Name: שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-24T19:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: למד שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) בטכניקת שאיבה בעלת לחץ נמוך לאיסוף תאים ממערכת הנשימה. השיטה מבטיחה בטיחות מטופל ושימור חיוניות התאים לעיבוד מיידי במעבדה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

תודה לאלנה Mitsi (עוזר מחקר) והאב קרול הנקוק (אחות מחקר) וצוות תיאטרון על תרומתם לצילומים, ולדיוויד שו (אחות מחקר) על תמיכתו בbronchoscopies המחקר שלנו. תודה גם למתנדבים שלנו רבקה דאנפי למאפשר הליך זה אמור להיות מצולם.

1. הנושאים הם נפגשו בהגעה על ידי אחות הנשימה המחקר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא כבר בצום ל&gt; 4 שעות לאוכל מוצק ושעה 2 לנוזלים צלולים 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההליך מבוצע כמקרה יום עם בדיקות מתאימות לפני ואחרי הליך (בהתאם למדיניות בית חולים סטנדרטית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא לובש חלוק בית חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורית מד קטנה מוכנסת (באופן אידיאלי לתוך יד שמאל) ונותרה באתרם עד תום תקופת ההחלמה שלאחר הליך 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצפיות Preprocedure נלקחות (לחץ דם, קצב לב, saturations חמצן [פסיכומטרי]). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הועבר לסוויטה ברונכוסקופיה. </li></ol> 2. נושא מוכן לנוהל בסוויטה על ידי מחקר המטפל נשימה מנוסה ברונכוסקופיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד ניטור מצורף כולל; 3 להוביל א.ק.ג., דופק oximeter 1,10 ומד לחץ דם. Anesthetתמיכת ic אין צורך לרבות כתב הסכמה מדעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמצן עלול להיות מועבר באמצעות צינורית באף במהירות של עד 4 ליטר / דקה, כדי להשיג פסיכומטריים&gt; 90% 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המפעיל בודק את bronchoscope, זה כולל הבטחת יניקה יעילה על ידי aspirating מלח רגיל סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה מקומית עם לידוקאין מושגת במעברי האף (באמצעות 1 Instillagel) ורירית הפה (באמצעות xylocaine) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הרגעה היא ראויה ומתבקש על ידי הנושא, midazolam תוך ורידי מנוהל 1. סוכן מתאים היפוך (flumazenil) הוא זמין באופן מיידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד החייאה צריך להיות זמין 1,10 בקלות. </li></ol> 3. Bronchoscope מוכנס ואת מיקומו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטובציה היא בדרך כלל דרך האף. אם זה לא אפשרי בשל פוליפים באף, turbinates המודלק, או כל חוסר נוחות ואז הנושא הוא מחובר לצינורות דרך הפה (פה משמר משמש למניעהנזק להיקף או שיניו של הנושא). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה מקומית בגרון הושלמה באמצעות ידוקאין 4%, בדרך כלל סך של 4-6 מיליליטר משמש. בדרך כלל זה גורם לשיעול על החדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיתרי הקול הם עברו, והרדמה ברירית נוספת באמצעות 2 מיליליטר aliquots של לידוקאין 2% בקארינה, בחלוקה של האונה הימנית התחתונה (RLL) ואונה ימנית באמצע (RML) ובכניסה RML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bronchoscope ממוקם בתוך RML, באופן אידיאלי במגזר המדיאלי, במצב שבו הוא דיסטלי מספיק כדי להיות בעמדה בטוחה אבל לא יותר דיסטלי, כך שדרכי הנשימה מתמוטטת כאשר יניקה מוחלת (&quot;מבחן קריצה &#39;באמצעות הלחצן השאיבה ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיצוב טוב מצויינים במהלך בדיקת הקריצה ידי bronchoscope שאפשר לקיים באופן מלא בעמדה ידי bronchoscopist ודרך נשימה שלא נסגרו במלואו באופן מיידי על שאיבה עדינה. </li></ol> 4. BAL מתבצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה 60 מיליליטר מזרקים הם מראשמלא מלוח חיממו רגיל - 60 מיליליטר, 50 מיליליטר, 50 מיליליטר, ו40 מיליליטר במזרקים רצופים. כאשר הנושא וbronchoscopist מוכנים המזרק הראשון של מי מלח הוא החדיר ידי עוזר רונכוסקופיה תוך bronchoscopist שומר על העמדה בRML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יד שאיבה עדינה מתבצעת לאחר מכן על ידי עוזרו משתמש באותו נמל ו50 מזרק מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה ולאחר מכן חזר 3x נוסף, עם נפח מקסימאלי של 200 מיליליטר בשימוש בטכניקה הספציפית שלנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL לאחזר מסולק בעדינות לתוך מכולות שכותרתו כבר החזיקו בקרח נמס. מיכלי זכוכית ניתן presiliconized כדי לעכב מצורף תא ולמקסם את החזר תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL מופיע מעורפל כנגד האור עם בועות סבון משטח שהוקמו על ידי פעילי שטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bronchoscope יבוטל באופן מלא באיטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL מועבר ללא דיחוי על קרח לעיבוד מיידי. </li></ol> 5. שחזור נושא </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא התאושש ל2-4 שעות על ידי אחות מחקר בדרכי הנשימה במחלקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופה זו מותר להם לנוח ואז רק לאכול ולשתות&gt; 60 1 דקות לאחר ההליך (כאשר סנוניתם מוערכת כבטוח), במטרה להפחית את הסיכון לשאיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצפיות הודעה פרוצדורליים מנוטרות ומתועד. בדיקה קלינית מתרחשת לפני השחרור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא תדרך predischarge על תופעות הלוואי הנפוצות (חום, אי נוחות בחזה קלה תקין submammary, כאבי גרון) ונתן מספר טלפון במקרה תופעות לוואי משמעותי להתרחש 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא במעקב ב1-5 ימים שלאחר הליך עם איש קשר קליני. זה יכול להיות גם בטלפון או באופן אישי. </li></ol> 6. תאים מבודדים במעבדה - ביצוע בקרח נמס במידת האפשר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנפח של נוזל BAL נרשם ומסונן דרך שכבה כפולה של ספוגית גזה סטריליתכדי להסיר תקעי ריר לprechilled צינורות 50 צנטריפוגות מיליליטר סטרילי,. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי pelleted על ידי צנטריפוגה ב XG 500 ב-C ° 4 ל5-10 דק ונשטפו על ידי vortexing ב50 מיליליטר מלח רגיל קר. צנטריפוגה חוזרת על עצמו פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים הם resuspended במדיום התרבות (RPMI-1640 +10% בסרום שור עוברי + 2 מ&quot;מ L-גלוטמין + פניצילין [40 IU / מיליליטר], סטרפטומיצין [75 IU / מיליליטר], וamphotericin B [0.5 IU / מיליליטר]) ו ספירת ההפרש בוצע באמצעות נפח שווה של trypan הכחול וhemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה התא היא מנורמלת לצפיפות הנדרשת (אנחנו משתמשים 1 x 10 6 תאים / מיליליטר), הוצג על ידי pipetting לתוך צלחות תרבית הרקמה מתאימות, וטופחו על 37 מעלות צלזיוס במשך 3 שעות על מנת לאפשר עמידת מקרופאג. 1 מיליליטר של השעיה תא זה לכל גם הוא מתאים לתרבות צלחות 24 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבודה לימפוציטים, אחרי 3 שעות של דגירה, התרבות בינונית בעדינות pipetted למעלה ולמטה 3x, ושנאסף. מדיום זה מכיל לימפוציטיםומקרופאגים nonadherent וניתן להשתמש כדי להעריך את תפקוד הלימפוציטים, זה גם עשוי לשמש בשלבים לטיהור למשל עם חרוזים מגנטיים CD14 להסיר מקרופאגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבודת מקרופאג, אחרי 3 שעות של דגירה, המדיום הוא הסיר בזהירות עם pipetting המינימלי והוחלף במדיום טרי, חם ללא אנטיביוטיקה (RPMI 1640 +10% שור עוברי בסרום + 2 L-גלוטמין מ&quot;מ). מקרופאגים הם חסיד לצלחת תרבית רקמה (ראה איור 1). </li></ol>

