Name: מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: למד מדידת אלודיניה טקטילית בעכברים עם זיהום חיידקי בערמונית באמצעות חיידקי UPEC. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני כאב כרוני בדגם קליני רלוונטי של פרוסטטיטיס.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי המענק 1K01DK079019A2 (PT) מ-NIH / NIDDK.

1. הכנת חיידקים להרכבת חיסון מאוס הבא חייב להיעשות בתנאים אספטיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 1 17 100 צינורות פוליפרופילן מ&quot;מ x עם כובעים ולהוסיף 3 מ&quot;ל של תקשורת הטריה וריא מרק (LB). באמצעות טיפי autoclaved, לקחת כמה מניות גליצרול חיידקים קפוא של זן CP1 2 ולהעביר כמות קטנה של התרבות לתוך המבחנה המכילה את המדיה LB. החזר את מכסה צינור החמצן כך שעדיין תוכל להיכנס לצינור - התרבות צריכה לגדול בתנאים אירוביים. צינור מקום ב 37 ° C בחממה רועדת ב220 סל&quot;ד לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להעביר 5 μl של תרבות הלילה לצינור טרי עם 3 מדיה LB מ&quot;ל ולגדול בתנאים סטטיים בחממת לילה בשעת 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3 העברה 40 μl של התרבות לתוך צינור מיליליטר aa 50 המכילה 40 מ&quot;ל LB תקשורת כל אחת. מקום במעלות צלזיוס למשך לילה חממת סטטי 37. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל ולהגדיר צנטריפוגה עד 4 ° C.לאחר צנטריפוגה הגיעה טמפרטורה סופית, להעביר כל תרבות מ&quot;ל 40 לתוך צינור צנטריפוגה 40 מ&quot;ל Nalgene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל צינורות לאזן צנטריפוגה - להתאים את עוצמת קול עם תקשורת LB לפי צורך. ספין צינורות ב6000 סל&quot;ד במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את supernatant ועדינות להשעות גלולת חיידקים ב40 המ&quot;ל סטרילי PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.5 עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את supernatant ולהשעות את החיידקים ב500 PBS סטרילי μl. להעביר את הפתרון לתוך צינור 1.5 מיליליטר microfuge. קח 10 μl של השעיה ולדלל ב990 μl של PBS קר כקרח. השתמש ספקטרופוטומטר לקרוא את ננומטר OD 420 כדי לקבוע את הנפח הדרוש לחיסון. כדי לקבוע את הנפח המתאים לקר כקרח PBS להשעות גלולה ב: קח את מספר 420 ננומטר OD (במ&quot;ל) ולחסר את הנפח המשוער של גלולת החיידקים [לשעבר. OD 420 ננומטר = 0.545, גלולה כ 0.075 מ&quot;ל. 0.545-0.075 = 0.470]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר 10 μl של השעית חיידקים ודיהלאוטה 990 PBS μl קר כקרח. קראו את ננומטר OD 420. המטרה היא להשיג שווי 420 ננומטר OD להשעיה המדוללת של 1.000 ± .010. אם המספר שלך הוא הדילול מעל היעד זה, להוסיף יותר נפח להשעיה ולקחת עוד קריאה. אם המספר הוא מתחת .990 אז ספין למטה ההשעיה וקריאת ננומטר 420 OD חוזר עד לקבלת קריאה רצויה. </li></ol> 2. זיהום בעלי חיים עכברים (5 עד 7 שבועות ישנים, 10 לכל קבוצה) נרכשו מג&#39;קסון המעבדה (הבר הרבור, ME). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מורדמים על ידי שאיפה של 1-4% isoflurane בתא פרספקס ומנוטרים עד שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר אחד בכל פעם הוא נלקח להחדרה של חיידקים באמצעות צנתור עם פוליאתילן (PE10) צנתר המחובר למחט 30 G שונה של זכוכית המילטון מזרק (אורך של 1.5-2.0 סנטימטר). הצנתר המוחדר לרכזת של המחט. העכבר הוא Placאד על פני השטח הגבי שלה תחת הרדמה נשמר באמצעות חרטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפין של העכבר הוא שמפריש לחץ עדינים וכמויות נדיבות של חומר סיכה על ספוגיות כותנה משמש לשימון של הכניסה לשופכה בפין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 μl של פוספט נאגר מלוח המכיל 1 x 10 8 חיידקים מוחדר לשופכה של עכברים מורדמים לאחר צנתור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים נשמרים במדינה הרדימה במשך 15 דקות בתא פרספקס לאחר הקדמת חיידקים כדי לאפשר מצורף חיידקים וכדי למנוע הטלת שתן מיידית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מוצבים בחזרה בכלוביהם ומעקב במשך 24 השעות הבאות. </li></ol> 3. בדיקת התנהגות עכברים נבדקו לפני הזיהום (בסיסי) ובימים 3, 7, 14, 21 ו 28 לאחר הדבקה. hyperalgesia התייחס והמישוש allodynia נבדק באמצעות חוטי פון פריי הוחלו על הבטן 11,12 וr הפלנטריegion של רגלו האחורית 13. בדיקה הייתה מעודה בזמן של יום קבוע, מתודולוגיה סטנדרטית ובדיקת הנסיינית אחת של כל בעלי החיים היו מועסקות. בדיקות מסונוור מקבוצות נוצלו כדי להילחם על המגבלות של בדיקות כאב מבוססות התנהגות במודלים של בעלי חיים. חמישה חוטי פריי פון בודדים עם כוחות של 0.04, 0.16, 0.4, 1.0 ו 4.0 גרם (Stoelting, ארה&quot;ב) היו מוחלים על הבטן והתדירות של תגובות גמילה היה מחושב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופה של 30 דקות של התאקלמות, עכברים ממוקמים בתאי פרספקס בודדים (6 x 10 סנטימטר X12) שנעשו בבית עם רצפת רשת תיל פלדה אל חלד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> hyperalgesia התייחס והמישוש allodynia נבדקו באמצעות החמישה חוטי פון פריי. כל חוט היה מוחל על 1-2 שניות עם מרווח בין גירוי של 5 שניות למשך 10 פעמים כלל, ואת השערות נבדקו בסדר עולה של כוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל נימה מוחלת על אזור הבטן התחתונה באזור הכללי של הערמונית וטיפול נלקח כדי לגרות אזורים שונים בתוך אזור זה, כדי למנוע הפחתת רגישות או &quot;לסכם&quot; אפקטים. חוטים היו מיושמים בהגדלת סדר כוחות ל1-2 שניות עם לפחות 5 שניות מרווחים בין גירויים לסך הכל 10 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה סוגים של התנהגות נחשבים תגובה חיובית לגירוי חוט: 1) נסיגה חדה של הבטן, 2) מלקקים מיידי או גירוד באזור של גירוי חוט; 3) קפיצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תדירות תגובה הייתה מחושבת כאחוז מתגובה חיובית (מתוך 10, למשל 5 תגובות של 10 = 50%) ונתונים שדווחו כאחוז הממוצע של תדר התגובה ± SE </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיות עם יותר מ 25 תגובות בסיסיות כלל חיוביות הוצאו מהמחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המישוש allodynia נבדק על האזור הפלנטרי של רגלו האחורית באמצעות חוטי פון פריי עם כוחות של 0.04, 0.16, 0.4, 1.0 ו 4.0 גר &#39;. 50% סף הנסיגה החציוני (5) הוערך באמצעות למעלה למטהשיטה שבה בדיקות התחילו עם חוט 0.04 גרם מיושמת בניצב לפני השטח הפלנטרי של רגלו האחורית עד הנימים הכפופים מעט. חוטים נבדקו בסדר עולים עד תגובה חיובית נצפתה. תגובה חיובית לנימה הוגדרה כאחד נסיגה חדה של כפה או ללקק מכפת המבחן. כאשר תגובה חיובית נרשמה הנימה החלשה הבאה יושמה, ואם תשובה שלילית נצפתה, אז החוט החזק הבא יושם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניסויים ומתודולוגיה שתוארו כבר נבדקו ואושרו על ידי הטיפול בבעלי החיים באוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן ולהשתמש ועדה. </li></ol>

