Name: גילוי תרופות בהנחיית: Assay אוטומטי גבוהים תוכן דלקת דג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: למדו שיטת סקרון אוטומטית לזיהוי תרכובות מכווננות דלקת בזברה Danio rerio באמצעות מיקרוסקופיה בזמן אמת. השיטה מאפשרת זיהוי פנוטיפים חיסוניים וקטלוג תרופות פוטנציאליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<p class="jove_content"&gt; אנו מודים Nadeshda וולף, נאדין Eschen וסוזאנה דלונג עבור בעלי חיים מעולה. CW נתמך על ידי המלגה לתואר שלישי מתוך תוכנית הלמהולץ &quot;<em&gt; BioInterfaces</em&gt; הבינלאומי בוגר בית הספר &quot;(BIFIGS). תמיכה נוספת ניתן על ידי מענק KIT-RISC ועל ידי מארי קירי הבינלאומי Reintegration גרנט במסגרת תוכנית 7 הקהילה האירופית Framework (PIRG07-GA-2010-267552) כדי CG. AHS נתמך על ידי BOLD (ביולוגיה של הכבד והתפתחות מחלות הלבלב) - רשת הדרכה מארי קירי ראשוני (238,821). UL נתמך על ידי Dopaminet FP7 (תוכנית המסגרת השביעית) (223,744).</p&gt;

<ol><li>Peterson, R. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+and+use+of+small+molecules+for+probing+biological+processes+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Discovery and use of small molecules for probing biological processes in zebrafish.</a> Methods Cell Biol. 76, (2004).</li>
<li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug.+Discov%22%5BJournal%5D)">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nat. Rev. Drug. Discov. 4, 35-44 (2005).</li>
<li>Loynes, C. A., Martin, J. S., Robertson, A., Trushell, D. M., Ingham, P. W., Whyte, M. K., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pivotal+advance%3A+pharmacological+manipulation+of+inflammation+resolution+during+spontaneously+resolving+tissue+neutrophilia+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pivotal advance: pharmacological manipulation of inflammation resolution during spontaneously resolving tissue neutrophilia in the zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 87, 203-212 (2009).</li>
<li>Martin, J. S., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+in+vivo+zebrafish+models+to+understand+the+biochemical+basis+of+neutrophilic+respiratory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Soc.+Trans%22%5BJournal%5D)">Using in vivo zebrafish models to understand the biochemical basis of neutrophilic respiratory disease.</a> Biochem. Soc. Trans. 37, 830-837 (2009).</li>
<li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., Trushell, D. M., Elworthy, S., Ingham, P. W., Whyte, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li>
<li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42(2007).</li>
<li>Redd, M. J., Kelly, G., Dunn, G., Way, M., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+macrophage+chemotaxis+in+vivo%3A+studies+of+microtubule+function+in+zebrafish+wound+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Motil.+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Imaging macrophage chemotaxis in vivo: studies of microtubule function in zebrafish wound inflammation.</a> Cell. Motil. Cytoskeleton. 63, 415-422 (2006).</li>
<li>D'Alençon, C. A., Peña, O. A., Wittmann, C., Gallardo, V. E., Jones, R. A., Loosli, F., Liebel, U., Grabher, C., Allende, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+chemically+induced+inflammation+assay+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput chemically induced inflammation assay in zebrafish.</a> BMC Biol. 8, 151(2010).</li>
<li>Haas, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+signaling+mediates+self-organizing+tissue+migration+in+the+zebrafish+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Chemokine signaling mediates self-organizing tissue migration in the zebrafish lateral line.</a> Dev Cell. 10, 673-680 (2006).</li>
<li>Luetjohann, D. S., Shah, A. H., Christen, M. P., Richter, F., Knese, K., Liebel, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sciencenet%27+-+towards+a+global+search+and+share+engine+for+all+scientific+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Sciencenet' - towards a global search and share engine for all scientific knowledge.</a> Bioinformatics. 27, 1734-1735 (2011).</li>
<li>Liebel, U., Kindler, B., Pepperkok, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvester%27%3A+a+fast+meta+search+engine+of+human+protein+resources%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Harvester': a fast meta search engine of human protein resources.</a> Bioinformatics. 20, 1962-1963 (2004).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

