Name: דרוזופילה מבוגרים חוש הריח הלם למידה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-07T19:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: למדו מדידת זיכרון אסוציאטיבי בזבובי פירות מבוגרים באמצעות מבחן ריח והלם חשמלי. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לחקור מנגנוני למידה וזיכרון ב-Drosophila melanogaster.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים במרכזי מניית Bloomington עבור זן הזבוב. עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר מBBSRC (BB / G008973 / 1).

1 טוס הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Outcross כל מוטציות, Gal4 / כטב&quot;מ וקווים אחרים עם מתח wildtype, כגון CSw-, לפחות שישה דורות שקדמו לניסויים התנהגותיים כדי לשלוט על רקע גנטי 26. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול זבובים על דיאטת מזון קמח תירס, שמרים וולסה סטנדרטי תחת מחזור אור כהה 00:12 שעה 25 מעלות צלזיוס, אלא אם כן מניפולציות ספציפיות דורשות טמפרטורה שונה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את ההשפעות של ביטוי transgene: שימוש 18 ° C כדי למנוע את הביטוי של גנים מושתלים ב( מערכת היעד) ts Gal4 Gal80 באמצעות פיתוח ולאחר מכן להעביר את הזבובים לC חממת 30 ° 1-2 ימים לפני הניסוי התנהגותי. לבצע את הניסוי ב30 ° C כדי לקבוע את ההשפעות של ביטוי transgene 3,4,6,7,14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים באמצעות ערוצי TRPA1 מופעל חום כדי לעורר נוירונים: להעלות את הזבובים ב23 ° C, שבו הוא טמפרטורה ידועהכדי לשמור על ערוץ פעיל, ולאחר מכן לעבור לחדר התנהגות ב30 ° C כדי להפעיל את TRPA1 להביע נוירונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים באמצעות טמפרטורת Shibire רגישה לחסום פלט הסינפטי 11, 14,24: אחורי זבובים ב18 ° C ולנהל בדיקות ב30 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזבובים 1-2 ימים לפני הניסוי ולספור אותם בקבוצות של כ 25 תחת CO אור 2 הרדמה. אחסן את הזבובים לפחות O / N בבקבוקוני מזון (ללא שמרים) בשעה 25 ° C (אלא אם כן מניפולציות ספציפיות נדרשות טמפרטורה שונה) ולחות 70% יחסי בחדר מבוקר לסביבה עם 00:12 שעות אור: תנאים חשוכים עד לפעם של הניסוי. הערה: אחסון זה מאפשר לזבובים להתאקלם במבחן הלמידה שלאחר מכן בוצע בחדר המבוקר לסביבה, שהיה לי את התנאים אופטימליים ללמידת דרוזופילה ו, חשוב מכך, מסירה את כל envi יומיוריאציות ronmental שיכול היה להשפיע על הפנוטיפ ההתנהגותי. </li></ol> .2 הכנה לפני הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הניסויים בפרספקס T-מבוך מחוייט (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן קבוע לבדוק את הצינור המתאים על מנת להבטיח כי חותם אטום מתקבל במהלך הניסוי. במידת צורך, לשנות את O-הטבעות שלאטום את התאים הפנימיים של T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים רשתות נחושת מחוייט בתוך צינורות אימונים. בדוק ונקו את הרשתות אלה באופן קבוע, ולהחליף אם חמצון. צרף את הרשתות נחושת לחוטים באמצעות קליפים תנין שרצים למתג תיבה מחוברת לממריץ חשמלי. השתמש במד מתח כדי להבטיח שהמנגנון מספק את ההלם הנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש g-מהדק להחזיק המבוך בחוזקה כדי למנוע כל דליפת אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריחות לצרף T-המבוך לצינורות שפועל למשאבת אוויר, כדי לאפשר להיגרר על פני הזבובים והוסרו לאחר מכן מT-המבוך. לשמור על אוויר מתוןלזרום ב ~ 2 ליטר / דקה </li></ol> 3 דילולי ריח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשני ריחות שונים בריכוזים כך שהזבובים להראות העדפה שווה לשני הריחות. השתמש 4-methylcyclohexanol (1:67) ו3-octanol (1: 100) מדולל בשמן מינרלים 7,13. הערה: לקבוע בזהירות ריכוזים אלה, אשר משתנים בהתאם למעבדה. לדוגמא לאחרים להשתמש ב01:10 עבור שני הריחות 24. ריחות נפוצים אחרים כוללים אתיל אצטט ויצטט iso-עמילן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 30 μl של הריח המדולל לתוך כוס ריח מחוייט ממוקמת בבלוק ריח המכוסה על ידי צינור פלסטיק עם ראש מחורר המאפשר אוויר להיגרר על הריח בכוס, וכך חושפים את הזבובים לפלומת ריח. </li></ol> .4 ההדרכה Protocol (איורים 1 ו -2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להלם אוויר ריח מבוגר, לבצע את כל הניסויים תחת אור אדום עמום (כלומר., הנורית אדומה), אשר מאפשר לחוקר לראות אך מונע fly מלראות, ובכך מאפשר הזבובים להתרכז