Name: הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: למד הדמיית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב preneoplastic ראשוניים ממודלי עכבר מהונדס גנטית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים חיים וניתוח השפעת לסיות גנטיות שונות על דינמיקה תאית בסרטן שד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לBofan וו והנוצרי Raithel לקבלת סיוע טכני ומיכאל ריגר להקדמתו להדמיה חייה תאים. נתמך על ידי NCI, NIH RO1CA112176 (PAF), NCI, NIH. R01CA89041-10S1 (PAF), דויטשר Akademischer Austaush Dienst eV A/09/72227 Ref. 316 (REN), משרד ההגנה W81XWH-11-1-0074 (REN), תכנית WCU (World Class אוניברסיטה) באמצעות קרן המחקר הלאומי של קוריאה ממומנת על ידי משרד החינוך, המדע והטכנולוגיה (R31-10069) (PAF ), NIH IG20 RR025828-01 (ציוד מתקן גדר מכרסם), וNIH NCI 5P30CA051008 (מיקרוסקופי ומשאבי הדמיה ובעלי חיים משותפים).

<ol><li>Jones, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+estrogen+signaling+pathways+collaborates+with+loss+of+Brca1+to+promote+development+of+ERalpha-negative+and+ERalpha-positive+mammary+preneoplasia+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Activation of estrogen signaling pathways collaborates with loss of Brca1 to promote development of ERalpha-negative and ERalpha-positive mammary preneoplasia and cancer.</a> Oncogene. 27, 794-802 (2008).</li>
<li>Burga, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+proliferation+and+differentiation+properties+of+primary+mammary+epithelial+cells+from+BRCA1+mutation+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Altered proliferation and differentiation properties of primary mammary epithelial cells from BRCA1 mutation carriers.</a> Cancer Res. 69, 1273-1278 (2009).</li>
<li>Li, M., Wagner, K., Furth, P. A. Preparation of primary mammary epithelial cells and transfection by viral and nonviral methods. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLi%2C+M+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer</a>. Ip, M., Asch, B. , Kluwer Academic, Plenum Press. (2000).</li>
<li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+stem-cell-driven+regeneration+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Imaging stem-cell-driven regeneration in mammals.</a> Nature. 453, 345-351 (2008).</li>
<li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+single-cell+imaging+of+mammalian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term single-cell imaging of mammalian stem cells.</a> Nature Methods. 8, S30-S35 (2011).</li>
<li>Eilken, H. M., Nishikawa, S. -I., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+single-cell+imaging+of+blood+generation+from+haemogenic+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Continuous single-cell imaging of blood generation from haemogenic endothelium.</a> Nature. 457, 896-900 (2009).</li>
<li>Kokkaliaris, K. D., Loeffler, D., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+tracking+hematopoiesis+at+the+single-cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+hematology%22%5BJournal%5D)">Advances in tracking hematopoiesis at the single-cell level.</a> Current opinion in hematology. , (2012).</li>
<li>Rieger, M. A., Hoppe, P. S., Smejkal, B. M., Eitelhuber, A. C., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+cytokines+can+instruct+lineage+choice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic cytokines can instruct lineage choice.</a> Science. 325, 217-218 (2009).</li>
<li>Rieger, M. A., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instruction+of+lineage+choice+by+hematopoietic+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Instruction of lineage choice by hematopoietic cytokines.</a> Cell Cycle. 8, 4019-4020 (2009).</li>
<li>Heinrich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+subtype-specific+neurons+from+postnatal+astroglia+of+the+mouse+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of subtype-specific neurons from postnatal astroglia of the mouse cerebral cortex.</a> Nat. Protoc. 6, 214-228 (2011).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

שלבים קריטיים חשוב לוודא שבלוטות חלב נקצרות מעכברי בנים אותו הגיל לשליטה לשונות הקשורים בגיל בהתנהגות תא אפיתל חלב. כאשר ציפוי התאים, אותו מספר התאים צריך להיות מצופה בכל אחד גם לכל ניסוי. תאים צריכים להיות דלילים יחסית כאשר ציפוי כך שתרבויות לא הופכות confluent מהר מדי כך שניתן לעקוב אחר תאים בודדים מרובים באמצעות תמונות סדרתיים. זה חיוני כי הצלחת תהיה מתאזנת בחממה לפני ההדמיה בגלל ההתמקדות תשתנה אחרי הצלחת היא מתא...

