Name: הקלטות קלאמפ תיקון בתאי שיער באוזן פנימיים מבודדות מדג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: למדו שיטה לבידוד תאי שיער בריאים מאוזן פנימית של דג זברה לצורך הקלטות קלאמפ תיקון. טכניקה זו מאפשרת חקר תכונות ביופיזיקליות של תעלות תלויות מתח ומנגנוני שחרור נוירוטרנסמיטרים במערכות השמיעה והשיווי המשקל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ממומן על ידי NSF (0854551).

1. הכנות שלפני ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 6 פתרונות (ראה טבלה 1 ליצירות): (א) 100 המ&quot;ל NZR (דג זברת צלצול של רגיל), (ב) 50 המ&quot;ל NZR + Tricaine (MS222), (ג) 10 המ&quot;ל NZR + BSA; (ד) 100 לוקאס המ&quot;ל (נמוך Ca 2 + פתרון), (ה) 10 המ&quot;ל לוקאס + פפאין, (ו) 100 המ&quot;ל K +-פתרון פנימי. פתרונות (א), (ב), (ד) (ו) ניתן לאחסן לתקופה של עד חודש אחד ב 4 ° C. פתרונות (ג) ו (ה) צריכים להיות מוכנים ביום ההתנסות. כל הפתרונים צריכים להיות בטמפרטורת חדר לפני תחילת ניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית ולמלא ארבעה 35 צלחות פטרי מ&quot;מ בערך באמצע עם פתרונות (א), (ג), (ד) ו (ה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך מנה לנתח באמצעות מילוי צלחת פטרי 60 מ&quot;מ עם Sylgard (Dow Corning, Midland, MI) ולאחר מכן חיתוך חלל לתוכו, שיאפשר לדגים לשבת זקוף בלי להטות מעל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לפחות שני כלי בידוד תא על ידי ההדבקה של סוף זקיק שיער כלב לסוף כוספסטר פיפטה בדבק מגע, ומאפשרת את השיער כדי להאריך מעבר לקצה פיפטה בכ 0.5 סנטימטר. ההשערות מכלבים רכי פרווה כמו לברדור רטריבר וWeimaraners לעבוד היטב. </li></ol> 2. בידוד של שמיעה ושיווי משקל מבוך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב דג זברה מבוגרת אחד על ידי טבילה בכוס המכילה NZR + Tricaine. חזותי לנטר את הזימים עד שכל תנועות opercular חדלו. מתן עשר דקות נוספות לפני ההסרה ושטיפת דגים עם NZR טרי. נהלים אלה אושרו על ידי הטיפול בבעלי החיים המוסדי והשתמשו ועדה (IACUC) מאוניברסיטת פפרדין אבל אישור יש לקבל מהמוסד שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להצמיד את הדג לביתור צד הגבה צלחת על ידי החדרת סיכה אחת סטנדרטית תפירה ישר (כ -2.5 סנטימטרים) באמצעות כל שקע עין וסיכה שלישית דרך הציר הגבה-הגחון כשליש למחצית מהמרחק מהראש לזנב כפי שמודגם באיור 1 א &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת זום (0.62-5x) מיקרוסקופ לנתח סטריאו המצויד בעינית 10x, להשתמש במספריים באביב (כלי מדע פיין מספר קטלוג 15000-02) לחשוף את המוח וקטע קצר של חוט השדרה על ידי הסרת גג הגולגולת מנקודה כ 0.5 סנטימטר זנב לרמה של הזימים קדימה לאפו של הדג. חותך את חוט השדרה והרם את המוח עם מלקחיים עדינים (כלי מדע פיין מספר קטלוג 11251-30) בעת גזירת העצבים בעמוד השדרה ובקבצים מצורפים אחרות; להסיר את המוח ולהשליך (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחצית הגחון של כמוסת הגולגולת שנותרה יוצרת &quot;קערה&quot; המכילה את האיברים באוזן הפנימי. הקפד על otoliths הבולט, הלבן, האטום בlagenas וsacculi ממוקם בצורה סימטרית בסוף הזנב של כל אוזן פנימית ואת מיקומו otoliths הרוחבי utricle יותר rostrally (האיורים 1C ו4A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקערה של עצם על ידי חיתוך כל attachmen הגחון ורוחבts תוך הרמתו בעדינות אל מחוץ לראש עם מלקחיים עדינים. הנח אותו לתוך צלחת פטרי המכילה לוקאס (1D דמויות ו4B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשני זוגות של מלקחיים עדינים, להתנפץ לרסיסים את הקערה בקו האמצע שלה על ידי גרירת שני קצוות לרוחב של העצם ומושך אותם בנפרד או לחלופין להפריד את חצי הימניים ושמאליים על ידי הוספת נקודות של המלקחיים במרכז ובחטטני את החצאים זה מזה. הסר את שני מבוכים מעצם שימוש במלקחיים עדינים (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את המבוכים לזהות השמיעתי ו- end איברי שיווי משקל: תעלות החצי העגולות, utricles, sacculi וlagenas (האיור 4C). אזורי רדרדים מתחת לכל אבן אוזן הם maculae המכיל את תאי שיער. כמו כן, רצועה של ורוד בתוך ampullae של תעלות החצי העגולות מזהה cupula שבו תאי השיער נמצאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את otoliths מlagena וutricle באמצעות מלקחי הקנס ( <stronז&gt; נתונים 2 ו 4C). אין צורך להסיר את אבן אוזן משקיק מכיוון שדבר עלולה לגרום ניזק לתאי שיער saccular. </li></ol> 3. בידוד תאי שיער <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות העברת פלסטיק פיפטה (מספר פישר סיינטיפיק קטלוג 13-711-09:00), להזיז את איברי קצה הקערה ובה לוקאס + פפאין מזעור נפחיו של נוזל מועבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת מבנים אלה בפתרון זה עבור 30 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתום תקופת הדגירה, להעביר את המבנים לצלחת המכילה NZR + BSA ודגירה בפתרון זה במשך לפחות 30 דקות. תאי שיער יישארו בריאים בפתרון זה לתקופה של עד ארבע שעות, אך ידרדרו לאחר 1-2 שעות לאחר בידוד (ראה שלבים הבאים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כהכנה לבידוד תא, להעביר אחד מאיברי הקצה לצלחת המכילה NZR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לlagenas וutricles, השתמש שיער כלב בעדינות כדי להרים את maculae גיליונות של TI אפיתל ורדרדssue שמכיל את תאי שיער (איור 3 א). ניתן גרף maculae החוצה (באמצעות שיער כלב) מתחת לotoliths של sacculi, וcupulae ממקומותיהם בתוך ampullae של התעלות הקמורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשני כלי תא בידוד שהוכנו בשלב 1.4, triturate המקולה או cupula ליצירת שדה פסולת המכיל את תאי שיער (איור 3 ב &#39;). אפשר התאים לפחות חמש דקות ליישוב על תחתית הצלחת לפני שעבר אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר לצלחת השלב של מיקרוסקופ ההפוך מצוידים באופטיקה לעומת השלב. ציית לתאים בהגדלת 40X ושים לב לגיוון במורפולוגיה. תאים רבים אבוקדו בצורה ואילו אחרים הם ארוכים ודקים. הנוכחות של צרורות שיער apical מזהה אותם כתאי שיער ושלב בהירות מבטיחה את בריאותם. Photomicrographs של תאי שיער מבודדים מוצגים באיור 5. </li></ol> 4. תיקון Clamping תאי שיער דג זברה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במסגרת הכנות לperfoמדורגות תיקון הקלטות 5,6, להכין תמיסה הפנימית amphotericin המכיל כדלקמן: המקום 5 מ&quot;ג amphotericin