<p class="jove_content"&gt; כאן אנו מציגים אוטומטי לחלוטין תפוקה גבוהה האסטרטגיה ההקרנה מה שמאפשר זיהוי של modulatory החיסון תרכובות בהקשר בעלי חיים שלם. ובכך מאפשר ניטור של תגובה דלקתית חריפה<em&gt; In vivo</em&gt; ובזמן אמת.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; אנו מספקים פרוטוקול ליישם דג הזברה כאורגניזם מודל בעל ערך עבור גילוי תרופות או סמים המאמצים repurposing, שכן השפעות התרופה על גיוס ליקוציט על הפצעים ניתן ללמוד בקלות יחסית בהקשר של המערכת מתפקדת במלואה החיסון המולדת. היתרון הייחודי של הגישה שלנו היא העובדה כי הפציעה כימי הופך מניפולציה הזחלים ידנית מיושן, ולכן התרת אוטומציה הקרנה בפורמט תפוקה גבוהה.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; בנוסף, תופעות לוואי או רעילים, כמו גם חזקות מחוץ היעד אפקטים ניתן להעריך בקלות עם הצעת הגדרת. ספריית ה-FDA אישר זאת לא מכיל חומרים רעילים בכל הריכוזים ההקרנה נתון. עם זאת, אנו מציעים עבור תרכובות רעילות לכאורה להשוות את מערך הנתונים זמינים (למשל modulatory פנוטיפ החיסונית, ריכוז התרופה) בין חברי הנוכחי חומר תרופתי באותו מעמד בספרייה נבדק. חברי הרעילות של המשפחה החומר, כי אחרת מפעילה פנוטיפ מבטיח modulatory החיסונית, יכול להערכה מחדש בריכוזים נמוכים יותר, אם יהיה צורך.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; אנחנו הוכיחו את האפשרות של תרופות לסווג באופן אוטומטי על פי אפקט המופעל modulatory המערכת החיסונית שלהם. תרופות השייכות לקטגוריה של תרכובות נוגדות דלקת לא ניתן תוקף ניסויים עצמאיים, ברוב של תרכובות הפעלת השפעתם באופן תלויה במינון. ארבעה מתחמים המזוהים כפרו ברזולוציה תרופות פוטנציאליות היה עד כה לא יאושר בהתאם. כמו כן, עולה כי זו קטגוריה מסוימת modulatory החיסונית קשה לתאר, שכן לא רק תרופות המשפיעות על ההחלטה עד כה תוארו בספרות. עם זאת, 3 מ -4 תרופות להערכה מחדש הראו מגמה אנטי דלקתי בריכוזים גבוהים יותר טוחנת. אופטימיזציה של הקריטריונים הסף שהוגדרו אמפירית צריך לעזור להפחית את מספר תוצאות חיוביות שגויות.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; כמו כן, הציג את הטכניקה מציעה את האפשרות להיות מנוצל לזיהוי של מוטציות בגנים המשפיעים על התנהגות הנדידה ליקוציט<sup&gt; 8</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; סיכום, השיטה המוצעת יכולה להקל ולהאיץ את גילוי תרופות או סמים repurposing מאמצי מניב פוטנציאליים מבנים להוביל חדשים עם מידע זמין ונגיש על סובלנות סמים, רעילות, המינון, כמו גם פוטנציאל מחוץ היעד אפקטים. לכן, כיהן אסטרטגיה, פשוט העלות והזמן חיסכון בשלבים הראשונים של פיתוח התרופה.</p

