Name: Cytometry המוני: פרוטוקול לכוונון יומי ודגימות תאים פועלים על Cytometer המוני CyTOF (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 59 s
Description: למד כיצד לכוון יומית ציטומטר מסה CyTOF ולהכין דגימות תאים לניתוח. פרוטוקול זה מדגים כוונון אופטימלי של הגדרות המכשיר, התאמת קצב זרימה ותחזוקה שוטפת לשיפור איכות הנתונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לד&quot;ר האוון ניואל וד&quot;ר שון Bendall למשוב. אנחנו גם רוצים להודות למדעים וDVS ד&quot;ר שון Bendall למדגם בחרוזי הקלקר בעל מספר lanthanide המכיל. אנו מודים למימון ממענק NIH 2 U19 AI057229.

<ol><li>Bandura, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+cytometry%3A+Technique+for+real+time+single+cell+multitarget+immunoassay+based+on+inductively+coupled+plasma+Time-of-Flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Mass cytometry: Technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma Time-of-Flight mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 81, 6813-6822 (2009).</li>
<li>Lou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer-based+elemental+tags+for+sensitive+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.%2C+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Polymer-based elemental tags for sensitive bioassays.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 46, 6111-6114 (2007).</li>
<li>Majonis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curious+results+with+palladium-+and+platinum-carrying+polymers+in+mass+cytometry+bioassays+and+an+unexpected+application+as+a+dead+cell+stain%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Curious results with palladium- and platinum-carrying polymers in mass cytometry bioassays and an unexpected application as a dead cell stain.</a> Biomacromolecules. 12, 3997-4010 (2011).</li>
<li>Leipold, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mass+cytometry+methods+for+bacterial+discrimination%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Development of mass cytometry methods for bacterial discrimination.</a> Anal. Biochem. 419, 1-8 (2011).</li>
<li>Bendall, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+mass+cytometry+of+differential+immune+and+drug+responses+across+a+human+hematopoietic+continuum%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum.</a> Science. 332, 687-696 (2011).</li>
<li>Newell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytometry+by+Time-of-Flight+shows+combinatorial+cytokine+expression+and+virus-specific+cell+niches+within+a+continuum+of+CD8%2B+T+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Cytometry by Time-of-Flight shows combinatorial cytokine expression and virus-specific cell niches within a continuum of CD8+ T cell phenotypes.</a> Immunity. 36, 142-152 (2012).</li>
</ol>

המחברים גם עבודה במרכז האנוש החיסוני הניטור, מרכז שירות באוניברסיטת סטנפורד שגובה דמי שימוש אך ורק כדי לשחזר את העלות של מבחנים, כולל cytometry המוני.

במשך העשורים האחרונים, cytometry הזרימה פלואורסצנטי היה סוס עבודת שיטה לניתוח תאים בודדים, הוא במונחים של ביטוי בשטח ומבחנים תפקודיים. עם זאת, בסוגיות של חפיפת ספקטרום של צבעי הניאון הגבילו את מספר הסמנים בו זמנית. בעוד ניסויים באמצעות יותר מ 12 סמנים בו זמנית כבר דיווחו, סכום הפיצוי הנדרש עושה את זה קשה מבחינה טכנית. במקום fluorophores, cytometry ההמוני החלוץ ידי מדעי DVS משתמש פולימרים בעלי אתרי chelating למתכו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> CyTOF TM ההמוני cytometer </td><td> מדעי DVS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> שטוף את הפתרון </td><td> מדעי DVS </td><td> 201071 </td><td> 0.05% חומצה הידרופלואורית במים </td></tr><tr><td> כוונון פתרון </td><td> מדעי DVS </td><td> 201072 </td><td> 0.5 ppm La, Cs, שחפת, TM, עיר, חומצה חנקתית עקבות </td></tr><tr><td> חרוזי קלקר איחוד אירופי המכילים </td><td> מדעי DVS </td><td> 201073 </td><td> מכיל איזוטופים טבעי שפע איחוד האירופיים; חרוזים מסופקים בכ 1 מ&#39;/ מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Multi-lanthanide המכיל (La / Pr / Tb / Tm / Lu) - חרוזי קלקר </td><td> מדעי DVS </td><td> עדיין לא זמין המסחרי </td><td> מכיל איזוטופים טבעי שפע של lanthanides הרשום </td></tr><tr><td> חומצה חנקתית (מרוכז) </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> A467-500 </td><td> אופטימה עקבות מתכת טהורה ICP-MS כיתה </td></tr><tr><td> צינור פוליסטירן עגול עם תחתית תא מסננת כובע-5 מ&quot;ל </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> משמש לסינון דגימות תאים לפני ההזרקה </td></tr><tr><td> נורמה מקרינה tuberkulin מזרק 1ml </td><td> הנקת זאס וולף </td><td> 4010-200V0 </td><td> סיליקון חופשי, לטקס חינם </td></tr><tr><td> נורמה מקרינה מזרק-3 מ&quot;ל </td><td> הנקת זאס וולף </td><td> 4010.000V0 </td><td> סיליקון חופשי, לטקס חינם </td></tr><tr><td> מי MilliQ </td><td></td><td></td><td> מים טהורים MΩ 18; לא חייבים להיות מאוחסנים בזכוכית או בקבוקי פלסטיק שנשטפו עם חומר ניקוי מסחרי (עקב הרמות הגבוהות של הווה בריום). </td></tr><tr><td> Citranox </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> Z273236 </td><td> חומר ניקוי חומצה </td></tr><tr><td> ארגון גז </td><td> Praxair </td><td> AR 5.0UH-T </td><td> 99.999% טוהר גבוה במיוחד </td></tr></tbody></table>