<ol><li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+%28BAL%29+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li>
<li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li>
<li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li>
<li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load%5BTitle%5D)+AND+%22Trop.+Med.+Int.+Health%22%5BJournal%5D)">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li>
<li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+CD4%2B+T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li>
<li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li>
<li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li>
<li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li>
<li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERS%2FATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society%2FAmerican+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL%2C+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li>
<li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Quant.+Cytol.+Histol%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li>
<li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Ethics%22%5BJournal%5D)">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li>
<li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li>
<li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li>
<li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li>
</ol>

אנדריאה מ &#39;קולינס ממומן על ידי קרן ביל ומלינדה גייטס, ולא אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. היא קיבלה כספים מחברת מרק (MSD) וGSK כדי להשתתף בכנסים ודמי הרצאה. 50 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. ג&#39;יימי Rylance ממומן על ידי קרן Wellcome, ואין לו ניגוד עניינים. הוא לא קיבל כל קרנות אחרות. 70 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. דניאל ג ווטון ממומן על ידי NIHR דוקטורט מלגה, ואין לו ניגוד עניינים. 40 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. יש אנג&#39;לה ד רייט אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. סייע עם מעל 100 Bals מחקר. יש אדם KA רייט אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. הוא עיבד מעל 50 דגימות BAL. דאנקן ג פולרטון </strong&gt; אין לו אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. 100 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. יש סטיבן ב גורדון אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. הוא קיבל כספים מחברת מרק (MSD) ונוברטיס כדי להשתתף בכנסים. 400 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי.

