Name: השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: למד השתלת אב עורקים בטניים אורתוטופית בעכברים לחקר מחלת כלי דם לאחר השתלה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מורפומטרי עקבי בדגמים אלוגניים וסינגניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי משאב הליבה של NIH P30 אובריאן המרכז (DK 079337).

1. הכנת Presurgical <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליכים כירורגיים, לא משנה כמה נעשה בזהירות, מביא ללחץ משמעותי. כדי למזער את ההשפעות של לחץ כזה ולמקסם מילואים, בעלי חיים צריכים להישמר בביבר ללפחות 72 שעות לפני השימוש 10,11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כלים כירורגיים, גזה, ומטליות חייבים להיות סטרילי. אין צורך להשתמש בכפפות סטריליות המספקות רק את קצות תפר מגע או מכשירי התחום האופרטיבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לhemostasis, זוהי החובה של לחצי clamping הם המינימום הכרחי. ניזק לכלי השיט עקב לחץ מוגזם או התרשלות בטיפול יגרום לפקקת, וכתוצאה מכך לשיתוק ברגל האחורית, איסכמיה מעי, ומוות תוך 24 שעות. מצאנו כי שימוש במהדק, עם לחץ של לא יותר מ 2 גרם / 2 סנטימטר מבטל את הבעיה. מלחציים אלה ציינו בטבלת 1. לחצי קלאמפ הם מצוינים במפרט הטכני למהדק שנעשה על ידי instrumen כירורגית באיכות הגבוההיצרנים לא. אנחנו גילינו שמלחציים זולים או חד פעמיים מלחציים אוניברסליים יפעילו יותר מדי לחץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקום של כלי טחונות כמו גם את המיקומים היחסיים של אב העורקים בבטן והנחותה וריד הנבוב (IVC) הוא זן תלוי. תוכל גם למצוא וריאציות קטנות בין עכברים בודדים, במיוחד במיקום של כלי ביטחונות. </li></ol> 2. מבצע תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים יכולים להיות מורדמים עם (אינדוקצית 1.5-2.5%, תחזוקה 1.0% באוויר) או עם isoflurane פנטוברביטל (55-65 מ&quot;ג / ק&quot;ג). Pentobarbital מטיל מגבלת זמן (עד 1.5 שעות), אבל מספק למנתח עם האפשרות לסובב את בעלי החיים לגישה טובה יותר, אם תרצה בכך. זמן הרדמה ניתן להרחיב עד 2 שעות על ידי צבת 2-3 טיפי ההרדמה בעת צורך על המעי או בכבד במהלך הניתוח. קטמין / xylazine (משקל 100 מ&quot;ג / קילו משקל גוף ולקטמין 7 מ&quot;ג / ק&quot;ג לXylazine, IP) יכול לשמש גם על ידי מנתחים מאומנים היטב שcan לסיים את ההליך בתוך 1-1.5 שעות, אבל יש לו טווח מינונים בטוח צר יותר. בארה&quot;ב, השימוש בפנטוברביטל הפך בעייתי יותר בשנים האחרונות, בשל אספקה ​​קצרה. זה הכרחי כי את עומק ההרדמה להיות פיקוח על מנת להיות בטוח שזה מספיק. רפלקס בוהן הקמצוץ הוא המדד הטוב ביותר לעומק מתאים אבל כדאי גם לציין את קצב נשימה ותנועות אחרות גם כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אינדוקצית הרדמה, להשתמש בג&#39;ל הסרת שיער או גילוח להסרת שיער בבטן הגחון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר החיה על לוח ההפעלה באמצעות קלטת מעבדה כדי להחזיק אותו בעמדה פשוט איברים. לוח הפעלה מתכתית מתיר את השימוש בכרית חימום מתחתיו כדי לספק תמיכת טמפרטורה במהלך הניתוח. אנחנו באופן ידני לשלוט על הטמפרטורה של כרית החימום, שהיא יחידת צרכן כיתה לשימוש ביתי. הטמפרטורה נשמרת בין 35-38 מעלות. לוח ההפעלה המתכתי הוא גם קל לעקר בין הליכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">לחטא