Name: Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: למדו להשתמש באולפקטומטר T-מבוך אנכי להערכת תגובות התנהגותיות של פרוקי רגליים לריחות שונים. שיטה זו מאפשרת למדוד משיכה ודחייה בקרב חרקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר ההדרים וקרן פיתוח הוא הודו על סיועם. הודות למלאך מיכאל הויט ופלורס לביצוע מבדקים.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסיפה מותאם במיוחד, חלק שני נמל T-olfactometer תואר קודם לכן במאן ואח&#39; 10. מוצג באיור 1. Olfactometer מורכב משפופרת זכוכית 30 סנטימטרים כי הוא מפוצל לשתי יציאות נפרדות עם רצועת טפלון להרכיב T-מבוך. כל מחצית מקבילה לזרוע של olfactometer סגנון 2-בחירה מאפשרת הנבדק לבחור בין שני שדות ריח פוטנציאליים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרכבה ולאחר המבחנים אמורים להתרחש בתוך חדר עם הטמפרטורה מבוקרת או קאמרי סביבתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> olfactometer הר זכוכית T-מבוך האנכי כפי שמוצג באיור 1 ולמקם אותו מתחת לנורת ניאון 900 לוקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאור פיזור אופטימלי, ההרכבה צריכה להיות מותקנת בתוך 1.0 x 0.6 x 0.6 מ &#39;מכל אטום כדי למקסם את הדיפוזיה אור אחידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את זרועות olfactometer למקורות ריח שישוכנו במייקרו מיצוי אחזקה / ריח המקור chamb מוצק שלבאה (SPMEC) (ARS, Inc, גיינסוויל, פלורידה) דרך טפלון; מחברי צינור זכוכית. כל SPMEC מורכב משפופרת זכוכית ישרה (17.5 סנטימטרים x 3.5 סנטימטרי רוחב) תמכה בכניסה ושסתום פורקן לזרמי אוויר נכנסים ויוצאים (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מערכת אספקת האוויר למקור חיצוני של האוויר ופחמן humidified מטוהר שנמצא תחת לחץ מתמיד (מערכת אספקת האוויר יש גם פילטר פנימי פחם לטיהור אוויר וbubbler אוויר לאידוי אם מקורות חיצוניים אינם זמינים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממס דגימות כימיות רצויות בתוך diluent המתאים (ממס) ופיפטה על מצע שחרור איטי כגון פתיל כותנה (פטי ג&#39;ון אריזה, Inc, קונקורד, צפון קרוליינה). טיפול ביקורת צריך להיות מורכב מפתיל כותנה ספוג ממס בלבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת למנוע זיהום משמעותי של כלי הזכוכית, עוטף את פתילות הכותנה שטופלו ושליטה ברקמת מעבדה (Kimwipes, קימברלי קלארק, רוזוול, GA) ומקום לשתי זרועות SPMEC (ARS, Inc, גיינסוויל, פלורידה). במקרה של דגימות צמחים חיות, קאמרי אוסף הגיליוטינה הפכפכה יכולה להיות מחובר לolfactometer מכיל טיפולים במקום SPMEC (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק מטוהר ואוויר humidified דרך SPMEC (או קאמרי הגיליוטינה נדיף) באמצעות שתי משאבות הקשורים למערכת אספקת אוויר (איור 1). לשמור על קצב זרימת אוויר ברמה של 0.1 ליטר / דקה בשתי זרועות של olfactometer. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העסקת olfactometer לבדוק את התגובה לפרוקי רגלי דוחים משוערים. בתיאור ההווה, חרקי hemipteran, psyllid הדרים האסיאניים, Diaphorina citri, שמש כפרוקי רגלי בדיקה. תגובה נוסתה עד נדיפים הדרים לבד או בשילוב עם (דיסולפיד דימתיל) דוחה ואוויר נקי כמקורות ריח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את כל הניסויים בטמפרטורה אחידה ולחות יחסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני כל הבדיקות, לא תחשוףest נושאים לאוויר נקי לעומת אוויר נקי או אוויר נקי לעומת ממס בolfactometer T-המבוך כדי לוודא היעדר הטית מיקומית או שפעת הממס על התנהגותו של הנבדק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת מקור ריח באופן אקראי לאחת מזרועותיו של olfactometer בתחילתו של כל מבדק. היפוך בעמדה זו לאחר כל 10 נבדקים assayed, לכל הפחות, לבטל את הפוטנציאל של הטית מיקומית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את התגובה של מינימום של 30 (ועד 120) נבדקים לשילוב טיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרשה נושאי מבחן 100-300 שניות להפגין תגובה התנהגותית המבוססת על תגובה הוקמה בעבר (חביון) מרווח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השיא אם הנושא נכנס לטיפול זרוע, זרוע שליטה או נשאר בנמל השחרור או מתחת חטיבת T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבקיע בחירת זרוע טיפול או שליטה כאשר נושא הבדיקה חוצה את החלוקה בT-המבוך ועובר לכל אחת מזרועות olfactometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבקיע בחירת זרוע שחרור כאשר מבחן שלubject נשאר בנמל השחרור או מתחת חטיבת T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה olfactometer וצינורות המחברים יסודיות עם 2% תמיסת סבון ולאפות את רכיבי הזכוכית ב 200 ° F בין השימוש בטיפולי ריח שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחנים שבטיפולים דוחים משוערים מוצגים בolfactometer T-המבוך עם או בלי טיפול כימי לעומת אוויר נקי, להשוות את מספר הנבדקים שנותרו בנקודת השחרור ולא להיכנס olfactometer בין טיפולים על ידי ניתוח דרך אחת של שונות ( ANOVA) ואחרי הבדיקה של Tukey HSD (α &lt;0.05). במקרים שבו הנבדקים לעזוב את זרוע השחרור, להשוות את מספר בחירת זרוע השליטה לעומת זרוע הטיפול בצ&#39;י מרובע (χ 2) ניתוח בα &lt;0.05. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Resh, R. H., Cardé, R. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aResh%2C+RH+%22Encyclopedia+of+Insects%22">Encyclopedia of Insects</a>. , Academic Press, Elsevier Science. USA. (2003).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biorational+tree-fruit+pest+management%22">Biorational tree-fruit pest management</a>. Aluja, M., Lesky, T. C., Vincent, C. , CABI. USA. (2009).</li>
