש לציין כי היישום המסוים הזה של טכניקות משולבות התנהגותי-microdialysis מותאם לתחומי המחקר הנוכחיים של המעבדה שלנו. זה נועד כדי להעריך את הדפוס הזמני של אתנול להגיע למוח בהשוואה לדפוס שינויי מוליך עצבי באותו האזור, כך שאנו יכולים להתייחס לצעדים אלה התנהגויות סינכרוני מנהל עצמי. ריכוזי אתנול dialysate נגזרים לא יתוקנו להתאוששות בחללית vivo, והם רק חלק קטן מריכוז אתנול רקמת המוח. אם microdialysis כמותית של אתנול נדרש, שבריר הפקת אתנול שמפזר ממרחב החוץ התאי לתוך החללית צריך להיקבע באופן ניסיוני. ראה פרסומים קודמים מהמעבדה שלנו לשיטות ודיון נוסף. 10,11,12 למרות שפרוטוקול זה מדגים את השימוש בגז chromatography יחד עם microextraction שלב היציב של אתנול מHeadspace של דגימות microdialysis, שיטות אחרות לניתוח של תוכן אתנול ממדגם microdialysis יכול לשמש. עם זאת, שיטות אלטרנטיביות יכולות לסבול מחסרונות מסוימים. לדוגמה, שיטות אנליטיות פחות רגישות עשויות לדרוש נפח דגימה גדולה יותר שמחייב גבוהה פי דגימה מדקות 5-7 מודגמות כאן. הסוג של מערכת הנדונה כאן משתמש microextraction שלב מוצק שמתרכז אתנול באדי השלב בבקבוקון המדגם האטום כך שהוא מאפשר ספיגה לסיבים הממוקמים באמיץ את הבקבוקון. זה משפר את גבול הגילוי לעומת דגימה אמיצה ישירה אשר בדרך כלל מאפשרת 50-100 microliters של האדים להיות מוזרקים. יתרון בולט נוסף של השיטה הוא שאמיץ המדגם המוזרק לניתוח הוא מאוד נקי וללא מלחים. הזרקה ישירה של מדגם microdialysis הנוזל עשויה לשמש גם עם sensit הגבוהלקוחים, אבל זה ידרוש יותר מכשיר לאורך זמן בשל תחזוקה שוטפת הנדרשת למנקה את המלחים המוזרק. פתרון בעיות, והערות אחרות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הניסוי שלך מתחיל, לתת לעצמך מספיק זמן כדי לבדוק שלהגדיר הקופץ microdialysis שלך מתפקד כראוי ולהטריד-לירות בכל סוגיות. אנו ממליצים לך יש תוספת הגדרה, perfused עם ACSF, מוכן לעבור עם תקלת הגדרה כדי לחסוך זמן, כמו רוב המפגשים אופרנטית נוטים להתרחש בזמן מסוים בכל יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפד כי בדיקות microdialysis מוכנסות על פני תקופה של כ 5 דקות כדי למזער את הניזק לרקמות המיוצר על ידי הטיה של הרקמה כחללית חודרת למוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת העברת העכבר לתוך התא אופרנטית כדאי לי אדם שני לסייע כך שהעברת הקו (חלק מהגדרת microdialysis) אינו הופך סבוך, וכך שהתכנית אופרנטית ניתן initiated בזמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שאתה נותן המון autosampler מי האמבט של זמן כדי להגיע לטמפרטורה המתאימה. המערכת שלנו בדרך כלל דורשת שעות כדי להגיע ל 50 מעלות צלזיוס כמו כן, להבטיח כי הדגימות שלך מתאדות באופן מלא לפני ניתוח הדגימות. אנחנו בדרך כלל חזותיים לאשר כי זה התרחש לפני ביצוע ניתוח מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטות סטנדרטיות כימיה טובות אנליטיים צריכות להיות אחריו. אלה כוללים, אך לא מוגבלים, לאימות של אנשים, ציוד ונהלים. בקיצור, אנחנו מעסיקים את ההנחיות הבאות: משתמשים בודדים צריכים להפגין את היכולת ליצור ערכי גובה שיא לשעתק לריכוזים סטנדרטיים ועיקולים רגילים ליניארי (R2 ≥ 0.99) במשך מספר ימים. כדי לאמת את מערכת GC-FID פועלת כראוי, סטנדרטים צריכים להיות תמיד להיות מנותחים לפני כל דגימות dialysate מוזרקות. עקומת הסטנדרט שנוצרה צריכה R2 ≥ 0.99. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוב הציוד שאנו משתמשיםנרכש באמצעות ריאן, Inc, אשר נרכשה על ידי טכנולוגיות Agilent בשנת 2010. בשלב זה, מכשירים מדעיים Bruker הושגו העסק של ריאן מעבדת גז כרומטוגרפיה המכשירים. לרכישות עתידיות, התייעץ עם החברה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרוטוקול הנוכחי מראה התנהגות אופרנטית עם חולדות, אבל הצופה צריך להיות מודע לכך שיותר הפרעת התנהגות היא צפויה להופיע במודל העכבר הקטן. נושא נוסף שיהיה מודע לזה שמיקום של חללית microdialysis לאזורים אחרים במוח מקליפת מוח הקדם חזיתית המדיאלי או גרעין נסמך עלולים לשבש התנהגות אופרנטית למידה רבה יותר מאשר שמוצג כאן. זה חשוב לבחון את פרמטרים התנהגותיים רבים מקרוב כדי לקבוע אם הניזק שנגרם על ידי מיקום חללי מייצר שינויים חמורים בהתנהגות. </li></ol>

