Name: ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 18 min 47 s
Description: למדו השתלה כבדית אורתוטופית חלקית בעכברושים כמודל ניסויי לחקר השתלות. השיטה כוללת הכנת שתל כבדי עם כריתת 50% ושחזור עורקי כבדי, ומאפשרת הערכת נזק hepatocellular באמצעות מדידת רמות אלנין אמינוטרנספראזה בדם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים פסקל Paschenda ומרייק ולץ לסיוע הטכני שלהם.

<ol><li>Puhl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+viscosity+histidine-tryptophan-ketoglutarate+graft+flush+improves+subsequent+extended+cold+storage+in+University+of+Wisconsin+solution+in+an+extracorporeal+rat+liver+perfusion+and+rat+liver+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Low viscosity histidine-tryptophan-ketoglutarate graft flush improves subsequent extended cold storage in University of Wisconsin solution in an extracorporeal rat liver perfusion and rat liver transplantation model.</a> Liver Transpl. 12, 1841-1849 (2006).</li>
<li>Yagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Preservation+and+Microcirculation+with+POLYSOL+After+Partial+Liver+Transplantation+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved Preservation and Microcirculation with POLYSOL After Partial Liver Transplantation in Rats.</a> J Surg Res. 167, e375-e383 (2011).</li>
<li>Engemann, R., Ulrichs, K., Thiede, A., Muller-Ruchholtz, W., Hamelmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+a+physiological+liver+transplant+model+in+rats.+Induction+of+specific+graft+tolerance+in+a+fully+allogeneic+strain+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Value of a physiological liver transplant model in rats. Induction of specific graft tolerance in a fully allogeneic strain combination.</a> Transplantation. 33, 566-568 (1982).</li>
<li>Sumimoto, R., Shinomiya, T., Yamaguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+hepatic+arterial+blood+flow+in+rats+with+liver+transplants.+Examination+of+donor+liver-derived+serum+class+I+MHC+antigen+in+rats+with+liver+transplants+with+or+without+hepatic+arterial+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Influence of hepatic arterial blood flow in rats with liver transplants. Examination of donor liver-derived serum class I MHC antigen in rats with liver transplants with or without hepatic arterial reconstruction.</a> Transplantation. 51, 1138-1139 (1991).</li>
<li>Chaland, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+with+hepatic+artery+anastomoses.+Hemodynamics+and+response+to+hemorrhage+in+conscious+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation with hepatic artery anastomoses. Hemodynamics and response to hemorrhage in conscious rats.</a> Transplantation. 49, 675-678 (1990).</li>
<li>Imamura, H., Rocheleau, B., Cote, J., Huet, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+consequence+of+rat+orthotopic+liver+transplantation+with+and+without+hepatic+arterial+reconstruction%3A+a+clinical%2C+pathological%2C+and+hemodynamic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Long-term consequence of rat orthotopic liver transplantation with and without hepatic arterial reconstruction: a clinical, pathological, and hemodynamic study.</a> Hepatology. 26, 198-205 (1997).</li>
<li>Zhong, Z., Theruvath, T. P., Currin, R. T., Waldmeier, P. C., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIM811%2C+a+mitochondrial+permeability+transition+inhibitor%2C+prevents+mitochondrial+depolarization+in+small-for-size+rat+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">NIM811, a mitochondrial permeability transition inhibitor, prevents mitochondrial depolarization in small-for-size rat liver grafts.</a> Am. J. Transplant. 7, 1103-1111 (2007).</li>
<li>Spiegel, H. U., Palmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+techniques+of+orthotopic+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical techniques of orthotopic rat liver transplantation.</a> J. Invest. Surg. 11, 83-96 (1998).</li>
<li>Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique for orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 16, 664-669 (1973).</li>
<li>Lee, S., Charters, A. C. 3rd, Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+technic+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Simplified technic for orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Am. J. Surg. 130, 38-40 (1975).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47-50 (1979).</li>
<li>Howden, B., Jablonski, P., Grossman, H., Marshall, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+hepatic+artery+in+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The importance of the hepatic artery in rat liver transplantation.</a> Transplantation. 47, 428-431 (1989).</li>
<li>Gao, W., Lemasters, J. J., Thurman, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+method+for+hepatic+rearterialization+in+rat+orthotopic+liver+transplantation.+Reduction+of+liver+injury+and+improvement+of+surgical+outcome+by+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a new method for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation. Reduction of liver injury and improvement of surgical outcome by arterialization.</a> Transplantation. 56, 19-24 (1993).</li>
<li>Zhao, D., Zimmermann, A., Wheatley, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometry+of+the+liver+after+liver+transplantation+in+the+rat%3A+significance+of+an+intact+arterial+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Morphometry of the liver after liver transplantation in the rat: significance of an intact arterial supply.</a> Hepatology. 17, 310-317 (1993).</li>
<li>Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty-percent+partial+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Fifty-percent partial liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 62, 292-293 (1996).</li>
<li>Lehmann, T. G., Bunzendahl, H., Langrehr, J. M., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+reconstruction+in+rat+liver+transplantation--development+of+a+new+tubing+technique+of+the+common+hepatic+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Int%22%5BJournal%5D)">Arterial reconstruction in rat liver transplantation--development of a new tubing technique of the common hepatic artery.</a> Transpl. Int. 18, 56-64 (2005).</li>
<li>Reck, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+arterialization+on+hepatic+oxygen+supply%2C+tissue+energy+phosphates%2C+and+outcome+after+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Impact of arterialization on hepatic oxygen supply, tissue energy phosphates, and outcome after liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 62, 582-587 (1996).</li>
<li>Hasuike, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+with+arterial+reconstruction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation with arterial reconstruction in rats.</a> Transplantation. 45, 830-832 (1988).</li>
<li>Steffen, R., Ferguson, D. M., Krom, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+orthotopic+rat+liver+transplantation+with+arterial+cuff+anastomosis+to+the+recipient+common+hepatic+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A new method for orthotopic rat liver transplantation with arterial cuff anastomosis to the recipient common hepatic artery.</a> Transplantation. 48, 166-168 (1989).</li>
<li>Knoop, M., Bachmann, S., Keck, H., Steffen, R., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience+with+cuff+rearterialization+in+600+orthotopic+liver+grafts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Experience with cuff rearterialization in 600 orthotopic liver grafts in the rat.</a> Am. J. Surg. 167, 360-363 (1994).</li>
<li>Hickman, R., Engelbrecht, G. H., Duminy, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique for liver transplantation in the rat.</a> Transplantation. 48, 1080(1989).</li>
<li>Liu, T., Freise, C. E., Ferrell, L., Ascher, N. L., Roberts, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+vascular+%22sleeve%22+anastomosis+for+rearterialization+in+orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A modified vascular "sleeve" anastomosis for rearterialization in orthotopic liver transplantation in rats.</a> Transplantation. 54, 179-180 (1992).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+sleeve+anastomosis+for+reconstruction+of+the+hepatic+artery+in+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Modified sleeve anastomosis for reconstruction of the hepatic artery in rat liver transplantation.</a> Microsurgery. 22, 62-68 (2002).</li>
<li>Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+partial+hepatectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Rodent models of partial hepatectomies.</a> Liver Int. 28, 3-11 (2008).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+Principles+of+Humane+Experimental+Technique%22">The Principles of Humane Experimental Technique</a>. , Methuen & Co. Ltd. London. reprinted by UFAW (1992).</li>
</ol>