cytometry המוני: פרוטוקול לכוונון יומי ודגימות תאים פועלים על cytometer המוני cytof

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

בשנים האחרונות, הניתוח המהיר של תאים בודדים יש בדרך כלל בוצע באמצעות cytometry זרימה ונוגדנים שכותרת-fluorescently. עם זאת, סוגיית חפיפת רפאים של פליטות fluorophore הגבילה את מספר הבדיקות בו זמנית. לעומת זאת, cytometer ההמוני CyTOF החדש על ידי זוגות מדעי DVS מערכת הקדמת תא בודד נוזל ICP-MS. 1 במקום fluorophores, פולימרים המכילים איזוטופים chelating מתכת מועשרת-מאוד הם מצמידים לנוגדנים או בדיקות ספציפיות אחרות. 2-5 בגלל טוהר המתכת והרזולוציה המונית של cytometer ההמוני, אין &quot;חפיפת רפאים&quot; מהאיזוטופים שכנים, ולכן אין צורך מטריצות פיצויים. בנוסף, בשל השימוש במתכות lanthanide, אין רקע ביולוגי ולכן אין לה מקבילה של autofluorescence. עם חלון המוני הפורשים מסה אטומית 103-203, באופן תיאורטי עד 100 תוויות יכולות להבחין בו זמנית. כיום, יותר מ 35 ערוצים זמינים באמצעות ריאגנטים chelating הזמינים ממדעי DVS, המאפשר לנתיחת תקדים של הפרופיל החיסוני של דגימות. 6-7 חסרונות cytometry המוני כוללים דרישה המחמירה לאיזוטופ נפרד מתכת לבדיקה (אין מקביל לפיזור קדימה או בצד), ועובדה שמדוברת בטכניקה הרסנית (אין אפשרות למיון החלמה). התצורה הנוכחית של cytometer המסה יש גם שיעור תא שידור של רק ~ 25%, ולכן דורש קלט מספר גבוה יותר של תאים. ביצועים יומיים אופטימליים של cytometer ההמוני דורשים מספר שלבים. המטרה הבסיסית של אופטימיזציה היא למקסם את עוצמת האות הנמדדת של איזוטופים המתכת הרצויה (M) תוך מזעור ההיווצרות של תחמוצות (16 &#39;), שיהיה הפחתה בעוצמת אות M ולהפריע לאות רצויה בM 16. הצעד הראשון הוא לחמם את המכונה כל כך חם, אני יציבCP פלזמה כבר נקבע. שנית, את ההגדרות עבור קצב זרימת גז נוכחי ואיפור חייבות להיות מותאמות על בסיס יומי. במהלך איסוף דגימה, שיעור אירועי התא המרבי מוגבל על ידי יעילות גלאי ומהירות עיבוד עד 1000 תאים / 2. עם זאת, בהתאם לאיכות המדגם, שיעור אירועי תא איטי יותר (300-500 תאים / 2) הוא בדרך כלל רצוי שיאפשר רזולוציה טובה יותר בין אירועי תאים ובכך למקסם את הגופיות שלמות על כפילויות ופסולות. לבסוף, ניקוי נאות של המכונה בסוף היום מסייע למזער אות רקע בשל מתכת חופשיה.