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> דימתיל sulphoxide </td><td> קרל רוט GmbH &amp; Co KG </td><td> A994.2 </td><td></td></tr><tr><td> (II) נחושת סולפט נטול מים </td><td> קרל רוט GmbH &amp; Co KG </td><td> PO23.1 </td><td></td></tr><tr><td> ה-FDA אישר תרופה הספריה </td><td> אנזו מדעי החיים </td><td> BML-2841-0100 </td><td></td></tr><tr><td> 384 microwell צלחת בלתי מחייב, μClear </td><td> גריינר </td><td> 781906 </td><td> שחור </td></tr><tr><td> אולימפוס סריקה ^ R </td><td> אולימפוס </td><td></td><td></td></tr><tr><td> צפריר נוזלי קומפקטי טיפול Workstation </td><td> Caliper </td><td></td><td></td></tr></tbody>
 </table>

גילוי תרופות בהנחיית: assay אוטומטי גבוהים תוכן דלקת דג הזברה

Facilitating Drug Discovery: An Automated High-content Inflammation Assay in Zebrafish

הזחלים דג הזברה הם נוחים במיוחד בעל חיים כל מולקולה קטנה מסכי 1,2 בשל גודלם הקטן והקלות היחסית של מניפולציה תצפית, כמו גם את העובדה כי תרכובות יכול פשוט להוסיף מים לרחצה נספגים בקלות כאשר מנוהל &lt;1% DMSO פתרון. בשל בהירות אופטית של הזחלים דג הזברה ואת הזמינות של קווי מהונדס המבטאים חלבונים ניאון leukocytes, דג הזברה להציע את היתרון הייחודי של ניטור תגובה דלקתית חריפה in vivo. כתוצאה מכך, ניצול דג הזברה גבוהה תוכן מסכי מולקולה קטנה שמטרתן זיהוי של modulatory החיסון תרכובות עם קצב העברת נתונים גבוה הוצע 3-6, דבר המצביע על אינדוקציה תרחישים דלקת כגון חתכים מקומיים ברקמת הסנפיר, נזק לייזר מכוונת אל פני השטח של חלמון עוברים 7 או קטיעה הסנפיר 3,5,6. החיסרון העיקרי של שיטות אלו עם זאת היההדרישה של מניפולציה הזחל ידנית על מנת לגרום לפציעה, ובכך למנוע תפוקה גבוהה ההקרנה. מבוא של דלקת הנגרמת כימית (סנטר) assay 8 בוטלו המכשולים הללו. מאז הפציעה נגרם באופן כימי את מספר העוברים, כי ניתן לטפל בעת ובעונה אחת הוא כמעט בלתי מוגבל. טיפול זמני של הזחלים דג הזברה עם נחושת סלקטיבי גורם מוות של תאים בתאי השיער של מערכת קו לרוחב והתוצאות בגיוס granulocyte מהירה neuromasts פצועים. התגובה הדלקתית ניתן בעקבות בזמן אמת באמצעות תרכובת מהונדס cldnB :: GFP / lysC :: DsRED2 6,9 הזחלים דג הזברה המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק בתאים neuromast, כמו גם כמה אדומים ניאון תיוג גרנולוציטים חלבון. על מנת לגבש אסטרטגיה ההקרנה שיאפשר שני ניתוחים גבוהה תוכן תפוקה גבוהה הצגנו טיפול הנוזל רובוטית ו MICR אוטומטי משולבoscopy עם סקריפט תוכנות מותאמות אישית מפותחת. סקריפט זה מאפשר כימות אוטומטי של התגובה הדלקתית על ידי הבקיע את השטח הכבוש על ידי אחוז leukocytes ניאון אדומים בתוך שטח מוגדר באופן אמפירי סביב הפצועים neuromasts ניאון ירוקים. יתר על כן, אנו עיבוד נתונים אוטומטי, טיפול, דמיון מודרך, אחסון מבוססים על מותאם אישית שפותחה MATLAB ו הסקריפטים פייתון. בקיצור, אנחנו מציגים את המסך אוטומטית HC / HT המאפשר בדיקה של תרכובות כימיות עבור השפעתם על התפתחות ייזום, או ברזולוציה של תגובה דלקתית granulocytic. פרוטוקול זה משמש נקודת פתיחה טובה ניתוחים מעמיקים יותר של מנגנוני סמים המסלולים המעורבים תזמור תגובת החיסון המולדת. בעתיד, הוא עשוי לסייע בזיהוי ההשפעות הרעילות או מטרה מחוץ בלתי נסבלים בשלבים המוקדמים של גילוי תרופות ועל ידי כך להפחית את הסיכונים פרוצדורליים ועלויות לפיתוח התרופה.

