Name: דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: למד שתלת תומכן בעורק הקרוטידי של עכבר לחקר restenosis ותגובות כלי הדם לתרופות. שיטה זו מאפשרת ניתוח היסטולוגי של היווצרות פלאק וריפוי האנדותל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לגב &#39;אנג&#39;לה פרוינד לסיוע הטכני המעולה בחתך סטנטים המשובצים הפלסטיק. אנו מודים גם גב &#39;רויה סולטן וגב&#39; אנג&#39;לה פרוינד לעזרה המקצועית עם כתמי אימונוהיסטוכימיה.

1. הכנה והשתלת תומכן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטנט-התמוכות (פורט וויין מתכות, Castlebar, אירלנד) היו קלועות ולאחר מכן לחתוך לגודל הרצוי במכון לטכנולוגית טקסטיל והנדסת מכונות, אוניברסיטת RWTH אאכן בגרמניה (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההשתלה, סטנטים חייבים להיות מועברים לתוך צינור סיליקון 2 ס&quot;מ, באמצעות מלקחיים, והניחו 2 מ&quot;מ בסוף מסוף אחד, המכונה קצה קדמי (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצה הקדמי יש לחתוך באלכסון, כדי להבטיח קצה חד להשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההשתלה, סטנט צריך להיות להשקות בשפע, על מנת להבטיח גלישה. </li></ol> 2. השתלת תומכן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10-12 שבועות עכברי סוג בר C57BL / 6 גברים ישנים, 25-27 גרם מורדמים באמצעות זריקת intraperitoneal של קטמין מ&quot;ג / ק&quot;ג 100 ו10 xylazine מ&quot;ג / ק&quot;ג. הרדמה תקינה היא אושר לפני הניתוח על ידי היעדר רפלקסים ותנועת זקן. כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה, עיני העכבר מכוסות על ידי סרט של bepanthene שמנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר גילוח וחיטוי נכון של אזור צוואר הגחון, חתך החציוני קטן של 1 ס&quot;מ מתבצע תחת stereomicroscope, באמצעות מספריים. לאחר שהפריד את 2 גופי שומן עם מלקחיים מעוקלים סטריליים, ניתן לראות את עורק התרדמה המשותף השמאל פועם יחד עם קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ס&quot;מ של עורק התרדמה המשותף שמאל וההסתעפות צריך להיות מוכנים ללא תשלום. קשר 1 באמצעות חוט 5/0 משי יהיה מחויב סביב עורק התרדמה המשותף השמאל, 2 קשרים באמצעות 7/0 חוטי משי יהיו מחויבים סביב העורק הראשי החיצוני השמאלי, וקשר 1 באמצעות חוט משי 7/0 יהיה מחויב מסביב לעורק התרדמה הפנימי (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרימת הדם ואז נקטעה על ידי קשירת הקשרים בעורק התרדמה הפנימי ועורק התרדמה החיצוני הפרוקסימלי בתקיפות, כמו גם על ידי משיכת הקשר סראונדing עורק התרדמה המשותף. הכלי צריך להיות קבוע באופן שבו עורק התרדמה המשותף וחיצוני נמצאים בקו ישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך קטן בעורק התרדמה החיצוני מתבצע, ליד את הקשר הפרוקסימלי, באמצעות מספריים Vannas. צינור סיליקון המכיל סטנט מוחדר לעורק התרדמה החיצוני, עם הקצה החד בחזית, באמצעות מדריך תיל. לאחר סטנט מגיע למיקום הרצוי, צינור סיליקון הוא משך לאחור על מדריך התיל ומאפשר את הרחבת הזיכרון של צורה (איור 1) סטנט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקשר הדיסטלי בעורק התרדמה החיצוני להיקשר בחוזקה כדי לסגור את האתר של חתך ואת קשרים בעורק התרדמה הפנימי ונפוץ יוסרו, ובכך להחזיר את זרימת הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החתך בעור נסגר באמצעות תפרי קליפים מישל 3-4 ומלקחי מישל. העכבר ממוקם תחת האור האדום עד להחלמה מלאה. טיפול משכך כאבים הוא לא הכרחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">שלט יכול להיות מנותח לאחר 1-3 שבועות. ללמוד מחדש endothelialization, נקודת סיום בזמן מוקדם יותר יש צורך (3-4 ימים). אנחנו נצפו במודל שלנו, כי השתלת תומכן 4 שבועות לאחר התערבות כירורגית זו, במיוחד על ידי השימוש בציפויים ייחודיים לbiofunctionalize סטנטים מיניאטורי, neoangiogenesis מתרחש בכ -30% מדגימה. זוהי אחורית לתהליכי שיפוץ והתחדשות, עם מנגנונים שונים ומייצג בעיה פתולוגית אחרת. להתרכז ביצירה, היצרות neointima בסטנט ו / או ניתוח של מנגנונים אלה תופעות לוואי לאחר השתלת סטנט נקודת סיום בזמן של 3 שבועות תהיה מועילה לא לערבב עם השפעות משובי הנגרמות על ידי ההתפרצות של neoangiogenesis. </li></ol> 3. ניתוח של היווצרות הפלאק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנקודת סיום בזמן, בעלי החיים הם מורדמים באמצעות זריקת intraperitoneal של קטמין מ&quot;ג / ק&quot;ג 100 ו10 xylazine מ&quot;ג / ק&quot;ג.הרדמה תקינה היא אושר לפני הניתוח על ידי היעדר רפלקסים ותנועת זקן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי החיים נהרגים על ידי exsanguination intracardial. סרום הדם שנאסף לצורך ניתוח נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פתיחת חלל בית החזה וPBS כביסה דרך intracardial punction, גוף זלוף עם 4% paraformaldehyde פתרון (PFA) מתבצע במשך 5 דקות. עורק הצוואר השמאלי שמכיל סטנט הוא גזור, ממוקם ישירות בפתרון PFA 4% ולפחות 16 שעות מאוחר יותר embbeded בפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 חלקים עבים מיקרומטר מבוצעים מדגימות באמצעות להקת יהלומים ראו פלסטיק משובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד את גודל השלט, מכתים Giemsa מבוצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את שיעור מחדש endothelialization בתוך שטח stented של כלי השיט, אימונוהיסטוכימיה לפון Willebrand גורם (vWF) מתבצעת. </li></ol>