בolfaction בניגוד לקלט ויזואלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את הזבובים לתוך צינור אימון ולאחר מכן לצרף לT-המבוך ולאפשר להם להסתגל לצינור וזרימת האוויר ל90 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את הריח הראשון (4 methylcyclohexanol-, MCH) עם הלם 60-V (בהיקף של שנים עשר 1.25 פולסים שניות עם מרווחים בין דופק 3.75 שניות) עבור משך זמן כולל של 60 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ההלם עם תקופת מנוחה 30 שניות ללא ריח או הלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את הריח השני (3-octanol, OCT) ל60 שניות בלי הלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ההלם עם תקופת מנוחה 30 שניות ללא ריח או הלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את הזבובים מחדר האימונים לתוך התא של T-המבוך המרכזי על ידי הפיכת T-המבוך בצד שלה ובעדינות דפיקות התחתונה של T-המבוך על משטח רך כגון מחצלת עכבר ישנה. לשמור על הזבובים בתא המרכזי ל90 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את צינורות הבחירה לbottom של המנגנון כדי ליצור את T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד למידה, להזיז את הזבובים לנקודת T-המבוך, שבו הם נחשפו בו זמנית לשני ריחות הבחירה ולנוע לעבר אחד. לנהל תקופת מבחן ל120 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלכודת הזבובים בצינורות הבחירה על ידי הזזה החדר המרכזי עד ובכך חוסמים את הקצוות של צינורות הבחירה. לאסוף את הזבובים בכל זרוע של T-המבוך ובתא המרכזי לתוך צלוחיות מזון וספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד זיכרון, לאסוף את הזבובים אחרי אימון (4.6) ולהעביר אותם מT-המבוך לבקבוקוני מזון ללא שמרים. חנות זבובים בחושך ב25 ° C ולחות 70% לזמן הדרוש שנותר כדי לקבוע את שלב הזיכרון של עניין (ראה מבוא). לחדש את הזבובים לT-המבוך כמו בשלב 4.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזיכרון לטווח ארוך, להשתמש במבוך בנוי מותאם אישית שמאפשר לכמה קבוצות של זבובים להיות מאומנות בו זמנית. לנהל 5 מחזורים של אימון עם 15 דקות בין מחזור מרווח (ספאCED) או בלי מרווח בין מחזור (התגודד). לשמור על הזבובים ב18 ° C ולחות 70% בחושך עד בדיקה. לפני הבדיקה, להזיז את הזבובים ל25 ° C ולאפשר להם להתאקלם לשעה לפחות 1. להעריך זיכרון לטווח ארוך 24 שעות לאחר אימון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הניסויים התנהגותיים, לנקות את כוסות ריח עם מים חמים וחומר ניקוי חסר ריח. לאחר ייבוש, מעיל הכוסות עם Sigmacote 10 μl. ייבש את Sigmacote על ידי חימום במיקרוגל. מדי פעם לנקות את T-מבוך צינורות פרספקס וחוסם ריח עם מים חמים וחומר ניקוי חסר ריח. </li></ol> .5 חישוב מדד ביצועים: מדידה של הזיכרון &quot;הזבובים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את ביצועי המדד (PI) לכל מצב כמספר זבובי הימנעות הריח לזווג הלם (CS -) מינוס מספר זבובי בחירת הריח לזווג הלם (CS +) מחולק במספר הכולל של זבובים (CS - + CS +) 1. Peמדד rformance (PI) = (# CS - עף - # CS + זבובים) / (# זבובי סך הכל) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב PI הסופי של הניסוי על ידי חישוב ממוצע לצרכן של הניסוי שבו MCH היה הריח לזווג הלם ואחד שבו היה אוקטובר הריח לזווג הלם. זה מסיר את כל הטיה של הזבובים שיש העדפה גבוהה יותר לריח אחד. </li></ol> .6 בקרה הסנסורית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חדות ריח על ידי החדרת ~ 40-50 זבובים לתוך 6,7,17 ​​T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 90 שניות, להזיז את הזבובים לנקודת הבחירה, ולאפשר להם 2 דקות לבחור בין ריחות ואוויר טהורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף ולספור את הזבובים. חישוב אחוזי ההימנעות על ידי חלוקת המספר הכולל של זבובים שבחרו את הריח על ידי חברות שהשתתפו במבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ל6,7,17 ​​תגובתיות הלם, להציג את הזבובים לחדר ההלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 90 שניות של מנוחה, לנהל התחשמלות 60-V DC, שממנו הזבובים יכולים לברוח לדומהצינור ללא הלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר 2 דקות לזבובים לבחירה; לאסוף ולספור את הזבובים. חישוב אחוזי הימנעות הלם על ידי חלוקת מספר הזבובים שנמנעו מההלם על ידי בריחת צינור ההלם במספר הכולל של זבובים בניסוי. כולל זבובים שיישארו בחדר המרכזי בסך של אלה שנמלטו להתחשמלות. </li></ol>