את האזור באמצעות חומרי חיטוי כמו כלורהקסידין, ואחריו לשטוף אתנול. חזור על תהליך זה שלוש פעמים, כדי להבטיח חיטוי הולם. זה יהיה גם להסיר את כל חתיכות חתוכות תכשירי שיער, אם קיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים לעשות חתך דרך קיר הגוף על מנת לחשוף את הקרביים של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במטלית כותנה, לדחוף את הקרביים בצד לחשוף את הכולים הגדולים של הבטן. הקרביים מונחים על פיסת הגזה שהורטבה בתמיסת מלח חמימה כדי לשמור אותו הלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות נתיחה בוטה, לנתח את אב העורקים בבטן בזהירות רבה מרקמה הסובבת. היזהר מאוד בניתוח הכלי מהווריד הנבוב הנחותה. יהיו סניפים אחד או יותר, כגון עורקים המותני, שיש להסירו בזהירות וצרבו. הקטע של אב עורקים מבותרים צריך להיות מתחת כלי הכליות ומעל ההסתעפות של אב עורקים בעורקי הירך. סעיף זה יכול לשמש כחומר תורם לרביםשני נמעני s, תלוי כמה הסתעפות כולים קיימים וגודל חית תורם הזרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את תפר ממש מתחת לעורקי הכליה ואחרת, ממש מעל ההסתעפות. בעזרת מספריים מחלקים את אב העורקים, יש לשטוף את השתל באופן מלא עם המלח המכיל 200 U / הפרין מ&quot;ל. להחזיק בזהירות קצה אחד של כלי השיט ולטפטף תמיסת המלח, כך שהוא עובר על הספינה על ידי כוח הכביד. אל תנתנו לבועות אוויר להפעיל באמצעות הכלי. לטפל בקצוות של הכלי קטן ככל האפשר אחרת אינטימה יכולה להיפגע וכתוצאה מפקקה מאוחר יותר. הסר אותו מהשטח ולמקם אותו באופן מיידי במכל של מי מלח קר כקרח. לאפשר חית התורם ללגרום לדימום מחודשת. </li></ol> 3. מבצע נמען <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם את החיה כאמורה לעיל ולהחיל ג&#39;ל הסרת שיער או להשתמש במכונת גילוח להסרת שיער בבטן. רק לפני החתך שניתן לו מנה של עצירות תת עורי ברמה של 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג להקמת שיכוך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Mount בעלי החיים בתחום ההפעלה באמצעות קלטת מעבדה. בעלי החיים חייבים להיות מותקנים על שלב הפעלה חמה שיעזרו לשמור על טמפרטורת גוף בזמן הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה העינים gentamycin לעיניים כדי למנוע מהם להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את הבטן, ואחריו לשטוף אתנול. חזור על תהליך זה שלוש פעמים, כדי להבטיח חיטוי הולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את נאותות הרדמה שוב לפני שתמשיך לשלב הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו אמצע דרך העור וקיר הגוף בשני שלבים, נזהר שלא לפגוע ברקמות שמתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפזר להחזיק החתך בבטן פתוחה. כוון את הרכבת הבורג לקראת הסוף האחורי כדי לשמור את חלק הארי של מהדק מהדרך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב את הכיכר של גזה סטרילית עם מלח ומניח אותה על המעיים. עם האצבע שלך בעדינות על הגזה, הכניסו מקלון צמר גפן תחת המעיים ועדינות משקף על המעיים שלIDE ולכן הם יושבים על גבי הגזה. קח עוד פיסת גזה, מקם אותו במעיים והרטבת אותו עם מי מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל רקמה שומנית המכסה את אב עורקים ווריד הנבוב הנח (IVC). להיות עדין. IVC הוא מאוד