כאן אנו מתארים assay הרומן גבוהה תוכן דלקת הנגרמת כימית מכוון לזיהוי modulatory החיסון bioactives. יש לנו שילוב בהצלחה מיקרוסקופ עם אוטומטיות מותאמות אישית סקריפטים תוכנה שפותחו המאפשרים כימות אוטומטי של התגובה הדלקתית כמו גם עוד עיבוד נתונים, ניתוח, כרייה, ואחסון.

גילוי תרופות בהנחיית: Assay אוטומטי גבוהים תוכן דלקת דג הזברה

זחלי דגי זברה נוחים במיוחד לסריקות של מולקולות קטנות במודל של בעל חיים שלם1,2, זאת בשל גודלם הקטן והקלות היחסית שבה ניתן לבצע מניפולציות ו...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא ביצוע סריקה פנוטיפית לזיהוי פעילות של ויסות חיסוני של תרכובות באמצעות בדיקת דלקת in vivo בדגי זברה. דבר זה מושג תחילה על ידי חלוקת זחלי דגי זברה לפלטה של 384 בארות, ולאחר מכן מתווספות לזחלים התרכובות שנסרקו כדי לאפשר חדירה לרקמות.לאחר מכן, מוסיפים תמיסת נחושת גופרתיים (copper sulfate) כדי לגרום לנזק ספציפי לרקמה. לבסוף, מחליפים את התרכובים ואת נחושת הגופרתיים במצע טרי. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות את מידת חדירת הלוקוציטים הספציפית לרקמה לאורך זמן, באמצעות ניתוח נתוני מיקרוסקופיה in vivo בזמן אמת.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת השראה בו-זמנית של דלקת במאות פרטים, ובכך מאפשרת אוטומציה ניסויית ואנליטית. את הפרוצדורה תדגים כריסטינה ויטמן, סטודנטית לדוקטורט מהמעבדה שלי. עבור בדיקת הסנטר, הגדירו זיווגים קבוצתיים בין דגים מסוג AB הומוזיגוטים כפולי-טרנסגניים לבין דגים מסוג פרא, אספו עוברים באמצעות השבחה טבעית וגדלו 50 עד 70 עוברים לכל צלחת במצע E3 בטמפרטורה של 29 °C עד שלושה ימים לאחר ההפריה.בדקו את כל הזחלים תחת סטריאוסקופ פלואורסצנטי כדי לוודא ביטוי של רפורטר פלואורסצנטי, היעדר דלקת ספונטנית והתפתחות תקינה בהתאם לגיל. לאחר הכנת מצע סינון והוספה של 20 µL לבארות של פלטת 384 בארות, העבירו זחל בודד שהורדם ב-74 µL של מצע לכל בארה. השתמשו בקצה פיפטה שנקטע לקוטר של 2 mm עם קצה מיקרו-פיפטה גמיש.