על מנת להשיג תוצאות טובות הבאות מועילים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> anesthetisation טוב בבסיס הלשון והלוע התחתון אחורי. זה חשוב כי זה משפר את הסובלנות פרוצדורליים של הנושא ואת הנוחות כללית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כך או ילדים (קוטר חיצוני 3.4-3.6 מ&quot;מ) או bronchoscope הבוגר (קוטר חיצוני 4.8-5.9 מ&quot;מ) ניתן להשתמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש אי נוחות במהלך אינטובציה האף, אינטובציה האוראלית היא מועדפת. באופן כללי אינטובציה האף היא גם טכניקה פשוטה או צריך להיות נטושה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החדרה ראשונית של לידוקאין ללוע התחתון, הנושא עשוי להעדיף bronchoscope לפירעון עד לתחילתה של הרדמה, במיוחד אם bronchoscope מוכנס דרך הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא 10 לפחות x 10 מיליליטר מזרקים prefilled רק עם 2-4 מיליליטר של לידוקאין. יש להשאיר אוויר במזרקים המאפשרים אספקה ​​משופרת של ההרדמה ישירות על גבי מיתרים וMuco Endobronchialsa. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאז השיעול במהלך ההליך מפחית באופן משמעותי את תשואת BAL; באמצעות מי מלח מחומם ויש הרדמה ברירית טובה חשובה כדי להפחית את זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 מיליליטר המזרקים יש prefilled עם מי מלח מחומם. זה נפוץ 50 מיליליטר הראשון של מלח רגיל החדיר להניב בין 10-20 מיליליטר עקב אובדן מת חלל והשאר רץ לתוך דרך נשימת המסוף. aliquots נוספים להחזיר חלק גדול יותר של נוזל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המפעיל תמיד צריך לבדוק bronchoscope לפני אינטובציה, כולל הבטחת יניקה יעילה על ידי aspirating מלח רגיל סטרילי. אובדן של יניקה יכול להתרחש בדרך כלל עקב מסתלסל של הצינור או דליפה סביב הקשרים עם bronchoscope או מכשיר יניקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך שאיבה ידנית, באופן אידיאלי בדרכי הנשימה לא צריכה לקרוס. אם יניקה חוזר ונשנה מתמוטטת בדרכי הנשימה, חוזרת BAL מופחתים למנגנון שסתום, והדלקת מקומית ודימום הוא בסבירות גבוהה יותר: זה בתורו גורם מ &#39;דרכי הנשימהעפרות עצבניות ושיעול סביר יותר. בחירת סניף subsegmental RML המתאים ביותר ושימוש בלחצי יניקה נמוכים ולכן הם גם חשובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר האוויר נשאף, כל הזמן לבדוק שוב את החיבור של המזרק לbronchoscope וגם עמדתו של bronchoscope בדרכי נשימת דיסטלי. אם מדובר בבעיה חוזרת ונשנית, שלאחר ההליך להבטיח שאין חורים ברונכוסקופ עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BAL ממעשנים הוא לעתים קרובות כהה יותר בשל נוכחותם של חלקיקים תאיים. מעשנים עלולים לסבול רונכוסקופיה פחות טוב, ויש לי שיעול מוגבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשואת נפח BAL עדיפה היא&gt; 100 מיליליטר. תשואה של&gt; 150 מיליליטר היא מצוינת. אנחנו לא חווינו כל תשואות&gt; 170 מיליליטר. אין קשר לינארי בין תשואת התא ותשואת נפח BAL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשואות של &lt;100 מיליליטר הן, בניסיון שלנו, בסבירות גבוהה יותר לגרום לתופעות לוואי כגון שיעול, כאבים בחזה וחום. אנו ממליצים כי נבדקים עם תשואות של &lt;100 מ&quot;ל להיות recoורד בעמדה לרוחב השמאל, זה עשוי לסייע לניקוז של כל נוזל ריאה הנותרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשר קליני צריך להיעשות עם הנושא בתוך 1-5 ימים כדי להבטיח שאין תופעות לוואי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרגעה midazolam משמשת ל&lt; 50% מנבדקים בבריטניה וב&lt; 5% במלאווי. Midazolam אינו מופיע כדי לשפר את הסבילות ישירות; כמה מפעילים מרגישים שהרגעה עשויה לעתים להיות בלתי יעילה בשמירה על דיאלוג קוהרנטי (ומרגיע) בנושא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניסיוננו, יש עקומה למידה משמעותית עם טכניקה זו. לדוגמא תיאום בין הרופא והאחות לוקח זמן ותשואות הן בדרך כלל נמוכות יותר בתחילתו של תהליך הלמידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנושאי HIV חיוביים, אנו משתמשים באנטיביוטיקה מונעת prebronchoscopy. </li></ol>

רקע ברונכוסקופיה Fiberoptic פותחה עבור פרקטיקה קלינית, זה נעשה שימוש נרחב גם אבחנה וטיפולית 1,2. ברונכואלוואולרית שטיפה (BAL) מסירה תאי nonadherent וריאות נוזל רירית מהמשטח הרירי; ביופסיה משמשת כדי לדגום רקמות הריריות וSubmucosal. בסביבות מחקר, BAL מאפשר דגימה של מולד (מקרופאגים ריאות 3-5), סלולארי (B-ו-T-תאי 6), ולחות (אימונוגלובולינים 7) תגובות בתוך הריאות. BAL הוא מקובל בעולם למטרות מחקר 8 ומאז 1999 הטכניקה שבוצעה ב&gt; 1,000 נבדקים בבריטניה ובמלאווי על ידי הקבוצה שלנו. אנו משתמשים בטכניקה זו במחקרים של תגובה חיסונית מולדת, סלולרית, ולחות לאנטיגן pneumococcal כוללים מרכבת ניסוי אנושית pneumococcal 9,17, עשן ביומסה 5, איידס וחיסון, וסטו טיפול מן החוץמת להחלמה מדלקת ריאות. הטכניקה שלנו משתמשת בשאיבת כף יד עדינה של נוזל החדיר; זה נועד למקסם חזר BAL נפח ולהפעיל כוח גזירה מינימום על epithelia ריסי על מנת לשמר את המבנה ותפקוד של תאים בתוך נוזל BAL. בהקשר מחקר BAL מנצל טכניקה שונה מזו הנהוגה על ידי רופאי טיפול בדרכי הנשימה ואינטנסיביים (שטיפה שמכונה לעתים קרובות הסימפונות, כביסות, שטיפה, או BAL) שמכוונים להשיג יתרון אבחון או טיפול. טכניקת המחקר נועדה לאסוף תאים ולשמר את הכדאיות כדי להקל את הצמיחה של תאי in vivo התרבות לשעבר. מסיבות אלה טכניקת המחקר משתמשת instillate גדול נפח (בדרך כלל בסדר הגודל של 200 מיליליטר) ומעסיקה שאיבה ידנית כדי להפחית את הנזק לתאים. חולים מקבלים הרדמה מקומית, הציעו סדציה הכרתית (midazolam), ולסבול את ההליך היטב עם תופעות לוואי מינימאליים. subjec המילולי והכתובמידע לא משפר את הסובלנות וכתב הסכמה מהדעת היא חובת 1. מטרה המטרה הכללית היא שההליך צריך להיות בטוח ויעיל. נושאים שלא צריכים לחוות כל הפרעה פיזיולוגית ומפעילים צריכים לאסוף באופן עקבי בעודף של BAL 100 מיליליטר מנושאים. לאחר ההליך, נושאים צריכים לחוות תופעות לוואי מינימליות. בטיחות בטיחות של הנושא היא בעל חשיבות עליונה. נבדקים שנבחרו בקפידה תוך שימוש בקריטריוני הכללה והדרה ברורים. פרוטוקול זה כולל תיאור של הסיכונים הפוטנציאליים ואת הצעדים שננקטו כדי להקל עליהם. התוויות נגד לרונכוסקופיה מחקר עשויות לבוא לידי ביטוי מוחלט או יחסי, ונכללות בפרוטוקול המחקר שלנו כקריטריוני הדרה והכללה. כל הנושאים שלנו מוקרנים כדי להבטיח בריאות מלאה. התוויות נגד מוחלטותכוללים עמוד השדרה יציבה צוואר הרחם, היפוקסיה להגיב, תעוקת חזה בלתי יציבה, diathesis דימום, והפרעות קצב לב ממאירות. התוויות נגד יחסית, כוללים אלה התנאים קשורים עם שיעורי סיבוך מוגברים, כוללות: כללי: בצורה גרועה שיתופי נושא 1, כל למשל אפילפסיה בעיה רפואית כללית משמעותית, ברונכוסקופיה הקודמת נסבלת גרוע, תופעות לוואי לידוקאין או midazolam, הריון, תזונה לקויה ידועה. נשימה: [saturations (פסיכומטרית) באוויר &lt;94%] היפוקסיה, hypercapnia, אסטמה לא יציבה 1, תפקוד נשימה לקויה באופן משמעותי 1 (FEV 1 &lt;1 ליטר), יתר לחץ דם ריאתי. לב וכלי דם: אורמיה, בתוך 6 שבועות של אוטם שריר הלב 1, חסימת וריד הנבוב מעולה. אחר: דיכוי חיסוני (הקבוצה שלנו מבצעת proce זה באופן קבועדורה בנושאי HIV חיוביים). ראה טבלת מס &#39;1 - סיכונים הקשורים לBAL למחקר.