שביר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להשתמש במלקחיים כדי לנתח את אב עורקי infrarenal מחברת מחקר IVC. נקה את שטח גדול מספיק כדי לספק מקום לשני חבקים עם מספיק כלי ביניהם כך שכאשר יחולקו, יהיה מספיק לכלי שניתן נתפר השתל. מתי לנתח, לחפש ענפי כולים. אם יש צורך לצרוב אותם עם cauterizer טמפרטורה נמוכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מהדק כלי דם מתחת לעורק כליה ועוד אחד בדיוק מעל ההסתעפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את אב העורקים. את הקצוות של אב העורקים בדרך כלל לחזור בו, והשאירו שטח של כ 5 מ&quot;מ. בדקו hemostasis. אם המהדק עובד בצורה נכונה, רק כמות קטנה של דם צריכה להימלט לאחר הקיצוץ. אם הדימום ממשיך, בדוק את המהדק להיות דבר בטוח הוא interfering איתם. שים לב שאף אחד מאב העורקים הוסר. הוא מחולק רק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הקצוות לחתוך עם מי מלח heparinized (200 U / ml) ולאחר מכן להסיר את הפתרון הנוסף עם ספוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tack השתל למקומו באמצעות שלושה תפרים שאינם רציפים בכל קצה. רק לתפור צד אחד של השקה בכל קצה, ולאחר מכן למלא את שאר עם תפר רציף ריצה או תפרים רציפים יותר. שבעה עד שמונה תפרים שאינם רציפים מספיק. אם אתה משתמש בתפר פועל, כדי להיות בטוח שאת דפנות הכולים תישארנה רגועות ושאינך גורם להיצרות בהשקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את המהדק בסוף הגולגולת ולחפש דליפות בקווי התפר. כמות קטנה של חלחול אישור הוא מתן הוא מפסיק בתוך כדקה. אם יש יותר מזה, אפשר להשתמש בתפר אחד כדי לעצור את הדימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות על באב העורקים מעל אתר ההשקה עם מוליך כותנת הרטובות, ולאחר מכן להסיר את המהדק השני. לחץ בעדינות על ולשחרר כמה פעמים ולבדוק שאב העורקים מופיע פטנט. השתל יהיה perfused מייד ודופק צריך להיות גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגזה מכסה את המעיים ולהעביר אותם בחזרה למקומו. הימנע פיתול של המעי ולשמור על אורינטציה אנטומית רגילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות 5-0 Vicryl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור באמצעות 5-0 או 6-0 prolene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את העכבר מתחת לעור עם carprophen ב5 מ&quot;ג / ק&quot;ג כדי להגדיל אלחוש לפני סיום הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן מלוח מיליליטר עכבר 0.5-0.8 מתחת לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר בכלוב מחומם כדי להתאושש. לנטר אותה בזהירות במהלך התאוששות כדי להיות בטוח שהוא מחלים באופן נורמלי. 2-3 שעות לאחר ניתוח, העכבר צריך להיות מתנהגות יחסית באופן רגיל. ב12 שעות אחרי ניתוח, טיפול בבעלי החיים עם עצירות תת עורי בשעת 2 ​​מ&quot;ג / ק&quot;ג לשיכוך כאבים. אם, בכל זמן, החיה קמרה, עושה רעש או מציג טווח מוגבל של תנועה, לחקור את העניין. אםסיבה סופית לא ניתן לקבוע וקבוע, בעלי החיים צריכים להיות מורדמים לפרוטוקולים מוסדיים. בגיל 24 שעתי בעלי החיים צריכים לקבל עוד מנה של carprophen תת עורית במינון 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג. שיתוק רגל אחורי מציין השקה נכשלה או פקיק. במצב זה, בעל החיים צריך להיות מורדם. </li></ol>

