מכלולי פפטיד הטרנסממברני ייצור של דיסולפיד-התייצבו ללימודים מבניים

פרוטוקול זה מייצר קומפלקסים מיוצבים קוולנטית של פפטידים טרנסממברניים למחקרים מבניים שמטרתם להבין כיצד חלבוני ממברנה מתקשרים זה עם זה באמצעות התחומים המשובצים בשומנים שלהם. ראשית, בטא חלבון היתוך מתויג hist המכיל את הרצף הטרנסממברני המעניין באי קולי. לאחר מכן חלץ את החלבון משבר גוף ההכללה באמצעות גינס וחומר ניקוי באמצעות מטריצת זיקה ניקל.

רכז את חלבון ההיתוך המתויג hist ודי סולפיד קשר אותו לצורה הדיאמטרית על ידי שטיפת העמודה בתמיסה המכילה חומרים מחמצנים. לאחר מכן, יש להוציא את חלבון ההיתוך המקושר בחומצה אצטית Tri Fluor ולטפל בציאנוגן ברומיד כדי לשחרר את שותף ההיתוך להמשיך לבודד את תוצר הפפטיד המקושר מתערובת העיכול על ידי HPLC שלב הפוך. בסופו של דבר, הזהות והטוהר של המוצרים מאומתים על ידי ניתוחי דף SDS וספקטרומטריית מסה.