מודלי עכבר מהונדס גנטי הם כלים כדי ללמוד ולהבין איך נגעים גנטיים שונים תורמים לסיכון להתפתחות סרטן השד. לדוגמה, עכברים מהונדסים גנטי הראו כי שילוב של שלושה גורמים: האובדן של השד באורך מלא 1 הסרטן, התחלה מוקדמת (BRCA1) גנים בתאי האפיתל חלב, haploinsufficiency ניבט קו החלבון p53 גידול (TP53), וחלב אפיתל תא ממוקד עד מוסדר אלפא קולטן אסטרוגן (עידן) תוצאות ביטוי בהתפתחות של סרטן השד ב100% של BRCA1 (ו) וירוס 11/f11/Mouse חלב גידול (MMTV) -Cre/p53 + / -/tetracycline-operator (floxed ט-op) -ER/MMTV-reverse טטרציקלין transactivator (rtTA עכברים על ידי גיל 12 חודשים בהשוואה לאחוזים הנמוכים יותר דיווחו בBRCA1 f11/f11/MMTV-Cre/p53 + / - עכברים ללא עידן על ביטוי (~ 50 - 60%) ועכברי BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre ללא TP53 haploinsufficiency (&lt;5%). 1 הדמית זמן לשגות דינמית של ההתנהגות של תאי האפיתל חלב ראשוני preneoplastic מגלה הבדלים בהתנהגות תא המוערכים פחות בקלות בסעיפי רקמות סטטיות. שינויים בשגשוג והתמיינות תאים הם נצפו בחלב ראשוניים מנישאי מוטצית BRCA1 אדם. 2 יצירת השעיות תא הבודד של תאי האפיתל חלב ראשוניים מרגיל ועכברים מהונדסים גנטי נוצרות דרך התנערות האנזימטית של רקמת בלוטת חלב resected. 3 זמן לשגות תמונות נתפסות להעריך מנגנון ועיתוי של הופעה ושכיחות של שינויים מורפולוגיים בתאי אפיתל כולל מעבר-mesenchymal (EMT) ואפופטוזיס מושבת תא. דור של מפות גורל תא, כימות של משך הזמן בין חלוקות תא (גלגולים סלולריים), וקביעת הדפוסים של חלוקת תאים מתאפשרים על ידי שימוש במעקב מהתא בודד. טיםכלי מעקב של &#39;(TTT) הוא תוכנה זמינה בפומבי משמשת ליצירת מפות גורל תא בודד. השירות שלה בהבהרת מנגנונים של גורל תא נקבע 4,5 בחינת התפתחות תקינה תא גזע hematopoietic 6-9 והדור של נוירונים. 10

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> עכבר בינוני אסאל EpiCult-B </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 05610 </td><td></td></tr><tr><td> EpiCult-B מאוס תוספים למניעת הפצת נשק </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 05612 </td><td></td></tr><tr><td> רקומביננטי עוריות Growth Factor האנושי (rhEGF) </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 02633 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase / Hyaluronidase </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 07912 </td><td></td></tr><tr><td> Scapels חד פעמי </td><td> נוצה </td><td> 2975 # 10 </td><td></td></tr><tr><td> תמיסת המלח המאוזן &quot;הנקס </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 37150 </td><td></td></tr><tr><td>כלוריד mmonium </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 07800 </td><td></td></tr><tr><td> Tryspin-EDTA </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 07901 </td><td></td></tr><tr><td> Dispase </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 07913 </td><td></td></tr><tr><td> אני DNase </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 07900 </td><td></td></tr><tr><td> מסננת תא 40 מיקרומטר </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 27305 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> טכנולוגיות StemCell </td><td> 06100 </td><td></td></tr><tr><td> PenStrep </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr></tbody></table>