<ol><li>Ross, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+to+injury+and+atherogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Response to injury and atherogenesis.</a> Am. J. Pathol. 86, 675-684 (1977).</li>
<li>Virmani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+the+vulnerable+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pathology of the vulnerable plaque.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 13-18 (2006).</li>
<li>Farb, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+acute+and+chronic+coronary+stenting+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pathology of acute and chronic coronary stenting in humans.</a> Circulation. 99, 44-52 (1999).</li>
<li>Weber, C., Noels, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis%3A+current+pathogenesis+and+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis: current pathogenesis and therapeutic options.</a> Nat. Med. 17, 1410-1422 (2011).</li>
<li>Lenzen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+and+outcome+of+patients+with+established+coronary+artery+disease%3A+the+Euro+Heart+Survey+on+coronary+revascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Management and outcome of patients with established coronary artery disease: the Euro Heart Survey on coronary revascularization.</a> Eur. Heart J. 26, 1169-1179 (2005).</li>
<li>Babapulle, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hierarchical+Bayesian+meta-analysis+of+randomised+clinical+trials+of+drug-eluting+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">A hierarchical Bayesian meta-analysis of randomised clinical trials of drug-eluting stents.</a> Lancet. 364, 583-591 (2004).</li>
<li>Wiviott, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensive+oral+antiplatelet+therapy+for+reduction+of+ischaemic+events+including+stent+thrombosis+in+patients+with+acute+coronary+syndromes+treated+with+percutaneous+coronary+intervention+and+stenting+in+the+TRITON-TIMI+38+trial%3A+a+subanalysis+of+a+randomised+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Intensive oral antiplatelet therapy for reduction of ischaemic events including stent thrombosis in patients with acute coronary syndromes treated with percutaneous coronary intervention and stenting in the TRITON-TIMI 38 trial: a subanalysis of a randomised trial.</a> Lancet. 371, 1353-1363 (2008).</li>
<li>van Werkum, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+coronary+stent+thrombosis%3A+the+Dutch+Stent+Thrombosis+Registry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Predictors of coronary stent thrombosis: the Dutch Stent Thrombosis Registry.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 1399-1409 (2009).</li>
<li>Finn, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+responses+to+drug+eluting+stents%3A+importance+of+delayed+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Vascular responses to drug eluting stents: importance of delayed healing.</a> Arterioscler. Thromb Vasc. Biol. 27, 1500-1510 (2007).</li>
<li>Joner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+drug-eluting+stents+in+humans%3A+delayed+healing+and+late+thrombotic+risk%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 48, 193-202 (2006).</li>
<li>Cines, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+in+physiology+and+in+the+pathophysiology+of+vascular+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.</a> Blood. 91, 3527-3561 (1998).</li>
<li>Hristov, M., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+characterization%2C+pathophysiology%2C+and+possible+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: characterization, pathophysiology, and possible clinical relevance.</a> J. Cell Mol. Med. 8, 498-508 (2004).</li>
<li>Rabelink, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+more+than+an+inflammatory+response%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: more than an inflammatory response?</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 834-838 (2004).</li>
<li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+evaluation+of+drug-eluting+stents+for+peripheral+applications%3A+recommendations+from+an+expert+consensus+group%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preclinical evaluation of drug-eluting stents for peripheral applications: recommendations from an expert consensus group.</a> Circulation. 110, 2498-2505 (2004).</li>
<li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neointimal+response+to+coronary+artery+injury+in+pigs+and+dogs.+Implications+for+restenosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Differential neointimal response to coronary artery injury in pigs and dogs. Implications for restenosis models.</a> Arterioscler. Thromb. 14, 395-400 (1994).</li>
<li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restenosis+and+the+proportional+neointimal+response+to+coronary+artery+injury%3A+results+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Restenosis and the proportional neointimal response to coronary artery injury: results in a porcine model.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 19, 267-274 (1992).</li>
<li>Ali, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+in-stent+stenosis+in+ApoE+knockout+mice%3A+insights+from+a+novel+mouse+model+of+balloon+angioplasty+and+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Increased in-stent stenosis in ApoE knockout mice: insights from a novel mouse model of balloon angioplasty and stenting.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 833-840 (2007).</li>
<li>Chamberlain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovasc. Res. 85, 38-44 (2010).</li>
<li>Rodriguez-Menocal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in-stent restenosis.</a> Atherosclerosis. 209, 359-366 (2010).</li>
<li>Costa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Covalent+immobilization+of+antimicrobial+peptides+%28AMPs%29+onto+biomaterial+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Covalent immobilization of antimicrobial peptides (AMPs) onto biomaterial surfaces.</a> Acta Biomaterialia. 7, 1431-1440 (2011).</li>
<li>Soehnlein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+cathelicidin+protects+from+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived cathelicidin protects from neointimal hyperplasia.</a> Science Translational Medicine. 3, 103ra198(2011).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