אין לנו אינטרסים מנוגדים לגילוי. החולדות הם שוכנו בתנאים ספציפיים לפתוגן חופשיים על פי ההנחיות של הפדרציה לעמותות בעלי חי מדע המעבדה (FELASA). כל הניסויים שנערכו בהתאם לחוק הפדרלי הגרמני בנוגע להגנה על בעלי חיים ו&quot; מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה &quot;(המכון הלאומי לבריאות פרסום המס &#39;86-23, מתוקן 1985).

הדגם הראשון של OLT החולדה נמסר על ידי Lee et al. ב -1973 9, שבו כל הכולים כולל העורק הכבד שוחזרו על ידי שיטה נתפרה ביד ומחלף portosystemic extracorporeal היה בשימוש. מודל זה היה טכני מסובך וקשה לביצוע. המודל הבא היה אחד בלי שחזור עורק כבד ומחלף extracorporeal, שפותח על ידי אותם סופרים 10 בשנת 1975. בשינה 1979, קמהדע et al. הציג טכניקת השקת השרוול למודל ללא rearterialization כבד 11. עם השינויים הללו, OLT בחולדות היה פשוט יותר עם זמן anhepatic קצר בפעולות נמען וכבר בשימוש נרחב כמודל ניסיוני מקובל. עם זאת, יש כבר מחלוקת מאז על המשמעות של arterialization בדיה בחולדת OLT 8 בגלל arterialization היה משימה תובענית אבל דילא משפיע על ד הישרדות לאחר השתלה. מחקרים רבים על arterialization כבד באמצעות טכניקת שחזור שונה כבר דיווחו 8, כגון השקת אאורטלי קטע לאב עורקי 3,9,17, טכניקת שרוול השקה 18,19,20, טכניקה טלסקופית 5, טכניקת סטנט 13, 16, וטכניקת השקת שרוול 12,21-23. בעוד הטכניקה לOLT העכברוש היא עדיין לא טופלה היום, מודל arterialized כבר העדיף יותר ויותר במונחים של עליונותה הפיזיולוגית 8,12,13,14. בין הטכניקות שהוזכרו לעיל, טכניקת סטנט שהיה פשוט ומהיר לביצוע נמסרה על ידי להמן ואח&#39;. 16 בשנת 2005. המחקר הראה תוצאות מצוינות: שיעור לא נצפה חסימה בעורק הכבד המשוחזר ב8 שעות, 24 שעות, ו 6 חודשים לאחר reperfusion. לכן אמצתי את הטכניקה הזאת לarterialization כבד. אנו ביצועיםהשקת ma נתפר ביד לשיקום SHVC וIHVC. שיטה זו מספקת אתר anastomotic עם מצב פיסיולוגי אופטימלי, מה שמוביל לשכיחות המופחתת של פקק 8, והוא הסימולציה ואימון למנתחי מייקרו הטובה ביותר. בנוסף, ההשקה יכולה להיות אפשרית גם עם כלי גדמים קצרים. בנוגע להשקה של IHVC, שיטה זו אינה דורשת זמן רב IHVC בצד השתל לעומת טכניקת השקת השרוול. לכן, כאשר וריד כלית התורם גזור לעשות IHVC השתל ארוך, שיטה זו ישימה להשתלה של שתל קטן שמצריכה זמן רב IHVC, כגון שתל 30% שמורכב מאונות ימין לרוחב וcaudate עם intrahepatic קצר וריד נבוב ללא SHVC 2. לגבי הטכניקות של כריתת כבד בחולדות, עד היום מספר שיטות דווחו; שתי הטכניקות העיקריות הן טכניקת קשירת המסה הקלסיתוטכניקת כלי המכוון 24. אנו מבצעים את טכניקת הקשירה הקלסית לכריתת כבד 50% 15, אבל תחת מיקרוסקופ ניתוחי על מנת להפוך את ההליך העדין יותר, וכדי להימנע מניזק לאונות והמבנים הנותרים. אנחנו תארנו את התוצאות המייצגות מן חולדות הנמען במודל שלנו, החולדות שרדו במהלך תקופת התצפית 7-היום ללא סיבוכים לכאורה. המודל יכול להיות שונה למטרות שונות של ניסויים על ידי בחירה בהגדרות השונות, כגון אחסון ממושך קור, איסכמיה החמה ממושכת הכוללת תרומה לאחר מוות לבבי, ושימוש בשתלים קטנים יותר כבדים או שתלים ממודלי ניסויים של פגיעה בכבד או מחלות. מניסיוננו, יש שלושה גורמים מרכזיים ברחבי ההליכים שיכולים להשפיע על ההישרדות לאחר השתלה, הפרמטר האמין ביותר לתוצאות של OLT חולדה: כמות איבוד דם; זמן המבצע, דוארבמיוחד clamping זמן של הווריד וIHVC הפורטל; והלימות של השחזור של כל כלי, אשר יכולות לגרום להיצרות, פקק, או דימום. בתקופת הכשרה של מודל זה, רוב הכישלונות יכול כנראה להיות קשור לגורמים אלו. במאמר זה וידאו, אנו מציגים הוראות שלב אחר שלב לניתוחים למודל העכברים שלנו OLT החלקי עם שחזור עורק כבד. בעוד מודל עכברים של OLT הוא מסובך ודורש מיומנות מייקרו מתקדמת, מאמר זה מספק שפע של מידע מעשי, שאמור לשמש כמדריך טוב לאימון ולמידה של דגם זה. לימוד מודל זה ביעילות, חשוב במיוחד לקיצור תקופת הלימוד, צמצום מספר בעלי החיים והעלויות הדרושות לאימון, ומאוחר יותר משחזר תוצאות אמינות בניסויים. זה עולה בקנה האחד עם תפיסת 3Rs (החלפה, הפחתה, ועידון) של ניסויים בבעלי חיים, שהניחה על ידי ראסל ורץ&#39; ב1959 25.