<ol><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li>
<li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice%3A+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li>
<li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique%3A+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Proc%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li>
<li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Proc%22%5BJournal%5D)">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li>
<li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+graft+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li>
<li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+surgical+research%22%5BJournal%5D)">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li>
<li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Korean+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li>
<li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+in+mice%3A+current+status+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li>
<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men%3A+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li>
<li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li>
<li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li>
<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li>
<li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

מודלי עכבר של אב עורקי השתלה לספק מספר היתרונות, כי עכברים הם מאוד מוגדרים היטב immunogenetically 9,12,13, והם יכולים לטפל בקלות לשנות את הביטוי של גנים ספציפיים שלהם, אם תרצו בכך. כפי שצוין במבוא, כירורגיה של כלי דם בעכבר היא יותר קשה מאשר רוב הדגמים בגלל גודלו של כלי השיט. אפילו העורקים הגדולים, כגון אב עורקים הם בדרך כלל לא יותר מ 100-200 מיקרומטר בקוטר פנימי; כך מניפולצית הכלים האלה דורשים כמות משמעותית של מיומנות וכשרון 8,14. הסיבוך השכיח ביותר שנצפה בני...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> חברה </td><td> מספר </td></tr><tr><td> מהדקי כלי דם </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 00396-01 (גודל B-1) </td></tr><tr><td> דומון מלקחיים </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 11293-00 </td></tr><tr><td> 10-0 עקצו microsuture </td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td> מספריים ישרים </td><td> Roboz כירורגי Instrument ושות </td><td> RS-5620 </td></tr><tr><td> cauterizer טמפרטורה הנמוכה </td><td> ביבר-Visitec הבינלאומי </td><td> 8441000 </td></tr><tr><td> מפשק עצמי שמירה </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td> 14240 </td></tr></tbody></table>

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

נהלי כלי דם המעורבים anastomoses בעכבר נחשבים בדרך כלל להיות קשה ותלוי מאוד במיומנותו של מנתח הפרט. זה בעיקר נכון, אבל יש מספר העקרונות חשובים שיכול להפחית את הקושי של נהלים אלה ולשפר את השחזור. השתלת אב העורקים orthotopic היא הליך שבו מצוין ללמוד עקרונות אלה משום שהיא כוללת רק שני anastomoses מקצה לקצה, אבל דורשת טכניקה טובה תפירה וטיפול בכלי להצלחה בקנה אחד. הליך זה מתחיל ברכש של אורך של אב עורקים בבטן מחית תורם, ואחרי החלוקה של אב עורקי היליד בנמען. אז אב עורקי הרכש ממוקם בין הקצוות החצויים של אב עורקי הנמען ונתפר למקומו באמצעות anastomoses מקצה לקצה. כדי להשיג מטרה זו דורשת רמה גבוהה של ריכוז, כלים טובים, יד יציבה, והערכה להצלחה באיזו קלותמערכת כלי דם של עכבר יכולה להיות פגומה, וכתוצאה מפקקת. למידת העקרונות חשובים האלה היא מה שתופס את רוב הזמן של המתחילים כאשר למידת microsurgery במכרסמים קטנים. לאורך פרוטוקול זה, אנו מתייחסים לנקודות חשובות אלה. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור מחלת כלי דם במגוון רחב של מערכות ניסיוניות שונות 1-8. בהקשר שמוצג כאן, זה משמש לרוב לחקר מחלה לאחר השתלת כלי דם, סיבוכים ארוכי טווח שכיחים של השתלת איבר מוצקה שבי היפרפלזיה intimal מתרחשת בתוך השתל. היתרון העיקרי של המודל הוא שהוא מאפשר ניתוחי מורפומטריות כמותיים והכלי המושתל טמון רציף לכלי אנדוגני, שיכול לשמש כשליטה נוספת 9. הטכניקה המוצגת כאן משמשת לרוב לעכברים במשקל 18-25 גרם. צברנו את רוב הניסיון שלנו באמצעות C57BL/6J, BALB / CJ, וזני C3H/HeJ.

איור 1 מציג שתל של אב עורקים. החצים הלבנים יסמנו את קווי התפר. שתל פטנט יציג דופק גלוי. איור 2 מצביע על ניסוי טיפוסי בו הישרדות נמען הייתה במעקב במשך תקופה של 56 ימים. קבוצה אחת הורכבה מעכברי נמען פראי מסוג-(C57BL / 6 x FVB) הושתלו באב עורקי BALB / ג. קבוצה האחרת, המיועד &quot;KO&quot; מורכבת מנמענים (C57BL / 6 x FVB) חסרים בביטוי של heme oxygenase-1, שתוצאה פקק מהשתלים בתוך 24 שעות. יש לציין, זה תוצאות במותו של כל הנמענים, כפי שמוצגות באיור. <str...