<li>Rodriquez-Saona, C., Stelinski, L. L. Behavior-modifying strategies in IPM: Theory and Practice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRodriquez-Saona%2C+C+%22Integrated+Pest+Management%3A+Innovation+-+Development+Process%22">Integrated Pest Management: Innovation - Development Process</a>. Peshin, R., Dhawan, A. K. , Springer. NY. 261-311 (2009).</li>
<li>Cardé, R. T., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCard%C3%A9%2C+RT+%22Advances+in+insect+chemical+ecology%22">Advances in insect chemical ecology</a>. , Cambridge University Press. UK. (2004).</li>
<li>Knight, A. L., Stelinski, L. L., Hebert, V., Gut, L., Light, D., Brunner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+dispensers+simultaneously+releasing+pear+ester+and+sex+pheromone+for+disruption+of+codling+moth+%28Lepidoptera%3A+Tortricidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Novel dispensers simultaneously releasing pear ester and sex pheromone for disruption of codling moth (Lepidoptera: Tortricidae).</a> Journal of Applied Entomology. 136 (1-2), 79-86 (2012).</li>
<li>Mann, R. S., Tiwari, S., Smoot, J. M., Rouseff, R. L., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repellency+and+toxicity+of+plant-based+essential+oils+and+their+constituents+against+Diaphorina+citri+Kuwayama+%28Hemiptera%3A+Psyllidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Repellency and toxicity of plant-based essential oils and their constituents against Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae).</a> Journal of Applied Entomology. 136 (1-2), 87-96 (2012).</li>
<li>Forbes, A. A., Powell, H. Q., Stelinski, L. L., Smith, J. J., Feder, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+sympatric+speciation+across+trophic+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sequential sympatric speciation across trophic levels.</a> Science. 323 (5915), 776-779 (2009).</li>
<li>Kennedy, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+responses+of+flying+mosquitos%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Zoological+Society+of+London+A%22%5BJournal%5D)">The visual responses of flying mosquitos.</a> Proceedings of the Zoological Society of London A. 109 (4), 221-242 (1940).</li>
<li>Miller, J. R., Roelofs, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained-flight+tunnel+for+measuring+insect+responses+to+wind-borne+sex+pheromones%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Sustained-flight tunnel for measuring insect responses to wind-borne sex pheromones.</a> Journal of Chemical Ecology. 4 (2), 187-198 (1978).</li>
<li>Mann, R. S., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Castle, W. S., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfur+volatiles+from+Allium+spp.+affect+Asian+citrus+psyllid%2C+Diaphorina+citri+Kuwayama+%28Hemiptera%3A+Psyllidae%29%2C+response+to+citrus+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Sulfur volatiles from Allium spp. affect Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), response to citrus volatiles.</a> Bulletin of Entomological Research. 101 (1), 89-97 (2011).</li>
<li>Onagbola, E. O., Rouseff, R. L., Smoot, J. M., Stelinski, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guava+leaf+volatiles+and+dimethyl+disulfide+inhibit+response+of+Diaphorina+citri+Kuwayama+to+host+plant+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Guava leaf volatiles and dimethyl disulfide inhibit response of Diaphorina citri Kuwayama to host plant volatiles.</a> Journal of Applied Entomology. 135 (6), 404-414 (2011).</li>
<li>Baker, T. C., Linn, C. E. Wind tunnels in pheromone research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+TC+%22Techniques+in+Pheromone+Research%22">Techniques in Pheromone Research</a>. Hummel, H., Miller, T. A. , Springer-Verlag. New York. 75-110 (1984).</li>
<li>Stelinski, L. L., Rodriguez-Saona, C., Meyer, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+foreign+oviposition+marking+pheromone+in+a+multitrophic+context%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Recognition of foreign oviposition marking pheromone in a multitrophic context.</a> Naturwissenschaften. 96 (5), 585-592 (2009).</li>
<li>Gökçe, A., Stelinski, L. L., Whalon, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+electrophysiological+responses+of+leafroller+moths+to+selected+plant+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Behavioral and electrophysiological responses of leafroller moths to selected plant extracts.</a> Environmental Entomology. 34 (6), 1426-1432 (2005).</li>
<li>Ali, J. G., Alborn, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((herbivore-induced+plant+volatile+increases+biological+control+activity+of+multiple+beneficial+nematode+species+in+distinct+habitats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">herbivore-induced plant volatile increases biological control activity of multiple beneficial nematode species in distinct habitats.</a> PLoS ONE. 7 (6), e38146(2012).</li>
<li>Mann, R. S., Ali, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+release+of+a+plant+defense+volatile+%27deceptively%27+attracts+insect+vectors+to+plants+infected+with+a+bacterial+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Induced release of a plant defense volatile 'deceptively' attracts insect vectors to plants infected with a bacterial pathogen.</a> PLoS Pathogens. 8 (3), e1002610(2012).</li>
</ol>