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> 95% אתנול </td><td> AAPER אלכוהול וכימי ושות, Shelbyville, KY </td><td> E190, 111000190 </td></tr><tr><td> סוכרוז Ultra-טהור </td><td> חבר הפרלמנט Biomedicals, LLC, סולון, אוהיו </td><td> 821721 </td></tr><tr><td> Ultra טוהר הליום גבוה </td><td> אוויר גז </td><td> הוא UHP300 </td></tr><tr><td> אוויר </td><td> אוויר גז </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> מימן </td><td> אוויר גז </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> GC 2 בקבוקוני מ&quot;ל </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0015 </td></tr><tr><td> כובעי בקבוקון GC עם PTFE / סיליקון SEPTA </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0084 </td></tr></tbody></table> טבלת 1. ריאגנטים ספציפיים

microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

שיטות אופרנטית מנהל עצמי משמשות בדרך כלל כדי לחקור את ההשפעות ההתנהגותיות ותרופתיות של תרופות רבות של התעללות, כולל אתנול. עם זאת, אתנול הוא בדרך כלל בניהול עצמי דרך פה, ולא לוריד כמו תרופות רבות אחרות של התעללות. את הפרמקוקינטיקה של תרופות אוראליות הן יותר מורכבת מאשר תרופות הזרקה לוריד. בגלל הבנת הקשר בין ההשפעות התרופתיות והתנהגותי של אתנול דורשת ידע של קורס הזמן של אתנול להגיע למוח במהלך ולאחר השתייה, אנו משתמשים בmicrodialysis vivo וגז כרומטוגרפיה עם זיהוי יינון להבה לנטר ריכוזי אתנול dialysate מוח לאורך זמן. ניסויים microdialysis התנהגותי משולבים כרוכים בשימוש במספר טכניקות. במאמר זה, ניתוח stereotaxic, הדרכה וmicrodialysis התנהגותי, שיכול להיות מותאם לבדיקת מספר רב של ניהול עצמי וNeuהשערות rochemical מרכז, נכללות רק כדי להמחיש כיצד הם מתייחסים לשלבים המאוחרים יותר של איסוף דגימה וניתוח אתנול dialysate. Dialysate ניתוח ריכוז אתנול באמצעות גז כרומטוגרפיה עם זיהוי להבת יינון, שהוא ספציפי למחקרי אתנול, מתואר בפירוט. נתונים היוצר על ידי שיטות אלה חושפים דפוס של אתנול להגיע למוח במהלך הליך ניהול עצמי, וכאשר יחד עם ניתוח נוירוכימי של אותן דגימות dialysate, מאפשרים מסקנות להתבצע ביחס להשפעה התרופתית והתנהגותי של אתנול.