<ol><li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> Journal of Comparative Physiology A. 157, 263-277 (1985).</li>
<li>Bolduc, F. V., Tully, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+flies+and+intellectual+disability%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">Fruit flies and intellectual disability.</a> Fly (Austin). 3, 91-104 (2009).</li>
<li>McGuire, S. E., Deshazer, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thirty+years+of+olfactory+learning+and+memory+research+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Thirty years of olfactory learning and memory research in Drosophila melanogaster.</a> Prog Neurobiol. 76, 328-347 (2005).</li>
<li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+olfactory+memory%3A+single+genes+to+complex+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat Rev Neurosci. 8, 341-354 (2007).</li>
<li>Chiang, H. C., Wang, L., Xie, Z., Yau, A., Zhong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3+kinase+signaling+is+involved+in+Abeta-induced+memory+loss+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">PI3 kinase signaling is involved in Abeta-induced memory loss in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107, 7060-7065 (2010).</li>
<li>Kanellopoulos, A. K., Semelidou, O., Kotini, A. G., Anezaki, M., Skoulakis, E. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+and+memory+deficits+consequent+to+reduction+of+the+Fragile+X+mental+retardation+protein+result+from+metabotropic+glutamate-mediated+inhibition+of+cAMP+signalling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Learning and memory deficits consequent to reduction of the Fragile X mental retardation protein result from metabotropic glutamate-mediated inhibition of cAMP signalling in Drosophila.</a> J Neurosci. 32, 13111-13124 (2012).</li>
<li>Malik, B. R., Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CASK+and+CaMKII+function+in+the+mushroom+body+a%E2%80%99%2F%C3%9F%E2%80%99+neurons+during+Drosophila+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">CASK and CaMKII function in the mushroom body a’/ß’ neurons during Drosophila memory formation.</a> Front Neural Circuits. 7, 52(2013).</li>
<li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem Senses. 32, 65-89 (2007).</li>
<li>Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CASK+regulates+CaMKII+autophosphorylation+in+control+of+synaptic+growth+and+appetitive+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CASK regulates CaMKII autophosphorylation in control of synaptic growth and appetitive learning.</a> Front Molecular Neuroscience. 6, 27(2013).</li>
<li>Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (72), e4334(2013).</li>
<li>Tonoki, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+impairs+intermediate-term+behavioral+memory+by+disrupting+the+dorsal+paired+medial+neuron+memory+trace%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Aging impairs intermediate-term behavioral memory by disrupting the dorsal paired medial neuron memory trace.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109, 6319-6324 (2012).</li>
<li>Yamazaki, D., Horiuchi, J., Nagano, S., Tamura, T., Saitoe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+DCO+mutation+suppresses+age-related+memory+impairment+without+affecting+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The Drosophila DCO mutation suppresses age-related memory impairment without affecting lifespan.</a> Nat Neurosci. 10, 478-484 (2007).</li>
<li>Cavaliere, S., Malik, B. R., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+channels+regulate+age-related+memory+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">KCNQ channels regulate age-related memory impairment.</a> PLoS One. 8, e62445(2013).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Isabel, G., Pascual, A., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exclusive+consolidated+memory+phases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Exclusive consolidated memory phases in Drosophila.</a> Science. 304, 1024-1027 (2004).</li>
<li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr Biol. 23, R752-R763 (2013).</li>
<li>Tully, T., Preat, T., Bonyton, S. C., Del Vecchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li>
<li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+and+memory%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning and memory. 16, 19-27 (2009).</li>
<li>Le Glou, E., Seugnet, L., Shaw, P. J., Preat, T., Gouguel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+consolidated+memory+retrieval+following+sleep+deprivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of consolidated memory retrieval following sleep deprivation in Drosophila.</a> Sleep. 35 (10), 1377-1384 (2012).</li>
<li>Placais, P. Y., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+favour+survival+under+food+shortage%2C+the+brain+disables+costly+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">To favour survival under food shortage, the brain disables costly memory.</a> Science. 339, 440-442 (2012).</li>
<li>Hirano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+launches+CRTC+to+faciltate+long-term+memory+formation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fasting launches CRTC to faciltate long-term memory formation in Drosophila.</a> Science. 339, 443-446 (2012).</li>
<li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li>
<li>Claridge-Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Writing+memories+with+light-addressable+reinforcement+circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry.</a> Cell. 139, 405-415 (2009).</li>
<li>Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dopamine+pathways+induce+aversive+odor+memories+with+different+stability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Three dopamine pathways induce aversive odor memories with different stability.</a> PLoS Genetics. 8, e1002768(2012).</li>
<li>Connolly, J. B., Tully, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aConnolly%2C+JB+%22Drosophila%3A+a+Practical+Approach%22">Drosophila: a Practical Approach</a>. Roberts, D. B. , Oxford University Press. 265-319 (1998).</li>
<li>Connolly, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+disrupted+by+impaired+Gs+signaling+in+Drosophila+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Associative learning disrupted by impaired Gs signaling in Drosophila mushroom bodies.</a> Science. 274, 2104-2107 (1996).</li>
<li>Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traces+of+Drosophila+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Traces of Drosophila memory.</a> Neuron. 70, 8-19 (2011).</li>
<li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+kenyon+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila kenyon cells in situ.</a> J Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li>
<li>Young, J. M., Wessnitzer, J., Armstrong, J. D., Webb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elemental+and+non-elemental+olfactory+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Elemental and non-elemental olfactory learning in Drosophila.</a> Neurobiol Learn Mem. 96, 339-353 (2011).</li>
<li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. .A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+model+for+alcohol+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li>
<li>Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+reveals+neural+circuit+mechanisms+of+fly+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dopamine reveals neural circuit mechanisms of fly memory.</a> Trends Neurosci. 33, 457-464 (2010).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