בעקבות הפרוטוקול הנ&quot;ל צריך להשיג ארבעה דברים. ראשית, המאפשר זמן חימום נאות לcytometer ההמוני יפיק פלזמה חמה, יציבה הכרחית לאות אופטימלית והיווצרות תחמוצת מינימאלית. כביסה שנייה, נאותה cytometer ההמוני עם פתרון לשטוף DVS מי MilliQ ו( איור 9) תעזור להפחית את הרמות של מתכת ספיחה לצינורות וחלקים אחרים של המכונה, כדי לסייע להפחית רקע במהלך רכישת מדגם (איור 8). זה גם יעזור להסיר את כל תאים שעלולים להיתקע במכונה ובכך לצמצם carryover ממדגם למדגם. תוך...

את הצעדים הדרושים לכוונון ואופטימיזציה יומיים של ביצועים של cytometer המוני CyTOF מתוארים. תגובות על הכנת מדגם אופטימלי וקצב זרימה נדונות

Cytometry המוני: פרוטוקול לכוונון יומי ודגימות תאים פועלים על Cytometer המוני CyTOF

בשנים האחרונות, ניתוח מהיר של תאים בודדים בוצע בדרך כלל באמצעות ציטומטריית זרימה ונוגדנים מסומנים פלואורסצנטית. עם זאת, ה...