שיטה כדי לקבוע את מהלך הזמן של ריכוז אתנול במוחם של חולדות במהלך אתנול אופרנטית מנהל עצמי מתוארת. גז כרומטוגרפיה עם זיהוי יינון להבה משמשת לכימות אתנול בדגימות dialysate, כי יש לו את הרגישות הנדרשת לנפחים הקטנים שנוצרו.

Microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה

שיטות של ניהול עצמי אופרנטי משמשות באופן נפוץ לחקר ההשפעות ההתנהגותיות והפרמקולוגיות של סמי ממכרים רבים, כולל אתנול.

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לנטר את רמות האתנול בדיאליזאט של המוח במהלך סשן של ניהול עצמי של אתנול. כדי להשוות מדד זה להתנהגויות סינכרוניות של ניהול עצמי, הדבר מבוצע תחילה על ידי השתלה כירורגית של מדריך למיקרודיאליזה, קנולה ובורג עיגון, ולאחר מכן אימון חולדות לניהול עצמי אופרנטי של אתנול. השלב השני הוא הרגלת החולדות לכישור של שלב הראש (head stage tether), כך שלא יעכב את הניהול העצמי של האתנול במהלך המיקרודיאליזה.לאחר מכן, מתבצעת מיקרודיאליזה במהלך מפגש של מתן אתנול עצמי, במהלכו מוכן חלק מהדיאליזט לניתוח אתנול. לאחר מכן, דגימות הדיאליזט נסרקות לקביעת ריכוז האתנול באמצעות כרומטוגרפ גזים עם גילוי יינון להבה. לבסוף, התוצאות המתקבלות מראות את מהלך הזמן של הגעת האתנול לאזור המוח הרלוונטי במהלך מפגש של מתן אתנול עצמי.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון דקירה של הזנב או של הווריד הספנוס (saphenous vein), הוא שההליך גורם להפרעה מינימלית בעת איסוף הדגימות ומאפשר מדידת תרופות לאורך זמן באזור המוח הרלוונטי בעוד החיה מבצעת משימה התנהגותית. בדרך כלל, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו יתקשו בביצועה מכיוון שהיא דורשת מספר מיומנויות מיוחדות, שרבות מהן ניתן לרכוש רק באמצעות תרגול חוזר או ניסיון. את ההליך ידגים ג'פרי דילי (Jeffrey Dilley), עוזר מחקר לתואר ראשון במעבדה שלנו.כל ההליכים בבעלי חיים המוצגים מאושרים על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת טקסס ועומדים בכל התקנות של המדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה. אוניברסיטת טקסס באוסטון היא מתקן המוסמך על ידי ALAC; עבור ניסויי מיקרודיאליזה התנהגותית אלו, נעשה שימוש בחולדות Long Evans שעברו השתלה כירורגית של קנולה בכיול 21 מעל אזור המוח הרלוונטי. על כל בעלי החיים לקבל שבוע אחד לפחות של טיפול והתאוששות לאחר הניתוח, ולוודא שהם בריאים לפני תחילת ההליכים הבאים.הנח את החולדה בתא אופרנט של Med Associates, המצויד במנוף נסוג של Lichter ובשפופרת הטיה, ואמן אותה ללחוץ על המנוף כדי לקבל גישה לתמיסת סוכרוז 10%. לאחר שהחולדה אומנה להגיב עבור תמיסת הסוכרוז, התחל בלוח זמנים הדרכתי מתאים שבמהלכו מתווסף אתנול בהדרגה לתמיסה לאורך מספר מפגשי שתייה בלילה שלפני המפגש האופרנט הלפני-אחרון. לאחר הרדמת בעל החיים ובדיקת רמת הסדציה, חבר את קפיץ הקישור לבורג הקישור בראש החולדה כדי להרגילה למערך, המורכב ממנוף מאזן, זרוע, קישור מסתובב, קפיץ ומעמד טבעות.