כדי להפחית את הסיכון של קרישי דם וrestenosis סטנט ובתמיכה בפיתוח של ציפויים חדשים לסטנטים משחררי תרופות, שיטה קלה, פשוטה ונגישה של השתלת תומכן במודל של בעלי חיים יש צורך. עכברים לספק מערכת האידיאלית ללמוד את המנגנונים המורכבים של שיפוץ העורק לאחר השתלת תומכן ואת היעילות של תרופות מסוג זה. מודלים קיימים לrestenosis בסטנט בעכבר הם קשים, דורש מיומנויות כירורגיות גבוהות ומרמזים סיכונים גבוהים של סיבוכים כמו דימום או שיתוק 17-19. לדוגמה, במודל של סטנט-ההשתלה לתוך אב העורקים החזי של עכבר תורם לאחר בלון התרחבות של כלי הדם ולאחר מכן השתלה של מגזר stented לתוך העורק הראשי של עכבר נמען 17, המחקר של מנגנוני פתיו, אינו השפיע רק על ידי תגובה של נמען לחומר תורם, אלא גם על ידי הפגיעה מסיבית של ושה וvasorum adventitia. השרשה של stee חלדסטנט l ישירות לאב העורקים בבטן אחרי בלון הרחבה 19 ואחריו שיעור תמותה גבוה (35%) בשל שיתוק רגלו אחורי לאחר פקקת או דימום מאב העורקים בבטן באתר של arteriotomy. השתלה בצורת ספירלה עצמית הרחבת Nitinol-סטנט לאב העורקים בבטן דרך עורק הירך 18 צריכה מיומנויות כירורגיות גבוהות, בעיקר בשל עיוורון בימוי סטנט לאורך ההסתעפות מעורק הירך לאב העורקים למקום סטנט במיקום הנכון. הליך זה מלווה בסיכון גבוה לפגיעה בעצב הירך, ולכן שיתוק של הרגל האחורית. בהשוואה להליכים אלה, המודל של השתלת תומכן בעכבר שלנו לא זקוקים למיומנויות כירורגיות גבוהות. המודל שלנו מציע שיטה פשוטה, קלה ויעילה כדי לנתח את ההשפעות של סמים ציפויים שונים על שיפוץ העורק, הצבת סטנט נעשתה תחת עין, ואין סיכונים של עצבים מזיקים או מבנים אחרים. Comניתן לחקור מנגנונים מולקולריים Plex קלים יותר במודל של העורק הראשי סטנט בעכבר שלנו, לא רק על ידי נגישות ישירה של הכלי, אלא גם בשל קיומם של זני עכברים עקום החוצה שונים. כמגבלה אחת, השוואה עם ההליך הקליני, המודל שלנו משתמש בעכברים / עורקים בריאים ואינו מבצע סטנט על לוחות קיימים מראש (לא restenosis בסטנט, אך היצרות בסטנט). כמו כן, אנו לא מבצעים בלון הרחבה לפני סטנט-השתלה. עם זאת, בשל נזק המסיבי של דפנות הכולים הדם בשני המודלים, תהליכי reparatory דומים. לצערנו, עקב ממצאי מתכת שמקורם, בניטור vivo של צמיחת neointimal אינו אפשרי בשיטות הדמיה קיימות כמו אולטרסאונד או מחשב טומוגרפיה. עוד גורם מגביל הוא חתך הדק של סטנטים המבוססים על המתכת, אשר דורש קצת מומחיות בעיבוד המתכת. באמצעות שיטה זו, שהיינוהצליח להראות, כי נויטרופילים מורה-biofunctionalized מיניאטורי Nitinol-סטנטים מצופים LL-37-להפחית בסטנט restenosis, מתן מושג חדש כדי לקדם את הריפוי של כלי דם לאחר טיפול התערבותית 21. למרות מגבלות אלה, נראה כי מודל זה להיות, עד עכשיו, את המערכת המתאימה ביותר, ובכך כסף וחיסכון בזמן, כדי לחקור ציפויי תרופה חדשים לסטנטים וההשפעות שלהם על האירועים המולקולריים במהלך שיפוץ העורק. יתר על כן, מודל זה ניתן להתאים בקלות לאוגר, שהוא דומה יותר לאדם, כך שכל השערת therapeutical ניתן לאמת לפני היישום לבעלי חיים גדולים יותר או אנושיים כדי למנוע תופעות לא נעימות ובלתי צפויות.