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

הדמית זמן לשגות ניתן להשתמש כדי להשוות התנהגות של תאים בתרבית ראשונית preneoplastic חלב האפיתל הנגזרים ממודלי עכבר מהונדס גנטי שונים של סרטן השד. לדוגמה, זמן בין חלוקות התא (גלגולים סלולריים), מספרים סלולריים אפופטוטיים, אבולוציה של שינויים מורפולוגיים, ומנגנון של יצירת מושבות ניתן לכמת והשוואה בתאים שנשאו נגעים גנטיים ספציפיים. תרביות תאים ראשוניות אפיתל חלב נוצרות מבלוטות חלב ללא גידול מוחשי. בלוטות resected זהירות עם הפרדה ברורה משרירים סמוכים, בלוטות לימפה הוסרו, והשעיות תא בודד של תאי האפיתל חלב מועשר נוצרות על ידי רקמת שד ריסוק ואחרי ניתוק וסינון האנזימטית. השעיות תא בודד מצופות וממוקמות ישירות מתחת למיקרוסקופ בתוך תא חממה עבור הדמית חית תאים. שישה עשרה 650 x 700 מיקרומטר מיקרומטר שדות בתצורת 4x4 מכל well של צלחת 6-גם הם צלמו כל 15 דקות במשך 5 ימים. תמונות זמן לשגות נבדקות ישירות למדוד התנהגויות סלולריות שיכול לכלול מנגנון ותדירות של יצירת מושבות תאים בתוך 24 השעות הראשונות של ציפוי לתאים (לעומת צבירת התפשטות תאים), שכיחות של אפופטוזיס, וביטול הדרגתי של שינויים מורפולוגיים. מעקב תא בודד משמש ליצירת מפות גורל תא למדידה של חיי תא בודדים וחקירות של דפוסי חלוקת תא. נתונים כמותיים מנותחים סטטיסטי לאמוד את ההבדל משמעותי בהתנהגות מתואמת עם נגעים גנטיים ספציפיים.

תאי אפיתל ופיברובלסטים יכולים להיות מכובדים על ידי מורפולוגיה של תאים. תאי האפיתל יש צורת cuboidal (איור 1 א-B) ומושבות תאי טופס (איור 1 א). Fibroblasts, סוג של תא סטרומה, יש מורפולוגיה מוארכת (האיור 1C). תאים היו מעוגלים וצפו בתחילת ההדמיה (איור 2A-D). לאחר התקשרות לצלחת שהם נעשו שטוחים והפגינו הופעת cuboidal סוג (2E איור, ח). ע...

הדמית זמן לשגות משמשת כדי להעריך את ההתנהגות של תאים ראשוניים preneoplastic חלב האפיתל הנגזרים ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סיכון לסרטן שד על מנת לקבוע אם יש קשר בין פרמטרים התנהגותיים ספציפיים ונגעים גנטיים מובחנים.