מקמו את הפשפש במנח צדי בתוך הבאר. בצעו את כל שלבי טיפול בנוזלים הבאים באמצעות עמדת עבודה רובוטית לטיפול בנוזלים, כדי להבטיח טיפול סימולטני בכל הפשפשים עבור הטיפול התרופתי. בצעו שאיבה והזרקה (pipette up and down) חמש פעמים כדי לערבב את התרכובות בלוחית מלאי התרופות. הוסיפו 16 µL מלוחית מלאי התרופות בריכוז 7.5 x ללוחית הסריקה וערבבו חמש פעמים במהירות של 10 µL לשנייה.כסו את פלטת הסריקה בנייר אלומיניום והדגירו אותה למשך שעה אחת ב-29 °C. כדי להשרות פגיעה כימית, הוסיפו 10 µL של תמיסת עבודה של נחושת גופיתית (copper sulfate) בריכוז 120 µM לכל באר.הוסיפו את תערובת הביקורות השליליות לארבע פעמים והדגרירו שוב למשך שעה אחת בטמפרטורה של 29 °C. שטפו את העוברים על ידי הסרה והחלפה של 80 µL מדיום מכל באער פעמיים, החל מ-90 דקות. לאחר הטיפול הראשוני בנחושת, רכשו תמונות באמצעות מיקרוסקופ אוטומטי הפוך עם עדשת Forex.הגדירו את רמת ה-Z הראשונית כך שמסות עצביות מהקו הצידי האחורי הימני והשמאלי יהיו גלויות, ודגמו תמונה מכל באר פעם בשעה. השתמשו בערוץ Brightfield 3 ובערוצי GFP בארבעה מישורי מיקוד. תוכנת ה-LabView המותאמת אישית יוצרת תמונות במיקוד מורחב מארבעת מישורי המיקוד עבור כל אחד מהערוצים.לאחר מכן, התמונות ממוזגות כדי ליצור תמונת שכבה (overlay) סופית ב-RGB. כלי לזיהוי תבניות מזהה נוירומות בתוך תמונות השכבה ב-RGB ויוצר אזור עניין שמוגדר אמפירית סביב הנוירומות; לבלחocytes פלואורסצנטיים אדומים המקיפים את הנוירומות הפגועות ניתן ציון, מה שמוביל לקריאה ראשית של אחוז השטח occupied על ידי leukocytes או pale. בממוצע, 95% מהלרוות מזוהות כראוי ויכולות לעבור לאחר מכן עיבוד נתונים נוסף.ההצלחה של ניסויים בודדים מוערכת באמצעות מפות דלקת או מפות עיניים. הנתונים החיוורים מקודדים בצבעים, כאשר ירוק בהיר מייצג מדד דלקת ראשוני גבוה, ושחור מציין היעדר דלקת. סקירה מהירה זו מאפשרת זיהוי מהיר של ניסויים שנכשלו, אותם ניתן להוציא לאחר מכן מניתוח הנתונים המשך.מפות iMaps בזמן 0.0 ובזמן 0.5 מראות בבירור האם יש לכלול ניסוי בעיבוד נתונים נוסף. בקרות נחושת מופיעות בגוונים שונים של ירוק, בעוד שבארי בקרת DMSO מופיעים בירוק כהה או בשחור בזמן 0.5. הדלקת כמעט חלפה בבקרות נחושת, המוצגות כעת בגוונים כהים של ירוק או בשחור לצורך עיבוד הבקרות.