מחלות לב וכלי דם שנגרמו על ידי את ההתקדמות של טרשת עורקים הן הגורם המוביל למוות במדינות המתועשות. טרשת עורקים היא תגובת מוקד, דלקתי fibro שגשוג של קיר כלי הדם לפציעת האנדותל 1, וכתוצאה מכך היווצרות של פלאק מורחב לתוך לומן של הכלי, המשפיעה על זרימת הדם דרך עורקים הכליליים. מעל 75% מתוצאת אוטם שריר הלב מהקרע של סיבי כובע הדק של 2 פלאק הדלקתי. מאז סיבוך זה עלול להיות קטלני, transluminal אנגיופלסטיקה מלעורית (כלילי) (PTCA) עם השתלת תומכן הפכה ראשונה בטיפול הבחירה בפרקטיקה הרפואית הנוכחית. השיטה מאפשרת התרחבות של העורקים הכליליים ובכך צמצמו את השיקום של זרימת דם. במקביל, היא גורמת לפגיעה במידה שהאנדותל וכלי הקיר 3. עם זאת, ההשפעה ארוכת הטווח של טיפול זה היא מוגבלת על ידי remode עורקים מוגזםלינג וrestenosis 4. על ידי העסקתו של סטנטים, PTCA הפך ליעיל יותר בטיפול בנגעים מורכבים, המאפשר revascularization לאחר סגירת כלי חריפה 5. שיטה זו מקטינה את השכיחות של restenosis בסטנט פחות מ 10% 6. לצד היתרונות הללו, ראשון בטיפול בחירה זו עבור revascularization כלילית נושא גם את הסיכונים מסכני חיים של פקקת וrestenosis בסטנט. פקקת בתומכן-נגרמת על ידי דה endothelialization של כלי השיט, ואחרי הידבקות מסיבית של טסיות והפיברין לאתר נפגע. 26% מהחולים סובלים מפקקת בסטנט ולמות 63% מאוטם שריר הלב 7. Restenosis מתייחס לתהליך של ריפוי פצע לאחר פגיעה מכאנית לדפנות כלי הדם, הכולל היפרפלזיה neointimal (הגירה והתפשטות של תאי שריר חלק בכלי דם (VSMC), תצהיר של מטריקס (ECM), ושיפוץשל כלי השיט. לעתים קרובות, מחדש התערבות פולשנית הופכת להיות נחוצה כדי dilatate כלי טרשת עורקים הצטמצמו קשה בשל פקקת וrestenosis בסטנט. כדי למנוע פקקת בתומכן, טיפול ארוך טווח בתרופות אנטי טרומבוטיים יש צורך 8. כדי למנוע restenosis, דור החדש של סטנטים משחררי תרופות elute סוכנים אנטי שגשוג כגון תרופות מדכאות חיסון (למשל סירולימוס, everolimus, zotarolimus) ותרופות אנטי סרטניים (למשל פקליטקסל) מציפוי פולימר במשך כמה חודשים 9,10. למרות שתרופות אלו מפחיתות את היווצרות וrestenosis neointima, הם שומרים על סיכון גבוה של פקקת בתומכן על ידי עיכוב מחדש endothelialization. לאחר פציעה העורק, התחזוקה של התא האנדותל היא חיונית כדי למנוע סיבוכים טרומבוטיים. בתנאים פיסיולוגיים, האנדותל האנושי מציג תחלופה קטנה 11. תחת Patholתנאי ogical, לעומת זאת, יושרת אנדותל לקויה, כך שהתאוששות מהירה בסביבת תאי אנדותל בוגרים ותאי האנדותל (EPCs) נדרש 12,13. המחקר של מנגנונים אלה מורכבים מולקולריים בבעלי חיים גדולים יותר 14-16 או בעורק אב העורקים עכבר הוא הליך קשה מאוד, המציע מידע מוגבל 17-19. כדי לבדוק את היעילות של סטנט-ציפוי חדשני להפחתה פקקת בתומכן ודגמים חדשים restenosis הם הכרחיים. Nitinol מייצג את הפלטפורמה האידיאלית עבור סטנטים בגלל &quot;גמישותו הגבוהה, השפעת צורת זיכרון טובה וסובלנות בחולים, בשימוש בהצלחה בסטנטים ממתכת חשופות בשימוש קליני. סגסוגת זו אפשרה ליצור סטנט מיניאטורי עם קוטר חיצוני של 500 מיקרומטר, שיכול להיות מצופה 20 ומושתל לתוך העורק הראשי של עכברים. הפיתוח של מיניאטורי Nitinol סטנט לעכבר געורק arotid, מאפשר הלימוד של מנגנונים מולקולריים מדויקים הנגרם על ידי השתלת תומכן, ומציע את האפשרות לבחון במהירות וביעילות את ההשפעות של סמים ציפויים שונים כדי למנוע restenosis. יתר על כן, קיומו של זני עכברים עקום החוצה שונים מהווה יתרון עצום בהבהרת התפקיד של מולקולות שונות המעורבים בצמיחת neointima ופקק בתומכן.