B (סיגמה A4888) לתוך צינור microcentrifuge מ&quot;ל 1.5 ומלאו עם DMSO μl 100. מייד מערבולת פתרון זה עבור 10-20 שניות עד שכל amphotericin נמס. ואז, פיפטה μl 625 K +-פתרון פנימי לתוך צינור microcentrifuge שני. הוסף 10 μl של פתרון amphotericin לפתרון K +-פנימי ומערבולת כאמורה לעיל. פתרון amphotericin המניות יימשך שעות אחדויות, אבל להשליך את הפתרון הסופי לאחר שעה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפברק pipettes תיקון מBF 150-86-10 ורוסיליקט זכוכית (סאטר מכשירים) באמצעות חולץ רב שלבים (סאטר P-1000). Pipettes צריך להטות קוטר של כ 2 מיקרומטר ויהיה התנגדויות של 1-3 MΩ את הפתרונים בטבלה 1. הגדרות על החולץ שעובד טוב הנם כדלקמן: חום = הרמפה minus10, משוכה = 0, מהירות = 18, עיכוב = 1, לחץ = 600. הצורה שלקצה פיפטה טובה ניכר מהתצלום בג ההבלעה של איור 5. pipettes בלאנט &quot;בצורת קליע&quot; הם העדיפו כפי שהם מציעים גישת התנגדות לפחות במהלך הקלטות אלקטרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במחט 28 מד Microfil מזרק (MF28G-5; מכשירי Precision העולם) למלא האלקטרודה הקלטה באמצע הדרך עם K amphotericin המכיל פתרון +-פנימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק את האלקטרודה לheadstage של מגבר מהדק תיקון. החל -10 mV, 10 צעדים במתח ms 10 הרץ ולשמור על לחץ חיובי באלקטרודה כפי שהוא תמרן דרך ממשק האוויר / פתרון ועד לתחתית של צלחת ההקלטה ליד התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את האלקטרודה orthogonally לתא מראה בריא. כאשר האלקטרודה היא קרובה מספיק לתא כך שהוא מתחיל להתרחק מהפתרון החוצה זורם, להפוך במהירות את הלחץ, החלת ואקום קל לאלקטרודה עד התא &quot;קופץ&quot; עליו. מייד להפסיק את היניקה על ההאלקטרודה הדואר ולהחיל פוטנציאל החזקת -70 mV לחלק הפנימי של האלקטרודה. בתוך כמה שניות חותם gigaohm יהווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב העוברים הנוכחיים הקיבולים, בתחילתם וסיומם של שלבי המתח המופיעים מייד לאחר היווצרות חותם. המשך לעקוב אחר הניקוב של הקרום מתחת האלקטרודה ידי amphotericin על ידי צפייה בעוברים לגדול בגודל לגודל המרבי שלהם (בכעשר דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאשר את הקמתה של תצורה כל התאים (מחורר) בתא בריא, לעורר K + זרמים חיצוניים על ידי יישום hyperpolarizing וdepolarizing צעדים של מתח. רוב תאי שיער חיצוניים יש זרמים בולטים (ראה איור 6). </li></ol> 5. נציג תוצאות איור 4 מראה תמונות שצולמה במהלך השלבים של בידוד תא. בפנל, את otoliths קשורים לlagenas, saccluli וutricles ניתן לראות through השכבה הדקה של העצם שoverlies. מבנים אטומים אלה מספקים ציוני דרך נוחים כדי לסייע בהסרה הבטוחה של איברי הקצה, מהחיה במהלך השלבים המאוחרים יותר של הניתוח. לוח ב &#39;מציג את &quot;הקערה&quot; של עצם המכילה את מבוכיו השלמים ואת otoliths הבולט בutricles, lagenas וsacculi. לוח C מראה מבוך שהוסר מהעצם. שים לב אבן אוזן הגדולה עם את השוליה בlagena, אבן אוזן נטיף קרח בצורה בשקיק ואבן אוזן צורת השעועית בutricle. חלק מהגיוון בגודל ומורפולוגיה ראתה בתאים מבודדים מlagena מודגם באיור 5. תא בריא מזוהה בקלות כשלב בהיר עם היקף חד. צורות סלולריות ניתן לחלק באופן גס לשני סוגים: אבוקדו בצורה (AVO) וארוכים ודקים (thn) למרות שהגודל של תאים בתוך כל קבוצה יכול להשתנות במידה ניכרת (השווה לדוגמא 1 AVO וAVO 3). הבלעה מציגה מקבץ שלשלושה תאים שאינם מבודדים לחלוטין אחד מהשני. הצבע השחור והמראה פרטני של התא בב הבלעת קלות מזהים תא זה מת. ג הבלעה מראה את קצה פיפטה תיקון הממחישה את הצורה והממדים המתאימים להקלטה מתאים אלה. העקבות הנוכחיות מוצגות באיור 6 התקבלו בתגובה לhyperpolarizing וdepolarizing מדרגות הפוטנציאל שהוטלו על תא דומה לAVO 2 מוצג באיור 5 lagena. תגובות נוכחיות בתאים בגדלים ובצורות שונים יכולות להשתנות מציעות מגוון נרחב של ערוצי משלימי מתח מגודרים. איורים 1-3: קריקטורות הממחישות שלבים בבידוד של תאי שיער. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig1.jpg" /> איור 1. הסרה של גולגולת capsule המכיל את מבוכי האוזן הפנימיות מדג הזברה.. הפין הקריב צד הגבה דג זברה לנתח עד צלחת. ב &#39;. גולגולת פתוחה, להסיר ולסלק מוח. ג. שימו לב otoliths בutricles, lagenas וsacculi. D. הסרת חלק גחון של כמוסה המכילה את מבוכי גולגולת. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig2.jpg" /> איור 2. הסרת מבוכים מכמוסת גולגולת.. לפצח את כמוסת גולגולת בקו האמצע שלה. ב. הסר מבוכים מעצם. ג. הסר את otoliths מlagenas וutricles באמצעות מלקחיים. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig3.jpg" /> איור 3. בידוד של תאי שיער ממבוכים.. רם בעדינות את האמאculae עם שערות של כלב. ב &#39;. Triturate maculae עם שתי שערות של כלב. ג משתמש תאי שיער מבודדים למהדק תיקון. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig4.jpg" /> איור 4. תמונות צולמו במהלך שלבים בבידוד של תאים בודדים. א לאחר ההסרה של המוח, הקשורים לotoliths שתי lagenas וsacculi (חיצים) וutricles (ראשי חץ) ניתן דמיין. B. לאחר הסרת הגחון חלק מגולגולת הכמוסה המכילה את האיברים באוזן הפנימי מבעלי החיים. הקריקטורה במחצית הימנית של B מזהה את מיקומם של utricle השמאל, lagena ושקיק. הקו המקווקו מציין את המיקום המשוער של מבוך השמאל. ג. מבוך עכבר (תצוגה המדיאלי) D: ציור קריקטורה הממחיש חלקים מרכזיים של מבוך ב-C. : חצי קדמימעגלית תעלה, ב: תעלה אופקית, ג: תעלה אחורית, ד: utricular אבן האוזן, דואר: saccular אבן אוזן, f: lagenal אבן אוזן. סרגל קנה מידה בD מייצג 1 מ&quot;מ לA ו-B, 0.5 מ&quot;מ לC ו-D <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig5.jpg" /> איור 5, תאים בריאים מבודדים מlagena הממחיש את המגוון של מורפולוגיה; AVO:. תאים בצורת אבוקדו; thn: תאים, ארוכים ודקות. הבלעה: אשכול של שלושה תאים מבודדים חלקי; הבלעה ב: תאים מתים; ג הבלעה: קצה אלקטרודה תיקון השתמש בהקלטות אלקטרו מתאי שיער דג זברה. סרגל קנה מידה = 20 מיקרומטר חל על הדמות הראשית וכל השיבוצים. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/4281/4281fig6.jpg" /> איור 6. זרמים שנרשמו בתיקון הדקו תא שיער. תגובות בממוצע בתא (t הדומהo AVO 2 באיור 5) לשלוש מצגות של צעדי מתח יושמו בהפרשים קבועים של 10 MV מ-140 mV עד +70 mV מפוטנציאל החזקת -70 mV. שים לב לנוכחי inactivating שמופיע בפוטנציאל depolarized עוד. בהירויות צעד מתח מוצגות לצד כמה מהעקבות.