<ol><li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+infection+and+chemotherapy+official+journal+of+the+Japan+Society+of+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li>
<li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li>
<li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+prostatitis%2Fchronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li>
<li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li>
<li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li>
<li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li>
<li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li>
<li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain%3A+discriminating+visceral+from+somatic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102(2011).</li>
<li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232(2009).</li>
<li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscero-visceral+hyperalgesia%3A+characterization+in+different+clinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li>
<li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li>
<li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+%28SNS%2FPN3%29-null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li>
<li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li>
<li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li>
<li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+%28EAP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li>
<li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li>
<li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+immunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

דלקת של ערמונית העכבר עם UPEC מאפשרת בדוגמנות vivo של אירועים שעשויים להיות מעורב בפתוגנזה של ערמונית חיידקים, CP / CPPS או כאירוע predisposing בדלקת כרונית. השיטות מתוארות להכנת חיידקים ותיקו החדרה על גוף גדול של ספרות על מודלי UPEC בדלקת בדרכי שתן נשית 7,14. המודל יש תחולה רחבה ללימוד פתוגנזה, בודק מועמדים פוטנציאליים ומנגנוני חיסון של אפנון חיסוני. היכולת לעקוב אחר התנהגות כאב באופן מדיד מאפשרת לחקר היווצרות כאב זיהום הנגרם על ידי ובאופן פוטנציאלי כמודל קלינ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> צינורות תרבות </td><td> BD פלקון </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB מרק מילר </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> צינורות Nalgene צנטריפוגות </td><td> Thermo </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> שיין באטלר </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> 30G המחט קטטר </td><td> המילטון </td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10 צינורות </td><td> BD intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> חוטי זכרונות פון פריי </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