<table><tbody><tr><td>ברונכוסקופ פיבראופטי, מקור אור ויניקה</td><td>unspecified</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> חלוק כירורגי, כפפות סטריליות </td><td>לא מוגדר</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> מד לחץ דם </td><td>לא מוגדר<</td><td>p></td><td> לניטור רציף של המטופל </td></tr><tr><td> אוקסימטר דופק </td><td>לא מוגדר</td><td></td><td> לניטור רציף של המטופל </td></tr><tr><td>מוניטור א.ק.ג 3 עופרת</td><td>unspecified</td><td></td><td> לניטור רציף של המטופל </td></tr><tr><td>אספקת חמצן לאף <p<>pp></td><td>unspecified</td><td> <</td><td> p> </td></tr><tr><td> תרסיס לידוקאין 10% (Xylocaine) </td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>להרדמה מקומית</td></tr><tr><td> לידוקאין הידרוכלוריד 2% </td><td>לא מוגדר</td><td></td><td>להרדמה מקומית</td></tr><tr><td> ג'ל לידוקאין (Instillagel) </td><td>Farco-Pharma, גרמניה</td><td></td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td>מי מלח רגילים, סטרילי, 200 מ"ל</td><td>לא מוגדר<</td><td>p></p</td><td>>pחם עד 30 & #176; C</td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק מחודד (x10)</td><td>unspecified</td><td></td><td> למתן לידוקאין </td></tr><tr><td>צינורית תוך ורידית 18 גרם</td><td>לא מוגדר</td><td></td><td> למתן מידזולם </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td>לא מוגדר</td><td></td><td> להרגעה </td></tr><tr><td> Flumazenil </td><td>לא מוגדר</td><td></td><td> היפוך הרגעה של בנזודיאזפינים (שימוש חירום בלבד) </td></tr><tr><td>60 מ"ל מזרקים מחודדים (x4)</td><td>unspecified</td><td></td><td>להזרקת מי מלח רגילה ונסיגת נוזל BAL. עשוי לדרוש חיבור מחבר ל יציאת הזרקה של הברונכוסקופ.</td></tr><tr><td> ספוגית גזה סטרילית </td><td>Vernaid, UK</td><<td>p></td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> מיכל סטרילי לנוזל BAL </td><td>ראה טקסט והערות</td><td></td><td>בקבוקי זכוכית סיליקון מפחיתים את היצמדות המקרופאגים. לחלופין, ניתן להשתמש בצינורות צנטריפוגה של 50 מ"ל (קיבולת כוללת של 200 מ"ל)</td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>SL2</td><td> רק אם נעשה שימוש בבקבוקי זכוכית סיליקון. הערה: מזיק ודליק. אם נעשה בו שימוש, פעל לפי אמצעי הזהירות המפורטים ב'יצרן' s MSDS </td></tr><tr><td> צנטריפוגה </td><td>לא מוגדרת</td><td></td><td>קיבולת צינור של לפחות 4 x 50 מ"ל. קירור ל-4 & #176; C preferred.</td></tr><tr><td> Shandon Cytospin צנטריפוגה </td><td>Thermo Scientific, UK</td><<td>p></td><td> לספירה דיפרנציאלית בלבד </td></tr><tr><td> RPMI 1640 בינוני עם L-גלוטמין </td><td>סיגמא, בריטניה<</td><td>p>R8758</td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> סרום בקר עוברי </td><td>סיגמא, בריטניה</td><<td>p>F6178</td><td> מוצרים אלטרנטיביים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> פניצילין-סטרפטומיצין </td><td>סיגמא, בריטניה</td><<td>p>P4333</td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td>Sigma, בריטניה</td><<td>p>A2942</td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> לוחות תרבית רקמות </td><td>Greiner Bio-One, UK</td><td>662160</td><td> מוצרים חלופיים זמינים מספקים אחרים </td></tr><tr><td> שקופיות מיקרוסקופ זכוכית </td><td>לא מוגדרים</td><td></td><td> לספירה דיפרנציאלית בלבד </td></tr><tr><td> Shandon cytofunnel </td><td>Thermo Scientific, UK</td><<td>p>A78710003 </td><td> לספירה דיפרנציאלית בלבד </td></tr><tr><td> Shandon cytoclip </td><td>Thermo Scientific, UK</td><<td>p>59910052</p</td><td>> לספירה דיפרנציאלית בלבד</tr><tr><td> > סט צביעה Hemacolor (מקבע, ריאגנטים אדומים וכחולים) </td><td>Merck, גרמניה<</td><td>p>111661</td><td> שימוש בהתאם ליצרן' הוראות </td></tr></tbody></table>