<ol><li>Lewis, R. S., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltage-+and+ion-dependent+conductances+in+solitary+vertebrate+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Voltage- and ion-dependent conductances in solitary vertebrate hair cells.</a> Nature. 304, 538-5341 (1983).</li>
<li>Art, J. J., Fettiplace, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+of+membrane+properties+in+hair+cells+isolated+from+the+turtle+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Variation of membrane properties in hair cells isolated from the turtle cochlea.</a> J. Physiol. 385, 207-242 (1987).</li>
<li>Sugihara, I., Furukawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+functional+aspects+of+two+different+types+of+hair+cells+in+the+goldfish+sacculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Morphological and functional aspects of two different types of hair cells in the goldfish sacculus.</a> J. Neurophysiol. 62, 1330-1343 (1989).</li>
<li>Lee, S., Briklin, O., Hiel, H., Fuchs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-dependent+inactivation+of+calcium+channels+in+cochlear+hair+cells+of+the+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium-dependent inactivation of calcium channels in cochlear hair cells of the chicken.</a> J. Physiol. 583, 909-922 (2007).</li>
<li>Horn, R., Marty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+activation+of+ionic+currents+measured+by+a+new+whole-cell+recording+method%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Muscarinic activation of ionic currents measured by a new whole-cell recording method.</a> J. Gen. Physiol. 92, 145-159 (1988).</li>
<li>Rae, J. R., Cooper, K., Gates, P., Watsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+access+perforated+patch+recordings+using+amphotericin+B%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Low access perforated patch recordings using amphotericin B.</a> J. Neurosci. Meth. 37, 15-26 (1991).</li>
<li>Lumpkin, E. A., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Ca2%2B+entry+through+mechanosensitive+channels+localizes+the+site+of+mechanoelectrical+transduction+in+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Detection of Ca2+ entry through mechanosensitive channels localizes the site of mechanoelectrical transduction in hair cells.</a> Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 92, 10297-10301 (1995).</li>
<li>Liang, J., Burgess, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gross+and+fine+dissection+of+inner+ear+sensory+epithelia+in+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Gross and fine dissection of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish (Danio rerio).</a> J. Vis Exp. 27, e1211(2009).</li>
<li>Hudspeth, A. J., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+voltage-+and+ion-dependent+conductances+in+saccular+hair+cells+of+the+bull-frog%2C+Rana+catesbeiana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of voltage- and ion-dependent conductances in saccular hair cells of the bull-frog, Rana catesbeiana.</a> J. Physiol. 400, 237-274 (1988).</li>
<li>Hudspeth, A. J., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+electrical+resonance+and+frequency+tuning+in+saccular+hair+cells+of+the+bull-frog%2C+Rana+catesbeiana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A model for electrical resonance and frequency tuning in saccular hair cells of the bull-frog, Rana catesbeiana.</a> J. Physiol. 400, 275-297 (1988).</li>
<li>Parsons, T. D., Lenzi, D., Almer, W., Roberts, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-triggered+exocytosis+in+an+isolated+presynaptic+cell%3A+capacitance+measurements+in+saccular+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Calcium-triggered exocytosis in an isolated presynaptic cell: capacitance measurements in saccular hair cells.</a> Neuron. 13, 875-883 (1994).</li>
<li>Kim, M. -H., Vickers, E., von Gersdorff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamp+capacitance+measurements+and+Ca2%2B+imaging+at+single+nerve+terminals+in+retinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch-clamp capacitance measurements and Ca2+ imaging at single nerve terminals in retinal slices.</a> J. Vis Exp. 59, e3345(2012).</li>
<li>Housley, G. D., Ashmore, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+the+action+of+acetylcholine+on+isolated+outer+hair+cells+of+the+guinea+pig+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+Lond.+B%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of the action of acetylcholine on isolated outer hair cells of the guinea pig cochlea.</a> Proc. R. Soc. Lond. B. 244, 161-167 (1991).</li>
<li>Nicolson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+hearing+and+balance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Rev.+Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of hearing and balance in zebrafish.</a> Ann. Rev. Genetics. 39, 9-22 (2005).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