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ הניתוחי </td><td> ליקה </td><td> M651 </td><td></td></tr><tr><td> מקור אור </td><td> שוט </td><td> KL1500LCD </td><td></td></tr><tr><td> ספוגיות כותנה </td><td> NOBA Verbandmittel </td><td> 974202 </td><td></td></tr><tr><td> מטליות גזה (5x5 סנטימטר) </td><td> Fuhrmann </td><td> 10002 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון povidone-יוד </td><td> Mundipharma </td><td> 6108022.00.01 </td><td></td></tr><tr><td> חימר על בסיס שמן </td><td> Debika תאגיד </td><td> 090148 </td><td></td></tr><tr><td> TachoSil </td><td> טאקדה התרופות הבינלאומי GmbH </td><td> EU/1/04/277/001-004</td><td> מוחל על פני שטח כבד resected </td></tr><tr><td> אזמל להב מס &#39;11 </td><td> PFM רפואי </td><td> 200130011 </td><td> הכנה של שרוול וסטנטים </td></tr><tr><td> קטטר 14-מד </td><td> B. Braun </td><td> 4268210S </td><td> קאף לPV </td></tr><tr><td> קטטר 18-מד </td><td> B. Braun </td><td> 4268130S </td><td> זלוף דרך PV </td></tr><tr><td> קטטר 24 מד </td><td> B. Braun </td><td> 4269071S </td><td> סטנט עבור BD וHA </td></tr><tr><td> תפר משי 4-0 </td><td> Resorba </td><td> H3F </td><td> כריתת כבד </td></tr><tr><td> תפר משי 6-0 </td><td> Resorba </td><td> H1F </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 Prolene (פוליפרופילן) תפר </td><td> Ethicon </td><td> 8701H </td><td> SHVC וIHVC </td></tr><tr><td> תפר Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> V304H </td><td> סגירת בטן </td></tr><tr><td> מזרק 5-מ&quot;ל </td><td> Terumo </td><td> אס + T05ES1 </td><td> גבה כרית </td></tr><tr><td> כרית חימום </td><td> Thermo </td><td> 190 מ&quot;מ x 260 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת הכחשה, קיבוע מגנטית </td><td> המדע פיין כלי בע&quot;מ </td><td> 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 </td><td></td></tr><tr><td> אמבט מים קר </td><td> הובר </td><td> 740.000X </td><td> שימור שתל </td></tr><tr><td> דו קוטבי מלקחיים </td><td> Söring </td><td> MBC-200 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחי יתושים </td><td> BONIMED </td><td> 451-476-03 </td><td> שני זוגות בשימוש </td></tr><tr><td> Adson מייקר מלקחיים </td><td> Dimeda </td><td> 10.176.12 </td><td></td></tr><tr><td> מייל מעוקלקרה מלקחיים </td><td> Aesculap </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td> מלקחי מייקר ישרים </td><td> Bonimed </td><td> 451-476-03 </td><td></td></tr><tr><td> מספרי מייקר מעוקלים </td><td> מדיקון </td><td> 05.15.83 </td><td></td></tr><tr><td> מספרי מייקר ישרים </td><td> Aesculap </td><td> FD12 </td><td> חתך פיין </td></tr><tr><td> מספרים </td><td> Aesculap </td><td> BC211W </td><td></td></tr><tr><td> בעל מחט מייקרו </td><td> Aesculap </td><td> FD241R </td><td> שחזור </td></tr><tr><td> בעל מחט ראש העיר Hegar </td><td> Mizuho Ikakogyo </td><td> 06-798-00 </td><td> סגירת בטן </td></tr><tr><td> DeBakey בולדוג מהדק (ישר) </td><td> אולריך </td><td> CV3054 </td><td></td></tr><tr><td> DeBakey בולדוג מהדק (מעוגל) </td><td> CODMAN </td> &lt;td&gt; 37-1062 </td><td></td></tr><tr><td> Satinsky מהדק </td><td> Mizuhoika </td><td> 09-230-24 </td><td></td></tr><tr><td> מהדק כלי דם היקפי </td><td> Teleflex רפואי </td><td> 353494 </td><td> הנמען SHVC </td></tr><tr><td> מהדק כלי מייקרו (חד פעמי) </td><td> AROSurgical מכשירי חברה </td><td> TKM-1-60 גרם </td><td> PV, IHVC שתל, והנמען HA </td></tr><tr><td> מהדק כלי מייקרו (מתכת) </td><td> המדע פיין כלי בע&quot;מ </td><td> 18052-01 </td><td> הנמען IHVC </td></tr><tr><td> פתרון רינגר לקטט </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 6150917.00.00 </td><td></td></tr><tr><td> תמיסת מלח רגילה </td><td> DeltaSelect </td><td> 1299.99.99 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון HTK </td><td> ד&quot;ר פרנץ קוהלר Chemie GmbH </td><td> 31268.00.00 </td><td> פתרון שימור </td></tr><tr><td> הפרין נטריום </td><td> רציופארם </td><td> 5394.02.00 </td><td> 500 יחב&quot;ל לפני זלוף שתל </td></tr><tr><td> 8.4% סודיום ביקרבונט </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 4399.97.99 </td><td> 0.5 מ&quot;ל לאחר reperfusion </td></tr><tr><td> 5% פתרון גלוקוז </td><td> B. Braun </td><td> 6714567.06.00 </td><td> 1.0 מ&quot;ל לאחר reperfusion </td></tr><tr><td> נתרן Cefuroxim </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 38985.01.00 </td><td> אנטיביוטיקה, 16 מ&quot;ג / ק&quot;ג </td></tr><tr><td> עצירות </td><td> תסקס פארמה </td><td> 997.00.00 </td><td> משכך כאבים, 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג </td></tr><tr><td> קייג&#39; היחיד לטיפול נמרץ </td><td> Brinsea מוצרים צריכים בע&quot;מ </td><td> Vetario S10 </td><td> טיפול לאחר הניתוח </td></tr></tbody></table>

ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

השתלת כבד orthotopic (OLT) בחולדות באמצעות שתל שלם או חלקי היא מודל הכרחי למחקר ניסויי השתלה, כגון מחקרים על שימור שתל ו1,2 פציעה איסכמיה reperfusion, תגובות חיסוניות 3,4, 5,6 פרמטרים המודינמיים, ו תסמונת קטנה לגודל 7. OLT החולדה הוא בין המודלים של בעלי החיים הקשים ביותר בניתוח הניסיון ודורש מיומנויות מתקדמות המייקר שלוקחים זמן ללמוד. כתוצאה מכך, השימוש במודל זה היה מוגבל. מאז האמינות והשחזור של תוצאות הן רכיבי מפתח של הניסויים במודלים של בעלי חיים אשר מורכבים כאלה משמשים, חיוני למנתחים העוסקים בעכברוש OLT להיות מאומנים בסטנדרטיים הליכים היטב ומתוחכמים עבור דגם זה. בעוד טכניקות ושינויים של OLT בחולדות שונות כבר דיווחו 8 מאז המודל הראשון היה describאד על ידי Lee et al. 9 בשנת 1973, לחיסולה של בדית השחזור עורק 10 וכניסתה של טכניקת השקת השרוול ידי קמהדע et al. 11 היו התקדמות גדולה במודל זה, כי הם פשטו את הליכי השיקום במידה רבה . במודל על ידי קמהדע et al., Rearterialization הבדיה גם בוטל. מאז חולדות יכולות לשרוד ללא זרימת עורקי כבד לאחר השתלה כבדה, לא הייתה מחלוקת על השווי של arterialization כבד. עם זאת, העליונות הפיזיולוגית של מודל arterialized כבר הודה יותר ויותר, במיוחד במונחים של שמירה על מערכת מרת צינור 8,12 ויושרת הכבד 8,13,14. במאמר זה, אנו מציגים ניתוחים מפורטים למודל של חולדת OLT עם שחזור עורק כבד באמצעות 50% שתל חלקי לאחר vivo לשעבר כבד resection. הליכי השיקום לכל כלי וצינור המרה מבוצעים על ידי השיטות הבאות: 7-0 תפרי פוליפרופילן רציפים ללעיל וinfrahepatic וריד הנבוב; טכניקת שרוול לוריד השער; וטכניקת תומכן לעורק הכבד ו צינור המרה.

כל חולדות הנמען (n = 20) שרדו ללא סיבוכים נראים לעין עד המתת חסד מתוכננת לדגימת דם ב1, 3, 24, ו 168 שעות (7 ימים) לאחר reperfusion פורטל (n = 5 בכל נקודת זמן). דגימות הדם נאספו מIHVC ידי לנקב ישיר עם מחט 27-מד. בעקבות צנטריפוגה XG ב 5340 למשך 10 דקות, את דגימות הסרום התקבלו ונותחו לרמות אלנין aminotransferase (ALT), המשקפות את מידת ניזק hepatocellular לאחר השתלה. הזמן כמובן שינויים ברמות ALT בסרום מוצג באיור 16. רמות ALT הגיעו לשיא ב 24 שעות (ממוצע ± סטיית תקן: 212.6 ± 67.9 IU / L) ולאחר מכן ירד לגבולות נורמלים ב168 שעות (33.6 ± 6.8 IU / L). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig1.jpg" /> איור 1. שרוול לוריד הפורטל (PV) מ1קטטר 4-מד, וסטנטים לעורק הכבד (HA) ומרת הצינור (BD) מצנתרים 24 מד. <img alt="איור 2" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2.jpg" /> איור 2. סכימה של הסרת הכבד מעכברוש התורם BD, מרת צינור;. HA, עורק כבד; IHVC, infrahepatic וריד נבוב; PV, וריד שער; SHVC, suprahepatic וריד נבוב. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig3.jpg" /> איור 3. פעולה תורמת. . החולדה מונחת על כרית חימום עם מערכת הכחשה, קיבוע מגנטית. הבטן נפתחה על ידי חתך קו אמצע עם סיומות בין שתי מדינות. ב. החדרת סטנט לתוך צינור המרה. ג. זלוף של הכבד דרך וריד השער. קיצורים הם להסביראד באיור 2. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig4.jpg" /> איור 4. קובץ מצורף של שרוול לוריד השער. , ב. מהדק DeBakey בולדוג שתופס את תא מטען ורידי הפורטל ממוקם מעל כוס המתכת. הגביע הוא רכוב בקופסא הפלסטיק מלא בקרח כתוש. ג. וריד השער הוא לשים דרך השרוול. ד. הקיר של וריד הפורטל כלפי חוץ על השרוול בגדם וריד הטחול מחוץ לשרוול ב7 שעת מיקום וסיומת של השרוול בכיוון השעה 12. דואר. וריד השער מאובטח באמצעות חוט משי היקפי 6-0 בשרוול. החיצים השחורים מצביעים על הגדם של וריד הטחול. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig5.jpg" /> איור 5. גופיים<html> החדרת סטנט לעורק הכבד. . הכבד קבוע על ידי כיווץ שני הקצוות של הסרעפת, והעורק הכבד נמשך ישר ידי החזקת חוט גבעול לעורק. ב. הקיר הקדמי של החתך הקטן בעורק הכבד נערך עימו מלקחי מייקר ישרים . ג, ד. הסטנט מוחדר לעורק הכבד ומאובטח עם חוט משי 6-0. <img alt="איור 6" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6.jpg" /> איור 6. הסכימה של vivo לשעבר 50% כריתת כבד. אונות בצבע אפור יוסרו. ACL, קדמית caudate אונה; PCL, אונת caudate אחורית; LLL, אונה שמאלית רוחב; LML, חלק שמאלי של האונה החציוני; חלק RML, זכות של האונה החציוני; SRL, אונה ימנית רוחב מעולה; אונת IRL, נחותה זכות לרוחב. = Fo &quot;jove_content&quot;: לשמור-together.within עמודים = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig7.jpg" /> איור 7. גופיים 50% כריתת כבד. . קשירת pedicle של אונת caudate האחורית. ב. קשירת pedicle של החלק השמאלי של האונה החציוני. ג. כבד לפני הכריתה 50%. ד. הכבד לאחר כריתת 50%. <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig8.jpg" /> איור 8. גופיים plasty של suprahepatic הווריד הנבוב. . הכבד קבוע על ידי כיווץ שני הקצוות של הסרעפת עם מלקחי יתושים. ב. תפרים להישאר עם 7-0 פוליפרופילן מצורפים בשתי הפינות. <img alt="איור 9" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig9highres.jpg" srג = &quot;/ files/ftp_upload/4376/4376fig9.jpg&quot; /&gt; איור 9. סכימה של השתלת השתל בחולדת הנמען. הליכי השיקום מבוצעת ללעיל וinfrahepatic וריד נבוב (SHVC וIHVC) עם תפר 7-0 רציפים, וריד הפורטל (PV) על ידי טכניקת שרוול, וכבד עורק (HA) ומרת צינור (BD) על ידי טכניקת תומכן. <img alt="איור 10" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig10.jpg" /> איור 10. פעולת נמען עד לסילוקו של כבד הילידים. . הבטן נפתחה על ידי חתך קו אמצע. ב. וריד הכליה הימנית הגבעול. ג. כבד היליד הוא נכרת. קיצורים מוסברים באיור 2. <img alt="איור 11" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig11.jpg" /> איור 11. השקה של suprahepatic וריד נבוב. , ב. מהדק כלי הדם ההיקפי לsuprahepatic וריד הנבוב קבוע בגוש חימר על בסיס שמן. התפרים להישאר בשתי הפינות נשמרים עם מתיחה עדינה superiolaterally להרחיב את ההשקה. ג. תפר intraluminal רציף של השורה האחורית בהתקדמות. ד. תפר רציף של השורה הקדמית בהתקדמות. <img alt="איור 12" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig12.jpg" /> איור 12. שיקום של וריד השער. , ב. מלקחי יתושי clamping וריד השער קבוע בחימר מבוסס נפט ומשך לעבר hilum הכבד. CF. החדרת השרוול לתוך וריד הפורטל. <img alt="איור 13" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig13.jpg" /> איור 13. בנייה מחדש של העורק הכבד. , ב. </stron<html> ז&gt; החדרת סטנט לעורק הכבד הנפוץ הנמען (CHA) בהסתעפות של עורק הכבד התקין (PHA) ועורק gastroduodenal (GDA). <img alt="איור 14" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig14.jpg" /> איור 14. השקה של infrahepatic הווריד הנבוב. . התפרים להישאר בשתי הפינות. ב. תפר רציף של השורה האחורית. ג. תפר רציף של השורה הקדמית. ד. Reperfusion של infrahepatic הווריד הנבוב. קיצורים מוסברים באיור 2. <img alt="איור 15" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig15.jpg" /> איור 15. כל הליכי השיקום שיסיימו. קיצורים מוסברים באיור 2. <img alt="&lt;/ Html">&quot;איור 16&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg&quot; /&gt; איור 16 זמן כמובן לאחר ניתוח של שינויים ברמות סרום aminotransferase אלאנין (ALT) (n = 20, n = 5 בכל נקודת זמן).. נתונים באים לידי ביטוי כאמצעי עם ברי שגיאה המצביעים על סטיות תקן. רמות ALT הגיעו לשיא ב 24 שעות (212.6 ± 67.9 IU / L) ולאחר מכן ירד לגבולות נורמלים ב168 שעות (33.6 ± 6.8 IU / L).