מטרתו הכוללת של פרוצדורה זו היא להדגים את הכיול היומי הנכון ואת ניתוח הדגימות במכשיר CyTOF. ראשית, המכשיר מורכב ומופעל. לאחר מכן, הגדרות המכשיר מותאמות (optimized) לצורך כיול להשגת אות מקסימלי.כעת המכונה מוכנה להרצת הדגימות. בשלב הסופי, המכונה מנוקה ומכובה. בסופו של דבר, ניתן להשיג נתוני תאים אופטימליים בהתאם לדרישות זמן ספציפיות.הדגמה ויזואלית של טכניקה זו היא קריטית. קשה ללמוד את נהלי ההקמה, הכיול והניקוי היומיים מתוך המדריך, כיוון שהם כוללים מספר שלבים תוכנתיים המבוצעים בו-זמנית.עליכם לרכוש ניסיון כדי להבין את רמות הרקע ועצמות האות המתאימות. לפחות 15 דקות לפני תחילת הניסוי, פתחו את תוכנת ה-CyTOF ובחרו ב-instrument setup. לאחר מכן, בלשונית card cage, לחצו על כפתור ה-heater כדי לאפשר למעטפת תא הריסוס להגיע ל-200 °C.החליפו את המזרק במזרק חשמלי במזרק חדש מלא במי milli cube. לאחר מכן, נקו את הנבולייזר על ידי שטיפה לאחור עם 5% Citron פעמיים דרך כל פתח. כדי להסיר שאריות Citron, חזרו על השטיפה לאחור עם מי Milli Q.בשלב הבא, פתחו את שסתום מיכל גז הארגון, פעולה שתוביל להדלקת נורית הארגון בחזית המכשיר. לאחר מכן, חברו את הנבולייזר לכניסת גז המילוי (makeup gas) ואת הנבולייזר לצינור הזרקת הנוזל. הכניסו את קצה הנבולייזר לפתח הלבן במעטפת החימום בלשונית בקר ה-RFG בחלון הגדרות המכשיר.לחצו על start plasma, ולאחר מכן לחצו על okay. לאחר סיום ההפעלה, לחצו שוב על okay בחלון הקופץ. כעת הדליקו את משאבת המזרקים.בעת מילוי חוזר של המזרק, לחצו על כפתור העצירה (stop) במקום על כפתור ההשהיה (pause) כדי לאפס את מונה הנפח. לפני כיול הציטומטר המסתי (mass cytometer), ודאו שהמכשיר חומם במשך 20 דקות. לאחר שהמכונה התייצבה, לחצו על כפתור הגדרות הרכישה (acquisition settings) כדי לפתוח את חלון הגדרות רכישת הנתונים. בלשונית האנליטים (analytes).לחצו על הטבלה המחזורית כדי לפתוח את פאנל בחירת האיזוטופים. לאחר מכן, בחרו את האיזוטופים המופיעים בתמיסת הכיול של DVS sciences המפורטת במדריך ולחצו על שמירה. לאחר מכן, לחצו על כפתור isotopes per reading כדי לפתוח את חלון המסות לכל קריאה.בחרו את מספר הפולסים ושנו את קנה מידה של ציר ה-y על ידי הזנת מספר חדש ולחיצה על enter. כעת מלאו מזרק הזרקה נורמלי של 1 mL בצבע ירוק עם תמיסת כיוון. סובבו את בורר יציאת הדגימה למצב load.הזרק 450 microliters של תמיסת כיול (tuning solution), ולאחר מכן סבב את הבורר למצב הזרקה. המתן עד שאיזוטופי תמיסת הכיול יתחילו להופיע כפסים בתצוגה זו. האותות באזור זמן המעוף (time of flight) שבין 9, 400 ל-9, 800 נובעים מאיזוטופי xenon בגז argon.כעת חזרו למסות לכל חלון קריאה ולחצו על כפתור ההפעלה (play) הירוק. כל קו צבעוני מייצג איזוטופים שנבחרו מלשונית האנליטים. כאשר רמות האיזוטופים יהיו יציבות, כוונו את הזרם הנבחר (current select) מהתפריט הנפתח בלשונית הפרמטרים של חלון הגדרות רכישת הנתונים.בחלון ההתחלה, הזן 0 עבור סיום (finish), והזן 10. עבור ערך הצעד (step value), הזן 0.5, ועבור זמן התייצבות (settling time), הזן 200. לאחר מכן לחץ על שמירה (save).