מבצעים ממוצע של 32 חזרות הביקורת ומחשבים את סטיית התקן. רק נקודות נתונים הנמצאות בטווח של שתי סטיות תקן נכללות בניתוח. ערך הממוצע של ביקרת השלילה DMSO נקבע כאלף, והערך הממוצע הגבוה ביותר של ה-PAOL עבור ביקרת הנחושת נקבע כ-1; עבור כל תרכובת, ערך ה-PAOL מחושב באמצעות אינטרפולציה או אקסטרפולציה ליניארית ביחס לביקרות המתאימות בצלחת הניסוי.הנתונים הגולמיים הנורמליים מניסויים חוזרים ממוצעים כדי להפיק קריאה סופית, שהיא מדד הדלקת הנובע מפתרון הדלקת. לאורך זמן, מבוצע התאמה של רגרסיה לא לינארית אקספוננציאלית מונוטונית ביחס לדלקת הראשונית. באמצעות שימוש בנוסחה זו, שבה אפס הוא המדד לתגובה הראשונית בזמן השווה לאפס ואחד קשור לשיפוע הגודל לאורך זמן ליצירת מרחב המאפיינים, מוחלת רגרסיה לא לינארית וניתוח אשכולות מחלק את מרחב המאפיינים לאזורים אופייניים, ובכך מאפשר זיהוי אוטומטי של מועמדים מעניינים מקטגוריות שונות של ויסות חיסוני.כל הפרמטרים מוצגים בתרשים הדו-ממדי המבוסס על הפרמטרים ACE של אפס ו-ace של אחת. שגרת טיפול בנתונים יוצרת דפי אינטרנט המספקים סקירה מהירה של התוצאות, וכן תצוגה מפורטת לבקשת המשתמש. קישורים רכים למסדי נתונים רלוונטיים אחרים, ביולוגיים, כימיים והטרוגניים, משולבים אף הם כדי לספק משאב בעל ערך למחקרים השוואתיים וחדשניים באמצעות שגרות אלו.נקבעו סטנדרטים נאותים של נתונים ומידע מטא עבור אחסון ארוך טווח של נתונים אלו; במסגרת סריקת פיילוט, בוצע ניתוח של ספרייה הכוללת 640 תרכובות ביו-אקטיביות ידועות המאושרות על ידי ה-FDA, כדי לבחון את השפעתן על התחלה, התקדמות או רזולוציה של תגובה דלקתית גרנולוציטית. על בסיס ההשפעות שנצפו, סווגו ארבעה סוגים של פנוטיפים ממודולטורים של מערכת החיסון שעשויים להעיד על מודוסים שונים של פעולה: אנטי-דלקתית, אנטי-רזולוציה, פרו-דלקתית ופרו-רזולוציה. 45 מתוך 640 התרכובות הפעילו השפעות אנטי-דלקתיות משמעותיות על ידי הפחתת מדד הדלקת הראשוני ל-50% או פחות.בתוך קטגוריה זו, נמצאו שישה תרכובות השייכות למחלקה הפארמקולוגית של תרופות אנטי-דלקתיות מוכחות. לאישור תקפותו של גישה זו, לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להפוך סריקה פנוטיפית in vivo של פעילות תרכובות למודולציה של מערכת החיסון למערכת אוטומטית במידה רבה, מה שמאפשר הן רכישת נתונים עקבית והן ניתוח בהקשר של בעל חיים שלם.