מדידה של allodynia משושים בדגם murine של ערמונית קטריאלי

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

coli Escherichia Uropathogenic (UPEC) הם פתוגנים שמשחקים תפקיד חשוב בדלקות בדרכי שתן וערמונית חיידקי 1. אנחנו הראינו לאחרונה שUPEC יש תפקיד חשוב בייזום של כאבי אגן כרוניים 2, תכונה של ערמונית כרונית / תסמונת כאב כרונית באגן (CP / CPPS) 3,4. הדלקת של הערמונית על ידי UPEC הרלוונטי קליני יכולה ליזום ולהקים כאב כרוני דרך מנגנונים שעשויים לכלול ניזק לרקמות וחניכה של מנגנוני אוטואימוניות 5. אתגר להבנת הפתוגנזה של UPEC בערמונית הוא נגישותו היחסית של בלוטת הערמונית למניפולציה. אנו מנוצלים שיטה שתוארה לעיל intraurethral זיהום 6 כדי לספק מתח קליני של UPEC לעכברים ממין זכר ובכך הקמת זיהום עולה של הערמונית. כאן, אנו מתארים הפרוטוקולים שלנו לתקנון bacterial 7 בידוד, כמו גם את ההליך לcatheterizing עכברי זכרים מורדמים להחדרה של חיידקים. CP / CPPS מאופיין בעיקר על ידי הנוכחות של המישוש allodynia 4. בדיקת התנהגות הייתה מבוססת על הרעיון של hyperalgesia עורית כתוצאה 8-10 כאבים קרביים הופנו. התמקדות ברקמות מעי רגיז מפחיתה את סף כאב עוריות המאפשרים לתגובה מוגזמת לגירויים בדרך כלל אינם כואבים (allodynia). יישום של כוח נורמלי לתוצאות בעור תגובות חריגות שנוטות להגדיל עם עוצמת כאב הבטן הבסיסית. אנו מתארים מתודולוגיה בעכברי NOD / ShiLtJ לנצל סיבי פון פריי לכמת allodynia מישוש לאורך זמן בתגובה לזיהום חיידקים בודד עם UPEC.

<html> בחנו הנהון / ShiLtj וC57BL/6J עכברי זכרים לנוכחות של כאב כרוני על זיהום חיידקים. עכברי זכרים (5 עד 7 שבועות ישנים) החדירו עם מי מלח או חיידקים לתוך השופכה (איור 1). גירוי מכאני של אזור האגן עם חוטי פון פריי של עכברים מלוחים החדירו C57BL/6J ועכברי C57BL/6J UPEC נגועים הביא לתדירות תגובה, כי לא השתנה במהלך 28-היום של הניסוי (איור 1). לעומת זאת, בעכברי NOD UPEC נגועים הציגו תגובות לגירוי אגן שהיו גדולים באופן משמעותי ונשארו גבוה באופן משמעותי ע...

דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד אלודיניה מישוש בעכבר הנובעת מזיהום חיידקי בערמונית. זה מושג על ידי הכנת תרחיף חיידקי להתקנה בעכבר זכר המונח תחת הרדמה. השלב השני הוא הוצאה עדינה של איבר המין של העכבר, ואחריו צנתור תוך שופכה.לאחר מכן מחדירים חיידקים ומתחילים זיהום עולה בערמונית העכבר. השלב האחרון הוא מדידת אלודיניה מישוש לאחר הדבקה. בסופו של דבר, תדירות תגובה מוגברת לסיבי vray המופעלים על אזור האגן משמשת להצגת ELO DIA מישוש משופר של אזור האגן בתגובה לדלקת ערמונית חיידקית.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון דלקת ערמונית הנגרמת על ידי הורמונים או דלקת ערמונית אוטואימונית, אם היא משתמשת בחיידקים לא רלוונטיים מבחינה קלינית ובמתודולוגיית זיהום עולה טבעית שבאמת חשובה לפתוגנזה של מחלת הערמונית, בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו בגלל חוסר יכולת לרשום באופן עקבי תגובות חיוביות לגירוי סיבי vray. כל ההליכים בפרוטוקול זה חייבים להתבצע בהתאם להנחיות המוסד והממשלה. בדיקת היפרלגזיה ואלודיניה מישוש מופנית מבוצעת בשעה קבועה ביום באמצעות מתודולוגיה סטנדרטית עם נסיין יחיד הבודק את כל החיות.יש להשתמש בבדיקות עיוורות של קבוצות כדי להילחם במגבלות של בדיקות כאב מבוססות התנהגות במודלים של בעלי חיים. כדי לקבל מדידה בסיסית עבור כל בעלי החיים בניסוי, תחילה התאקלמו עכברים זכרים בני חמישה עד