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

הליכים כלי דם הכוללים אנסטומוזות בעכברים נחשבים בדרך כלל לקשים ותלויים במידה רבה במיומנותו של המנתח. ...

מטרת הליך זה היא להשתיל אביקום בטני של עכבר תורם אל עכבר רקיב אלוגנני. הדבר משיג תחילה על ידי השגת האביקום מהתורם, ולאחר מכן, על ידי הכנת אתר השתלה בחיה הרקיבה.לאחר מכן מנתחים ומחלקים את האורטה המקורית של בעל החיים המקבל. השלב הסופי הוא ביצוע שתי אנסטומוזות וסקולריות מקצה לקצה (end-to-end) להשתלת אורטת התורם. בסופו של דבר, ניתן להשתמש בהליך זה כדי לחקור את התפתחותן של מחלות וסקולריות לאחר השתלה בשילובי זנים אלוגנאיים.היתרון של שיטה זו על פני השתלה הטרוטופית של לב, למשל, הוא שהניתוח המורפומטרי קל יותר לביצוע מכיוון שהכלי דמים הם בגודל אחיד. בנוסף, כלי הדם אינו מוקף ברקמה פרהנכימלית, שעלולה להיות מוקפת בתסננת תאית ובגורמים אחרים שעלולים לסבך את ניתוח הנתונים שהתקבלו. שימוש בטכניקה זו עשוי להיות מועיל במיוחד להדגמת המנגנונים המעורבים במחלות וסקולריות לאחר השתלה, המהוות בעיה שקשה לטיפול בהשתלות קליניות בבני אדם.כדי למזער את השפעות הלחץ ולהמקסם את מאגרי האנרגיה שלהם, החזיקו את בעלי החיים בביבליום למשך 72 שעות לפחות לפני הניתוח. ביום הניתוח, הניחו לוח ניתוח מתכתי על גבי פד חימום המכוון ל-35 עד 38 °C. לאחר ההרדמה, הסירו את הפרווה מהבטן הוונטרלית של בעל החיים.השתמשו בסרט הדבקה למעבדה כדי לקבע את בעל החיים בתנוחת פריסה (spread eagled) על שולחן הניתוח, ולאחר מכן חטאו את כל האזור הגולח של בעל החיים שלוש פעמים באמצעות חומר חיטוי ולאחריו אתנול, תוך שימוש במספריים סטריליים. לאחר מכן, בצעו חתך דרך דופן הגוף כדי לחשוף את איברי הבטן. לאחר מכן, השתמשו במקלון צמר גפן סטרילי כדי לדחוק את האיברים ה פנימיים הצידה על גבי פיסת גזה סטרילית הלחה בתמיסת סלין חמה, ובכך לחשוף את כלי הדם הגדולים של הבטן.כעת, בזהירות רבה, בצעו דיסקציה קהה להרחקת אבי העורקים הבטני (abdominal aorta) מהרקמות הסובבות, כולל הווריד החלול התחתון (inferior vena cava), ולאחר מכן הרימו בזהירות ובצעו כauterization לעורקי המותניים (lumbar arteries). קטע אבי העורקים המיועד לדיסקציה צריך להימצא מתחת לכלי הדם הכליתיים ומעל לפיצול של אבי העורקים לעורקי הפמור (femoral arteries). לאחר זיהוי האזור, קשרו תפר אחד ממש מתחת לעורקים הכליתיים ותפר נוסף ממש מעל לפיצול.בשלב הבא, השתמש במספריים כדי לחתוך את האורטה ולאחר מכן אחז בזהירות רבה בקצה אחד של כלי הדם וטפטף תמיסת סליין עם הפרין כך שתזרום דרך כלי הדם בכוח הכבידה. לאחר מכן, השתדל לגעת בקצוות כלי הדם כמה שפחות. הוצא את השתל והנח אותו מיד במיכל עם תמיסת סליין קרה מאוד (בקרח).לאחר מתן הרדמה ושיכוך כאבים לבעל החיים המקבל, גדלו את הבטן הוונטרלית כפי שהודגם. מרחו משחה עינית של gentamicin על העיניים כדי למנוע מהן להתייבש, ולאחר מכן חטאו את הבטן כפי שהודגם כדי להבטיח חיטוי הולם. כעת בצעו חתך בקו האמצע דרך העור ודופן הגוף בשלבים.לאחר מכן, הכניסו מורחב כדי להחזיק את החתך הבטני פתוח, כאשר מכלול הבור פונה לעבר החלק האחורי של בעל החיים כדי להרחיק את גוף התפס מדרך העבודה. לאחר מכן, הניחו גזה סטרילית ספוגה בתמיסת סלין על המעיים. לאחר מכן, החזיקו את הגזה בעדינות במקומה באמצעות אצבע.