<table><tbody><tr><td>סטנטים של ניטינול (מתוצרת עצמית מתמוכות ניטינול)</td><td>מתכות פורט וויין, קסלבר, אירלנד NiTi#1, סופר-אלסטי, מחוסל ישר, תחמוצת אור, קוטר 500 & #956; m</td><td>מוצר בהתאמה אישית</td><td>המכון לטכנולוגיית טקסטיל והנדסת מכונות</td></tr><tr><td>צינור סיליקון</td><td>IFK Isofluor, גרמניה</td> קוטר <td>מוצר בהתאמה אישית</td><td>500 &mu; M, עובי חתך 100 &mu; m, צנתר פוליטטרפלואוראתילן</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>מלקחיים אולימפוס</td><td>SZ / X9</td><td></td></tr><tr><td>FST</td><td>, גרמניה</td><td>91197-00</td><td>קצה סטנדרטי מעוקל 0.17 מ"מ</td></tr><tr><td>קטמין 10%</td> <td>CEVA, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילזין 2%</td> <td>מדיסטר, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bepanthene</td><td>Bayer, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>FST, גרמניה</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>ישר Vannas מספריים</td><td>Aesculap, גרמניה</td><td>OC 498 R</td><td></td></tr><tr><td>5/0 משי</td><td>Seraflex</td><td>IC 108000</td><td></td></tr><tr><td>7/0 משי</td><td>Seraflex</td><td>IC 1005171Z</td><td></td></tr><tr><td>חוט מנחה</td><td>Abbott כלי דם</td><td>1001782-HC</td><td>0.014 אינץ' אנגיופלסטיקה מנחה חוט</td></tr><tr><td>מישל תפר קליפים</td><td>אסקולאפ, גרמניה</td><td>BN507R</td><td>7.5 x 1.75 מ"מ</td></tr><tr><td>Michel Forcep</td><td>Aesculap, גרמניה</td><td>BN730R</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