שטיפה ברונכואלוואולרית (bal) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה עם סיב אופטי שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) באמצעות שאיבה שנערכה ידנית יד על מנת להסיר תאי nonadherent ונוזל רירית ריאה מהמשטח הרירי. בסביבות מחקר, BAL מאפשר דגימה של מולד (מקרופאג ריאות), תגובות תאיות (B-ו-T-תאים), ולחות (אימונוגלובולינים) בתוך הריאות. BAL הוא מקובל בעולם למטרות מחקר ומאז 1999 הטכניקה שבוצעה ב&gt; 1,000 נבדקים בבריטניה ובמלאווי על ידי הקבוצה שלנו. הטכניקה שלנו משתמשת בשאיבת כף יד עדינה של נוזל החדיר; זה נועד למקסם חזר BAL נפח ולהפעיל כוח גזירה מינימום על epithelia ריסי על מנת לשמר את המבנה ותפקוד של תאים בתוך נוזל BAL ולשמר את הכדאיות כדי להקל על הצמיחה של תאי in vivo התרבות לשעבר. טכניקת המחקר ולכן משתמשת בנפח גדול יותר תוספותtillate (בדרך כלל בסדר הגודל של 200 מיליליטר) ומעסיק שאיבה ידנית כדי להפחית את הנזק לתאים. חולים מקבלים הרדמה מקומית, הציעו סדציה הכרתית (midazolam), ולסבול את ההליך היטב עם תופעות לוואי מינימאליים. מידע נושא מילולי וכתוב משפר את הסובלנות וכתב הסכמה מהדעת היא חובה. בטיחות של הנושא היא בעל חשיבות עליונה. נבדקים שנבחרו בקפידה תוך שימוש בקריטריוני הכללה והדרה ברורים. פרוטוקול זה כולל תיאור של הסיכונים הפוטנציאליים, ואת הצעדים שננקטו כדי להקל עליהם, רשימת התוויות נגד, ולפני בדיקות שלאחר ההליך, כמו גם טכניקות רונכוסקופיה ומעבדה מדויקות.

תוצאות קליניות טובות הן BAL נפח של מעל 100 מיליליטר ונושא שחווה ברוב, אי נוחות קטין (ראה טבלה 1). זה דורש נושא נינוח ושיתופי. המטפל חייב להיות בטוח, מוכן ומזומן (חומרים), והבנה כלפי המתנדב. השתנות אינטר ותוך נושא בתשואה סלולרית (כולל ספירת ההפרש) שתוארו. ספירת תאי ההפרש מנבדקים בריאים הן בדרך כלל מקרופאגים&gt; 90% עם מספר קטן של נויטרופילים (&lt;2%) ולימפוציטים (5-10%). תאי BAL centrifuged על גבי שקופיות מיקרוסקופ יכולים להיות מוכתמים בכתם גרעיני ההפרש כדי להשיג מידע זה (איור 1). באיור 1, תאי BAL תוקנו ונצבעו באמצעות מכתים Hemacolor על פי הוראות היצרן. צריכים לספור לפחות 300 תאים כדי להשיג תוצאות אמינות למקרופאגים,נויטרופילים ולימפוציטים; 500 תאים לסוגים נדירים יותר של תאים. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מפגע </td><td> סיכון </td><td> צמצם בפרוטוקול זה על ידי: </td></tr><tr><td colspan="3"> השפעה של ברונכוסקופיה ו1 BAL, 14 </td></tr><tr><td> אי נוחות קלה </td><td> &lt;25% 14, # </td><td> שיכוך כאבים מתאימים ותרופות הרגעה. גישה בטוחה ואכפתיות לנושא. </td></tr><tr><td> דימום מאף </td><td> &lt;1% # </td><td> לחץ מתון לאינטובציה האף בלבד. אם אי נוחות נושא או צמצם הצטמצם - אינטובציה דרך הפה במקום. </td></tr><tr><td> דימום Endobronchial (hemoptysis) </td><td> &lt;0.1% * 15 </td><td> לא ביופסיות שנלקחו. שליטה קפדנית ברונכוסקופיה - הימנעות רירית בדרכי הנשימה. </td></tr><tr><td> NausEA, דלקת ריאות הקאות ושאיפה </td><td> &lt;0.02% 14, # </td><td> צום של preprocedure שעה אוכל&gt; 4 מוצק 1. הרדמה מקומית הולמת. עמדת Semirecumbent במהלך הליך. תצפית שלאחר ההליך זהיר. </td></tr><tr><td> קדחת </td><td> 14 0.01 - 1% #, 16 </td><td> מתייחס לדלקת, ויכול למזער על ידי איסוף מקסימאלי של BAL. אונה אחת BAL בלבד. # </td></tr><tr><td> האף כואב / בגרון וצרידות </td><td> &lt;25% 14, # </td><td> הרדמה מקומית מספיקה של האף, הגרון וגרון (מזעור שיעול). </td></tr><tr><td> זיהום </td><td> &lt;0.1% באיידס שלילי, 1% בנשאיות 14, # </td><td> הליך כביסה bronchoscope תקן 1. אונה אחת BAL בלבד. # זיהוי מוקדם של זיהום: בדיקה קלינית בתוך 1 שעותקשר קליני ד 1-5 ימים לאחר ברונכוסקופיה. </td></tr><tr><td> כאבים בחזה / שיעול </td><td> &lt;0.2% 14, # </td><td> אונה אחת BAL בלבד. אוסף המקסימאלי BAL. # </td></tr><tr><td colspan="3"> השפעות של תרופות: לידוקאין, midazolam </td></tr><tr><td> הפרעות קצב </td><td> נדיר מאוד * </td><td rowspan="3"> מקסימום של 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג לידוקאין 14 בשימוש. מי מלח מחומם נורמלי החדיר. # דופק oximetry (פסיכומטריים&gt; 90% עם תוספת חמצן), ניטור לב בכל הליך. אנטגוניסט נזודיאזפינים (flumazenil) זמין באופן מיידי. </td></tr><tr><td> חוסר התמצאות / תסיסה </td><td> &lt;0.1% # † </td></tr><tr><td> דיכאון נשימה אירובי </td><td> נדיר מאוד * </td></tr></tbody></table> * לא מנוסה בקבוצה שלנו בלמעלה מ 1,500 נהלי מחקר. † Idiosyncratic ולא תגובה תלוית מינון. # הניסיון של הקבוצה שלנו בלמעלה מ 1,500 נהלי מחקר. טבלת 1. סיכונים הקשורים לBAL למחקר. זה כולל את המפגע או סיכון וכיצד זה הוא מופחת על ידי שימוש בטכניקה שתוארה. השפעות של ברונכוסקופיה / BAL וגם את ההשפעות של כל תרופות מרפא המשמשות כלולות. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. שקופיות מיקרוסקופ מציג BAL המקרופאגים ונויטרופילים מזדמנים. תאי BAL תוקנו במתנול ומוכתם באדום Hemacolor (Y eosin) וכחול (תכלת ב &#39;).

אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה סיב אופטי ושטיפה ברונכואלוואולרית באמצעות שאיבה בלחץ נמוכה. הטכניקה משמשת כדי לקצור תאים חיסוניים ממשטחי רונכואלוואולרית ריאות. משמש הרדמה מקומית וטשטוש קל בהכרה (midazolam). נושאים לסבול את תופעות לוואי מינימליות גם הליך וניסיון.

שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע שטיפה ברונכואלוולולרית באופן בטוח ויעיל. דבר זה מושג ראשית על ידי הבטחת הבטיחות, שיתוף הפעולה והנוחות של הנבדקים שנבחרו, תוך שימוש בקריטריונים ברורים להכללה ולשלילה.בשלב זה מבוצעים בדיקות ותצפיות טרום-פרוצדורליות. לאחר מכן, עם הכניסה לחדר הברונכוסקופיה ובדיקת כל הציוד, המטופל מקבל אלחוש מקומי והצעה לסדציה בהערה. לאחר מכן, בעקבות אינטובציה של מיתרי הקול, הברונכוסקופ מובא למיקום מתאים בתוך ה-RML.פעולה זו מבטיחה תפוקה טובה של נפח נוזל ה-BAL. לבסוף, נוזל ה-BAL נשמר באמצעות שאיבה עדינה ביד ומועבר ללא דיחוק על קרח לעיבוד מעבדתי מיידי. בסופו של דבר, טכניקה זו מאפשרת איסוף של תאים ושומרת על חיוניותם כדי להקל על גידול תאים בתרבית ex vivo.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות המבוצעות על ידי רופאי נשמה וטיפול נמרץ, המכונות לעיתים שטיפות סימפוניאליות (bronchial washings) או שטיפה ברונכואלוולולרית (bronchoalveolar lavage), במטרה להשיג תועלת אבחנתית או טיפולית, הוא שטכניקה זו משתמשת ביניקה עדינה ביד של הנוזל שהוחדר. הדבר נועד למקסם את נפח הנוזל המוחזר מהנאדירים ולהפעיל כוח גזירה מינימלי על האפיתל בעל השערות (ciliated epithelia), וזאת כדי לשמר את המבנה והתפקוד של התאים בתוך נוזל השטיפה. הליך השטיפה הברונכואלוולולרית מבוצע כפרוצדורה רפואית ביום, עם בדיקות מקדימות ובדיקות לאחר הפרוצדורה בהתאם למדיניות בית החולים הסטנדרטית, כולל וידוא שטופס ההסכמה הכתוב חתום ומתאריך כראוי.עם הגעתו, הנבדק פוגש את האחות למחקר נשימתי, המבצעת את כל הבדיקות המקדימות הנדרשות לפני הפרוצדורה, כולל וידוא שהנבדק צם לפחות ארבע שעות מאוכלים ושעתיים מנוזלים. אם הנבדק עומד בכל הקריטריונים הנדרשים, הוא מחליף את בגדיו לחלוק בית-חולים, ונלקחות תצפיות מקדימות לפני הפרוצדורה, כולל מדידות של לחץ דם, קצב לב ורוויית חמצן. קנולה בעלת כילון קטן מוחדרת, רצוי ליד שמאל.זה יישאר ב-C two עד לסיום תקופת ההתאוששות שלאחר הפרוצדורה. לאחר מכן, הנבדק מועבר לסוויטת הברונכוסקופיה שבה נוכח ברונכוסקופיסט מנוסה המחקר נשימה. לאחר מכן, ציוד ניטור מחובר לנבדק.זה כולל ECG בעל שלושה לידים, מד לחץ (manometer) ומד סטורציה (pulse oximeter). אין צורך בתמיכה הרדמתית. קנולה נזית מותאמת לכל המתנדבים לפני הכנסת הברונכוסקופ, וחמצן מסופק אם רמות הרוויה יורדות מתחת ל-96% בקצב של עד ארבעה ליטרים לדקה.בשלב זה, המפעיל מבצע בדיקות מקדימות למיקרוסקופ הסיב האופטי (ברונכוסקופ). בדיקות אלו כוללות וידוא של שאיבה יעילה על ידי שאיבת תמיסת סלין סטרילית. ברגע שהמפעיל מוודא שהברונכוסקופ פועל באופן אופטימלי, ניתן אלחוש מקומי למעברי האף ולרירית הפה של הנבדק באמצעות מריחה של Instill gel ו-Xylocaine, בהתאמה.אם הרגעה היא הולמת והנבדק ביקש אותה, ניתן מינון מתאים של midazolam בעירוי לווריד. כבכל פרוצדורה הכוללת הרדמה, יש להחזיק חומר נוגד (reversal agent) מתאים זמין באופן מיידי. בנוסף, יש לוודא שציוד להחייאה נמצא גם הוא בהישג יד.הנתיב לאוורור של הנבדק מבוצע באמצעות הנבה nasal. אם הדבר אינו אפשרי, ניתן לבצע הנבה oropharyngeal, ובלבד שנעשה שימוש במגן פה מתאים באזור הלרינקס. אלחוש מקומי ניתן באמצעות 4-6 mL של lidocaine בריכוז 4% לאחר המעבר דרך מיתרי הקול.בנוסף, ניתן אלחוש רירי באמצעות מנות של 2 מיליליטר של 2% lidocaine בקרינה (carina), בנקודת ההפרדה בין האונה הימנית התחתונה לאונה הימנית האמצעית (RML), ובפתח ה-RML. לבסוף, הברונכוסקופ מגיע לאונה הימנית האמצעית ובאופן אידיאלי ממוקם בסגמנט המדיאלי במיקום דיסטלי בטוח. בצעו את "מבחן העימיץ" (wink test) באמצעות כפתור השאיבה כדי לוודא שהברונכוסקופ אינו ממוקם במיקום דיסטלי מדי, שעלול לגרום לקריסת דרכי הנשימה.