נתיחה מדוקדקת של איברי הקצה והטיפול העדין של התאים היא קריטית לבידוד המוצלח של תאים בריאים, שלמים ופעילים מבחינה פיזיולוגית לשיער. דבקות את הטיפים הבאים תבטיח הצלחה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קל יותר להשיג תאים בריאים מדגים קטנים (2-2.5 סנטימטר אורך). דגים גדולים יותר יש טיפי שומן רבים יותר שלא ברורה להדמיה במהלך תהליך הנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש להקפיד בעת הסרת otoliths, אשר לשכב תאי השיער. הימנע ממגע עם התאים כאשר תופסים את otoliths עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התוצאות הטובות ביותר מתקבלות כאשר maculae וcupulae ניתקים כגיליונות והתאים, נכתשו מהאפיתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו מוצאים את השימוש בשיער כלב לtriturate תאים להיות עדיף על שיטות אחרות, כוללים שימוש בריסי אדם 7 שאינם מחודדים וכפחות גמישים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התיקון Clamping, הפעלת לחץ חיובי לtהוא אלקטרודה כשהוא עובר דרך ממשק האוויר / פתרון חשוב לשמור על הקצה נקי. שחרורו של הלחץ החיובי כדי לאפשר לתא &quot;לקפוץ&quot; על האלקטרודה הוא גם חשוב. שיטה זו מנקה את נפח קטן של תמיסה המכילה amphotericin מרחק מהקצה, ובכך להגדיל את הסיכוי ליצירת חותם gigaohm עם התא. בניסויים שלנו אנו משתמשים בטכניקת הקלטת התיקון המחוררת במקום תצורה המסורתית יותר כל התאים בגלל השבריריות של התאים. מנסה &quot;ללכת עד תא&quot; לעתים קרובות תוצאות בהפסד של חותם gigaohm. </li></ol> השיטה המתוארת כאן תניב מאה תאי שיער בריאים לכל חיים. הטכניקה יכולה להתבצע בטמפרטורת חדר ולא דורשת ציוד מיוחד מעבר למיקרוסקופ לנתח. דו&quot;ח קודם ביופיטר מתאר את הנתיחה של האוזן הפנימית בדג הזברה בגישה הבטנית 8. מחברים אלה מדגימים dissection של איברים שלמים, paraformaldehyde-קבועי אוזן פנימיים. אנו מעודדים את הקורא לצפות בסרטון זה לצורך ההשוואה עם השיטות שלנו. אחד יתרונות של השיטות שהוצגו כאן הוא הקבלה של תאים שימושיים לחקירות פיסיולוגיות בשידור חיים. מלבד השימוש בם בניסויים מהדקים תיקון ללמוד את ערוצי מתח המגודרים (כפי שמוצג כאן) את השימוש בתאים אלה ניתן להאריך ללמוד תהודת תא 9,10, שחרור הנוירוטרנסמיטר לפקח על ביצוע מדידות קיבול 11,12, לחקור neuromodulation הנגרם על ידי ההפעלה של ערוצי יגנד המגודר 13, כמו גם לנצל את השפע של מידע שניתן ללמוד מן השימוש במוטציות המשפיעות על שמיעה ושיווי משקל 14.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם פתרון </td><td> מתכון </td></tr><tr><td> (א) NZR (דג זברת צלצול של רגיל) (במ&quot;מ) </td><td> 116 NaCl, KCl 2, 2 CaCl 2, 3 גלוקוז, 5 Na +-HEPES, pH 7.35. </td></tr><tr><td> (ב) NZR + Tricaine </td><td> NZR + 0.02% sulfonate 3-aminobenzoic חומצת אתיל אסתר תאן (סיגמה A5040). </td></tr><tr><td> (ג) NZR + BSA </td><td> NZR + 0.4% שור סרום אלבומין (סיגמה A2153). </td></tr><tr><td> (ד) לוקאס (נמוך Ca 2 + פתרון) (במ&quot;מ) </td><td> 100 NaCl, 2 KCl, 0.05 CaCl 2, 0.05 MgCl 2, 3 גלוקוז, 30 Na +-HEPES, pH 7.35. </td></tr><tr><td> (ה) לוקאס + פפאין </td><td> לוקאס + 0.05% L-ציסטאין (Sigma C1276) + 0.2% פפאין (סיגמה P3375). </td></tr><tr><td> (ו) K +-פתרון פנימי (במ&quot;מ) </td><td> 52 K 2 SO 4,38 KCl, 1 K +-EGTA, 5 K +-HEPES, pH 7.3. </td></tr></tbody></table> טבלת 1. פתרונות.