למרות ההתקדמות הניכרת שנעשתה בפיתוח סטנט בעשורים האחרונים, מחלות לב וכלי דם יישארו הגורם העיקרי למוות במדינות מערב. לצד היתרונות שמציעים פיתוח של סטנטים משחררי תרופות שונות, revascularization כלילית נושא גם את הסיכונים מסכני חיים של פקקת וrestenosis בסטנט. מחקר על אסטרטגיות טיפוליות חדשות נפגעת על ידי חוסר השיטות המתאימות ללימוד תהליכים והשתלת תומכן restenosis. כאן, אנו מתארים הליך מהיר ונגיש של השתלת תומכן בעורק התרדמה עכבר, אשר מציע את האפשרות ללמוד בדרך נוחה את המנגנונים המולקולריים של שיפוץ כלי שיט ואת ההשפעות של סמים ציפויים שונים.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשתלה של סטנט מיניאטורי Nitinol לתוך עורק הצוואר השמאלי של עכברים לוקחת 25-30 דקות ומציגה את שיעור תמותה של 10% בעיקר כתוצאה מהניזק של כלי השיט בהתערבות. שיעור הישרדות טוב יותר נצפה בעכברים שיש משקל יותר מ 25 גרם בזמן השתלת תומכן (שיעור תמותה של 5%). לכן, בחרנו עבור עכברי השתלת משקל בין 25-27 גרם. לאחר ניתוח, העכברים להתאושש מהרדמה תוך 2-5 דקות ואין ליקויים פיסיים, כמו שיתוק למשל, הם נצפו. מיקרו מחשב טומוגרפיה (Micro-CT) הדמיה מבוצעת שבוע לאחר השתלת תומכן הראתה כי סטנטים לא נקעו על ידי זרימת דם (איור 1 ג). למרבה הצער, ניתוח של היווצרות neointima בתמונות האלה הוא לא אפשרי בשל ממצא מתכת שמקורם (איור 1D, 1E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנחנו לא צופים בכל כלי שיט או נזק האנדותל של אזור unstented של כלי השיט, מייד מתחת לסטנט, גילוי על ידי כהיסטולוגית (איור 2 א) ועל ידי צביעה ספציפית לאנדותל (איור 2, אנטי עכבר CD31 נוגדן). לסקירה כללית טובה יותר, הסעיף נסרק באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר שני פוטונים (איור 2 ב, 2 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכלי stented, הרחבה קבועה של 15% מזוהה (סטנט יחס: העורק, 1,15:1) על ידי עכברים עם משקל בין 25-27 גרם. היווצרות Neointima ופקיק-היווצרות יכולות להיות מנותחת על ידי stainings היסטולוגית הקלסיים (למשל Hematoxilin-eosin, Giemsa, Movat, Toluidin הכחול, מייסון-Trichrom-גולדנר, איור 3 א, 3 ב). מאז lamina פנימית וחיצוני והבינלאומיים אינן גלויה יותר, גודל שלט היה מחושב כהפרש של חיצוני ואזורי luminal (כלומר אזור פלאק: 234,566 ± 3315 מיקרומטר 2, כלומר אזור luminal: 12036 ± 2662 מיקרומטר 2). גם היקף חיצוני נמדד (ממוצע: 1799 ± 14 מיקרומטר). באשר לניתוחהרכב תאי, הסעיפים צריכים להיות deplastified ומוכתם בסמנים ספציפיים. עבור מחדש endothelialization, השתמשנו בנוגדן אנטי CD31 Cy3 מצומדות ולהתפשטות של תאי שריר חלק נוגדן אנטי SMA FITC-מצומדת (איור 3 ג). Re-endothelialization מחושב כאחוז מCD-31 מוכתם חיובי על פני השטח luminal הכולל (ממוצע: 23.07 ± 3.14%) שבוע לאחר השתלת תומכן. </li></ol> כמובן, מספר בלתי מוגבל של מכתים ספציפי אפשרי, בהתאם לניסיון של כל מעבדות. ניתן גם לבצע ניתוח של שרשרת שרירן כבדה, לאפיון טוב יותר של SMCs, אלא גם ניתוח של תאי הסתננות (מונוציטים, לימפוציטים), או stainings לציטוקינים דלקתיים שונים, בהתאם למטרת המחקר. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig1highres.jpg" sr<html> ג = &quot;/ files/ftp_upload/50233/50233fig1.jpg&quot; /&gt; איור 1. סקירה סכמטי של ההליך כירורגי (). זרימת הדם מופרעת על ידי קשירת הקשרים בעורק התרדמה הפנימי ועורק התרדמה החיצוני הפרוקסימלי בתקיפות, כמו גם על ידי משיכת הקשר המקיף את עורק התרדמה המשותף. צינור סיליקון המכיל סטנט מוחדר לעורק הראשי החיצוני דרך חתך קטן בעורק התרדמה החיצוני. לאחר סטנט מגיע למיקום הרצוי, צינור סיליקון הוא משך לאחור על מדריך התיל ומאפשר את הרחבת כושר הזיכרון של סטנט. תמונות מיקרו-CT המראות את מיקום סטנט שבוע לאחר השתלה כירורגית (ב &#39;). בשל הממצאים שמקורם בחומר, ניתוח של צמיחת neointima אינו אפשרי (C, D). 3fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/50233/50233fig2.jpg &quot;/&gt; איור 2. אזור Unstented של הכלי אינו מושפע מההליך כירורגי, כפי שמוצג על ידי Toluidin הכחולה (א) ו CD31 מכתים האנדותל ספציפי (B, C). <img alt="איור 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3.jpg" /> ניתן לבצע איור 3. ניתוח של השלט על ידי stainings היסטולוגית הקלסיים (למשל מאסון-Trichrom-גולדנר) (א). ניתן לאתר את פקיק המאורגן על ידי תצהירי הפיברין שחור מוכתמים בתוך neointima, במקרים מסוימים חסימה של הכלי שלם הוא ציין (ב &#39;). שגשוג תאי שריר החלק (FITC, ירוק) מחדש endothelialization (Cy3, אדום) או זוהה על ידי צביעת immunofluorescence כפולה באמצעות סמנים ספציפיים.Counterstaining בוצע עם 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, כחול) (ג). הבחנו מחדש יושלם endothelialization של תמוכות סטנט (חץ שמאלה, כפול) בהשוואה למחדש endothelialization luminal incompleted (חץ ימני, יחיד).