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מדידות פון פריי אלקטרוניות הן אלטרנטיבה יעילה ומשופרת לחוטי פון פריי הקלאסיים, מכיוון שהן מאפשרות מדידה מהירה ומדויקת של שינויים בספי הנסיגה המכאניים של מכרסמים לגירוי לחץ המופעל ברציפות לפני ואחרי אירוע דלקתי.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

אנו מתארים פרוטוקול לבחון את התפתחותם של hyperalgesia מושרה אופיואידים וסובלנות בעכברים. המבוסס על המדידה של תגובות nociceptive תרמיים ומכאניות של בעלי חיים תמימים וטופל במורפיום, היא מאפשרת לכמת את העלייה ברגישות לכאב (hyperalgesia) ולהפחית בכאבים (סובלנות) הקשורים לממשל אופיום כרוני.

הערכה של סובלנות hyperalgesia ומשככי כאבים הנגרם מורפיום בעכברים באמצעות שיטות nociceptive תרמיים ומכאניות

כאב נוירופטי הוא תוצאה של פגיעה או מחלה המשפיעה על מערכת החושית. "מודל השרוול" בכאב עצבי בעכברים מורכב מההשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת. אלודיניה מכאנית נבדקה באמצעות חוטי פון פריי.

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

אנו מודדים הפעלת perigenital מכאנית רגישות ותורן תא בערמונית של C57BL / 6 עכברי זכרים שעברו הפרדיגמה מתח בתחילת חיים - הפרדה אימהית יילודים, על מנת לגרום למודל פרה-קליני של תסמונת ערמונית כרונית / כרוני כאבים באגן.

הערכה של הפעלת תא Perigenital רגישות וערמונית תורן במודל עכבר של הפרדה אימהית עובריים

בתנאי כאן הוא פרוטוקול המפרט צעדים כדי ליצור מודל חיה של כאב כרונית שלאחר איסכמיה (CPIP). זהו מודל מוכר היטב מחקה את האדם מורכבים האזור תסמונת הכאב סוג-I. היפרארגישויות מכני ותרמי הם הערכה נוספת, כמו גם קפסאיצין המושרה nocifensive תנהגויות נצפתה במודל עכברוש CPIP.

כרונית לאחר איסכמיה כאב מודל עבור מורכבות אזור תסמונת כאב הסוג-אני בחולדות

כדי לפתח התערבויות טיפוליות חדשניות למניעה וניהול של כאבי גב, נדרשים מודלים של בעלי חיים לבחון את המנגנונים והיעילות של טיפולים אלה מנקודת מבט תרגומית. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את בדיקת BMS, שיטה סטנדרטית להערכת רגישות מכנית אחורית בחולדה.

הערכת רגישות מכנית של הגב בחולדה לחקירה מכניסטית של כאבי גב כרוניים

שיטות להשראת מודל כאב גב פשוטה ומהירה בעכברים ניתנות כאן באמצעות הזרקה תוך רצועה של מפעיל פלסמינוגן בשתן.

מודל כאב גב עכבר הנגרם על ידי מפעיל אורוקינאז

קשירת עצבים סיאטית חלקית גורמת לכאב נוירופתי כרוני מתמשך, המאופיין בתגובות מוגזמות לגירויים תרמיים ומכניים. מודל עכברי זה של כאב נוירופתי משמש בדרך כלל לחקר טיפולים חדשניים לניהול כאב. מאמר זה מתאר בפירוט את ההליך הכירורגי לשיפור התקינה והשחזור.

קשירת עצבים סיאטית חלקית: מודל עכברי של כאב נוירופתי כרוני לחקר ההשפעה האנטינוסיצפטיבית של טיפולים חדשניים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת nociception בעכברים נגועים Trypanosoma evansi, באמצעות מכשיר פון פריי האלקטרוני ככלי, מדידת סף מכני של הכף האחורית ואת הקרביים.

פון פריי האלקטרוני קשור לסולם גרימס עכבר להערכת אלודיניה וכאב בעכברים נגועים בטריפנוסומה אוונסי

הפרוטוקול מתאר כיצד למדוד היפרלגזיה בברך בעכברים. אנו מראים דוגמאות במודלים של עכברים לכאבי ברכיים חריפים כמו גם במודלים של דלקת מפרקים ניוונית (OA).

הערכת היפרלגזיה בברך בעכברים באמצעות מדידת יישום לחץ

למד מדידת אלודיניה טקטילית בעכברים עם זיהום חיידקי בערמונית באמצעות חיידקי UPEC. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני כאב כרוני בדגם קליני רלוונטי של פרוסטטיטיס.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

גלה סרטונים נוספים