ארבעה מזרקים בנפח 60 מיליליטר ממולאים מראש בנפח של 60 מיליליטר, שני נפחים של 50 מיליליטר, ונפח של 40 מיליליטר של תמיסת סליין סטרילית רגילה מחוממת. כאשר הנבדק והברונכוסקופיסט מוכנים, עוזר הברונכוסקופיה מזריק את המזרק הראשון של הסליין. בזמן שהברונכוסקופיסט שומר על המיקום ב-RML, העוזר מבצע שאיבה עדינה בעזרת היד באמצעות אותו הפורט ואותו מזרק.לאחר מכן חוזרים על הפרוצדורה שלוש פעמים נוספות תוך שימוש בכל אחת מהמזרקים באופן עוקב, כאשר בטכניקה ספציפית זו נעשה שימוש בנפח מרבי של 200 milliliters. נוזל ה-BAL שהופק נשפך בעדינות לתוך מכלים מפלסטיק שעשויים להיות סיליקוניים מראש ומונחים על קרח נמס. סיליקוניזציה מונעת היצמדות של תאים וממקסמת את השבת התאים. נוזל ה-BAL נראה עכור מול האור עם בועות סבון על פני השטח הנוצרות על ידי חלבונים וסורפקטנטים.לבסוף, מושך את הברונכוסקופ החוצה באיטיות ובמלאו. הנבדק מועבר למעקב להשגחה במהלך ההתאוששות, ונוזל ה-BAL מועבר ללא עיכוב על קרח. לצורך עיבוד מיידי, יש לאפשר לנבדק להתאושש עד ארבע שעות תחת השגחת אחות מחקר נשימתי.במהלך זמן זה, יש לאפשר לנבדק לנוח אך לא לאכול או לשתות עד לפחות 60 דקות לאחר הפרוצדורה. זאת כדי להפחית את הסיכון לשאיפה, לאחר שסוגיות הבליעה של הנבדק יוערכו כבטוחות. התצפיות שלאחר הפרוצדורה מנוטרות ומתועדות.בדיקה קלינית תתבצע לפני השחרור. הנסיין יקבל הדרכה לגבי תופעות לוואי נפוצות ומספר טלפון ליצירת קשר במקרה של הופעת תופעות לוואי משמעותיות. תור למעקב עם הנסיין יבוצע על ידי רופא או אחות יום אחד עד חמישה ימים לאחר הפרוצדורה.פעולה זו עשויה להתבצע בטלפון או באופן פרוני. לאחר ההגעה למעבדה למחקר, בצעו את כל המניפולציות על קרח רטוב, במידת האפשר.ראשית, רשום את נפח נוזל שטיפת הסימפונות והנאבקים (bronchoalveolar lavage fluid). לאחר מכן, סנן את הנוזל דרך שכבה כפולה של תחביב סטרילי כדי להסיר פקקי ריר ואסוף את התסנין אל מבחנות צנטריפוגה סטריליות של 50 milliliters. השקף את התאים באמצעות צנטריפוגה ב-500 G בטמפרטורה של ארבע מעלות Celsius למשך חמש עד 10 דקות.הסיר את הנוזל העליון (supernatant) ושטוף עם 50 milliliters של תמיסת סליין נורמלית קרה. חזור על תהליך הצנטריפוגציה. פעם נוספת, השהה מחדש את התאים בנפח מתאים של מצע גידול.בדרך כלל, שני מיליליטרים יספקקו צפיפות תאים טובה לספירה. לאחר מכן, בצעו ספירת תאים באמצעות המוציטומטר ו-trypan blue על פי ההליכים הסטנדרטיים, והתאימו את צפיפות תרחיף התאים ל-1×10⁶ תאים למיליליטר על ידי הוספת נפח מתאים של מצע גידול. לאחר מכן, העבירו מיליליטר אחד של תרחיף התאים לכל באער בלוח 24.דגרו את התאים בלוחית באבורי 37 °C למשך שלוש שעות כדי לאפשר היצמדות של מקפגים לצורך עבודות עם לימפוציטים. לאחר שלוש שעות של דגירה, העבירו בעדינות את מצע התרבית למעלה ולמטה באמצעות פיפט שלוש פעמים ואספו אותו. מצע זה מכיל לימפוציטים ומקפגים שאינם נצמדים, וניתן להשתמש בו להערכת תפקוד לימפוציטים.ניתן להשתמש בשיטה זו גם בשלבי טיהור נוספים לעבודות עם מקרופאגים. לאחר שלוש שעות של דגירה, שאבו בזהירות את המדיום והחליפו אותו במדיום טרי וחם ללא אנטיביוטיקה; בשלב זה המקרופאגים נצמדים לצלחת תרבית הרקמה. תאי BAL סנטריגו על עלית מיקרוסקופ באמצעות Thermo Shandin Cyto Centrifuge ונצבעו בצבע גרעיני דיפרנציאלי כדי לחשוף את סוגי התאים.מרבית התאים הם מקפגים (macrophages), כגון התא המסומן ב-M, אך ניתן לראות מדי פעם נויטרופיל המסומן ב-N ולימפוציט המסומן ב-L. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה כיצד לבצע בבטחה וביעילות ברונכוסקופיה ושטיפת מעיים למטרות מחקר באמצעות טכניקה זו; חשוב לציין, כולל אלחוש תקין של בסיס הלשון והחלק האחורי של הלוע (posterior oropharynx), בדיקת הברונכוסקופ לשאיבה יעילה והיעדר דליפות אוויר לפני הפרוצדורה, ובחירת הענף תת-סגמנטלי המתאים ביותר של האונה האמצעית הימנית. מפעילים צריכים לאסוף בעקביות מעל 100 mils של שטיפת מעיים מנבדקים שחוו תופעות לוואי מינימליות.