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לקבוע האם נגעים גנטיים הנוטים לסרטן השד משנים את התנהגותם של תאי זיכרון פלסטיים של אצטרובל בתרבית ראשונית. זה מושג על ידי בידוד תאי אפיתל חלב ראשוניים מעכברים מהונדסים גנטית. כשלב שני, הדמיית זמן-lapse של תאים חיים מבוצעת במשך חמישה עד שבעה ימים, ויוצרת סרט לניתוח התנהגות התא.לאחר מכן נעשה שימוש בתוכנה העוקבת אחר תאים בודדים כדי לכמת ולהשוות את התנהגות התאים המבודדים ממודלים שונים של עכברים מהונדסים גנטית של סרטן השד. התוצאות מראות כי נגעים גנטיים ספציפיים גורמים להתנהגויות שונות בזיכרון הקדם-ניאופלסטי. תאי אפיתל המבוססים על ניתוחים התנהגותיים כמותיים המבוצעים באמצעות מעקב אחר תא בודד.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה כיצד נגעים גנטיים שונים משנים את ההתנהגות של תאי אפיתל של מאם פרה-ניאופלסטי. ניתן ליישם אותו גם על מערכות אחרות כגון פרה-ניאופלסטיים, תאים מאיברים אחרים, תאים סרטניים מכל איבר, כולל חקר שינויים התנהגותיים אפשריים המושרים על ידי טיפול, כמו גם השוואות של התנהגות תאי סטרומה מרקמה רגילה וסרטנית המדגימות את ההליך. היום יהיו ד"ר פריסילה פירת', המחברת הבכירה של פרסום זה, ופיט ג'ונסון, מנהל מרכז המשאבים המשותפים למיקרוסקופיה והדמיה במרכז לחקר הסרטן לומברדי באוניברסיטת ג'ורג'טאון.המתת חסד של עכבר והמשך מיד בנתיחה. הניחו את העכבר על משטח נקרופסי קלקר ואבטחו את כל ארבעת הגפיים כך שעורו הגחוני יהיה מתוח. להרוות את עור הגחון והשיער, כולל עור הגפיים באתנול 70%.חשפו את בלוטות החלב מספר שתיים ושלוש ומספר ארבע וחמש עם חתך בקו האמצע דרך העור. הארך את החתך בשני חתכי y דרך העור המדיאלי של ארבע הגפיים. היזהר לא להיכנס לצפק באמצעות דיסקציה קהה.הפרד את העור מהצפק הבסיסי. משוך לאחור משני צידי העור עד שהוא מתוח והצמד אותו לפלטפורמה החל מהצד החיצוני. השתמש במספריים כדי לבצע דיסקציה קהה המבודדת את בלוטות החלב הפנימיות ו/או החזה השלמות מרקמת החיבור והשריר הבסיסיים.מניחים בלוטת חלב אחת או שתיים בצלחת פטרי של 10 סנטימטר ומעבירים למכסה המנוע של תרבית רקמות. כעת, בדוק את הבלוטות לאיתור בלוטות לימפה חלביות. גושים קטנים ומוקפים היטב בצבע צהבהב.בעזרת אזמל ומלקחיים, הסר אותם מהבלוטה שמסביב. טוחנים את רקמת החלב לקוביות בגודל מילימטר בעזרת שני אזמלים. מניחים את רקמת החלב הטחון בצינור חרוטי של 50 מיליליטר עם חמישה מיליליטר של חומר דיסוציאציה.מערבבים אותו עם טציה עדינה ודוגרים אותו למשך הלילה. שמור את הפקק רופף למחרת. לבודד ולתרבית את תאי האפיתל העיקריים.מיד לאחר ציפוי התאים. מקם את צלחת שש הבארות בצורה מאובטחת על במת מיקרוסקופ בתוך תא דגירה. הניחו לצלחת להתייצב למשך 15 דקות לפחות.כוונן את המעבה לתאורת קוהלר ומרכז את טבעות הפאזה. פתח את תוכנת רכישת התמונות כגון מהירות וצור ותן שם לספרייה עבור תמונות ה-time-lapse ושמור במיקום עם מספיק מקום לקבצים גדולים. הורד את העדשות כדי למנוע tagהפרעות בעדשה.תחת הכותרת stag, בחר כיול stagהשיג מחדש את מישור המוקד שנקבע Z שווה לאפס תחת הכרטיסייה X, Y, Z. וסמן נקודות הדמיה על ידי בחירה באפשרות הוסף נקודה מתחת ל-stagה. נקודות הדמיה באמצע כל באר.הדמיית ניגודיות פאזה עלולה להיות מעוותת ליד הפריפריה של בארות פלסטיק. סדר נקודות בריבוע בארבעה על ארבעה שדות כל אחד עם חפיפה של כ- 5%. שמור את הנקודות שנבחרו תחת שלב.תחת שלב, בחר צור מפת מיקוד ופעל לפי ההנחיה כדי להגדיר את המוקד של כל נקודה. לאחר מכן הגדר את תזמון רכישת התמונה כך שהיא תלכוד את המספר הנכון של תמונות בשעה. כעת שמור את מפת המיקוד מתחת לבמה.המשך על ידי לחיצה ימנית על רכישת תמונות בסרגל הכלים הימני. לאחר מכן שמור את הגדרות ההדמיה. לחץ על לחצן ההקלטה כדי להתחיל בתהליך ההדמיה לאחר שעה, בדוק את מיקוד התמונות כדי לראות אם יש צורך בהתאמה כלשהי.עקוב והמשך את ההדמיה החיה במשך חמישה ימים כאשר התאים הופכים למתלכדים. זה קריטי לעקוב אחר התמונות הדיגיטליות שנרכשו ולהתאים את מפת המיקוד לעתים קרובות במהלך 24 השעות הראשונות מכיוון שהתאים יתחברו לצלחת לאחר מכן לפחות פעמיים ביום. בדוק שהתאים ממוקדים והתרביות אינן מזוהמות.