Assay למידת המבוגרים תסיסנית הלם חוש הריח המוצג כאן מאפשר ניתוח של המנגנונים המולקולריים שבבסיס שלבים שונים של זיכרון, כוללים זיכרון לטווח ארוך 15-17. כמו גם קביעת ההשפעה של מקצבי היממה 18, שינה 19, דיאטה 20,21, הזדקנות 11-13, מחלה ניוונית של מערכת עצבים 5 וטיפולים תרופתיים 5,6,19 על זיכרון. גישות רבות עוצמה פותחו לאחרונה להדמיה התפקודית של המעגלים העצביים שמתווכים זיכרון חוש הריח בזבובי 3,4,7,11,16,27. טכניקות optogenetic אלה משתמשים ברפרטואר העצום של היזמים השונים הזמינים בדרוזופילה 14,16. יזמים אלה משמשים כדי להביע את כתבי סידן וcAMP מקודד גנטי בתאי עצב זיכרון 16,27 כדי לחקור את ההשפעה של מוטציות גנטיות ספציפיות על עקבות זיכרון. השימוש בדואר של יזמים ומוטציות מותנים במבוגרים מאפשר הלימוד של התפקיד לאחר ההתפתחותי של מוצר גן בזיכרון 3,4,6,7,13,14. הדמיה וגישות התנהגותיות יכולים להיות משולבות עם ערוצי אור ומופעל חום כדי לעורר או לדכא תאי עצב שונים במעגל הזיכרון 11,14,16,22-24 להבהיר את תפקידם נוסף. יתר על כן, תאי עצב זיכרון גוף פטרייה נגישים לכל תא הקלטות מהדק תיקון 28, וטכניקות מתמטיות וחישובית נמצא בשימוש למודל זיכרון חוש הריח דרוזופילה 29. התקדמות ניסוי אלה, בשילוב עם הצורות השונות של פרוטוקולי זיכרון אסוציאטיביים הציגו כאן, לאפשר דרוזופילה ללשמש מודל המולקולרי ורמת מעגל השינויים בזיכרון אסוציאטיבי המתרחשים בתגובה ללתגמל, עונש, מוטיבציה, התמכרות, הזדקנות ומחלות 5,6,11-13,16,30-31.

השיטה המוצגת כאן היא שתוארה על ידי טולי וקווין עם כמה שינויים קטנים 1. הניסוי מתבצע בשני שלבים: הזבובים מאומנים בשלב הראשון, והזבובים המאומנים נבדקים בשלב השני. במהלך אימון, קבוצה של זבובים במקביל נחשפו לריח 1 (CS +) והלם חשמלי (ארה&quot;ב) בצינור אימונים. הזבובים אז יקבלו ריח 2 (CS -) ללא הלם חשמלי. זיווג יחיד זה של ריח מסוים עם הלם נקרא אימון 1 מחזור, והריחות ההנפוצים ביותר בשימוש הם 4-methylcyclohexanol (MCH) ו3-octanol (אוקטובר). אימון אחד במחזור מוביל להיווצרותו של שלב יציב של זיכרון שניתן לאתרם לתקופה של עד 7 שעות; עם זאת, הזיכרון נבדק בדרך כלל באופן מיידי על מנת לקבוע מה הוא כינה למידה, רכישה או 2 זיכרון דקות. הזיכרון נמדד ב30 דקות או שעה 1 נקרא זיכרון לטווח קצר, ואילו3 זיכרון hr נקרא זיכרון לטווח בינוני. החשיפה של זבובים למחזורי אימונים חוזרים ונשנים עם פערים בין מחזורי אימון (אימון במרווחים) מובילה לצורה מאוחדת של זיכרון לטווח הארוך שהיא שעתוק CREB תלוי ונמשך עד שבוע. הדרכה ללא פערים (אימון התגודד) מובילה להיווצרות של זיכרון הרדמה עמידה (ARM), אשר בדומה לזיכרון לטווח ארוך, נמדד 24 שעות בדרך כלל לאחר 5 מחזורים של אימונים 7,13,15-17,20,21. עם גישה זו, ההשפעה של מוטציות גנטיות שונות בשלבים שונים אלה של זיכרון ניתן לקבוע. הביטוי מונע האמרגן של transgenes הבהיר או רגישה לטמפרטורה כדי להפעיל או לחסום את הפעילות העצבית של תאי עצב מסוימים מאפשר לחקור שנוירונים הנדרשים לרכישת זיכרון, איחוד ואחזור 3,4,11,15,16,20, 22-24. זיכרון בשעה 1 נמדד בדרך כלל כאשר לומדים פגיעה בזיכרון הקשורה לגיל, כי f זוORM של זיכרון מופיע פגיע במיוחד להשפעות של הזדקנות 11-13. מגוון רחב של בקרות התנהגותיים וגנטיות מבוצעים עם ניסויי זיכרון, למשל, כדי לקבוע אם פגם ביצועים הוא בגלל פגם זיכרון מרכזי או פגם חושי היקפי המונע את הזבוב מחישת ההלם או קיו חוש הריח 5 -7, 1 7, 25,26.