לאחר מכן, לחצו שוב על חלון המסיות לכל קריאה (masses per reading) ולחצו על play. לאחר סימון נקודות השיא של אותות האיזוטופים, עברו ללשונית הגדרות ערוץ ה-DAC בחלון הגדרות המכשיר. גללו למטה אל current והזינו את ערך השיא של האיזוטופ.לחצו על set actual current value, ולאחר מכן שמרו (save). כעת, שנו את התפריט הנפתח ל-make up gas. הזינו 0.55 בחלון ההתחלה (start), 0.95 בחלון הסיום (end), 0.05 בחלון ערך הצעד (step value) ו-200 בחלון זמן ההתייצבות (settling time).לחצו על save. לאחר החזרה לחלון ה-masses per reading ולחיצה נוספת על play, ציר ה-x יציג כעת את ספיקת גז הפיצוי (makeup gas flow rate). שימו לב לערכים שבהם אותות האיזוטופים מגיעים לשיא, והבחינו בעלייה המהירה של אות ה-GD 1 55 לקראת הסוף.לאחר מכן חזור ללשונית הגדרות ערוץ ה-DAC. גלול למטה לסעיף ה-makeup gas והזן את ערך שיא האיזוטופ החדש. לחץ על set actual current value.לאחר מכן לחצו שוב על save כדי לתעד את היחס בין האיזוטופ הרצוי לתחמוצת. ראשית, בצעו הזרקה שנייה של 450 µL של תמיסת כיול. לאחר מכן, בלשונית הפרמטרים, בחרו time מהתפריט הנפתח והזינו 0 בחלון ההתחלה (start), 10 בחלון הסיום (end), 1 בחלון ערך הצעד (step) ו-200 בחלון הייצוב (settling).לאחר לחיצה על play בחלון המשאות לכל קריאה, השתמשו בסמן כדי לקרוא את הערך הגבוה יותר עבור TM 1 69 או TB 1 59, וכן את ערך ה-GD 1 55. כעת, הזרים שלושה מיליליטרים של Milli Q water דרך לולאת הדגימה, ולאחריהם 500 microliters של תמיסת שטיפה DVS. בלשונית כיול המסה, לחצו על run כדי לעקוב אחר התקדמות שטיפת הניקוי עד שעוצמת הפסים תתחיל לרדת.לאחר מכן, הוסיפו שלושה מיליליטרים של מים ב-milli cube ועקבו עד שרמות הפסים ירדו לרמות הרקע. התחילו בהזנת האיזוטופים של הדגימה שהודגמו זה עתה במקום האיזוטופים של תמיסת הכוונון, ולאחר מכן לחצו על שמירה. בשלב הבא, פתחו את חלון הרכישה ושנו את הגדרות הרכישה כפי שנדרש עבור נפח הדגימה.לדוגמה, דגימה של 450 µL תמלא את לולאת הדגימה ותדרוש 600 שניות להרצה כדי לאפשר השהיות ברכישת נתוני התאים. הגדירו את השהיית הרכישה ללפחות 30 שניות ואת השהיית יציבות הגלאי ללפחות 20 שניות לפני ההרצה. שטפו את דגימות התאים לפחות פעמיים עם מי milli cube, ולאחר מכן השעיו את הדגימה בריכוז מקסימלי של 10⁶ תאים למיליליטר וסננו את תמיסת התאים שהתקבלה דרך מסננת תאים של 35 µm.כדי להסיר אגרגטים. כעת הזן שם קובץ חדש עבור הדגימה הנוכחית. שים לב שכל הקבצים חייבים להישמר בכונן E.לאחר מכן, העבירו את שסתום לולאת הדגימה למצב טעינה (load), הזריקו את הדגימה, החזירו את שסתום לולאת הדגימה למצב הזרקה (inject), ואז לחצו על run. בחלון הרכישה, התאים ייוצגו בחלון הצילום (snapshot) כאוספים אופקיים של סימנים בכל תעלה איזוטופית אנכית, ויציגו את הרזולוציה המיטבית בטווח של 300 עד 500 תאים לשנייה, כפי שמוצג כאן.עם סיום רכישת הנתונים של הדגימה, יופיע חלון קופץ. לחצו על אישור כדי לאשר את סיום הרצת הדגימה, ולאחר מכן הגדילו לפחות 500 µL של MQ water בין כל דגימה כדי לסייע בצמצום שאריות דגימה ולניקוי המכשיר. לאחר השימוש, הגדילו 450 µL של תמיסת שטיפה לתוך לולאת הדגימה. עקבו אחר שחרור המתכת החופשית ולאחר מכן שטפו את לולאת הדגימה עם 3 mL של milli Q water, תוך ניטור השטיפה עד להגעה לרמות רקע של פסים (background streak levels).