השתלת הכבד orthotopic בחולדות היא מודל ניסיון הכרחי למחקר ביו. כאן אנו מציגים הניתוחים שלנו להשתלת כבד חולדת orthotopic עם שחזור עורק כבד באמצעות 50% שתל חלקי.

השתלת כבד אורתוטופית (OLT) בחולדות באמצעות שתל מלא או חלקי היא מודל ניסויי חיוני למחקרי השתלה, כגון...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ביצוע השתקת כבד אורטוטופית חלקית בחולדות, כמודל ניסויי הדיר במידה רבה למחקר השתלות. דבר זה מושג תחילה על ידי הוצאה (explantation) של הכבד מהחולדה התורמת. השלב השני הוא הכנת הש Transplant ex vivo, הכוללת כריתת 50% מהכבד.בשלב הבא, כבד המקור של חולדת המקבל מוסר. השלב הסופי הוא השתלת הש Transplant של חלק מהכבד אל תוך חולדת המקבל. לבסוף, נמדדים רמות של alanine aminotransferase בסרום כדי להעריך את הנזק התאי הכבדי של הש Transplant של הכבד לאחר ההשתלה.בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בפרוצדורה זו מתקשים בשל המורכבות הכללית הדורשת מיומנויות מיקרו-כירורגיות מתקדמות. כדי להתחיל בפרוצדורה, הניחו את חולדת התורם המורדמת על משטח חימום לאחר שווידאתם באמצעות לחיצה על בהונות שהבעל חיים מורדם לחלוטין, וקבעו את הזרועות העליונות באמצעות מערכת קיבוע ומתיחה מגנטית. גדלו את הפרווה מכל אזור הבטן של החולדה וחטרו את העור המתאים באמצעות תמיסת פובידון יוד.פתח את הבטן באמצעות חתך בקו האמצע עם הרחבות דו-צדדיות. הנח מזרק של 5 mL מתחת לגבו של החולדה כך שה-supra hepatic vena cava יהיה מורם ונטראלית; השתמש בתפסן Mosquito כדי למשוך את התהליך לכיוון הראש, והחלף מסיחים סובקוסטליים כדי לפתוח את השטח הכירורגי. בשל הצורך למניפולציות תכופות במסיחים ובמזרק ה-5 mL במהלך הפרוצדורה, לא נעשה שימוש בסדינים כירורגיים סביב החתך. תחת מיקרוסקופ כירורגי בהגדלה של 16x, נתק את ה-falciform ligament ואת ה-left triangular ligament, והפרד את ה-left phrenic vein. הסיח את האונה המדיאלית והאונה הלטרלית השמאלית כלפי מעלה באמצעות תחתומי גזה רטובים.באמצעות פינצטה ביפולרית, צורבו והפרידו את כלי הדם הפרא-ספיגאליים (paraesophageal) שבין האונה הלטרלית השמאלית לאונה הקדמית. העבירו את המעיים מחוץ לבטן לצדו השמאלי של החולדה וכסו אותם בתשבץ גזה רטוב. קרצפו והסיטו את האונה הלטרלית הימנית כלפי מעלה באמצעות תשבץ גזה רטוב.בודד את ה-infra hepatic vena caver מהרקמה הרטרו-פריטוניאלית וקשור את הווריד האדרנלי הימני, אשר יחולק מאוחר יותר ממש לפני הסרת הש transplanted כדי להחדיר סטנט לתוך תעלת המרה; ראשית, קשור את תעלת המרה בגובה ההתפצלות של העורק הגסטרו-דודנלי. בצע חתך קטן בדופן הקדמית של תעלת המרה פרוקסימלית לנקודת הקשירה, ולאחר מכן, תוך כדי החזקת הדופן הקדמית של החתך עם מיקרו-פינצטה ישרה ביד שמאל, השתמש במיקרו-פינצטה קמורה ביד ימין כדי להחדיר סטנט לתוך התעלה.יביא אותו למקומו וקבע אותו באמצעות חוט משי במידה שש אפסים.השאירו את אחד הקצוות החתוכים של חוט התפירה על תעלת המרה באורך של ארבעה מילימטרים, כדי שניתן יהיה להחזיק את החוט במהלך האנסטומוזיס המאוחרת. שחררו את הווריד הפורטלי מהוורידים הפורטליים והספלני על ידי קשירה וחיתוך שלהם; קשרו וחתכו את העורק הגסטרו-דודנלי. לאחר מכן, בודדו את העורק הכבדי המשותף מראש הלבלב ועד לשורשו.סובבו את הכבד ימינה באמצעות מקלוני צמר ובצעו דיסקציה לרצועה סביב גב הכבד והוושנית עם השלמת ההכנות. להוצאת הכבד, הסירו את המגבים, את פינצטות היתוש ששימשו לקיבוע תהליך החרב (xiphoid process) ואת המזרק בנפח 5 ml שהונח מתחת לגבו של החולדה.החזיר את המעיים לחלל הבטן. הזרק 500 IU של heparin natrium בשני מיליליטר של תמיסת סலைன் נורמלית דרך וריד הפין. כעבור שלוש דקות בערך, נקה את המזרק של חמישה מיליליטר, את פינצטת היתוך ואת הרטרקטור, וקשור את העורק הכבדי המשותף פרוקסימלית לשורשו.השאירו את אחד הקצוות הגזורים של החוט קשור עבור העורק הכבדי המשותף. זמן רב לאחר קשירת הווריד הנבוב התת-כבדי. סגרו קרוב לווריד הכליתי הימני באמצעות פינצטת Mosquito.סגרו את הווריד הפורטלי באמצעות תפס מיקרו-כליים חד-פעמי מתחת לגזע של וריד הטחול. חתכו את הדופן הקדמית של הווריד הפורטלי והחדירו קטטר בכיול 18 gauge אל תוך הווריד הפורטלי. בצעו פרפוזיה לכבד in situ עם 60 milliliters של תמיסת histidine tryptophan ketoglutarate קרה.