<table><tbody><tr><td>3-אוקטנול</td><td>סיגמא</td><td>218405</td><td></td></tr><tr><td>4-מתיל ציקלוהקסנול</td><td>סיגמא</td><td>15309-5</td><td></td></tr><tr><td>בנזלדהיד</td><td>סיגמא</td><td>418099</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>פלוקה</td><td>BP2629-1</td><td></td></tr><tr><td>הקסיל אצטט</td><td>סיגמא</td><td>108154</td><td></td></tr><tr><td>פרוקטוז</td><td>סיגמא</td><td>F0127</td><td></td></tr><tr><td>אגרוז</td><td>ביוליין</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr></tbody></table>

דרוזופילה מבוגרים חוש הריח הלם למידה

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

תסיסנית כבר בשימוש בניסויי התניה קלסיים במשך 40 שנה, ובכך להקל באופן משמעותי את ההבנה של זיכרון שלנו, ובכלל זה הבהרת המנגנונים המולקולריים המעורבים במחלות קוגניטיביות 1-7. למידה וזיכרון יכולים להיות מאושר בזחלים כדי לחקור את ההשפעה של גני התפתחותיות 8-10 ובזבובים כדי למדוד את התרומה של גני פלסטיות בוגרים 1-7. יתר על כן, תוחלת החיים הקצרה של דרוזופילה מאפשרת הניתוח של גני תיווך פגיעה בזיכרון הקשורה לגיל 5,11-13. הזמינות של הרבה יזמים מושרה המחלקים את מערכת העצבים דרוזופילה מאפשרת לקבוע מתי והיכן גן של העניין נדרש לזיכרון רגיל, כמו גם ממסר של היבטים שונים של אות חיזוק 3,4,14,16. זיכרון לומד בדרוזופילה מבוגרת מאפשר ניתוח מפורט שלהתנהגות ומעגלים המעורבים ומדידה של זיכרון לטווח ארוך 15 -17. אורכו של שלב הבוגר להכיל מניפולציות גנטיות, התנהגותי, תזונתיות ותרופתיות ארוך טווח של זיכרון, בנוסף לקביעת ההשפעה של הזדקנות ומחלות ניווניות של מערכת עצבים על זיכרון 3-6,11-13,15-21. התניה קלסית היא מושרה על ידי ההצגה בו זמנית של אות ניטראלית ריח (גירוי מותנה, CS +) וגירוי חיזוק, למשל., הלם או סוכרוז חשמלי, (גירוי הבלתי מותנה, ארה&quot;ב), שהפכו קשורה אחד עם השני על ידי בעלי החיים 1,16. גירוי שני מותנה (CS -) מוצג לאחר מכן ללא ארה&quot;ב. במהלך שלב הבדיקות, דרוזופילה מוצגות בו זמנית עם CS + וריחות CS-. לאחר דרוזופילה מסופקות זמן לבחור בין הריחות, ההפצה של בעלי החיים נרשמת. אל הליך זהשפל אסוציאטיבי אוויר מרתיע או תיאבון למדידה באופן מהימן ללא הטיה הוצגה על ידי ההעדפה המולדת לכל אחד מהגירויים מותנים. ניסויי בקרה שונים מבוצעים גם כדי לבדוק אם כל גנוטיפים להגיב באופן רגיל לריח וחיזוק לבד.

מדד הביצועים (PI) משמש כמדד של זיכרון. טבלה 1 מציגה חישוב נציג של PI. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> MCH יחד עם הלם </td><td> 3 באוקטובר יחד עם הלם </td></tr><tr><td> זבובי הימנעות MCH (בצינור OCT) = 80 זבובים מעדיפים MCH (בצינור MCH) = 20 PI 1 - (80-20) / 80 + 20) = 0.6 </td><td> זבובי הימנעות אוקטובר (בצינור MCH) = 75 זבובים מעדיפים אוקטובר (בצינור OCT) = 25 PI 2 = (75-25) / (75 + 25) = 0.5 </td></tr><tr><td> PI של הניסוי = (0,6 + 0,5) /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> טבלת 1 חישוב נציג של מדד ביצועים תוך שימוש בנתונים להמחשה. מדדי ביצועים עבור ניסויים שונים ניתן להשוות להבהיר תופעות זיכרון. ברגע כזההשוואה מוצגת באיור 3, המכיל את התוצאות מסדרת הניסויים שבוצעה עם זבובי קנטון S מבוגרים wildtype (WT) וטמבל לומדים מבוגרים זבובים מוטנטיים 1. הממוצע של 10 חוקרים פרטיים מסופק, עם ברים שגיאה מייצגים את סטיית התקן של ממוצע (SEM). תוצאות אלו מראות כי זבובים טמבלים להראות ירידה בלמידה בהשוואה לwildtype. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> איור 1 ניסיוני הגדרה למבוגרים. הזבובים מאומנים ונבדקו במבוך T. האימון כרוך בהצגת ריח עם הלם חשמלי ואחריו ריח B שני ללא הלם חשמלי. לאחר תקופת מנוחה בתא האמצעי הזבובים מוצגים עם שני הריחות בו זמנית. הזבובים לכודיםבשני צינורות ונאספו ונספר להשיג ציוני למידה / זיכרון. <img alt="איור 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> איור 2 פרוטוקול הכשרת המבוגרים. הזבובים מתאמנים בשני שלבים. הצעד הראשון שבו זבובים יקבלו ריח (CS +) יחד עם ההתחשמלות (ארה&quot;ב) ל60 שניות. בשלב הבא זבובים יקבלו ריח שני (CS-) ללא הלם חשמלי. אז זבובים מותר לנוח 90 שניות לאחר שהם נבדקים על הבחירה שלהם בין CS + וCS-. <img alt="איור 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> איור 3 גרף נציג מראה טמבל ולמידת wildtype בדרוזופילה מבוגרת. </strong&gt; WT וזבובים טמבלים נבדקו הבאים פגישה אחת של אימון. זבובים טמבלים להראות ירידה בלמידה בהשוואה לWT (n = 10).