המחבר זכה למימון שהועמד על ידי מחקר ההדרים וקרן פיתוח.

<html> בזאת, מכשיר בדיקה ופרוטוקול מתואר למדידת התגובה של פרוקי רגליים קטנים (Insecta: Hemiptera: Psyllidae) לodorants. השיטה כרוכה במבחן אמריקאי, המאפשר לחרקים לעשות בחירה בין שני שדות odorant במקרה של מבחני הערכת attractant משוער. יתר על כן, נושא הבדיקה עשוי להציג שלושה סוגים של התנהגויות על ידי השארת זרוע השחרור וכניסה לכל אחד משני תחומי ריח פוטנציאליים, או שנותר בזרוע השחרור, במקרה של מבחני repellency. Olfactometer מאפשר איסוף נתוני תפוקה גבוהה משום שהיא מנצלת את geotactic השלילי (נטייה לנוע כלפי מעלה) וphototactic החיובי (נטייה לנוע לכיוון אור) תגובה התנהגותית טבעית של פרוקי רגליים רבים. למרות ההפגנה הנוכחית משתמשת בדוגמא מבחן חרקי psyllid, assay יכול להיות מותאם בקלות לפרוקי רגליים רחבה, כאלה שמשתמשים בטיסה או הליכה כמצבים דומיננטיים של תחבורה. Olfactometers &quot;jove_content&quot;&gt; המיועד למדידת התגובה של חרקים בתחילה פותחו לפני עשרות שנים ומלאה תפקיד מרכזי בהבהרת מושכים ודוחה חרקים 12. העיצובים הספציפיים של olfactometers כאלה להשתנות במידה רבה, עם זאת, וריאציות על הנושא הכללי של assay שתי הבחירה, כמו גם כפי שמתוארות כאן, מבחנים דומים Y-tube שלעתים קרובות משמשים למדידת תגובת פרוקי רגליים לכימיקלים. מנהרות טיסה גדולות יותר שעלול לגרום לבריחה מתמשכת של חרקים 9 הביאו גם אוסף של נתוני פורצים מאירים את המנגנונים הבסיסיים של טיסה וכיוון חרק semiochemicals, כמו גם, נתונים המודיעים שימוש מעשי בכלי דברה. זה לעתים קרובות יש צורך להתאים את עיצוב olfactometer ומכשור נלווה לביולוגיה של נושא בדיקת פרוקי רגליים המסוימות. olfactometers אלה שיכולים לשמש בקרב קבוצה רחבה של חרקים מועילים יותר מאלה specific לקבוצה קטנה, אך לעתים את המשמעות הכלכלית של קבוצה קטנה של חרקים מכתיבה את הצורך בפיתוח של olfactometer מאוד ספציפיים וטכניקת בדיקה. העיצוב תאר כרגע בונה על טכניקות חרקי העבר מוכרות. זה מאפשר לassay שתי בחירה סטנדרטי יותר מ-Y bioassays צינור שבזירת הניסוי או המבחן האמריקאי לובשת צורה של מכשיר זכוכית בצורת אות V 7. בדרך כלל, זרוע אחת של Y-צינור כזה תקבל odorant טיפול, ואילו השני יישאר ריק 13. וריאציות על olfactometers כאלה עשויות לכלול תוספת של זרועות מרובות חישורים, 14 ואפילו תוספת של אדמה בינונית לassaying ההתנהגות של יצורים הנעים בקרקע 15. בפיתוח olfactometers כאלה מבחנים נלווים, חשוב לשקול כמה הדוק תנאים טבעיים משוכפלים ולכן הרלוונטיות האמיתית של תגובות התנהגותיות הוערכו במונחים של הביולוגיה של הנבדקים. כדי להתואר rge, הנתונים שנאספו יהיה שימושי כמו הרלוונטיות של המבדק התנהגותי ביחס לאקולוגיה התנהגותית של האורגניזם 16 בלבד. Olfactometer תאר כרגע והמבדק ההתנהגותי תוכנן במיוחד עבור חרק hemipteran שנוטה ליזום טיסה כמו &quot;קפיצות&quot; קצרות 16. הכיוון האנכי של olfactometer וסידור מקור האור להקל חניכה של תנועת חרק ולכן התנהגות אורינטציה כימית בתיווך לאחר מכן ניתן assayed ביעילות ובתפוקה גבוהה. הסדר assay התנהגות זו סבירה יכול לשמש למגוון רחב של טיסה או הליכה או מיני פרוקי רגליים יכולים גם להיות שונים בקלות כדי להתאים את הצורך של יצורים שאינם חרקים.