כדי לקבוע את מנגנון היווצרות המושבה הראשונית, התחל עם ערימת תמונות בודדת המייצגת אתר הדמיה אחד על הצלחת. במסגרות הראשוניות, התאים יהיו צפים, ניתן להבחין בין תאי אפיתל ופיברובלסטים על ידי מורפולוגיה של תאים. לתאי אפיתל יש צורה קובואידית ויוצרים מושבות תאים.לפיברובלסטים, סוג של תא סטרומלי, יש מורפולוגיה מוארכת. עקוב אחר התמונות הסדרתיות כדי לקבוע מתי תא האפיתל הראשון נצמד לצלחת. בשלב זה ניתן לזהות ולהבדיל בין תאי אפיתל לפיברובלסטים על ידי המורפולוגיה הקובואידית יותר שלהם.עקבו אחר תא האפיתל הבודד הזה דרך תמונות סדרתיות ועקבו אחר גורלו במהלך 24 השעות הבאות. שימו לב, אם התא מוקף בתאי אפיתל נוספים, עובר חלוקת תאים או עובר אפופטוזיס אם הוא מוקף בתאי אפיתל, ניתן לקבוע את מנגנון היווצרות המושבה החל מהצטברות הסביבה או מחלוקת התאים. רשום את מספר המושבות שנוצרו על ידי צבירת תאים לעומת חלוקת תאים במהלך 24 השעות הראשונות כדי לקבוע את מספר התאים הנצמדים בתחילה שעוברים אפופטוזיס לאורך פרק זמן מסוים.עקוב אחר התמונות הסדרתיות להופעת מאפיינים קלאסיים של אפופטוזיס המתפתחים בתא שנדבק לאורך זמן. תאי אפיתל בתרבית משנים את המורפולוגיה שלהם מצורה קובואידית ראשונית למראה מוארך יותר. עקבי עם EMT.עקוב אחר התמונות הסדרתיות כדי לקבוע את היום והשעה לאחר הציפוי כאשר זה קורה, התחל בהפעלת תוכנית TTT. בחר ראשי תיבות של משתמש ולחץ על המשך. לחץ על הגדר NAS, בחר את תיקיית ייצוא ה-TTT שנוצרה על ידי המשתמש ולחץ על אישור.בדפדפן, בחר תיקיית ניסוי. בחר תיקיית מיקום ולאחר מכן לחץ על לחצן מיקום הטעינה. שלח את גורם העיניים ל -10 פעמים.טען את מספר התמונות הנדרש, שהוא בדרך כלל כל התמונות. בעת שימוש בניתוח זה. בפעם הראשונה בחלון עורך התאים, בחר מושבה חדשה תחת תפריט הקובץ בחלון הסרט.לחץ על לחצן תא הרצועה או הקש F שתיים. כדי להתחיל לעקוב אחר תא. זהה תא בחלון הסרט ומקם את הסמן מעל התא.עיגול עם מספר התא אמור להופיע לאחר לחיצה על F שתיים. השתמש במקש האפס בלוח המספרים כדי לעקוב אחר מיקום התא ולהתקדם לתמונה הבאה. הזז את הסמן כדי לעקוב אחר המיקום של כל תא בכל מסגרת.כדי למחוק רצועה ולחזור לתמונה הקודמת, הקש Delete בלוח המספרים כדי לעבור מסגרות קדימה מבלי לעקוב אחר התא, הקש שלוש. וכדי לנוע אחורה ללא מעקב, לחץ על אחד. כדי לסמן חלוקת תאים בחלון הסרט, לחץ/י על כפתור החלוקה כדי לסמן מוות תאי בחלון הסרט, לחץ/י על ״מוות תאי״.לאחר שהתרחשה חלוקה, ניתן לעקוב אחר תאי הבת באותה מפת גורל תא. לשם כך, עבור לחלון עורך התאים ולחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על סמל העיגול של תא הנקודה המיועד. זה מתחיל את מצב המעקב באופן אוטומטי כעת לחץ על F 10 כדי לשמור את העץ.כל עץ יישמר בתיקיית הפלט המיועדת. כדי להתחיל מפת סולפט חדשה בחלון עורך התאים, בחר בתפריט הפתוח, לחץ על קובץ ולחץ. תאי מושבה חדשים היו מעוגלים וצפים בתחילת ההדמיה.מוטות הגודל שווים ל-200 מיקרון לאחר ההצמדה לצלחת, הם הפכו שטוחים והפגינו מראה מסוג קובייתי. לאחר ארבעה ימים של תרבית, רוב תאי האפיתל התארכו למורפולוגיה דמוית EMT. שינוי זה התרחש עם אותה כרונולוגיה בכל הגנוטיפים שנחקרו, התאים הצפים התפתחו למושבות תאי אפיתל בודדות מוגדרות.עד 24 שעות לאחר הציפוי, ניתוח תמונה סדרתי גילה כי מושבות אלה נוצרו על ידי צבירת תאים ולא על ידי חלוקת תאים. בעוד ששיבוש BRCA כשלעצמו לא שינה את מספר המושבות שנוצרו. תוספת של חוסר האפלו TP 53 הפחיתה משמעותית את מספר המושבות שנוצרו.כמו כן, תוספת של ER alpha על ביטוי הגדילה משמעותית את מספר המושבות שנוצרו בעקבות הליך זה. ניתן לבצע שיטות אחרות המשתמשות בהדמיית זמן-lapse בשילוב עם מעקב אחר תא בודד על מנת לענות על שאלות נוספות כמו כיצד גישות טיפוליות ספציפיות או נגעים גנטיים נוספים משנים את התנהגות התא ועשויות להשפיע על התגובה הטיפולית או על התקדמות הסרטן.