בלחץ הידרוסטטי של 20 סנטימטרים, חתוך באופן מיידי את הסרעפת, את הווריד המערך תוך-בית-החזה ואת הדופן הקדמית של הווריד המערך התת-כבדי כדי לאפשר שטיפה של תמיסת הפרפוזיה מהכבד. סגור את הווריד המערך התת-כבדי באמצעות תסמיך כלי דם מיקרוסקופי פחות מהכבד. הסר את הכבד על ידי דיסקציה של הווריד המערך התת-כבדי.הווריד הפורטלי, הסרעפת, הרצועות הנותרות, ווריד האדרנל הימני והעורק הכבדי המשותף. יש להניח את הכבד שהוצא בתוך תמיסת HTK קרה בכוס מתכת המותקנת בקופסת פלסטיק מלאה בקרח גרוס. הפרוצדורות עבור הש transplanted של הכבד מבוצעות בכוס המתכת המלאה בתמיסת HTK קרה מאוד; לצורך חיבור של cuff לווריד הפורטלי, יש לסגור את גזע הווריד הפורטלי באמצעות תפס bulldog של DeBakey ולהניח את התפס בעמדת גישור מעל הכוס.העבירו את הווריד הפורטלי דרך השרוול וסגרו שוב את הווריד הפורטלי יחד עם הארכה של השרוול בעמדת השעה 12, הכניסו את דופן הווריד הפורטלי מעל השרוול כדי למקם את קצה ווריד הטחול מחוץ לשרוול בעמדת השעה 7, ואבטחו את הווריד הפורטלי באמצעות חוט משי 6-0 כדי להחדיר סטנט לעורק הכבדי. קבעו את הכבד על ידי תפיסת שני קצות הסרעפת באמצעות פינצטות ומתוחו את העורק הכבדי המשותף על ידי החזקת החוט הקשור באמצעות תפסן DeBakey bulldog ומספרי מיקרו ישרים. בצעו חתך קטן בדופן הקדמית של העורק הכבדי המשותף באמצעות יד שמאל.החזיקו את הדופן הקדמית של החתך בעזרת מיקרו-פינצטה ישרה וביד ימין הכניסו סטנט לעורק הכבדי המשותף. בעזרת מיקרו-פינצטה מעוקלבת, קשרו את הסטנט באמצעות חוט משי 6/0 והשאירו אחד מקצות החוט הגזוזים באורך של 4 mm. בצעו שטיפה של הכבד דרך הקטטר העורקי עם 5 mL של תמיסת HTK קרה עבור כריתת כבד של 50%.ראשית, קבעו את האונה האחורית באמצעות פינצטת Mosquito כדי להחזיקה במקומה. לאחר מכן, קשרו את השומת שלה באמצעות חוט משי בדרגת 4-0 והסִירו את האונה.את האונה הקוראטית הקדמית מסירים באותו אופן. לאחר מכן, סובב את קופסת הפלסטיק ב-90 מעלות. הדק את הקצה הימני של הסרעפת ואת החלק השמאלי של האונה המדיאלית.בצעו חתך קטן בקצה העליון של הגבול של החלקים הבילטרליים של האונה המדיאלית, ולאחר מכן הסירו את החלק השמאלי לאחר ליגציה. לאחר ליגציה של הפדיקל באמצעות חוט משי במידה 4/0, הסירו את האונה הלטרלית השמאלית וצרבו בזהירות את פני השטח של הכבד שהוסר בעזרת פינצטת ביפולארית. מסת הכבד מופחתת כעת בכ-50% לצורך פלסטיקה של vena cava supra hepatica.ראשית, קבעו את מיקום הכבד על ידי תפיסת שני קצות הסרעפת בעזרת פינצטת Mosquito. לאחר מכן, קצצו את הדופן הקדמית של הווריד החלול העליון (supra hepatic vena cava) על ידי הסרת הסרעפת התואמת. הצמידו תפרירי polypropylene 2 7 0 מהחוץ פנימה בשתי הפינות כתפרי קיבוע (stay sutures) לצורך האנסטומוזה המאוחרת.לאחר מכן, גזמו את הדופן האחורית של ה-supra hepatic vena cava. שמרו את השתל הכבדי בטמפרטורה של ארבע מעלות Celsius בתמיסת HTK בתוך אמבט מים קרים. הכינו את המקבל לניתוח באופן דומה לניתוח התורם ופתחו את הבטן באמצעות חתך בקו האמצע.הניחו תחביש גזה רטוב מעל הצד הימני של התריסריון והמעיים כולם. כדי להשיג שדה ניתוחי סביב הווריד הנישבי התת-כבדי (infra hepatic bena caver), הכניסו את האונה השמאלית והאונה המרכזית לחלל התת-סרעפתי השמאלי, והסיטו את האונה הצידית הימנית כלפי מעלה באמצעות תחביש גזה רטוב.בודד את הווריד הרחב התת-כבדי (infra hepatic vena cava) מהרקמה הרטרו-פריטוניאלית באמצעות ליגציה, וחלק את וריד יותרת הכליה הימני בעזרת גזה לחה ומקלוני צמר. סובב את הכבד שמאלה ונתח את הרצועה שמאחורי הכבד. חתוך את תעלת המרה ממש מתחת לענף מהאונה הלבבית (chordate lobe).השאירו את אחד הקצוות החתוכים של החוט קשור עבור הצינור המרה באורך ארבעה מילימטרים; קשרו וחלקו את העורק הגסטרו-דואודנלי ואת העורק הכבדי הפרופרי במרחק של שלושה מילימטרים מההסתעפות מהעורק הכבדי המשותף, כדי ליצור מבנה רחב של העורק בקצה העורק הכבדי המשותף. סגרו את הווריד החלול התחתון (infra hepatic vena cava) באמצעות תפסן מיקרו-כליים מתכתי מעט מעל הווריד הרנאלי הימני, ואת הווריד הפורטלי בגובה ההסתעפות שלו בhilum של הכבד באמצעות תפסן מזבנב (mosquito forceps). סגרו את הווריד החלול העליון (supra hepatic vena cava) יחד עם הסרעפת באמצעות תפסן כלי דם פריפריאלי וקבעו את התפסן בגוש של פלסטלינה על בסיס שמן. הפחיתו את ההרדמה ב-isof fluorine ל-0.4 אחוז נפח. הסִירו את הכבד המקבל המקורי על ידי דיסקציה של הווריד החלול העליון בגבול שבין הווריד החלול העליון לכבד.