פרוקי רגליים (כולל חרקים ועכבישים) לעתים קרובות מוגדרים כמזיקים, כי הם גם להתחרות עם מאכל אדם בהגדרות חקלאיות או עירוניות או להעביר פתוגנים סיבתיות של מחלה 1. כמות גדולה של השקעה נעשית לפיתוח כלי בקרה למזיקים כאלה. כלים אלה יכולים להשתנות במידה רבה והתקדמות משמעותית נעשתה בפיתוח כלי biorational כי גם לשנות או לנצל את ההתנהגות הטבעית של מזיקים עם השימוש במשיכה או דוחי 2,3 התנהגותיים. מזיקי פרוקי רגליים לעתים קרובות מסתמכים על אותות או רמזי חוש ריח לזוג ו / או מיקום 4 מארח. לכן גילוי של משיכה או דוחים יעילות למזיקים יכול להוביל לעתים קרובות לפיתוח כלי בקרה. תהליך זה של גילוי כרוך במספר שלבים. ראשית, ההתנהגות הטבעית של הנבדק חייבת להיות מובנת. לדוגמה, יש לוודא אם מין אחד ממינים נתונים מושך את ההפךסקס למיקום זוג. אם כך, צריך לקבוע אם משיכה זו מתווכת על ידי חומר כימי והיכן שמיוצר כימי. צעדים נוספים כוללים קביעה מתי הכימי מופק וזיהוי הסופי שלה. במשך כל התהליך, (חרקים או קרדית) התגובה התנהגותית של נושא המבחן לodorants חייבת להיבדק. בתחילה, את ההתנהגות של הנבדק תיבחן לחומר הטבעי. לדוגמה, תגובתו של עש זכר עשויה להיבדק לזה של התמצית של בלוטת הפרומו שלה הנשית conspecific. לחלופין, תגובה של אוכלי עשב לריחות הטבעיים של הצמח הפונדקאי שלו יכולה להיבדק. למרות חקירות אלה יש לעתים קרובות התמקדות מעשית בפיתוח של כלי ניהול 5,6, הם יכולים להיות מיושמים גם על מחקר שעוסק בשאלות עקרוניות יותר, כגון התפצלות 7. השלבים הבאים כרוכים בבדיקת התגובה של פרוקי הרגליים לגרסות סינטטיות של מוצרים טבעיים שזוהו. Understanding כמה פרוקי רגליים מגיבים לכימיקלים מחייב פיתוח של כלים המתאימים כדי למדוד את התנהגותם. הנתונים המופקים על ידי כלים כאלה יהיו תלויים בכמה טובים הוא החוקר הצליח למדוד התנהגויות טבעיות בהגדרה מבוקרת. לפני למעלה משישה עשורים, olfactometers טיסה הממושכת ומנהרות שפותחו כדי למדוד תגובת חרק odorants 8,9. Olfactometers להשתנות באופן משמעותי בעיצוב, ולעתים קרובות הם מותאמים לחרק או הבעיה הספציפי הנחקר. המטרה של מאמר זה היא לתאר את העיצוב ושימוש ב, olfactometer T-מבוך כיוון אנכי למדידת תגובת חרק odorants (איור 1). הכיוון האנכי של olfactometer מנצל geotaxis השלילי (נטייה לנוע למעלה) הוצג על ידי חרקים רבים. מקור אור ממוקם ישירות מעל olfactometer מנצל phototaxis החיובי (נטייה לנוע לכיוון מקור האור) הוצג על ידי חרקים רבים. Olfactometer שימושי במיוחד לחרקי hemipteran שנוטים לא להציג בקלות בתנועה אופקית olfactometers אורינטציה ושהושפעו מאוד מעוצמת האור ביחס לאורינטציה. עם זאת, המכשיר הזה יכול לשמש למגוון רחב של חרקים מעופפים והזוחלים, כמו גם Arachnids. Olfactometer יכול להיות מועסק על מנת להעריך את שני מושכים ודוחה. במקרה של משיכה, שדה הריח המפוצל (איור 1) הוא הקים עם attractant המשוער שוחרר בצד אחד לעומת אוויר נקי שוחרר בצד הנגדי. בחירה נרשמת כאשר החרק שוחרר בבסיס olfactometer בוחר אחד משני שדות הריח. במקרה של דוחים, התנהגות שלישית היא אפשרית. בנוסף לתנועה כלפי מעלה בכל אחד משני שדות הריח, חוסר התנועה כלפי מעלה עשוי להיות מוקלט המציין גירוי שאינו מגיב או הדיפה מגירוי או שדות ריח.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> שתיים יציאה מחולקת T-olfactometer </td><td> מחקר אנליטי מערכות (ARS), Inc גיינסוויל, פלורידה </td><td> אף אחד (בהתאמה אישית) </td><td> אם אינן זמין מARS, דרום מדעי (גיינסוויל, פלורידה) גם כיום בונה ומפיצת ציוד כזה. </td></tr><tr><td> מוצק שלב החזקת מייקר חילוץ / קאמרי מקור ריח עם טפלון; מחברי צינור זכוכית. </td><td> מחקר אנליטי מערכות (ARS), Inc גיינסוויל, פלורידה </td><td> RV-R3 </td><td> ראה לעיל הערה </td></tr><tr><td> מערכת אספקת אוויר </td><td> מחקר אנליטי מערכות (ARS), Inc גיינסוויל, פלורידה </td><td> HADS-2AFM2C.4 </td><td> ראה לעיל הערה </td></tr><tr><td> גיליוטינה קאמרית </td><td> אנליטי reseקשת מערכות (ARS), Inc גיינסוויל, פלורידה </td><td> L3GP3 </td><td> ראה לעיל הערה </td></tr></tbody></table>