הקלטות קלאמפ תיקון בתאי שיער באוזן פנימיים מבודדות מדג הזברה

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish

ניתוחי תיקון מהדק של ערוצי מתח המגודרים בתאי שיער חושיים שבודדו ממגוון מינים שתוארו קודם לכן 1-4 אבל הסרטון הזה מייצג את היישום הראשון של השיטות הללו לתאי שיער מדג הזברה. כאן אנו מדגימים שיטה לבודדה תאי שיער בריאים, ללא פגע מכל הקצה, אברי האוזן הפנימיים: שקיק, lagena, utricle ותעלות קמורות. יתר על כן, אנחנו מדגימים את הגיוון בגודל והמורפולוגיה של תאי שיער ולתת דוגמה של סוגי הקלטות מהדקות תיקון שניתן להשיג. היתרון של השימוש במערכת מודל דג זברה זה על פני אחרים נובע מהזמינות של דג זברת מוטציות המשפיעות על שמיעה ושיווי משקל. בשילוב עם השימוש בקווים מהונדסים וטכניקות אחרות שעושות שימוש בניתוח גנטי ומניפולציות, בידוד התא ושיטות אלקטרו הציג כאן צריך להקל על תובנה רבה יותר לתוך תאי שיער תפקידי pשכב בתיווך מערכות חוש אלו.

מטרת סרטון זה היא להדגים הליכים לקבלת תאי שיער בריאים, ללא פגע מהאיברים הפנימיים של דג זברת האוזן בוגר ולאחר מכן להשתמש בם ללימודים מהדקים תיקון שנועדו לאפיין את מאפייני biophysical של ערוציהם מתח המגודרים.

ניתוחי patch clamp של תעלות תלויות-מתח בתאי שיער חישתיים שבודדו ממגוון מינים תוארו בעבר1-4, אך זה...