השיטה למדידה למבוגרים זיכרון אסוציאטיבי דרוזופילה מתוארת. Assay מבוסס על היכולת של הזבוב לשייך ריח מוצג עם (שוק חשמלי) חיזוק שלילי ולאחר מכן לאחזר את המידע הזה במועד מאוחר יותר, ומאפשר זיכרון כדי להימדד.

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

המטרה הכללית של הליך זה היא למדוד זיכרון אסוציאטיבי באמצעות בדיקת הלם ריח בdrosofilla בוגרת. הדבר משיג על ידי איסוף זבובים תחת הרדמה של פחמן דו-חמצני תחילה. השלב השני הוא חשיפת הזבובים בו-זמנית להלם חשמלי ולריח ראשון A בצוות A. לאחר מכן, הזבובים נחשפים לריח השני B ללא הלם.לבסוף, הזבובים מועברים לנקודת הבחירה בצוות א', שם הם נחשפים הן לריח A והן לריח B בו-זמנית. לאחר שתי דקות של זמן פיזור, הזבובים שבחרו בריח A ואלו שבחרו בריח B נאספים בנפרד ונספרים תחת פחמימן (carbon dioxide). דבר זה מאפשר חישוב של מדד הביצועים עבור כל ריח. ה-PI הסופי מתקבל על ידי חישוב ממוצע של ה-PI משני ניסויים נפרדים: האחד שבו ריח A צומד להלם, והשני שבו ריח B צומד להלם.שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי השפעת המצב הפנימי של בעל החיים והזיכרון. לדוגמה, על ידי שינוי הגיל, התזונה והשינה, ניתן להחיל אותה גם על מערכות אחרות. כך למשל, היא אנלוגית לבדיקות התניית פחד המתווכות על ידי מכרסמים או מפעלים, כאשר הגנים ומנגנוני הלמידה שמורים מאוד בין חרקים ליונקים.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן הכנת הזבובים למבחן והעברתם אל תוך ומחוץ למכשירי ה-teammates היא קשה ללמידה, ולא פשוט להבין כיצד לבצע אותה רק על סמך פרוטוקול כתוב. כדי להתחיל, גדלו זבובים על תזונת מזון סטנדרטית תחת מחזור אור-חושך של 12 שעות בטמפרטורה של 25 °C. יום עד יומיים לפני הניסוי, הרדימו את הזבובים באמצעות פחמן דו-חמצני והפרידו אותם לארבע קבוצות של 25. אחסנו את הזבובים למשך לילה בבקבוקוני מזון ללא שמרים בטמפרטורה של 25 °C ובלחות של 70% בחדר מבוקר סביבתית תחת מחזור אור-חושך של 12 שעות.בשלב הבא, הכינו מערכת MAs מותאמת מ-Perspex ובדקו באופן קבוע את חיבורי הפעמים כדי להבטיח אטימה הרמטית במהלך הניסוי; הניחו רשתות נחושת מתוכננות בתוך צינורות האימון. נקו את הרשתות באופן סדיר והחליפו אותן אם הן מתחמצנצות. השתמשו בתפסני תניח כדי לחבר את רשתות הנחושת לחוטים המובילים לתיבת מפסקים המחוברת למעורר חשמלי.לאחר מכן, השתמש במד-מתח (voltmeter) כדי לוודא שהמכשיר מספק את השוק הנדרש. בשלב הבא, הצמד את המבוך בחוזקה באמצעות תפסני G. כדי למנוע דליפות אוויר, חבר את מבוך ה-T לצינור המחובר למשאבת אוויר, כדי לאפשר לשאיבת הריחות לעבור על פני הזבובים ולהסיר אותם מהמערכת.שמרו על זרימת אוויר מתונה של שני ליטרים לדקה, ולאחר מכן דללו 4-methylcyclohexethanol או MCH ביחס של 1:67 ו-3-octanol או OCT ביחס של 1:100 בשמן מינרלי. לאחר מכן, העבירו בפיפטה 30 µL של הריח המדולל אל כוס הריח. הכינו כוס ריח בהתאמה אישית וכסו בלוק ריח עם צינור פלסטיק בעל חלק עליון מחורר.מקם את כוס הריח שהוכנה במיוחד בתוך בלוק הריח. מנגנון זה מאפשר שאיבת אוויר מעל הריח בכוס, ובכך חושף את הזבבים לענן ריח. בצע את כל ניסויי ההתניית הלם הריחי בבוגרים תחת תאורה אדומה עמומה, המאפשרת לחוקר לראות, אך מונעת מהזבוב לראות ומבטיחה שהזבבים יתרכזו בריח בניגוד לקלטים חזותיים.בשלב הבא, העבירו את הזבובים אל צינור האימון המחובר ל-TMAs ואפשרו להם להסתגל לצינור ולזרימת האוויר במשך 90 שניות. הגישו את ריח ה-MCH הראשון עם הלם של 60 וולט, המורכב מ-12 פולסים של 1.25 שניות, עם מרווחי זמן של 3.75 שניות בין הפולסים, למשך זמן כולל של 60 שניות.