facilitating-drug-discovery-an-automated-high-content-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מדווחים על פיתוח של מערכת הדמיה ניתוח אוטומטי של העוברים מהונדס דג הזברה בצלחות multiwell. זה מדגים את היכולת לאמוד את ההשפעות תלויות במינון של מולקולה קטנה, BCI, על גדילה פיברובלסטים ביטוי פקטור כתב גנים לספק טכנולוגיה להקמת תפוקה גבוהה כימיים מסכי דג הזברה.

פיתוח הדמיה ניתוח אוטומטיות עבור מסכי דג הזברה כימיים.

המעבדה שלנו פיתחה מערכת שהיא שימושית לצורך זיהוי של כמה התנהגויות שונות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת הדמיה אוטומטית תפוקה גבוהה רומן. המערכת יכולה לשמש לאיתור שינויים עדינים בהתנהגות לאחר הזחלים שנחשפו לרעלים או תרופות סביבתיים.

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

מאמר וידאו זה מתאר את צינור התפוקה הגבוה שכבר נקבע בהצלחה להדביק ולנתח מספר גדול של עוברי דג הזברה מתן כלי רב עוצמה חדש לבדיקת מתחם וגילוי סמים באמצעות האורגניזם חוליות בעלי החיים כולה.

הקמה ואופטימיזציה של הגדרת תפוקה גבוהה ללמוד<em&gt; סטפילוקוקוס epidermidis</em&gt; ו<em&gt; Marinum Mycobacterium</em&gt; זיהום כמודל לגילוי תרופות

דג הזברה הוא אורגניזם ניסיוני מצוין ללמוד תהליכים התפתחותיים חוליות ומחלות של בני אדם מודל. כאן, אנו מתארים פרוטוקול על אופן ביצוע מסך כימי תפוקה גבוהה מדריך לעוברי דג הזברה עם כל הר באתר הכלאה (רוצה) לקריאה החוצה.

מסך ידני מולקולה קטנה מתקרב תפוקה גבוהה באמצעות עוברי דג הזברה

הפרוטוקול מתאר נלוקסון דג זברה למבוגרים עם ביולוגי; לאחר מכן לנתח, הכנת המעי עבור cytometry, מיקרוסקופיה קונפוקלית ו- qPCR. שיטה זו מאפשרת ניהול של תרכובות ביו לעקוב אחר ספיגת מעיים ואת הגירוי המערכת החיסונית המקומית עורר. זה רלוונטי לבדיקה את הדינמיקה מעיים של אמצעי מניעה שבעל-פה.

צנרור שבעל-פה של דג זברה למבוגרים: מודל להערכת ספיגת מעיים של תרכובות ביו

המטרה של פרוטוקול זה היא למדוד את זמן העברה של fluorescently עם תוויות מזון דרך המעי של הזחל דג זברה אופנה תפוקה גבוהה.

מדידת תפוקה גבוהה הבטן מעבר הזמן באמצעות זחל דג זברה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור נוגדן הפלורסנט בתיווך זיהוי של חלבונים בהכנות שלמות של עוברי הדגים והזחלים.

כל הר אימונוהיסטוכימיה בזיבפיש עוברים וזחלים

Zebrafish מודלים מבע לאפשר סינון תפוקה גבוהה ההקרנה והדמיה פלורסנט של תאים סרטניים אנושיים ב vivo microenvironment. פיתחנו זרימת עבודה עבור קנה מידה גדול, הקרנת תרופות אוטומטיות על החולה הנגזרת דגימות לוקמיה ב דג זברה באמצעות מיקרוסקופ אוטומטי מצויד במיקרוסקופ הדמיה יחידה.

הקרנת התרופה של החולה העיקרי הנגזר גידול Xenografts ב Zebrafish

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט להשתלת xenograft אוטומטית של גידול בזחלי דג זברה באמצעות מערכת הזרקה רובוטית חדישה. כמו כן, אנו מציגים סרטוני הזרקה ונתוני ולידציה המדגימים את הביצועים המוצלחים של המערכת.

אוטומציה של השתלת גידול בזחלי דג הזברה לחקר סרטן ורפואה

ניתוח חזותי (VA) היא גישה חדשה לניתוח נתונים באופן אינטראקטיבי. בסרטון הזה, אנו דנים את הבעיה עומס הנתונים שהובאו על ידי תפוקה גבוהה ניסויים ביולוגיים, ולהציע VA כפתרון לבעיה כזו. הסרטון מדגים ניתוח בתוך ובין מערכי נתונים החיסונית באמצעות כלי VA נקרא המחזה.

להקל על ניתוח נתונים החיסוני עם טכניקות Analytic חזותית

למדו שיטת סקרון אוטומטית לזיהוי תרכובות מכווננות דלקת בזברה Danio rerio באמצעות מיקרוסקופיה בזמן אמת. השיטה מאפשרת זיהוי פנוטיפים חיסוניים וקטלוג תרופות פוטנציאליות.

גילוי תרופות בהנחיית: Assay אוטומטי גבוהים תוכן דלקת דג הזברה

גלה סרטונים נוספים