מטרתו של נוהל זה היא להדגים את השיטות להשגת תאי שיער בריאים ושלמים מאיברי הקצה השמיעתיים והווסטיבולריים של דגי זברה בוגרים, על מנת שניתן יהיה להשתמש בהם בבדיקות patch clamp. מחקרים אלו נועדו לאפיין את התכונות הביופיזיקליות של התעלות המופעלות על ידי מתח שלהם. זאת משיגים תחילה על ידי הסרת המוח מהדג, ולאחר מכן הוצאת החלק הוונטרלי של קופסת המוח המכיל את המבוכים.השלב השני הוא שבירת קערת העצם כדי לבודד את המבחולות המכילות את איברי הקצה, ה-Saccule, ה-utricle והתעלות חצי-המעגליות. לאחר מכן, משתמשים בשערת כלב כדי להסיר מאיברי הקצה את שכבות האפיתליום המכילות את תאי השערה. השלב הסופי הוא בידוד תאי שערה בודדים על ידי הפרדה עדינה של שכבות האפיתליום באמצעות שתי שערות כלב.בסופו של דבר, ניתן לבצע הקלטות בשיטת patch lamp בתאי שיער מבודדים כדי לאפיין את תכונותיהם של תעלים תלויי-מתח. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות הוא שהיא מדגימה כיצד להפיק תאי שיער חיוניים מדגם אורגניזם של דג הזברה, שניתן לביצוע מניפולציות גנטיות בו. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הפיזיולוגיה השמיעתית והווסטיבולרית, כגון שאלות השואפות להבין את המנגנונים השולטים בשחרור מוליכים עצביים מתאים המתווכים שמיעה ושיווי משקל.התחילו את הפרוצדורה בהכנת שישה תמיסות שונות בהתאם לכתב היד המצורף. לאחר מכן, סמנו ומלאו 4 צלחות פטרי בקוטר 35 מילימטר בערך עד מחציתן בתמיסות המצוינות בכתב היד המצורף. לאחר מכן, הכינו כלי ניתוח על ידי חיתוך חלל בצורת דג בתוך צלחת פטרי בקוטר 60 מילימטר הממולאת ב-sil guard שהתקשה.פעולה זו תמנע מהבעל חיים להתהפך במהלך הנתיחה. הכינו לפחות שני כלי בידוד תאים על ידי הדבקת קצה הזקיק של שערה של כלב לקצה של פיפטת זכוכית מסוג pasta בעזרת דבק מהיר, כך שהשערה תבלוט מעבר לקצה הפיפטה בכ-0.5 סנטימטרים. כעת, הקריבו דג זברה בוגר אחד על ידי טבילתו בכלי כימי המכיל תמיסת רינגר רגילה לדגי זברה (NZR) ו-trica.עקבו ויזואלית אחר הזימים עד להפסקת כל תנועות האוזניים. המתינו לפחות 10 דקות נוספות לפני הוצאת הדג ושטיפתו ב-NZR טרי. לאחר מכן, הניחו את הדג בצלחת הניתוח כאשר צדו הגבי (dorsal) פונה כלפי מעלה.החדירו סיכת תפירה סטנדרטית אחת דרך כל שקע עין, וסיכה שלישית דרך הציר הדורסו-ונטרלי. במרחק של כשליש עד חצי מהמרחק מהראש לזנב, תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי מגדיל, חשפו את המוח ומקטע קצר של חוט השדרה על ידי הסרת גג הגולגולת מנקודה הנמצאת כ-0.5 סנטימטרים קודם לרמה של הזימים ועד לאפו של הדג, באמצעות מספרי קפיץ. לאחר מכן, חתכו את חוט השדרה והרימו את המוח בעזרת פינצטה עדינה תוך כדי חיתוך העצבים וחיבורים אחרים.לאחר מכן, הוצא והשלך את המוח. החלק הוונטרלי שנותר של קפסולת הגולגולת יוצר מעין קערה המכילה את איברי האוזן הפנימית. התבונן באווליטיים הלבנים והאטומים הבולטים של ה-OTA ב-legina וב-sculli, הממוקמים באופן סימטרי ברבע הקצה של כל אוזן פנימית, ובאווליטיים של ה-utricle הממוקמים לטרלית.ספירה נוספת. מבנים אלו משמשים כנקודות ציון שימושיות המסייעות בהסרה שלמה של המבוך באמצעות פינצטה עדינה ומספרי קפיץ. הסר את קערת העצם על ידי חיתוך כל ההיצמדות הוונטרלית והלטרלית תוךempre הרמה עדינה שלה מתוך הראש.בשלב הבא, הניחו אותו בצלחת פטרי המכילה תמיסת סידן נמוכה או low cas. פצלו את הגולגולת בקו האמצע שלה, והפרידו בין החצי הימני לשמאלי על ידי הכנסת קצותם של פינצטה עדינה למרכז ופתיחת החצאים זה מזה. לאחר מכן, הוציאו את שני המבוכים (labyrinths) מהעצם.בחנו את המבוכים וזהו את איברי הקצה השמיעתיים והווסטיבולריים: התעלות החצי-מעגליות, ה-utricle, ה-sacculus וה-lagena. הסירו בזהירות את ה-otoliths מה-lagena ומה-utricle באמצעות פינצטה עדינה.בפרוצדורה זו, העבירו את האיברים הקצביים לצלחת המכילה locas ו-propane. בעזרת פיפטת העברה מפלסטיק, דגרו מבנים אלו למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. בתום תקופת הדגירה, העבירו את המבנים לצלחת המכילה NZR ו-BSA ודגרו למשך 30 דקות לפחות.הכנות נוספות לבידוד תאים. העבר את אחד האיברים הקצביים, לדוגמה את ה-legina, אל הצלחת המכילה NZR. צלחת זו מונחת לאחר מכן על הבמה של מיקרוסקופ סטריאו זום לדיסקציה.