לאחר ההלם, המתן תקופת מנוחה של 32 שניות. הצג את הריח השני של OCT למשך 60 שניות ללא הלם. לאחר ההלם, המתן תקופת מנוחה של 32 שניות.לאחר מכן, הפכו את מכשיר ה-teammates על צדו והקישו בעדינות בתחתיתו על משטח עכבר כדי להעביר את הזבובים מתא האימון אל התא המרכזי. לאחר השהייה של הזבובים בתא המרכזי למשך 90 שניות, התקינו את צינורות הבחירה בתחתית המכשיר כדי להכין את ה-team A למדידת הלמידה. העבירו את הזבובים לנקודת הבחירה של ה-teammates וחשפו אותם בו-זמנית לשני הריחות למשך 120 שניות.לכדו את הזבובים בתוך צינורות הבחירה על ידי החלקת התא המרכזי למעלה. לאחר מכן, אספו את הזבובים מהתא המרכזי ומכל אחת מזרועות המכשיר אל תוך מבחנות מזון נפרדות. סמנו בבירור על המבחנה את סוג הזבובים ואת בחירת הריח שלהם, ולאחר מכן ספרו אותם כדי למדוד את הזיכרון.אספו את הזבובים לאחר האימון והעבירו אותם מהמבחנות לקבוצות למבחנות מזון ללא שמרים. אחסנו את הזבובים בחושך בטמפרטורה של 25 degrees Celsius ובלחות של 70% כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט המצורף. לאחר מכן, החזירו את הזבובים לקבוצותיהם.עבור זיכרון לטווח ארוך. השתמשו במבוך שנבנה באופן מותאם, המאפשר אימון של מספר קבוצות זבובים בו-זמנית. בצעו חמישה מחזורי אימון.יש לשמור את הזבובים בטמפרטורה של 18 degrees Celsius ובלחות של 70%humidity בחושך עד לביצוע הבדיקה. לפני הבדיקה, העבירו את הזבובים לטמפרטורה של 25 degrees Celsius ואפשרו להם להסתגל למשך שעה אחת לפחות.בצעו הערכה של הזיכרון לטווח ארוך, 24 שעות לאחר האימון. לאחר הניסויים ההתנהגותיים, נקו את כוסות הריח באמצעות מים חמים ודטרגנט ללא ריח.לאחר הייבוש, מרחו 10 µL של sigma coat על כוסות הריח. לאחר מכן, חממו את כוסות הריח בתנור מיקרוגל כדי להקשيح את ה-sigma coat. בצעו בדיקת רגישות לריח על ידי הכנסת 100 זבובים אל ה-team aze; לאחר 90 שניות, העבירו את הזבובים לנקודת הבחירה ואפשרו להם שתי דקות לבחור בין ריחות טהורים לאוויר.לאחר מכן, אספו וספרו את הזבובים. לבדיקת תגובה להלם, הכניסו את הזבובים לתא ההלם.לאחר 90 שניות של מנוחה, הגש shock חשמלי של 60 volt DC. חלק מהזבובים יברחו לצינור דומה ללא shock. תן לזבובים שתי דקות לבחור.לאחר מכן, אספו וספרו את הזבובים שברחו מצינור ההלם כדי לה 규יח את השפעות הלמידה. סדרת ניסויים בוצעה עם זבובים בוגרים מסוג wild type של Canton ועם למידה בזבובים בוגרים מוטנטיים מסוג DS. זבובים מסוג duns מראים ירידה בלמידה בהשוואה לזבובים מסוג wild type.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לעקוב במדויק אחר זהות הזבובים ומה בוצע עבור כל אחד מהם. שימו לב כי הזבובים עלולים להיכנס למצב של סטרס בקלות במהלך ההכנה, האימון והבדיקה. ודאו שאתם ממזערים את הסטרס ושומרים על עקביות.זכרו כי הלמידה של ה-Joslin עשויה להראות וריאציות מדי יום. לפיכך, נקטו במיגורה ובצעו את הנהלי הבקרה והניסוי בקירוב באותה השעה ביום ותחת אותם תנאים. אם קבוצות הבקרה מפסיקות ללמוד, נסו לנתח מה בוצע באופן שונה בהשוואה לימים שבהם הניסוי עובד.לאחר שתבדילו את המשתנה, נסו להשיג עקביות רבה יותר עם משתנה זה בעת ביצוע בדיקת הזיכרון. בהצלחה להמשך.

drosophila-adult-olfactory-shock-learning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אנו מתארים טכניקה הוקמה כדי למדוד ולנתח ריח עוררו תגובות סידן באונה מחושים...