אפשרו לחולדה לבלות את הלילה בחדר האופרנט בכלוב הבית שלה עם גישה חופשית למזון ומים, ולאחר מכן השלימו את מפגש האימון של היום הבא עם הרתמה והציוד הנלווה במקומם, יום לפני ניסוי המיקרודיאליזה. לאחר הרדמת החולדה באמצעות isof fluorine, בדקו את רמת הסדציה על ידי צביטה בבהו, והחדירו פרוב מיקרודיאליזה המוזרק בנוזל מיקרודיאליזה מלאכותי (artificial cerebral spinal fluid). קבעו את הפרוב כראוי ולאחר מכן כווננו את קצב הזרימה של הפרוב ל-0.2 µL לדקה.הניחו את החולדה בכלוב המגורים שלה בחדר התנאיים (operant room) ללינה, כאשר כל ציוד הדיאליזה מותקן, עם גישה חופשית (ad lib) למזון ומים. ביום שלאחר השתלת הפרובה, לפחות שעתיים לפני תחילת הניסוי, הגבירו את קצב הזרימה של הפרובה לקצב העבודה שלה. באמצעות מזרק Hamilton, ודאו שקצב הזרימה של הפרובה עקבי ועומד על לפחות 90% מקצב הזרימה שהוגדר.במידה ומעריכים מוליכים עצביים בדגימות הדיאליזה, יש לדגום במהלך כל שלבי הניסוי. התחילו באיסוף דגימות דיאליזה בזמן שהחיה נמצאת בכלוב המגורים שלה. אחסנו את הדגימות באופן מתאים לצורך ניתוח מאוחר יותר.העבירו בזהירות את החולדה לתא האופרנט והפעילו את התוכנית האופרנטית השולטת בתא. המשיכו לדגום בעוד החולדה ממתינה להבליטה של המנוף אל תוך התא, עד לקבלת שתי דגימות לפניבליטת המנוף. התחילו לאסוף חלק מכל דגימת דיאליזט לצורך אנליזת אתנול על ידי העברת אליקוט מתאים של הדיאליזט למבחנה מזכוכית בנפח שני מיליליטר ואיטום המבחנה באמצעות ספטום אטום לאוויר; בצעו את השאיבה והאיטום של דגימות האתנול במהירות.מכיוון שאתנול הוא חומר נדיף ונפח הדגימה קטן, הכנה לא עקבית או איטית של הדגימה תוביל לתוצאות לא מדויקות. יש לשמור את השארית לצורך אנליזה של מוליכים עצביים. תקופת השתייה של 20 דקות מתחילה לאחר שתוכנת המחשב של Med Associates דוחפת את המנוף אל תוך התא והחולדה לוחצת עליו כדי לקבל גישה לבקבוק עם תמיסת שתייה.המשיכו לדגום לאורך כל תקופת השתייה; לאחר תקופת השתייה, תוכנת המחשב תסוג את הבקבוק מהתא. השאירו את החיה בתא למשך תקופה נוספת של 20 דקות לאחר השתייה בסיום ניסוי המיקרודיאליזה. לאחר הרדמת החולדה, הוציאו את הפרובה.אם החיה אינה עוברת הרג הומני באופן מיידי, החזיר את הסותם כדי להבטיח את ויזואליזציית נתיב הגשושית. אסוף את המוח בתוך שלושה ימים מסיום הניסוי. נתח את הדגימות יחד עם סטנדרטים חיצוניים של אתנול באמצעות כרומטוגרף גז בעל גלאי יינון להבה (FID), דוגם אוטומטי של headspace המחומם ל-50 °C, ועמודה קפילרית עם הליום כפאזה ניידת.