time-lapse-imaging-primary-preneoplastic-mammary-epithelial-cells

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור:מרינה אראנטס רדיקי1, ויקטור קרלוס מלו1,ויקטורה פאס מצ'אדו1, מרסיה כריסטינה אוליביירה דה רושה1, ז'קלין ואז דה אוליביירה1, לואנה כריסטינה קמרגו1,2, לואיס אלכסנדר מולמן1, ריקרדו בנטס אזבדו1, סוניה נאיר באו1, ז'ואאו פאולו פיגרו לונגו11המכון למדעי הביולוגיה, אוניברסיטת ברזיליה, 2המחלקה לתהליכים פסיכולוגיים בסיסיים, המכון לפסיכולוגיה, אוניברסיטת ברזיליהסרטון זה מדגים את ההליך למעקב אחר התקדמות הגידול in vivo על ידי הזרקת תאי אדנוקרצינומה שדיים המבטאים לוציפראז לעכבר נקבה וניטור אותות ביולומינסנט...

הדמיה ביולומינסנט של התקדמות גידול השד במודל עכבר נקבה

אנו מתארים שיטה לתגובת הדמיה לטיפול נגד...

חי הדמיה של תגובות סמים בmicroenvironment הגידול במודלים עכבריים של סרטן השד

הפעלה של מוטציות סמויות עם adenovirus-Cre לתוצאות מערכת ductal החלב בסרטן שד גרורתי רלוונטי מבחינה קלינית. התאגדות של אמרגן YFP מאפשרת מעקב של תאים סרטניים גרורתי דיסטלי. מודל זה שימושי ללמוד גרורות סמויות, חסינות אנטי סרטניים, ולעיצוב immunotherapies החדשני לטיפול בסרטן השד.