החדירו מקלון צמר סטרילי מתחת למעיים, והסיטו אותם בעדינות כך שהמעיים ינוחו על הגזה. הניחו פיסת גזה סטרילית נוספת על המעיים והרטיבו אותה בתמיסת סליין. לאחר הסרה עדינה של כל רקמה שומנית המכסה את ה-ATA ואת ה-inferior vena cava, השתמשו בפינצטה כדי לנתח בזהירות את ה-infrarenal aorta מה-inferior vena cava.כעת פנו שטח גדול מספיק כדי לאפשר מקום לשני תפסנים, עם מספיק כלי דם כך שבעת החלוקה, יישאר מספיק כלי דם שניתן יהיה לתפור אליו את הש transplanted graft. שימו לב שניתן להשתמש בתפר השחור כדי להרגיש את המשקל לאורך כלי הדם. בעת הדיסקציה חפשו ענפים של כלי דם, וכבשם באמצעות מכשיר כבישה (cauterizer) בטמפרטורה נמוכה לפי הצורך.בשלב הבא, הכניסו סגור כלי דם אחד ממש מתחת לעורק הכליה וסגור כלי דם נוסף ממש מעל הפיצול (bifurcation). לאחר מכן, גזרו את האורטה. במקרה זה, הגזירה מבוצעת קרוב יותר לפיצול מכיוון שכלי דם מסתעף נצרב בקרב המרחק שבין שני הסגורים, מה שהפך נקודה זו לבלתי מתאימה לאנסטומוזה; קצות האורטה יסוגו בדרך כלל, וישאירו רווח של כ-5 מילימטרים.בדוק את ההמוסטזיס. אם התופסנים פועלים כראוי, רק כמות קטנה של דם אמורה לחדור החוצה לאחר החיתוך. לאחר מכן, שטוף את הקצוות החתוכים של האאורטה בתמיסת סליין עם הפרין וספוג את עודפי התמיסה.כעת קבעו את השתל למקומו באמצעות שלוש תפרים נפרדים בכל קצה. לאחר מכן, תפרו צד אחד של האנסטומוזה בכל קצה והשלימו את השאר באמצעות שבעה עד שמונה תפרים נפרדים. אם מועדפת תפירה רצופה, יש להקפיד שדפנות כלי הדם יישארו רפויות ושלא תיווצר היצרות באנסטומוזה.כעת הסירו בזהירות את התסמין מקצה האורטה הקראניאלי ובדקו אם קיימות דליפות בקו התפרים. לאחר מכן, לחצו בעדינות על האורטה מעל אתר האנסטומוזה באמצעות מקלוני צמר ספוגים והסירו את התסמין השני. לחצו בעדינות ושחררו את האורטה מספר פעמים כדי לוודא שהכלי פתוח (patent). השתל יקבל זרימה מיידית וניתן יהיה לראות דופק.כעת, הסירו את הגזה המכסה את המעיים והחזירו אותם למקומם, תוך שמירה על הכיוון האנטומי הרגיל ומניעת פיתול. השתמשו בתפר Vicryl במידה 5-0 כדי לסגור את שכבת השריר, ולאחר מכן סגרו את העור באמצעות תפר proline במידה 5-0 או 6-0. טפלו בעכבר תת-עוריים ב-carprofen כדי להגביר את האנלגזיה לפני סיום ההרדמה, ולאחר מכן הגבישו לעכבר 0.5 עד 0.8 milliliters של סליין באותו נתיב.לבסוף, מקמו את העכבר בכלוב מחומם להתאוששות ועקבו אחר בעל החיים בקפידה. 12 ו-24 שעות לאחר הניתוח, ניתן לבעל החיים בופרנורפין וקרפרופן באופן תת-עורי, בהתאמה. איור ראשון זה מציג שסתום אאורטלי.שימו לב לקווי התפרים כפי שסומנו על ידי החצים הלבנים כאן. מוצג ניסוי טיפוסי שבו נערך מעקב אחר הישרדות הרכיבים למשך תקופה של 56 ימים. קבוצת הביקורת כללה עכברים רכיבים מסוג wild type C 57 BL six by FVB שהושתלו בהם אאורטות של bowel C.הקבוצה הניסויית כללה מקבלים מסוג C 57 BL six by FVB, עם Deficiency בביטוי של heme oxygenase one. נוקאאוט זה מוביל לטרומבוזה של השתלים בתוך 24 שעות. ראוי לציין כי הדבר הוביל למותם של כל המקבלים.איור זה מראה את מדידות האקו של הוריד הרחב התחתון, הוריד החלול והאבי aorta הבטנית בבעלי חיים בריאים ובמקבל השתלה. שימו לב שהשתל פתוח ודומה במראהו ל-aorta שאינה מושתלה. כפי שראיתם, הרקמות עדינות וקטנות מאוד, ולכן עליכם לזכור שפרוצדורה זו היא בהחלט מיומנות נרכשת, ולפיכך יידרש תרגול רב לפני שניתן יהיה לבצע את הפרוצדורה בהצלחה ובצורה שגרתית, לאחר השליטה בה.ניתן לבצע טכניקה זו בתוך שעה אחת אם היא מבוצעת כראוי.