מודל של השתלת תומכן בעורק התרדמה עכבר מתואר. בהשוואה לשיטות אחרות דומות, הליך זה הוא מהיר מאוד, פשוט ונגיש, ומציע את האפשרות ללמוד בדרך נוחה תגובת קיר כלי דם לסטנטים משחררי תרופות שונים והמנגנונים המולקולריים של restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשתיל סטנט בעורק הת carotid של עכבר, באופן המאפשר לחקור שכתוב של כלי דם או את ההשפעות של ציפויים תרופתיים שונים. ראשית, הסטנט מוכן להשתלה על ידי העברתו לתוך צינור סיליקון. לאחר מכן, העורק המשותף מבודל ותפרירי כירוק מוצבים כדי להפסיק את זרימת הדם.לאחר מכן, הסטנט מוחדר דרך חתך קטן בעורק הת carotid החיצוני. לאחר שהוצב במקומו, שפופרת הסיליקון ותיל ההובלה מוסרים, והסטנט נשאר בעורק ה-carotid המשותף. לבסוף, הדגימות נצבעות ב-gemsa לצורך ניתוח של היווצרות הפלאק.המודלים הקיימים להשראת היצרות חוזרת (restenosis) מיידית הם קשים לביצוע, שכן הם דורשים מיומנויות כירורגיות מדויקות והסיכוי לסיבוכים נפוצים כמו קרעים או שיתוק הוא גבוה. המודל שלנו ממזער את הסיכון לסיבוכים על ידי שמירה על הסטנט בטווח הראייה לאורך כל הליך ההשתלה. חלקים מהליך זה יבוצעו על ידי ד"ר Simsek Imas, פוסט-דוקטורנט מהמעבדה שלנו.אדגים את השתלת התומך (stent) לתוך עורק העגלה. התחילו בשימוש בפינצטה להעברת התומך לתוך צינור סיליקון באורך שני סנטימטרים. יש לחתוך את הקצה החשוף של הצינור באלכסון, תוך עצירה שני מילימטרים לפני הקצה הקדמי, כדי להקל על ההשתלה. הרטיבו את התומך לפני ההשתלה כדי להקל על ההחדרה.בשלב הבא, ודאו את עומק ההרדמה המתאים בעכבר זכר בוגר. לאחר מריחת משחה מגנה על העיניים, גדלו את אזור הצוואר הוונטרלי. לאחר מכן, נקו את האזור באמצעות שפשופים חוזרים של Betadine ואלכוהול, תוך עבודה תחת מיקרוסקופ סטריאו.השתמשו במספריים כדי לבצע חתך חצקי קטן מעל האזור. הפרידו את השומן והרקמות עד לבידוד העורק התוך-גרוני השמאלי. לאחר שניתן להבחין בו, קשרו תפר סביב העורק המשותף, במרחק של כסנטימטר אחד מההפיצול.קשרו שתי תפרים סביב העורק הקרוטידי החיצוני, והשאירו את הקשר הדיסטלי רפוי כדי לאפשר השתלת סטנט. לאחר מכן, קשרו תפר סביב העורק הקרוטידי הפנימי. לאחר שהתפרים הוחזקו, בצעו חתך קטן בעורק החיצוני סמוך לקשר הפרוקסימלי.באמצעות תיל מנחה, הכניסו את צינור הסיליקון המכיל את הסטנט. לאחר שהגיע למקומו, הסירו את צינור הסיליקון כדי לאפשר לסטנט להתרחב. לאחר מכן, הדקו את הקשר הדיסטלי בעורק הקרוטיד החיצוני והסירו את התפרים מהעורק הקרוטיד הפנימי והמשותף כדי להחזיר את זרימת הדם.סגרו את החתך באמצעות סיכות תפירה והניחו את החיה תחת מנורת חימום עד להחלמה מלאה. תהליך היווצרות הפלאק בכלי הדם נבדק בנקודות זמן שונות לאחר השתלת הסטנט.ראשית, לאחר המתת חסדי ופרפוזיה טרנס-קרדיאלית, בודדו את העורק הקרוטידי השמאלי והסִירו את החלק המכיל את הסטנט. הניחו את הדגימה בתמיסת 4%PFA. לאחר לפחות 16 שעות, טמנו את הדגימה בפלסטיק כפי שמוצג כאן.לאחר חיתוך של שכבות בעובי 50 micrometer באמצעות מסור פס יהלום, בוצע שימור של הגם כדי להעריך את היווצרות הפלאק. הדמיית מיקרו-CT (מיקרו- computerized tomography) שבוצעה שבוע לאחר השתלת הסטנט הראתה כי הסטנט לא הוזז על ידי זרימת הדם. לא נמצאו נזקים לכלי הדם או לאנדותל באזורים שאינם מכוסים בסטנט, כפי שהודגם על ידי צביעה ב-Odin blue וצביעה ספציפית לאנדותל ב-CD 31; צביעה היסטולוגית זו משמשת לבדיקת היקף היווצרות הפלאק.כאן נראה התומכן (stent) כפיברין שצבעו שחור בתוך הנאואינטימה. במקרים מסוימים, נצפית חסימה מלאה של כלי הדם. הר-אנדותלייזציה של מאבדי התומכן מוצגת משמאל על ידי החץ הכפול, בעוד שר-אנדותלייזציה לומית חלקית מוצגת מימין על ידי חץ בודד.בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור כי יש להשקות את אזור העבודה באופן רציף כדי למנוע התייבשות ולהקל על המניפולציה של הסטנט.

a-murine-model-stent-implantation-carotid-artery-for-study

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מדגים כיצד להשתמש דגם זול ואמין פרה ללמוד תהליכים pathobiological ו pathophysiological של פיתוח ב-סטנט restenosis. אורך ניטור vivo באמצעות אוקטובר (טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית) וניתוח של תמונות אוקטובר הפגינו גם הם.