השתמשו בשערת כלב כדי להרים בעדינות מהמאקולה את גליון הרקמה האפיתליאלית הוורודה המכיל את תאי השערה. ניתן להסיר את ה-mace מה-sculli וה-uracil, ואת ה-kae ניתן לבודד מהמיקומים שלהם בתוך התעלות החצי-מעגליות. בעזרת שניים מכלי בידוד התאים שהוכנו קודם לכן, טחנו את המאקולה כדי ליצור שטח של שברים שיכיל את תאי השערה.המתינו לפחות חמש דקות עד שהתאים ישקעו לתחתית לפני הזזת הצלחת. לאחר מכן, העבירו את הצלחת לבמה של מיקרוסקופ הפוך המצויד באופטיקה של ניגודיות פנים. צפו בתאים תחת הגדלה של 40 פעמים.שימו לב למגוון במורפולוגיה של התאים. חלק מהתאים הם בצורת אבוקדו בעוד שאחרים הם ארוכים ודקים. נוכחותם של צרורות שערות אפיקליים מעידה על תאי שערה, והבהירות במיקרוסקופ הפאזה מבטיחה את בריאותם.עבור הקלטות בשיטת patch מחורר (perforated patch), הכין תמיסה המכילה amphotericin על ידי הנחת 5 mg של amphotericin B בתוך מבחנת צנטריפוגה של 1.5 mL. לאחר מכן, הוסף 100 µL של DMSO ובצע ערבול מהיר (vortex) מיידי של המבחנה למשך 10 עד 20 שניות עד להמסה מלאה של ה-amphotericin. בשלב הבא, העבר בפיפטה 625 µL של תמיסת פנים של potassium ion למבחנת מיקרו-צנטריפוגה שנייה.לאחר מכן, הוסיפו 10 µL של תמיסת האמפוטריצין לתמיסה הפנימית של יוני האשראי וערבבו ב-vortex למשך 10 עד 20 שניות נוספות. הכינו פיפטות פאץ' (patch pipettes) מסיבי זכוכית בורוסיליקט. באמצעות מושך פיפטות רב-שלבי, יש להגיע לקוטר קצה של כ-2 µm ולהתנגדות שבין 1 ל-3 MΩ.פיפטות בעלות קצה קהה בצורת קליע מועדפות, מכיוון שהן מציעות את התנגדות הגישה הנמוכה ביותר במהלך הקלטות אלקטרופיזיולוגיות. לאחר מכן, השתמש במחט מזריק microfill במידה 28 כדי למלא פיפטת patch עד מחציתה בתמיסה פנימית של יוני אשלגן המכילה amphotericin. הצמד פיפטה זו לראש המגבר (head stage) של מערכת ה-patch clamp כדי לאפשר הקלטות patch clamp.ראשית, הפעל לחץ חיובי על האלקטרודה בעת הורדתה דרך הממשק שבין האוויר לתמיסה, עד לתחתית צלחת ההקלטה בקרבת התאים. לאחר מכן, מקם את האלקטרודה בניצב לתא שנראה בריא. כאשר האלקטרודה קרובה מספיק כך שהתא מתחיל להתרחק מהתמיסה הזורמת החוצה, הפוך במהירות את הלחץ כדי ליצור ואקום קל באלקטרודה עד שהתא ייצמד אליה.הפסיקו מיד את השאיבה באלקטרודה כדי לאפשר היווצרות של חסם גיגה-אוהם (giga ohm seal) עם התא. השלימו שלבי מתח היפר-פולריזציה (hyperpolarizing) חוזרים של 10 millivolts לאלקטרודה ועקבו אחר השתנות זרם הקיבול (capacitive current transience). המשיכו לנטר את נקבי הממברנה המושרים על ידי amphotericin ככל שגודל השתנות הזרם גדל למקסימום.כדי לאשש את ביסוס תצורת ה-perforated patch בתא בריא, עוררו זרמים תלויי-מתח על ידי החלת מדרגות פוטנציאל של היפר-פולריזציה ודפולריזציה. ברוב תאי השיער קיימים זרמי יציאה בולטים המגיעים לאינאקטיבציה מהירה במהלך דפולריזציה ממושכת. איור זה מציג את החלק הוונטרלי של מארז המוח לאחר הסרת המוח.ניתן לראות את האוטוליטים הקשורים ל-tulo, ל-genus ול-sculli, וכן את אלו הקשורים לשני ה-utricle, דרך העצם הדקה המכסה אותם לאחר הסרת קערת העצם. נוכחות האוטוליטים מסייעת בזיהוי מיקום המבוכים. הקו המקווקו באיור מציין את ההיקף המקורב של המבוך השמאלי.כאשר המבוך מבודד, ניתן לזהות את איברי הקצה השמיעתיים והווסטיבולריים, כגון ה-s, ה-legina, השקיק (utricle) והתעלות החצי-מעגליות. האיור ממחיש את מיקומם של מבנים אלה: A, B ו-C הם התעלות החצי-מעגליות. D הוא השקיק, E הוא ה-s, ו-f הוא ה-lega.המגוון במורפולוגיה של תאי השיער ניכר בדמות זו של תאים שבודדו מה-lega. התאים נחלקים בקירוב לשני סוגים, בעלי צורה דקה או צורת אבוקדו. תאים בריאים נראים בהירים בבדיקת פאזה, עם קווי מתאר חדים וצרורי שיער בולטים בניגוד אליהם.לתאים מתים, המוצגים כאן בתמונה המוקטנת B, מראה גרנולרי שחור. איור זה מציג את התגובות הממוצעות בתא לשלוש הגשות של מדרגות מתח שהחלו בתוספות של 10 millivolt ממינוס 140 millivolt ועד פלוס 70 millivolt, עם פוטנציאל החזקה של מינוס 70 millivolt. שימו לב כי זרם האינאקטיבציה מופיע בפוטנציאלים דפולריזציה גבוהים יותר.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע רישומים אלקטרופיזיולוגיים כבר 90 דקות מתחילת הפרוצדורה. יתרה מכך, אם שלב ה-tri נדחה ואיברי הקצה נשמרים ב-BS, solution, ניתן להשיג תאים בריאים עד ארבע שעות לאחר תחילת הדיסקציה. הכנה זו, בשימוש בשילוב עם מוטציות גנטיות נפוצות של zebrafish, מספקת מערכת מודל ייחודית לחקר הגורמים המולקולריים העומדים בבסיס המנגנונים של חוסר איזון בשמיעה.