assay בחירה האנכי t-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

לאור החשיבות הכלכלית של חרקים ומזיקים כמו Arachnids של גידולים חקלאיים, סביבות עירוניות או כוקטורים של מפעל ומחלות אנושיות, טכנולוגיות שונות מפותחות ככלי בקרה. משנה של כלים אלה מתמקד בשינוי ההתנהגות של פרוקי רגליים על ידי משיכה או דחייה. לכן, פרוקי רגליים הם לעתים קרובות המוקד של חקירות התנהגותיים. כלים שונים פותחו כדי למדוד התנהגות פרוקי רגליים, כולל מנהרות רוח, טחנות טיסה, servospheres, וסוגים שונים של olfactometers. המטרה של הכלים הללו היא למדוד תגובת חרקים או עכבישים לרמזים ויזואליים או לעתים קרובות יותר חוש ריח. Oflactometer T-המבוך האנכי המתואר כאן מודד בחירות שבוצעו על ידי חרקים בתגובה למושכים או דוחים. זהו מכשיר בדיקת תפוקה גבוה שמנצל phototaxis החיובי (משיכה לאור) וgeotaxis השלילי (נטייה ללכת או לעוף כלפי מעלה) הוצג על ידי פרוקי רגליים רבים. Olfactometאה מורכב משפופרת זכוכית 30 סנטימטרים שמחולקת במחצית עם רצועת טפלון להרכיב T-מבוך. כל מחצית משמשת כזרוע של olfactometer מאפשר לנבדקים לבצע בחירה בין שני שדות ריח פוטנציאליים במבחנים המעורבים מושכים. במבחנים הכוללים דוחים, חוסר התגובה נורמלית למושכים ידועים אך ניתן למדוד כמשתנה שלישית.