וריד הפורטלה מעט מעל ללסת של פינצטת היתוש, והוריד הנבוב התת-כבדי מעט מתחת לנקודת האמצע שבין הכבד לווריד הכליתי הימני. מקמו את שתל הכבד באופן אורטוטופי. שחזור כלי הדם הוא החלק הקשה והחשוב ביותר בהליך זה.יש לבצע זאת בזהירות רבה אך במהירות, עבור האנסטומוזיס של ה-supra hepatic vena cava באמצעות תפר רציף. מקמו את תפר העיגון (stay suture) ב-supra hepatic vena cava של המקבל, מפנים החוצה, באמצעות חוט polypropylene 7/0 המצורף, בפינה הימנית של השתל, ולאחר מכן קשרו קשר באותה צורה. מקמו את תפר העיגון השני בפינה השמאלית.זו תהיה התפר הפותח של תפר רץ. כדי להרחיב את האנסטומוזיס, אחזו ושמרו את התפרים באמצעות תפסני דה-בייקי (DeBakey bulldog clamps) בשתי הפינות, תוך הפעלת מתיחה עדינה כלפי מעלה ולצד. לאחר מכן, חרצו את התפר בפינה השמאלית דרך הדופן בצד השת transplanted graft, מהחוץ פנימה ובסמיכות לקשר שבחוץ, ותפרו את השורה האחורית של ה-satic vena caver תוך כדי תפר תוך-לומנלי (intraluminal) באמצעות שבעה עד שמונה תפרים עד לפינה הימנית.בצע את התפרים הראשונים בזהירות, כך שהלומנים הפנימיים יפנו זה לעומת זה בפינה הימנית. העבר את חוט הפוליפרופילן 7-0 דרך כלי הדם מצד השתל כלפי חוץ. תפר את השורה הקדמית מבחוץ, מימין לשמאל, בכ-10 תפרים.שטפו את החלק הפנימי בתמיסת lactated ringer. כדי להסיר בועות אוויר, בצעו את התפר האחרון קרוב לתפר הייצוב (stay suture) ולאחר מכן קשרו אותם יחד. לצורך שחזור וריד הפורטלה, קבעו את וריד הפורטלה באמצעות תסמיך לכלי דם מיקרוסקופיים וחבקו את פינצטת המוסיקיטו (mosquito forceps) בחימר. לאחר מכן, חתכו את הדופן הקדמית של וריד הפורטלה בדיוק מתחת ללסנפי פינצטת המוסיקיטו.שטפו את החלק הפנימי של וריד השער המקבל ואת השרוול (cuff) באמצעות תמיסת Lactated Ringer. הכניסו את השרוול אל וריד השער והדוקו אותו באמצעות תפר היקפי של חוט משי במידה 6/0. לסיום, בצעו פרפוזיה מחדש לכבד.הוציאו את המזרק בנפח 5 ml מגב החולדה והעלו את ריכוז ה-isoflurane ל-0.8% נפח לצורך שחזור העורק הכבדי בטכניקת סטנט. ראשית, אחזו בחוט של העורק הכבדי הנכון (proper hepatic artery) באמצעות פינצטת Mosquito וקבעו אותו בחימר. לאחר מכן, סגרו את העורק הכבדי המשותף (common hepatic artery) של המקבל באמצעות תפסן.בצעו חתך קטן בפיצול של מבנה ה-Y בקצה העורק הכבדי המשותף (common hepatic artery) כדי ליצור פתח בצורת משפך. החזיקו את הסטנט שמוצב בעורק הכבדי המשותף של השתל באמצעות מיקרו-פינצטה מעוקלת. החליקו את הסטנט אל תוך העורק הכבדי המשותף של המקבל והדקיפו אותו באמצעות קשירה בחוט משי במידה 6/0. קשרו קצה אחד של חוט זה יחד עם החוט במידה 4 מ"מ שעל העורק הכבדי המשותף של השתל, כך ששני העורקים הכבדיים המשותפים יתקרבו זה לזה תוך הפחתת המתח באתר האנסטומוזה.לאחר מכן, שחררו את התפסן עבור האנסטומוזה של ה-infra hepatic vena cava באמצעות תפר רציף באותה צורה שבה בוצעה האנסטומוזה של ה-supra hepatic vena cava, אך השתמשו ביותר תפרים עם נשיכות עדינות יותר. לאחר שחרור התפסנים, הגבירו את ריכוז ההרדמה ל-1.0 volume percent לצורך שחזור תעלת המרה. החזיקו את חוט תעלת המרה של הרסיפיינט באמצעות פינצטת Mosquito וקבעו אותו בחימר.בצעו חתך קטן בצינור המרה בגובה המתאים, כך שצינור המרה המשוחזר לא יהיה ארוך מדי. הכניסו את התומך (stent) ואבטחו אותו בעזרת חוט משי במידה 6/0. קשרו חוט זה לחוט שעל צינור הש transplanted (graft duct).כעת הושלמו כל הלימודי השחזור. סגרו את החתך הבטני באמצעות תפרים רציפים מסוג Vicryl 4-0 בשכבות. מיד לאחר הניתוח, טפלו בחולדה המקבלת באמצעות הזרקה תת-עורית של sphero sodium ו-buprenorphine בנפח כולל של 1.5 milliliters של תמיסת סליין פיזיולוגית.יש לאפשר לחולדה להתאושש במשך 60 דקות בכלוב יחידה לטיפול נמרץ מיוחד עם אוויר חם ואספקת חמצן לפני החזרתה לכלוב רגיל. כל החולדות המקבלות שרדו עד להדמימה המתוכננת לצורך דגימת דם בפרקי זמן של 1, 3, 24 ו-168 שעות לאחר reperfusion של השער הנשרי. דגימות סרום נסרקו לבדיקת רמות alanine aminotransferase, המשקפות את מידת הנזק ההפטוצולרי של השתלי הכבד לאחר ההשתלה.כפי שמוצג בגרף זה, רמות ה-LT הגיעו לשיא לאחר 24 שעות ולאחר מכן ירדו חזרה לגבולות הנורמה בתוך 168 שעות. לאחר סרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן ביצוע השתלת כבד חלקית ותחלית בחולדות כמודל ניסויי הדיר למחקר השתלות.