כדי לכבות את המכשיר, בחרו בלשונית בקר ה-RFG בחלון הגדרות המכשיר ולחצו על stop plasma. עם השלמת הפרוצדורה, לחצו על okay בחלון הקופץ, הממליץ להסיר את הנבולייזר תחת לשונית card cage. כבו את המחמם, סגרו את השסתום באספקת ה-argon, ולאחר מכן משכו בזהירות את הנבולייזר לאחור כדי להוציאו מתא התמריס.בשלב הבא, שחררו את הברגה של צינור הכנסת הדגימה והניחו אותו בצד. שחררו את חיבור הכנסת גז המייק-אפ עד שיתרופה מעט, ולאחר מכן משכו החוצה את הנבולייזר. לבסוף, באמצעות אותה מזרק וצינור כפי שהודגם קודם לכן, נקו את שני הפתחים של הנבולייזר בעזרת 5%Citron ואחסנו את הנבולייזר כשהוא מכוסה ב-5%Citron עד לשימוש הבא.שטיפה נאותה של הציטומטר המסתי (mass cytometer) במים מסוג UE ובתמיסת שטיפה DVS תפחית את רמות ספיגת המתכות אל הצינורות ולחלקים אחרים של המכשיר, ובכך תסייע להפחית רעשי רקע כפי שניתן לראות בגרפים אלו. כוונון שגוי, המיוצג על ידי הקו המגנטה, הגביר באופן משמעותי את היווצרות התחמוצות ב-m פלוס 16 בהשוואה לדגימה מכוונת כהלכה, כפי שמוצג על ידי הקו הכחול הכהה. לכך יש השפעה של הפחתה קלה של האותים הרצויים ב-m והגברה משמעותית של הפרעות הרקע הבלתי רצויות ב-m פלוס 16.שטיפה נכונה ודילול תקין של הדגימות במים מזוקקים מסוג Milli Q יבטיחו רקע מינימלי ורזולוציה מרבית של תאים, תוך איזון מול הצורך במהירות. בדומה לנתונים מניסוי מייצג המוצגים כאן, בניסוי זה הועברו חרוזי פוליסטירן המכילים שפע טבעי של lanthanum 1 39 ODIUM one 40, TERBIUM 1 59, DIUM 1 69 ו-LUTETIUM 1 75 במצב רכישת תאים. הנתונים נותחו באמצעות FlowJo, ושרידי חרוזים שבורים הוצאו מהניתוח באמצעות gating.נקבע כי הדגימה המכווןנת כראוי נמצאת בקצב זרימה של 0.74 liters per minute, כפי שמוצג על ידי הקו הכחול הכהה. בקצב זרימה זה נצפו עומקי אות גבוהים יותר מאשר בקצבי זרימה נמוכים יותר, ונצפה כי לדגימה המכווןנת כראוי יש אות גבוה יותר במסות המתכת M ואות נמוך יותר במסות התחמוצת m plus 16 בהשוואה לאותות שאינם מכווןנים כראוי. תצוגה מקרוב של האות במסה M של LANTHANUM 1 39 ו-THULIUM 1 69 מוצגת כאן.שימו לב כי קצב זרימת גז הפיצוי משפיע על עוצמת האות של LANTHANUM 1 39 יותר מאשר על עוצמת האות של thulium 1 69. גרפים אלו מראים את האות במסות תחסן של m פלוס 16, כלומר 1 55 ו-180 5, המתאימות לתחסני LANTHANUM 1 39 פלוס oh 16 ו-thulium 1 69 פלוס oh 16 בהתאמה. שימו לב כי קצב זרימת גז הפיצוי מגביר את האות במסה 1 55 הרבה יותר מאשר את האות במסה 180 5, מכיוון ש-lanthanum 1 39 מתחמצן בקלות רבה יותר מאשר thulium 1 69.עוצמות האות של m ו-m פלוס 16 כפונקציה של קצב זרימת גז הפיצוי מוצגות כאן. הסמלים המלאים מייצגים את MASS M, בעוד שהסמלים הפתוחים מייצגים את mass M פלוס 16; צבעי הקווים תואמים ל-mass M הרלוונטי. שימו לב כי עוצמות האות של LANTHANUM 1 39 ו-price ODIUM 1 41 מושפעות מאוד מקצב זרימת גז הפיצוי, ואפילו מגיעות לנקודה שבה נוכחות התחמוצת של mass m פלוס 16 גבוהה מזו של mass M. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה כיצד להפעיל את ה-CyTOF, לכוון אותו כראוי, להריץ את הדגימות שלכם, ולבסוף לנקות ולכבות את המכשיר בצורה נכונה בסיום ההרצות היומיות.