אטרקציה של הדרי מבוגרי אסיה psyllid (Diaphorina citri) לריחות שלהם נדיפים הלידה המארחת הצמח (הדרים) מתוארת באיור 2 א. באופן משמעותי (α &lt;0.05) יותר מבוגרים בוחרים בזרועו של olfactometer T-המבוך מקבל ריחות מצמחי הדר מתגוררים בהשוואה לשליטה ריקה (אוויר נקי). דוגמה לדחייה מוצגת באיור 2 ב. במקרה זה, את החרקים נחשפו לזרוע אחת נדיפים ההדרים שקבלו T-המבוך, ואילו הזרוע השנייה קבלה נדיפים מצמח הדרים שטופל בדיסולפיד הידוע הדוחה, דימתיל 11. במקרה זה, שלושה סוגים של התנהגויות נצפו. מספר psyllids נעצר בזרוע השחרור ולא להגיב לא הייתה שונים סטטיסטית מהמספר נכנס זרוע קבלת הריחות מצמחי הדר בלבד (איור 2 ב &#39;). עם זאת, אין psyllids נכנס הזרוע המכילה tהוא יארח צמח הפכפך כאשר משותף הציג-עם הדוחה (2B איור). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig1.jpg" /> איור 1. התרשים סכמטי של olfactometer כיוון אנכי T-מבוך הצטרף למערכת מסירת אוויר ומכשירי שחרור טיפול ריח. התרשים הוא עיבוד של איור 1 במאן et al. 10. נושא הבדיקה ממוקם בנפרד לתוך תא שחרורו של T-2-olfactometer מחולק הנמל. הוא נע לכיוון הריחות דרך שסתום שער שמאפשר תנועה כלפי מעלה בשליטה אל olfactometer ומונע מהחרקים זוחלים בחזרה לאזור נקודת השחרור. צינור bifurcates 10 סנטימטרים אחרי ערך השער. תגובה חיובית לריח נרשמת פעם אחת החרק נע 0.5 סנטימטר לצד מסוים של החלוקה. קאמרי אוסף הגיליוטינה ההפכפכה יכול להיות בשימוש במקום המוצק PHAsדואר החזקת מייקר חילוץ / קאמרית מקור ריח (SPMEC) כמקור ריח. <img alt="איור 2" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50229/50229fig2.jpg" /> איור 2. תגובה של הדרי מבוגרי אסיה psyllid (Diaphorina citri) לנדיפים מצמחי הדר מארחים לעומת בקרת אוויר נקיה () או נדיפים הדרים לעומת הדרי נדיפים שיתוף שוחרר-עם (דיסולפיד דימתיל) הדוחה (ב &#39;) בכיוון אנכי T מבוך-olfactometer איור 2 א:. ניתוח חד כיווני של שונות (ANOVA) ואחרי הבדיקה של Tukey HSD (α &lt;0.05) בוצע כדי להשוות את מספר psyllid ביצוע בחירה בין שתי הזרועות (2 טיפולים, n = 120). עמודות שצוינו על ידי אותיות שונות שונות באופן משמעותי מזו (α &lt;0.05) התרשים 2B:. Analys כיוון אחדהוא שונים (ANOVA) ואחרי הבדיקה של Tukey HSD (α &lt;0.05) בוצע כדי להשוות את מספר psyllid ביצוע בחירה בין כל אחת מזרועות או שנותר בנקודת השחרור (3 טיפולים, n = 120). עמודות שצוינו על ידי אותיות שונות שונות באופן משמעותי מזו (α &lt;0.05).

Olfactometer אנכי, T-מבוך מתואר לassaying התגובה התנהגותית של פרוקי רגליים. Olfactometer מאפשר הנסיין למדוד בחירות שבוצעו על ידי נבדקים, כאשר נתון שני שדות ריח פוטנציאליים. שניהם המשיכה ולדחייה מodorants ניתן למדוד במכשיר זה.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

Given the economic importance of insects and arachnids as pests of agricultural crops, urban environments or as vectors of plant and human diseases, ...

