הכנה ואיון פעולה של הפתוגן מוצרי Double מנת באפי Coat טסיות דם באמצעות מערכת הדם ליירט

בסרטון זה, יוכנה רכז טבחיות במינון כפול ממאגר של שבע שכבות Buffy coats, ולאחר מכן יטופל באמצעות intercept. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה של אופן ההכנה של רכז טבחיות במינון כפול המנוטרל מפתוגנים. ראשית, נציג סקירה סכימטית ולאחריה הדגמה.

שבע יחידות ראשונות של דם מלא נתרם עוברות סבוב בצנטריפוגה והפרדה כדי להפיק שבע יחידות של שכבת תאי דם לבנים וטסיות (buffy coat) העומדות ביעדי הנפח וההמטוקריט. שכבות ה-Buffy coats מחוברות, מאוגדות ועוברות סבוב בצנטריפוגה. לאחר מכן, תרחיף הטסיות מופרד מתאי הדם האדומים הנותרים כדי להפיק ריכוז טסיות במינון כפול לצורך השבתה של פתוגנים ולוקוציטים.

ריכוז טסיות במינון כפול מטופל באמצעות מערכת ה-intercept, המקשרת באופן צולב חומצות גרעיניות. בסופו של דבר, הליך זה מניב שתי מנות טיפוליות של טסיות באיכות in vitro מקובלת לאורך שבעה ימי אחסון, כפי שנקבע על ידי הערכה של pH, גלוקוז, לקטט, PO2 ו-PCO2, וכן רמת ה-CD62P. טכנאי ממרכז הדם ידגים את ההליך, ואנו נתאר את דרישות העיבוד.

ראשית, ודא שריכוז הטסיות במינון כפול עומד במפרטי העיבוד של intercept, שהם 300 עד 420 מיליליטר. נפח של 2.5 עד שבע פעמים 10¹¹ של מינון הטסיות, ופחות מארבע פעמים 10⁶ תאי דם אדומים למיליליטר. התחל את ההליך עם שבע יחידות של דם מלא שנאספו בערכות איסוף של 450 מיליליטר מסוג top bottom.

הניחו את יחידות הדם בכוסות צנטריפוגה ובצעו סבב חזק במהירות של 4,880 RCF למשך 11 דקות בטמפרטורת החדר עם הגדרת בלימה B five בהתאם להוראות היצרן. לאחר הסבב, הדם יופרד לשלוש שכבות: תאי דם אדומים, שכבת בופי (buffy coat) ופלזמה. העבירו את הפלזמה לשקית הלוויין העליונה ואת תאי הדם האדומים לשקית הלוויין התחתונה, תוך השארת שכבת הבופי, בנפח של כ-48 milliliters ו-37% hematocrit, במכל האיסוף.

הניחו את שכבות הבאפי (Buffy coats) על מנער טסיות (platelet agitator) בטמפרטורת החדר למשך הלילה בחיבור סטרילי, שבע שכבות באפי ו-300 milliliters של SSP בתוספת תמיסת תוספים לטסיות. בתצורת ניקוז, כאשר תמיסת התוספים נמצאת למעלה, סגרו את הצינור בין תמיסת התוספים לשכבת הבאפי הראשונה כפי שמוצג כאן. פתחו את הריתוכים בין יחידות שכבת הבאפי ואפשרו להן להתנקז אל מכל שכבת הבאפי האחרון.

בשלב הבא, פתחו את התסבך ואת הריתוך שבין תמיסת התוסף לשכבת ה-buffy coat הראשונה, ואפשרו לכשליש מתמיסת התוסף, כ-100 milliliters, להישטף דרך כל אחד ממכלי ה-Buffy coat באופן רצית לפני סגירת התסבך; חזרו על השטיפה פעמיים נוספות, כאשר בכל פעם נעשה שימוש בכ-100 milliliters מתמיסת התוסף. נתקו את מכל ה-buffy coat המרוכז מהמכלים הריקים. נפח ה-Buffy coat המרוכז, כולל תמיסת התוסף, צריך להיות כ-600 milliliters.