עבור הקלטה וניתוח של הכרומטוגרמות, השתמש בתוכנת תחנת עבודה לכרומטוגרפיה כדי להכין את המערכת לניתוח אתנול. השתמש במקלח מים עם סירקולציה כדי לחמם את פלטת הדוגמאות האוטומטית (autosampler) ופתח את מיכלי האוויר והמימן. לאחר מכן, הפעל את תוכנית ההפעלה.כאשר המערכת מוכנה, התחל שריפה למשך 20 דקות, שתבצע דה-קונטמינציה לסיב. הכן תמיסות סטנדרט באמצעות בקבוק מדידה נפחי של 100 milliliter כדי לדלל 238 microliters של 95%ethanol במים לנפח סופי של 100 milliliters. השתמש בדילול סדרתי ביחס של אחד לאחד ליצירת הסטנדרטים.העבירו באמצעות פיפט את התמיסות הסטנדרטיות למבחנות זכוכית ואטמו אותן בדיוק כפי שהודע בהכנת הדגימות. הקפידו להריץ בקרת מים (water blank) יחד עם הסטנדרטים. הניחו את הסטנדרטים ואת הדגימות במגש של הדוגם האוטומטי, וחממו אותם עד שכל מנת הנוזל תתאדה.להרצת התקנים והדגימות, צור רשימת דגימות המציינת איזו דגימה נמצאת בכל חריץ של הדוגם האוטומטי, וציין כי יש לנקב כל דגימה. לאחר מכן, נתב את קבצי הנתונים לתיקייה נבחרת, בחר את השיטה המתאימה לדגימות והתחל בהרצה. לאחר שהמערכת סיימה להריץ את הדגימות, ודא שהתוכנה ביצעה אינטגרציה נכונה של כל פיסגה.שרטט את גובה השיא כפונקציה של כל סטנדרט חיצוני ידוע. ריכוז אתנול. השתמש בפונקציה הלינארית המתקבלת מהנקודות כדי לבצע אינטרפולציה של ריכוז האתנול בכל דגימת דיאליזאט.איור זה מציג כרומטוגרמות לדוגמה עבור שלושה ריכוזים של תמיסות סטנדרט של אתנול ואחת עבור דגימת דיאליזאט של חולדה שנאספה בסוף סשן של administration עצמית של אתנול. שיאי האתנול צריכים להיות סימטריים יחסית, עם זמני שימור עקביים ויחס אות לרעש הגבוה מ-10. אי-עמידה בקריטריונים אלו מעידה על כך שהמערכת דורשת תחזוקה; כרומטוגרפיה איכותית וסטנדרטים תקינים יוצרים עקום סטנדרטים לינארי המשמש לחישוב ריכוז האתנול בדגימות דיאליזאט שנאספו מבעלי חיים בביצוע administration עצמית של אתנול במהלך תקופת ה-administration העצמית שלהם.ריכוזי האתנול שהופקו מהדיאליזט אינם מתוקננים להשבה של הפרובה in vivo והם מהווים רק חלק מרכיז האתנול ברקמת המוח. אם נדרשת מיקרודיאליזה כמותית של אתנול, יש לקבוע באופן ניסיוני את שבר המיצוי של האתנול המדיף מהחלל החוץ-תאי אל תוך הפרובה. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בערך בארבע עד חמש שעות, אם היא מבוצעת כראוי.שלב זה ישתנה בהתאם לאורך הסשן ההתנהגותי. השלמה מוצלחת של שלב המיקרודיאליזה בניסוי תלויה במידה רבה באיכות שלבי ההכנה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לוודא שהחולדות מטופלות היטב ושהן הורגלו לכל גירוי שעלול להסיח את דעתן במהלך ניסוי הדיאליזה, וזאת על מנת שהתנהגות ההגשה העצמית של בעל החיים לא תיפגע.