mass-cytometry-protocol-for-daily-tuning-running-cell-samples-on

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סרטון זה מדגיש שיטה פרוטאומית חד-תאית המשתמשת בנוגדנים מצומדים במתכת כבדה לברקוד תאים מובחן. לאחר מכן, immunostaining ו cytometry המסה מוחלים כדי להעריך שינויים פנוטיפיים חיסוניים ותפקודיים בתאי חיסון אנושיים שמקורם בדם שלם.

בדיקת ברקוד לאפיון פנוטיפי ופונקציונלי של תאי מערכת החיסון

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת ציטומטריה של זרימה לכימות תאי סרטן מזדקנים הנגרמים על ידי טיפול עם סמני הזדקנות כפולים. הגילוי והכימות של תאים מזדקנים כרוכים בשימוש במצע β-גלקטוזידאז. המצע נבקע על ידי β-גלקטוזידאז ליזוזומלי פעיל בתוך התאים המזדקנים, ומייצר תוצר פלואורסצנטי אשר, בשילוב עם גרגרי ליפופוסצין אוטופלואורסצנטיים, מסמן את תאי הסרטן המזדקנים.

כימות מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי סרטן מזדקנים הנגרמים על ידי טיפול

מאמר זה מתאר את האיסוף והעיבוד של דגימות לניתוח ציטומטריית מסה.

לדוגמא הכנה לניתוח Cytometry Mass

כאן נתאר בגישה פרוטיאומיה מבנית תא בודד כדי להעריך את החיסון פנוטיפי ו פונקציונלי (ציטוקינים תאיים אינדוקציה) שינויים בדגימות דם היקפיים, נותחו באמצעות cytometry המוני.

ניתוח מתא בודד של Immunophenotype וייצור ציטוקין בדם כל הפריפריה באמצעות Cytometry המונית

ניתוח תזרים cytometric הוכיח יקר עבור חוקרים תרבויות טהור וניטור dynamics הקהילה מיקרוביאלי. אנו מציגים שלוש זרימות עבודה מקיפה, מן הדגימה כדי ניתוח נתונים, עבור טהור תרבויות וקהילות מורכבים כמו גם ברורה בינוני כמו מטריצות מאתגר, בהתאמה.

אפיון Microbiome Dynamics – Cytometry זרימה מבוסס זרימות עבודה מתרבויות טהור לקהילות טבעי

מאמר זה מדגים שיטה חזקה לכמת המיטוכונדריה או lysosomes בתאים חיים. השילוב של צבעי ספציפיים ליזוזום או המיטוכונדריה עם נוגדנים fluorescently מצומדת סמני פני השטח מאפשר כימות של אלה organelles אוכלוסיות מעורבות לתאים, כמו ראשי תאים שנקטפו דגימות רקמה, באמצעות cytometry זרימה ססגוניות.

כימות מבוססי Cytometry זרימה ססגוניות של המיטוכונדריה, Lysosomes בתאי T

פרוטוקול זה מתאר כיצד לבודד keratinocytes העור מדגמי העכבר, כדי להכתים עם מתכת מתויג נוגדנים, ולנתח תאים ויטראז על ידי cy, try המונית כדי לפרופיל את דפוס הביטוי של חלבונים של עניין בשלבים שונים מחזור התא.

בידוד וכתמים של העור העכבר Keratinocytes עבור ניתוח מחזור התא הספציפי של חלבון הביטוי הסלולרי על ידי המוני הקיקומטריה

פרוטוקול זה מתאים את מדידות מחזור התא לשימוש בפלטפורמת ציטומטריית מסה. עם היכולות מרובות הפרמטרים של ציטומטריית מסה, מדידה ישירה של שילוב יוד מאפשרת זיהוי תאים בפאזה S בעוד סמני מחזור תוך תאיים מאפשרים אפיון של כל מצב מחזור תא במגוון תנאי ניסוי.

שימוש באנלוגי פירימידין, 5-Iodo-2′-Deoxyuridine (IdU) עם סמני מחזור התא כדי לקבוע שלבי מחזור התא בפלטפורמת ציטומטריית מסה

כאן אנו מציגים את הפרוטוקול לשחזור צעדים של תאים סינתטיים המציגים אנטיגן באמצעות Bilayers השומנים הנתמכים על ידי חרוזים ואת השימוש בהם כדי לחקור את הפלט הסינפטי מתאי T מופעלים.

הכנת Bilayers השומנים הנתמכים על ידי חרוזים לחקר תפוקת החלקיקים של הסינפסות החיסוניות של תאי T

אנו מתארים שיטה פשוטה, מהירה של הפקת 3D רקמה דמוית spheroids יישום הפוטנציאל שלהם לכמת הבדלים תאים תאים אינטראקציות.

תא פשוט תלוי תרבות Drop פרוטוקול הדור של Spheroids 3D

למד כיצד לכוון יומית ציטומטר מסה CyTOF ולהכין דגימות תאים לניתוח. פרוטוקול זה מדגים כוונון אופטימלי של הגדרות המכשיר, התאמת קצב זרימה ותחזוקה שוטפת לשיפור איכות הנתונים.

Cytometry המוני: פרוטוקול לכוונון יומי ודגימות תאים פועלים על Cytometer המוני CyTOF

גלה סרטונים נוספים