הנח את שכבות הבאפי (Buffy coats) המאוחדות על מכשיר ערבול למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, חבר מכל אחסון טבקיות עם מסנן להפחתת לוקו (leco reduction filter) מובנה לשקית המכילה את מאגר שכבות הבאפי. הנח את שכבות הבאפי המאוחדות ואת מכל אחסון הטבקיות בצנטריפוגה וסבב במהירות של 462 RCF למשך תשע דקות ו-20 שניות.

לאחר הצנטריפוגה, העבירו את תרחיף הטבחוניות דרך מסנן הפחתה מסוג Luca אל תוך מכל האחסון של הטבחוניות. התוצאה היא רכז טבחוניות במינון כפול המכיל כ-7×10¹¹ טבחוניות ב-420 milliliters, שניתן להעבירו תהליך של נטרול פתוגנים באמצעות intercept לנטרול פתוגנים. רכז הטבחוניות במינון הכפול מטופל באמצעות ערכה לעיבוד intercept, הכוללת מכל antoin, מכל הארה ושני מכלי אחסון.

חברו את מכל תרחיף הפלאגטים למכל ה-Amin בערכת העיבוד של ה-intercept. לאחר מכן, תלו את הפלאגטים. שברו את הקנולה התחתונה במכל ה-amin כדי לאפשר לתרסיס לזרום אל מכל ההארה.

לאחר מכן, שברו את הקנולה העליונה של מכל ה-Amin כדי לאפשר לטסיות לזרום דרך מכל ה-Amin אל תוך מכל ההארה. ערבבו בעדינות את תערובת הטסיות וה-amtosin. לחצו קלות על מכל ההארה כדי להוציא ממנו את האוויר.

אטמו את הפיתול בין מיכל ההארה למיכל ה-amato כך שלא יותר מארבעה סנטימטרים של פיתול יבלטו ממיכל ההארה. הסירו והשליכו את המכלים הריקים. הניחו את סט העיבוד במאיר, כאשר מיכל ההארה נמצא בתא הגדול משמאל והמארגן נמצא בתא הקטן בצד ימין.

סרוק את מזהה התרומה. קוד מוצר ועיבוד. הזן את מספר הסדרה למאיר.

סגור את הכיסוי המתכתי ואת המגירה. לחץ על start כדי להתחיל את ההקרנה. המאיר מספק מינון מבוקר של אור UVA לתערובת הפלטלט-אמין במכל ההקרנה.

אמין נקשר בין זוגות הבסיסים של חומצות הגרעין של פתוגנים, שעשויים להיות נוכחים ביחידת טסיות הדם. עם חשיפה לאור, נוצרים קשרי צלב קבועים הנועלים את ה-DNA או ה-RNA יחד, כך שהפתוגנים אינם יכולים לשכפל את עצמם ולגרום למחלה במקבל מוצר הדם. לאחר ההארה, הסירו את ערכת העיבוד.

בשלב הבא, הוצאו את המכלים מהמאמגז, תלו את הטסיות ואת ערכת העיבוד. שברו את הקנולה ביציאה של מכל ההארה ואפשרו לטסיות לזרום אל תוך מכל ה-CAD. בתוך מכל ה-CAD נמצאת פרוסה עם חרוזי פוליסטירן מקרו-נקבוביים שסומנו, המפחיתים את רמות האמין השארי במוצר הדם.

הקפידו שלא לכופף את פרוסת ה-CAD. הוציאו את האוויר ממכל ה-CAD אל תוך מכל התאורה. אטמו את הצינור ליד פתח הכניסה של מכל ה-CAD.

הסר והשלך את מכל ההארה הריק. הנח את מכל ה-CAD עם מכלי האחסון המחוברים אליו על בוחן טסיות (platelet agitator) למשך שש שעות עד 16 שעות. פעולה זו תביא להפחתה של amlin שיורי לריכוז של פחות או שווה ל-2 µM.