microdialysis-ethanol-during-operant-ethanol-self-administration

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים את השימוש בכרומטוגרפיית גז headspace כדי לקבוע את ריכוזי האתנול בעוברים של דגי זברה. שיטה זו מספקת כלי שימושי לניתוח איכותי וכמותי של תרכובות אורגניות נדיפות.

כרומטוגרפיית גז Headspace: טכניקה להערכת ריכוז אתנול בעוברים של דגי זברה

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשה ויעילה ליזום אופרנטית במהירות להגיב עבור אתנול בחולדות כי בניגוד שיטות סטנדרטיות, אינו מחייב מצוקת המים או סוכרזית / סוכרוז דהייה ליזום להגיב.

שיטה להערכת מאפייני החיזוק של אתנול בחולדות ללא מצוקת מים, סכרין Fading או הדרכת גישה מורחבת

אנו מתארים פרוטוקול גרימת מתגמל nonrewarding חוויות בזבובי פירות (תסיסנית) באמצעות צריכת אתנול מרצון כאמצעי לשינויים במדינות גמול.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

הפרעה לשימוש באלכוהול (AUD) היא בעיה בריאותית לאומית גדולה ונדרש ההתפתחות של טיפולים יעילים יותר כדי לקזז את הצרכים של האוכלוסייה המטופלת הזו. לשם כך, הפרוטוקול הבא מנצל שני דגמים שתייה פשוטה מכרסמים כדי להעריך את היעילות פרה של תרכובות נגד אלכוהול עופרת.

מאתר שותה מודלים בהתפתחות Pharmacotherapies לאלכוהול: הבחירה אפל, שני-בקבוק שתייה

עבודה זו מתארת פרוטוקול לכמת רמות האתנול בעובר דג זברה באמצעות כרומטוגרפיה הראש שטח גז משיטות חשיפה נכונה לעיבוד העובר ניתוח אתנול.

קוונפיקציה של רמות האתנול של עוברי דגים באמצעות כרומטוגרפיה גז החלל הראשי

מחקר זה נועד להראות כי פרדיגמת מערכת עירוי האלכוהול בסיוע מחשב פרוגרסיבי (CAIS) היא שיטה אמינה ורגישה שניתן להשתמש בה כדי לבחון את התכונות המניעות הקשורות לניהול עצמי של אלכוהול בבני אדם.

המוטיבציה לתגמול אלכוהול: מנבאים של ניהול עצמי של אלכוהול תוך ורידי ביחס פרוגרסיבי בבני אדם

מוצג כאן פרוטוקול למודל 2BC/CIE של תלות באלכוהול בעכברים לחקר הפרעת שימוש באלכוהול.

חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין בשילוב עם בחירה בשני בקבוקים למודל הפרעת שימוש באלכוהול

פרוטוקול זה מתאר פרדיגמת שתייה סטנדרטית של שני בקבוקים בכלוב ביתי לבחירה לסירוגין כדי להדגים צריכת אלכוהול בחולדות. בנוסף, הוא מספק הוראות שלב אחר שלב להגדלת הפרוטוקול הסטנדרטי עם מערכת זיהוי ליקוק עשה זאת בעצמך המאפשרת ניתוח מיקרו-מבני של התנהגות השתייה.

מידול צריכת אלכוהול במכרסמים באמצעות שתיית כלוב ביתי לבחירה בשני בקבוקים וניתוח מיקרו-מבני

תרופות עצמית הממשל קולות קולי (USV) משמשים הערכות התנהגותיות במחקר בבעלי חיים, אך לעתים רחוקות בשילוב. מטרת מאמר זה היא לתאר את היתרונות של USVs ההקלטה במהלך מינהל עצמי נהלים סמים כדי להעריך את התגובה הרגשית לחוות סמים.

הערכת קולות Ultrasonic במהלך והתרופות עצמית הממשל חולדות

למדו מיקרודיאליזה של אתנול במוח עכברושים במהלך נחישות עצמית באמצעות כרומטוגרפיית גז. שיטה זו מאפשרת ניטור רציף ומינימלי של ריכוז האתנול במוח תוך כדי ביצוע משימות התנהגותיות.

Microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה

גלה סרטונים נוספים