In-סטנט restenosis הדמיה: דגם זולה, Preclinical אמין, מהיר

בסרט מוצג במודל כדי לחקור את הפיתוח של היפרפלזיה intimal לאחר הפריסה סטנט באמצעות הכלי האנושי (הר"י) במודל עכברים immunodeficient.

האדם הפנימי החלב (הר&quot;י) עורק השתלת סטנט: דגם האדם ללמוד פיתוח restenosis ב-סטנט

שינויים היסטולוגית ויוכימי לאחר הרחקת endograft פרצה עדיין אינם ברורים. אנו מתארים מודל חדש של השתלת endograft על פרצה עכברית. באמצעות ניתוח פקיק עם ובלי ממשק persistant מחזור דם זרם, והערכת חומרים ביולוגית endovascular חדש, מודל זה יסייע להבין טוב יותר pathobiology הדרה מפרצת endovascular.

דגם Murine חדש של מפרצת אבי העורקים תיקון Endovascular

מודל הפגיעה בבלון הצוואר של חולדה המתואר להלן מאפשר לחוקרים להעריך תרופות או טיפולים השוללים היפרפלזיה עורקית הנגרמת על ידי פציעה. מתוארים הכנה מפורטת לפני הניתוח, הליך כירורגי וטיפול לאחר ניתוח בבעל החיים.

פציעת בלון עכברוש ראש דגם כדי לבדוק Therapeutics שיפוץ אנטי-וסקולרית

מחקר זה מתאר הליך פולשני עבור אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים. בהשוואה לשיטות אחרות באמצעות פגיעה חשמלית או הקפאה, פציעה כתוצאה מכני מחקה את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפולים revascularization והוא אידיאלי לחקר המנגנונים המולקולריים המעורבים.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Restenosis לאחר הליכים Cardiovascular (ניתוח מעקף, אנגיופלסטיקה, או stenting) היא בעיה משמעותית להפחית את עמידות של נהלים אלה. טיפול אידיאלי יהיה לעכב תפוצת שריר חלקה (VSMC) תוך קידום התחדשות האנדותל. אנו מתארים מודל להערכה סימולטנית של התפשטות VSMC ותפקוד האנדותל in vivo.

Murine אבי העורקים למחוץ פגיעה: יעיל<em&gt; בויבו</em&gt; מודל של תאים שרירים חלקה תפוצת ו אנדותל פונקציה

Reproducable מודלים ניסיוניים נדרשים לבדיקה של חסימת כלי דם הרומן חומרים, אשר תוכננו כדי לטפל endovascular סגר של מפרצות תוך-גולגולתי (IA). מטרות המחקר הנוכחי לפתח טכניקה כירורגית מתוקננת ובטוחה עבור סטנט בסיוע לסתימת מפרצת של מפרצות saccular במודל חיה של חולדה.

מגנזיום מתכלה סטנט לטיפול מפרצות Saccular במודל חולדה - מבוא לשיטת כירורגי

הפציעה בבלון עורק התרדמה של החולדה מחקה את הליך האנגיופלסטיקה הקליני המבוצע כדי לשחזר את זרימת הדם בכלי טרשת עורקים. מודל זה גורם לתגובת פגיעה עורקית על ידי התנפצות דופן העורקים, ו denuding את השכבה האינטימית של תאי אנדותל, בסופו של דבר גורם שיפוץ ותגובה היפרפלסטית מולדת.

עכברוש עורק הראש מבוקר לחץ על פגיעה בבלון מגזרי עם יישום טיפולי Periadventitial

פרוטוקול זה מתאר את ההשתלה של סטנטים כליליים אנושיים לתוך אב העורקים הבטן של חולדות עם apoE-/- רקע באמצעות גישה טרנס-ירך. בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים, מודלים מוריניים נושאים את היתרונות של תפוקה גבוהה, רבייה, קלות טיפול ודיור, וזמינות רחבה של סמנים מולקולריים.

השתלת סטנטים כליליים בגודל אנושי לתוך אב העורקים בטן עכברוש באמצעות גישה טרנס-ירך

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית סטנדרטית לאינדוקציה של מפרצת צוואר במודל עכברי באמצעות ניתוח כירורגי יחיד.

מודל עכברי של היווצרות מפרצת קרוטיד

למד שתלת תומכן בעורק הקרוטידי של עכבר לחקר restenosis ותגובות כלי הדם לתרופות. שיטה זו מאפשרת ניתוח היסטולוגי של היווצרות פלאק וריפוי האנדותל.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

גלה סרטונים נוספים