לאחר טיפול ה-CAD, הוצא את יחידות הפלטלטים מהמערבל, תלה את הפלטלטים, שבור את הקנולה בפתח היציאה של מיכל ה-CAD ואפשר לפלטלטים לזרום לשני מכלי האחסון. לאחר מכן, הוצא את האוויר ממכלי האחסון. אטום את הצינור מעל מחבר ה-Y והסר את מיכל ה-CAD.

התוצאה היא שני תרכיזי טסיות שבהם נוטרלו הפתוגנים, לצורך הערכת תפקוד טסיות in vitro. נמדדו עבור תרכיזי הטסיות מינון הטסיות, pH, PO₂ ,PC O₂ ,ייצור לקטט וצריכת גלוקוז של ה-intercept. תרכיזי הטסיות נבדקו עד היום השביעי לאחסון.

איור זה מציג את מנת הפלטלטית ההתחלתית הממוצעת של רכז פלטלטית במינון כפול לפני טיפול בחומר חסימה (intercept), ואת מנת הפלטלטית הממוצעת בכל אחד מהמוצרים המפוצלים שעברו טיפול עד היום השביעי של האחסון. כפי שניתן לראות כאן, אובדן הפלטלטית במהלך האחסון היה בערך 9% הפחתה זו אינה שונה מהאובדן הצפוי של פלטלטית במהלך אחסון של פלטלטית קונבנציונלית. על פי הדרישות האירופאיות, ה-pH של הפלטלטית חייב להישאר מעל 6.4 עד לסוף חיי המדף.

במהלך העיבוד, ה-pH של תרכיזי טסיות יורד מעט, בהתאם לנפח ריכוז הטסיות ולחדירות הגזים של מכל אחסון הטסיות. איור זה מציג את ה-pH של מוצרי הטסיות המופרדים לאורך שבעה ימי אחסון; במהלך האחסון, ה-pH יציב ונשמר היטב בטווח דרישות העיבוד. מטבוליזם אירובי אמור להמשיך להתרחש בטסיות המאוחסנות, והוא מהווה אינדיקטור ליכולתן של הטסיות לתפקד in vivo לאחר עירוי למטופל.

צריכת ה-O2 והייצור של CO2 על ידי טסיות הדם מעידים על נשימה מתמשכת של הטסיות במיכל ה-PL 24 10 במהלך שבעת ימי האחסון. באופן דומה, מטבוליזם אנארובי אמור להימשך בטסיות מאוחסנות. לפיכך, צריכת גלוקוז וייצור לקטט מהווים גם הם אינדיקטורים ליכולתן של הטסיות לתפקד לאחר עירוי.

שתי דמויות אלו מציגות את רמות הלקטט והגלוקוז לאורך שבעת ימי אחסון. צריכת הגלוקוז ויצירת הלקטט על ידי הפלטלטית עקביות זו לזו. במהלך שבעת ימי האחסון, בחמש יחידות היו רמות גלוקוז של פחות מ-1.11 millimoles per liter, המהווים את הגבול התחתון של בדיקת הגלוקוז.

הכנת שכבת הבאפי (Buffy coat) ותיקוף האיחוד הניצבו תהליכים שהניבו רכזים של טסיות העומדים בקריטריוני הכניסה לטיפול בחסימה (intercept treatment), ובסגוליות בנפח, במניין הטסיות, ביחס הפלזמה ובזיהום של כדוריות דם אדומות. היחידות הסופיות עומדות בקריטריוני התיקוף לאורך שבעה ימי אחסון, כולל מינון הטסיות וה-pH. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטת הכנת שכבת הבאפי המסורתית, המייצרת רכז טסיות במינון בודד, הוא שהיא ממקסמת את תפוקת הרכיבים מאסיפות דם, מפחיתה הוצאות תפעוליות באמצעות שימוש בטכניקת מינון כפול ומשפרת את בטיחות המטופל על ידי השבתה של פתוגנים המועברים בעירוי.