סידן הדמיה של ריח עוררו התגובות תסיסנית מחושים האונה

זחלי תסיסנית מסוגלים לשייך גירויי ריח בתגמול בטעם. כאן אנו מתארים הפרדיגמה התנהגות פשוטה המאפשרת הניתוח של למידה אסוציאטיבית אפטטיבית הרחה.

למידה אסוציאטיבית הרחה באפטטיבית<em&gt; דרוזופילה</em&gt; זחלים

סרטון זה מתאר בדיקת התניה קלאסית שבוחנת למידה וזיכרון בדרוזופילה, הנקראת התניה של חיזור. הבדיקה מבוססת על הפחתת החיזור הגברי לאחר שחווה דחייה על ידי נקבה לא פתוחה מראש. הפרוטוקול לדוגמה מציג הגדרה עבור ההליך שניתן להשתמש בה כדי להעריך זיכרון לטווח קצר וארוך.

דרוזופילה התניות חיזור: שיטה לבדיקת למידה וזיכרון בזבובים

אנו מציגים מבחן אמריקאי כדי לחשוף את ההשפעה של ניחוחי על התנהגות דרוזופילה באמצעות assay Y-מבוך.

בדיקה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Olfaction עם Assay Y-מבוך

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

טעם הוא תהליך חושי חשוב המאפשר משיכה לחומרים מועילים והימנעות מחומרים רעילים.  פרוטוקול זה מתאר מבחן בליעה פשוט לקביעת העדפת טעם של דרוזופילה לתרכובת כימית נתונה.

Assay העדפות טעם למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em

פרוטוקול זה מתאר לימוד תסיסנית זיכרון assay שנקרא מיזוג חיזור. זה assay קלאסי מבוסס על צמצום התנהגות החיזור הגברי לאחר דחייה מינית על ידי נקבה לא נקלט מראש. צורה טבעית זו של גמישות התנהגותית יכולה לשמש לבחינת למידה, זיכרון לטווח קצר וזיכרון לטווח ארוך.

תסיסנית חיזור התניה כמדד למידה וזיכרון

כאן אנו מציגים פרוטוקול שבו ניתן לדמיין את הסידן הטרום ו/או הפוסט-סינפטיות בהקשר של למידה וזיכרון של דרוזוהילה . בשנת הדמיה vivo סידן באמצעות synaptically חיישנים סידן מקומי משולב עם הפרדיגמה הקלאסית מיזוג ריח כגון הפלסטיות הסינפטית הבסיסית בבסיס סוג זה של למידה אסוציאטיבית עשוי להיקבע.

ב-Vivo סידן הדמיה אופטית של למידה הנגרמת הפלסטיות הסינפטית בדרוזופילה מלאנוסטר

עבודה זו מתארת פרדיגמה התנהגותית פשוטה המאפשרת ניתוח של למידה אסוציאטיבית מרתיעה בזבובי פירות בוגרים. השיטה מבוססת על דיכוי ההתנהגות הגיאוטקסית השלילית המולדת בשל הקשר שנוצר בין הקשר סביבתי מסוים להלם חשמלי.

דרוסופילה התנהגות הימנעות פסיבית כפרדיגמה חדשה לחקר למידה אסוציאטיבית מרתיעה

אנו מתארים כאן שיטות להשראת וניתוח שיפוץ תלוי חוויית ריח של גלומרולי סינפטי של אונת אנטנה במוח הצעיר של דרוזופילה .

עיצוב מחדש תלוי ניסיון של נוירון חושי חושי הריח של המוח הצעיר קישוריות סינפטית בתקופה קריטית לחיים מוקדמים

מחסום משמעותי לחקר הפעילות התאית במהלך תהליכים קוגניטיביים כמו למידה וזיכרון הוא השימוש בחומרי הרדמה להכנת הדמיה in vivo . הרדמה פוגעת בזיכרון לטווח קצר ובקוגניציה במספר מודלים, כולל דרוזופילה. מחקר זה מציג שיטה ייחודית להכנת דרוזופילה בוגרת להדמיה in vivo ללא הרדמה.

ב Vivo הדמיה של פעילות עצבית בזבובים בוגרים של דרוזופילה לא מורדמת

למדו מדידת זיכרון אסוציאטיבי בזבובי פירות מבוגרים באמצעות מבחן ריח והלם חשמלי. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לחקור מנגנוני למידה וזיכרון ב-Drosophila melanogaster.

דרוזופילה מבוגרים חוש הריח הלם למידה

גלה סרטונים נוספים