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור: Venuprasad, K., et al. מתן תוך-קנה של המופילוס אינפלואנזה במודלים של עכברים לחקר דלקת בדרכי הנשימה. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים את האיסוף והעיבוד של נוזל שטיפת הסימפונות מעכבר שעבר המתת חסד שנדבק בהמופילוס אינפלואנזה שאינו ניתן לסוג לניתוח במורד הזרם.

איסוף נוזל שטיפת סימפונות מדגם עכבר נגוע בהמופילוס אינפלואנזה שאינו ניתן לסוג

סרטון זה מדגים את השימוש בציטומטריית זרימה כדי לזהות ולספור תאים חיסוניים שונים בנוזל שטיפה ברונכואלבאולרי. בתחילה, מזהים תאים חיסוניים בודדים באמצעות צבע כדאיות, ולאחר מכן צביעה דיפרנציאלית של חלבוני סמן פני השטח, המאפשרת ספירה מדויקת של כל סוג תא.

זיהוי וספירה של תאי מערכת החיסון בנוזל שטיפה סימפוני לפי ציטומטריית זרימה

התגובה החיסונית המארחת לזיהום הפתוגן היא תהליך מוסדר היטב. ניצול מודל חשיפת ריאות lipopolysaccharide בעכברים, ניתן לבצע הערכות ברזולוציה גבוהה של המנגנונים המורכבים הקשורים להיווצרות מחלה.

הניצול של לוע התחתון Intratracheal PAMP מנהל ושטיפה ברונכואלוואולרית כדי להעריך את תגובת מארח חיסון של עכברים

אנו מתארים שיטה לגרימת דלקת ריאות neutrophilic על ידי אתגר לlipopolysaccharide תרסיס על ידי עִרפּוּל, מודל פציעת ריאות חריפה. בנוסף, טכניקות ניתוחיות בסיסיות לבידוד ריאה, אינטובציה לקנה הנשימה ושטיפה ברונכואלוואולרית הם גם תיארו.

שיטה ליצירת ריאות neutrophilia שימוש התרסיס lipopolysaccharide

מאמר זה מתאר טכניקות bronchoscopic בריאת השור תחת תנאי ניסוי, כלומר חיסון מודרך bronchoscopically, שטיפה ברונכואלוואולרית, צחצוח הסימפונות, וביופסית ריאות transbronchial.

ברונכוסקופיה מודרכת מבחינה ויזואלית, Intrabronchial הרכבת חיסון ו: ריאות שור במחקר ביו<em&gt; בVivo</em&gt; טכניקות דגימה

מצב בריאותי של הריאה משתקף על ידי סוג ומספר של תאים חיסוניים הנמצאים bronchioles של הריאה. אנו מתארים טכניקת שטיפה ברונכואלוואלית המאפשרת בידוד ומחקר של תאים לא דליקים וגורמים מסיסים ממערכת הנשימה התחתונה של עכברים.

ברונכאלווולאר של ריאות Murine כדי לנתח דלקת תאים דלקתית

כאן, אנו מתארים שני שלפוחית חוץ-תאית בידוד םילוקוטורפ אולטראפילטרציה צנטריפוגה, ultracentrifugation עם צפיפות צנטריפוגה הדרגתיות, לבודד שלפוחית חוץ-תאית מדגימות נוזלים שטיפה bronchoalveolar מאתר. השלפוחיות המוגלתיות חוץ-תאית נגזר נוזל שטיפת מאתר bronchoalveolar על ידי שתי השיטות לכמת, מאופיין.

בידוד של שלפוחית חוץ-תאי של נוזל שטיפה Bronchoalveolar מאתר באמצעות טכניקת צנטריפוגה אולטראפילטרציה

אנו מתארים שיטה לעיבוד מכתשיים נוזל ששטיפה בהתאמה דם היקפי מאנשים כרוניים הנגועים באיידס על טיפול תרופתי להערכת מאגרי HIV ריאתי. שיטות אלה תוצאה של רכישת תאים CD4 T טהור מאוד מכתשי מקרופאגים שעשויים להיגרם לאחר מכן עבור immunophenotyping קלדה ו-DNA האיידס/RNA כימות על ידי תגובת שרשרת באולטרסאונד.

עיבוד של ברונמכתשיים נוזלים ומתאימים דם עבור מכתשיים מקרופאג ו CD4+ T-Cell Immunophenotyping קלדה ומאגר HIV הערכה

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לקביעת האם חשיפה לאוזון, קריטריון מזהם אוויר, פוגע מכתשי מקרופאג efferocytosis בvivo. פרוטוקול זה מנצל בדרך כלל ריאגנטים וטכניקות והוא יכול להיות מותאם מודלים מרובים של פגיעה בריאות כדי לקבוע את ההשפעות על מכתשי מקרופאג efferocytosis.

בהערכת Vivo של מכתשי מקרופאג Efferocytosis בעקבות חשיפת האוזון

כתב יד זה מתאר את ביסוס מודל זיהומי של דלקת ריאות בעכברים ואת אפיון פתרון הפגיעה בהתאמה יחד עם שיטות לגידול חיידקים והחדרה תוך טרכיאלית. מתוארת גם גישה חדשנית המשתמשת בציטומטריית זרימה בממד גבוה להערכת הנוף החיסוני.

מודל ניסיוני להערכת רזולוציה של דלקת ריאות

למד שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) בטכניקת שאיבה בעלת לחץ נמוך לאיסוף תאים ממערכת הנשימה. השיטה מבטיחה בטיחות מטופל ושימור חיוניות התאים לעיבוד מיידי במעבדה.

שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

גלה סרטונים נוספים