orthotopic-aortic-transplantation-mice-for-study-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכבר לחקר דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון. לאחר הנחת עכבר תורם מורדם במצב שכיבה, אבי העורקים הבטני האינפרא-כלייתי (IAA) מבודד בזהירות מהמבנים הסובבים. כלי ההסתעפות קשורים, ושני קצוות רשות העתיקות מהודקים כדי למנוע זרימת דם לפני כריתה. לאחר מכן, מושתל התורם בעכבר מושתל אלוגני, וזרימת הדם משוחזרת באמצעות אנסטומוזה כדי לחקור דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון.

מודל אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכבר לחקר דחיית כלי דם הנגרמת על ידי מערכת החיסון

אנו מתארים פרוטוקולים לarteriosclerois שוחדנו העכבר (GA) דגמים אשר כרוך חציצה של מגזר כלי עכבר לנמען של אותו הזן המולד. על ידי backcrossing שינויים גנטיים נוספים לתורם הכלי, המודל יכול להעריך את ההשפעה של גנים ספציפיים על GA.

מודלים עכבר לטרשת עורקים שתל

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכברים. מטרת הפרוטוקול היא לספק מודל שבאמצעותו ניתן לחקור תהליכים פתולוגיים ואסטרטגיות טיפוליות הרלוונטיות לתגובות אלואימוניות בעורקים ולשינויים העורקיים הנובעים מכך התורמים לכישלון השתלת איברים.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

אנו מציגים מודל השתלת אבי העורקים orthotopic בטכניקה שרוול בעכברים. זו שיטה השקה מהירה מאוד, אשר יכול להיות מועסק במחקרים של מחלת כלי דם.

בטכניקה שרוול במודל של עכברים של אבי העורקים השתלת - סרט הדרכה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של הטרוסקסואלים השתלת אבי העורקים בעכברים באמצעות שימוש בטכניקת השרוול שאינו תפר במודל מורטין הצווארי. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הפתולוגיה הבסיסית של השתלת האלופתיה כרונית (קו) והוא יכול לעזור להעריך סוכנים רפואיים חדשים כדי למנוע את הקמתה.

מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

למד השתלת אב עורקים בטניים אורתוטופית בעכברים לחקר מחלת כלי דם לאחר השתלה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מורפומטרי עקבי בדגמים אלוגניים וסינגניים.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

גלה סרטונים נוספים