patch-clamp-recordings-in-inner-ear-hair-cells-isolated-from-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הזחל דג הזברה לייצג את חוליות first מודל המערכת כדי לאפשר הקלטה סימולטני מהדק תיקון של שריר מוטורי עצבי היעד השדרה השלד. וידאו זה מדגים את שיטות מיקרוסקופיות משמש לזיהוי שווי סגמנטלי מוטורי עצבי שרירים תאים היעד, כמו גם מתודולוגיות עבור הקלטה של ​​כל סוג תא.

מותאמים הצמד תיקון הקלטות מ-מוטור נוירון שרירים יעד השלד דג הזברה

Whole-cell-clamp תיקון הקלטות של עצב השמיעה דנדריטים סיבים בבית סינפסה סרט פנימי תא שיער שבלול יונקים.

הקלטות Postsynaptic ב דנדריטים מביא פנייה שבלול תאים שיער פנימית: שחרור Multivesicular ניטור ב סינפסה סרט

פרוטוקול זה מתאר טכניקה הנקראת אלקטרופיזיולוגיה של מהדק טלאי שלם, שהיא שיטה לחקר תכונות חשמליות של נוירוני מאוטנר ותאים רטיקולוספינליים אחרים בעוברים של דגי זברה.

אלקטרופיזיולוגיה של מהדק טלאי תאי שלם: שיטה לחקר תכונות חשמליות של נוירונים

סרטון זה מדגים רישום של אותות חשמליים מתאי עצב afferent בזחל זברה משותק על ידי מיקום מיקרופיפטה ליד גנגליון הקו הצידי ויצירת חותם רופף ללכידת אותות. התמיסה החוץ תאית שומרת על הכדאיות העצבית בתהליך זה.

ניטור אותות חשמליים מתאי עצב Afferent בזחל של דג זברה משותק

סרטון זה מדגים את טכניקת מהדק המדבקה למדידת זרמים יוניים בגופי תאי נוירון חושיים באוזן הפנימית. הוא מפרט את ההכנה והשימוש בפיפטת מהדק טלאי מלוטשת מלאה בתמיסה פנימית המכילה אמפוטריצין B, המנקב את הממברנה כדי לאפשר תנועת יונים תוך שמירה על התנאים התוך-תאיים. פולסי מתח מופעלים כדי להפעיל ולתעד את פעילות תעלת היונים, ומספקים תובנות לגבי תכונותיהם והתנהגותם.

הקלטות מהדק טלאי מחורר של גופי תאי עצב חושיים באוזן הפנימית

מקור: Lukasz, D., et al. הדמיית סידן in vivo של תאי שיער בקו הרוחב בדג זברה זחל. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים הדמיה חיה של זרם סידן בתאי השיער בקו הצדדי של זחל דג זברה טרנסגני משותק באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. גירוי מכני של צרורות שיער באמצעות פולסים נוזליים גורם לכניסת סידן דרך תעלות מכניות ותעלות מגודרות מתח, אשר מוצגות בזמן אמת באמצעות מחווני פלואורסצנטיות. השיטה מדגישה את הדינמיקה של סידן אפיקלי ובסיסי בתאי שיער נוירומסטים, ומבהירה את תפקידם בזיהוי תנועת מים.

הדמיית דינמיקת סידן בתאי שיער בקו הרוחב של דג זברה זחל

שיטה פשוטה להקליט פוטנציאלי שדה תאיים במוח הקדמי דג זברת הזחל מתוארת. השיטה מספקת...

הקלטת אלקטרו מוח קדמי בזחל דג זברה

פיתחנו הכנת מוח השדרה שלמה כבל כדי להקליט ולעקוב אחר פעילות חשמלית באמצעות הקלטת מהדק תיקון מתאי העצב ותאי מאוטנר reticulospinal אחרים בעוברי דג הזברה. לפיכך, אנו מסוגלים להקליט זרמים מעוררים ומעכבים הסינפטי, פעילות ערוץ מתח מגודרת ופוטנציאל פעולה מתא העצב מרכזי בעובר מתפתחת.

תיקון הקלטות קלאמפ מתאים עוברי דג הזברה מאוטנר

כתב יד זה מתאר שיטות הקלטות אלקטרו מן הנוירונים השדרה של עוברי דג הזברה הזחלים. הכנת שומרת נוירונים באתרו ולעיתים קרובות כרוך דיסקציה מינימום. שיטות אלה מאפשרות לחקר אלקטרו מגוון של נוירונים שדרה, מרכישת רגישויות חשמל הראשונית דרך שלבי זחל מוקדם.

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

פרוטוקול זה מתאר שיטות כדי להקליט התגובה גזע המוח של עכברוש לאחר הלידה הגורים. לבחון התפתחות תפקודית של תאים שיער החיצוני, ההליך ניסיוני של קלאמפ תיקון שלם-תא הקלטה בתאים מבודדים שיער החיצוני מתואר צעד אחר צעד.

גזע המוח השמיעתית תגובה והקלטה החיצוני תא שיער תיקון שלם-תא קלאמפ בחולדות כמחנכת

דג זברה היא מערכת מודל יש תכונות רבות ערך כולל בהירות אופטית, התפתחות חיצוני מהירה,, חשוב במיוחד בתחום השמיעה ושיווי, מבחוץ ממוקם תאי שיער חישה. מאמר זה מתאר כיצד הטרנסגניים דג זברה יכול לשמש כדי assay שיער-תא mechanosensation ותפקוד presynaptic בוססו.

בתחום ההדמיה סידן Vivo של קו הצד תאים שיער בזחל דג זברה

למדו שיטה לבידוד תאי שיער בריאים מאוזן פנימית של דג זברה לצורך הקלטות קלאמפ תיקון. טכניקה זו מאפשרת חקר תכונות ביופיזיקליות של תעלות תלויות מתח ומנגנוני שחרור נוירוטרנסמיטרים במערכות השמיעה והשיווי המשקל.

הקלטות קלאמפ תיקון בתאי שיער באוזן פנימיים מבודדות מדג הזברה

גלה סרטונים נוספים