surgical-procedures-for-rat-model-partial-orthotopic-liver

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מציגים גרסה לא קל ליצור בטכניקה של שתי השרוול קלאסית השתלת כבד orthotopic בחולדה.

השתלת כבד Orthotopic בחולדות

השתלה כבד עזר מספקת תמיכה זמנית בכשל כבד אקוטי, עד התחדשות של הכבד הכושל. השתלת heterotopic עזר הכבד (אלט) עם arterialization וריד שער (PVA) הופכת את תפקוד כבד מספיק. פיתחנו טכניקה דומה בעכברים, כדי לבחון את ההשפעה של arterialization וריד שער על המורפולוגיה והתפקוד של השתל.

Heterotopic עזר עכברוש כבד השתלה עם זרימה מוסדר פורטל וריד Arterialization בכישלון חריף כבדית

כאן, מוצג פרוטוקול מעורבים השתלת כבד חלקית עכברוש arterialized מחדש. באופן ספציפי, 70% הכבד היה resected ויוו באמצעות טכניקת מעודכן של hepatectomy מונחה כלי השיט. עורק הכבד שוחזר בצורה הקצה לצד. הטכניקה השרוול שונה כדי לקצר את זמן השקה של infrahepatic את הווריד הנבוב.

מחדש Arterialized השתלת הכבד חלקית עכברוש עם ויוו מונחה כלי 70% Hepatectomy

השחזור של הווריד הנבוב suprahepatic (SHVC) נשאר צעד קשה בהשתלת הכבד orthotopic חולדה. במאמר זה אנו מראים פרוטוקול צעד אחר צעד עבור שחזור SHVC בחולדות בטכניקה השקה מגנטיים חדשניים.

מודל עכברוש של Orthotopic השתלת כבד בטכניקה השקה מגנטיים חדשניים עבור שחזור הנבוב Suprahepatic

המטרה של מחקר זה היא לשנות את מודל השתלת כבד אורתוטופית חולדה כדי לייצג טוב יותר השתלת כבד אנושי ולשפר את הישרדות הנמען. השיטה המוצגת מחדש את זרימת העורקים הכבדים על ידי חיבור עורק הכבד המשותף של הכבד התורם לעורק הכבד התקין של הכבד הנמען.

סיבוכים מופחתים לאחר חיבור מחדש עורקי במודל חולדה של השתלת כבד אורתוטופית

פרוטוקול השתלת כבד עזר הטרוטופי של חולדות המתואר כאן מציע כלי מחקר מעשי לחקר מנגנונים של דחיית השתלת כבד. מודל זה מסייע להקל על המכשולים הכירורגיים והלחץ של בעלי חיים של השתלת כבד אורתוטופית בחולדות.

מודל השתלת חולדה בכבד שלם עזר הטרוטופי תוך שימוש בכבד כבד למחקרי דחיית אלוגרפט

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

כאן, אנו מציגים מודל כבד עכבר אנושי חדש שנוצר בעכברי נוקאאוט של תאים מתווכים של קולטן רעלן Alb (TRECK)/SCID לאחר השתלת תאי גזע כבד אנושיים לא בשלים וניתנים להרחבה.

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

מודל מהדק hilar כבד עכברוש ייחודי שפותח עבור הבוחנים את שפעת מולקולות תרופתיות לטיוב פגיע reperfusion-איסכמיה. מודל זה כולל cannulation ישיר של אספקת הפורטל למגזר הכבד איסכמי באמצעות סניף של וריד השער, המאפשר למסירה כבדה ישירה.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

מטרת כתב היד והפרוטוקול היא להסביר ולהדגים בפרוטרוט את ההליך הכירורגי של השתלת כליות אורתוגרפית בחולדות. שיטה זו היא פשוטה כדי להשיג את הפרזיה הנכונה של כליה התורם ולקצר את הזמן הreperfusion באמצעות שימוש בטכניקת ורידי השרוול וההשקה.

אורתובנושא חולדה השתלת כליה: מגישת רומן וכירורגית פשוטה

למדו השתלה כבדית אורתוטופית חלקית בעכברושים כמודל ניסויי לחקר השתלות. השיטה כוללת הכנת שתל כבדי עם כריתת 50% ושחזור עורקי כבדי, ומאפשרת הערכת נזק hepatocellular באמצעות מדידת רמות אלנין אמינוטרנספראזה בדם.

ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה

גלה סרטונים נוספים