המטרה הכללית של נוהל זה היא למדוד את התנהגות ה-CID בתגובה לחומרי ריח. דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת TMAs אנכיים שבהם בחירות ריח שונות מקושרות לאזורים מרחביים שונים. השלב השני הוא הכנסת ה-CIDs לתוך ה-temaze.בשלב הבא, עוקבים אחר ה-CIDs למשך פרק זמן קצוב כדי לראות באיזו זרוע של המבוך הם בוחרים, ובחירתם נרשמת. בסופו של דבר, בדיקת בחירת ה-vertical temas משמשת לחשיפת תגובת ההתנהגות של חרקים לריח. ה-vertical TE masal. Spectometer מנצל התנהגויות טבעיות של חרקים על מנת לבחון תגובת חרקים למגוון של חומרים מושכים ודוחים.כשלב ראשון, מצאו חדר בבקרה טמפרטורלית או תא סביבתי שבו ניתן לבצע את ההרכבות הניסיוניות והבדיקות. התחילו בבניית מערך הניסוי על ידי הרכבת אולפקטומטר (מדריח ריחות) בעל שני פתחים בהתאמה אישית. האולפקטומטר מורכב מצינור זכוכית באורך 30 סנטימטרים, המפוצל לשני פתחים נפרדים עם רצועת טפלון המשמשת כבסיס.כל חצי מקביל לזרוע של אולפקטומטר מסוג בחירה בין שתי אפשרויות, המאפשר לנבדק לבחור בין שני שדות ריח פוטנציאליים. כדי להשיג דיפוזיה אופטימלית של אור, השתמשו במכל אטום כדי להקיף את מערך הניסוי. לאחר התקנת ה-TMAs Olfactometer בצורה אנכית, מקמו אותו תחת נורת פלורסנט בעוצמה של 900 luxe וחברו את פתח הכניסה של החרק לאולפקטומטר.מקורות הריח נשמרים בתא מקור של מיקרו-מיצוי פאזה מוצקה. חברו את זרועות האולפקטומטר למקורות הריח באמצעות מחברי צינור זכוכית מסוג Teflon. לאחר מכן, חברו את מערכת הזרמת האוויר למקור חיצוני של אוויר מלחח ומסונן בפחם הנמצא תחת לחץ קבוע.להכנת מקורות ריח, המססו את דגימות הכימיקלים הרצויות בממס מתאים. העבירו את התמיסה באמצעות פיפטה לפתיל כותנה. בנוסף, השריו פתיל כותנה בממס בלבד ליצירת דגימת ביקורת.עטפו את פיתילי הכותנה המטופלים ואלו שבקבוצת הביקורת בנייר סופג למעבדה כדי למנוע זיהום משמעותי של כלי הזכוכית. כאשר נדרש דגימה, הניחו אותה באחד מתאי המקור. לפני הבדיקה עם ריח, חשפו את ה-Cates לאוויר נקי לעומת אוויר נקי וממס לעומת אוויר נקי ב-T MAs Olfactometer.שלב זה נועד לאמת את היעדרם של הטיות מיקומיות או השפעה של הממס על נשואי הניסוי. כדי לבחון אוויר נקי מול אוויר נקי, התחילו את זרימת האוויר המטוהר והמולח דרך תאי מקור ריקים באמצעות שתי משאבות המחוברות למערכת אספקת אוויר. שמרו על זרימת אוויר של 0.1 liters per minute דרך שתי הזרועות של האולפקטומטר.יש לוודא שכל התצפיות יבוצעו בטמפרטורה ובלחות יחסית סטנדרטיות. כעת התחילו את מבחן הבקרה על ידי הנחת כ-20 SIDS בתא. צפו ב-SIDS למשך פרק זמן שנקבע מראש שבין 100 ל-300 שניות.המשקל מאפשר להם להגיב לסביבה. לאחר שתסתיים התביית, רשמו את תגובת ה-CIDs לסביבת הבדיקה. רשמו בחירה בזרוע השמאלית עבור כל SLI שחוצה אל החלק השמאלי של ה-T maze מעל לנקודה הנמוכה ביותר של המחיצה. רשמו באופן אנלוגי עבור הזרוע הימנית.במידה ולא נבחרה אפשרות אחרת, רשמו בחירה בזרוע השחרור. לאחר שכל התגובות תועדו, אספו את ה-CIDs באמצעות שואב (aspirator). בצעו בדיקה דומה עבור ממס לעומת אוויר נקי על ידי הכנסת פתיל ממס לאחד מתאי המקור.השתמשו בסט אחר של CIDs עבור התצפיות לאחר הרצות הבקרה. התחילו את בדיקת הריח על ידי הקצאה אקראית של מקור ריח לאחת מזרועות האולפקטומטר בתחילת כל בדיקה ביולוגית. הפכו את המיקום הזה לפחות לאחר כל בדיקה של 10 נבדקים כדי למנוע הטיה מיקום פוטנציאלית.שוב, ודאו שזרימת האוויר, הטמפרטורה והלחות לא השתנו. הכניסו עכברים אחד או יותר לתא בכל הרצה. עבור הבדיקה המוצגת כאן, מוכנסים כ-10 עכברים. בדקו את התגובה של מינימום 30 ועד 120 נבדקים לכל שילוב ריחות.צפו בנבדקים במשך 100 עד 300 שניות כדי לאפשר להם להפגין תגובה התנהגותית. יש לקבוע את מרווח הזמן מראש. רשמו את בחירות הזרועות של נבדקי הניסוי על ידי סימון בחירת ריח כאשר נבדק נכנס לזרוע האולפקטומטר עם הריח, או סימון בחירת זרוע ביקורת או בחירת זרוע שחרור.לבסוף, לאחר שכל התצפיות נרשמו, יש להסיר את ה-CIDs באמצעות שאיבה (aspirator) לפני שימוש במערך עבור טיפול בריח אחר, לנקות את האולפקטומטר ואת צינור החיבור ביסודיות עם תמיסת סבון 2% ולאפות את רכיבי הזכוכית בטמפרטורה של 200 degrees Fahrenheit למשך 24 שעות. גרף זה מציג את התגובה של Asian citrusy לתרכובות נדיפות מצמחי מאכס הדר לעומת ביקרת אוויר נקי. גרף זה מציג את התגובה של Asian citrusy לתרכובות נדיפות מהדר לעומת תרכובות נדיפות מהדר ששוחררו יחד עם dimethyl di sulfide, דוחה הן בגרף העליון והן בגרף התחתון.העמודות המסומנות באותיות שונות זו מזו באופן מובהק סטטיסטית ברמת ביטחון של מעל 95%. זאת בהתאם לניתוח שונות חד-משתנה (one-way ANOVA) ולאחריו מבחן Tukey להבדלים מובהקים. המלכודות פועלות במגוון רחב של עיצובים ולעתים קרובות הן מותאמות ומתוכננות עבור בעיית המזיקים הספציפית הנחקרת.המאמר הנוכחי מתאר את התכנון והשימוש ברפלקטומטר בעל אוריינטציה אנכית המשמש למדידת תגובתם של חרקים למגוון ריחות.