חניכה של סרטן השד גרורתי על ידי מיקוד של האפיתל ductal עם Adenovirus-Cre: דגם רומן מהונדס עכבר של סרטן השד

תרבית תאים ראשונית באמצעות organoids רקמה שלמה מספקת מערכת מודל המחקה את המיקרו-הסביבה רב-התאית בגוף חי. פיתחנו מודל סרום ללא עיקרי רקמת האפיתל שד תרבות המנציח שושלות מעורבות תרבית תאים ותערוכות מובחנות מורפולוגיה, ללא הפרעה רקמה האנזימטית. organoids השד בר-קיימא ל&gt; 6 חודשים.

אינו אנזימטית, תרבות רקמות סרום ללא נגעי שד טרום פולשני לדור ספונטני של Mammospheres

מודל גידול ראשוני orthotopic סרטן השד סר כירורגית של גידול ראשוני כדי להאריך את חיי עכבר כדי ליצור גרורות ספונטניות מתוארים. גידול הגידול ולהתפתחותו מנוטר לכמת ידי דימות פלואורסצנטי בלוציפראז.

במודל עכבר orthotopic של שד ספונטני סרטן גרור

המטרה של הפרוטוקול הזה היא לתאר את הגישה החדשה מידול סרטן השד מבוסס על הזרקת הפנים של יצור-הבעת אדנווירוס לתוך בלוטות החלב של העכבר. גישה זו מאפשרת גם מניפולציה ייחודית לסוג תא ולעוגב של אירועים אונגניים באופן זמני מבוקר.

דוגמנות סרטן השד באמצעות הזרקת הפנים של המין-אדנווירוס המבטא לתוך בלוטת החלב של העכבר

עבודה זו מוגדרות מראש פרוטוקול מתקדם כדי להעריך במדויק את טעינת הגידול על ידי זיהוי של חלבון פלורסנט ירוק אותות biלומינסנציה, כמו גם שילוב של טכניקת גילוי מולקולרי כמותי.

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

פרוטוקול זה מתאר חלון הדמיה חדש של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה (R.MIW). מיקרוסקופיה תוך-ורידית לאחר השתלת ה-R.MIW מאפשרת הדמיה אורכית ורב-יומית של בלוטת החלב הבריאה והחולה עם רזולוציה תאית בשלבי ההתפתחות השונים.

מיקרוסקופיה תוך-ורידית אורכית באמצעות חלון הדמיה של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה

שיטת ההדמיה התוך-ורידית המתוארת כאן משתמשת בדור ההרמוני השני של הקולגן ובפלואורסצנציה אנדוגנית מהקו-פקטור המטבולי NAD(P)H כדי לפלח באופן לא פולשני מיקרו-סביבה של גידול ללא תווית לתוך תאי גידול, סטרומל וכלי דם לצורך ניתוח מעמיק של תמונות תוך-ורידיות 4D.

גישת סגמנטציה ללא תווית להדמיה תוך-ורידית של מיקרו-סביבה של גידולי יונקים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה קלה להדמיה תוך-חיונית של בלוטת החלב של עכבר מניק, באמצעות סריקת לייזר, מיקרוסקופ קונפוקלי ומולטיפוטון.

מיקרוסקופיה תת-תאית תוך חיונית של בלוטת החלב

כתב היד מתאר מתודולוגיה להקמה וכן ניטור גדילה אורכי של גרורות ריאה ספונטניות מגידולי שד בהזרקה אורתוטופית, הניתנת להתערבות בכל שלבי המפל הגרורתי.

ב Vivo הדמיה למדידת גרורות ריאה ספונטניות של תאי גידול שד בהזרקה אורתוטופית

למד הדמיית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב preneoplastic ראשוניים ממודלי עכבר מהונדס גנטית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים חיים וניתוח השפעת לסיות גנטיות שונות על דינמיקה תאית בסרטן שד.

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

גלה סרטונים נוספים