vertical-t-maze-choice-assay-for-arthropod-response-to-odorants

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

במאמר זה וידאו, אנו מתארים שיטה חדשה המאפשרת בנייה של הדרגתיים odorant בגיאומטריות ויציב לשליטה. אנו בקצרה להמחיש כיצד הדרגתיים אלה יכולים לשמש מסך פגמים חוש הריח (תתרנות מלאה או חלקית) ו ללמוד תכונות מהותיות יותר של התנהגות chemotaxis.

ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

זחלי תסיסנית מסוגלים לשייך גירויי ריח בתגמול בטעם. כאן אנו מתארים הפרדיגמה התנהגות פשוטה המאפשרת הניתוח של למידה אסוציאטיבית אפטטיבית הרחה.

למידה אסוציאטיבית הרחה באפטטיבית<em&gt; דרוזופילה</em&gt; זחלים

לזבובי פירות יש מערכת ריח מורכבת, הם יכולים להבחין במאות ריחות ולהשתמש בחוש הריח שלהם כדי לכוון החלטות התנהגותיות. סרטון זה מתאר את בדיקת האולפקטומטר הארבע-כיוונית, שיטה לחקר תגובות התנהגותיות של חוש הריח בזבובים. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטפל בזבובי בדיקה ומהם השלבים הקריטיים בעת ביצוע הבדיקה.

בדיקת אולפקטומטר ארבע-כיוונית: שיטה להערכת תגובות מרומזות ריח בדרוזופילה

סרטון זה מתאר שיטה לבדיקת התנהגות גישוש חוש הריח בזבוב הפירות, הנקראת מבוך Y. סרטון הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר ולנהל את הבדיקה.

דרוזופילה Y-maze Assay: שיטה להערכת תגובות חוש הריח בזבובים

שיטת הערכת כמותית תגובת chemotactic...

Assay Chemotaxis סי אלגנס

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

אנו מציגים מבחן אמריקאי כדי לחשוף את ההשפעה של ניחוחי על התנהגות דרוזופילה באמצעות assay Y-מבוך.

בדיקה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Olfaction עם Assay Y-מבוך

Flywalk מערכת מעקב האוטומטי משמש לכימות ברזולוציה גבוהה של מודרך ריח התנהגות בmelanogaster תסיסנית.

כימות ברזולוציה גבוהה של התנהגות מודרכת ריח<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; שימוש ב<em&gt; Flywalk</em&gt; פרדיגמה

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

כאן, אנו מתארים את הבנייה ואת השימוש במנהרת רוח עבור ריח מתווכת מבחני התנהגותי עם חרקים. העיצוב מנהרת רוח מקלה על שחרורו של ריח מקורות באמצעות מספר שיטות, עם וללא גירויים חזותיים. מנהרת רוח ניסויים הם אמצעי חשוב לזיהוי כימיקלים נדיפים פעיל בהתנהגותו.

במנהרת רוח עבור ריח מתווכת מבחני התנהגותי חרקים

מבוכי Y מאפשרים לחוקרים לקבוע את הרלוונטיות של גירויים ספציפיים המניעים התנהגות של בעלי חיים, במיוחד רמזים כימיים מבודדים ממגוון מקורות. תכנון ותכנון זהירים יכולים להניב נתונים חזקים (למשל, אפליה, מידת חקירה, התנהגויות רבות). מנגנון ניסיוני זה יכול לספק תובנה רבת עוצמה על שאלות התנהגותיות ואקולוגיות.

שימוש במבוכי Y סגורים להערכת התנהגות כימוסנסורית בזוחלים

למדו להשתמש באולפקטומטר T-מבוך אנכי להערכת תגובות התנהגותיות של פרוקי רגליים לריחות שונים. שיטה זו מאפשרת למדוד משיכה ודחייה בקרב חרקים.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

גלה סרטונים נוספים