Name: הפרדה Plasmodium falciparum שלב מאוחר נגועים באמצעי מגנטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: למדו הפרדה מגנטית של תאי דם אדומים נגועים ב-Plasmodium falciparum בשלב מאוחר. השיטה מנצלת את התכונות הפרמגנטיות של ההמוזואין להשגת טוהר של כמעט 100% תוך שימור יכולת הפלישה של הטפילים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי מענק PRB-009 לCS ומלגת דוקטורט לLC, מSecretaría Nacional de Ciencia y Tecnología (SENACYT), פנמה.

כל הצעדים של הפרוטוקול, למעט centrifugations, צריכים להתבצע בתוך מכסה מנוע כדי לשמור על מדגם סטרילי. 1. בידוד שלב מאוחר של פ אריתרוציטים falciparum נגועים כל השלבים המאוחרים של אריתרוציטים Plasmodium הנגועים ניתן להפריד במתודולוגיה זו, מאז hemozoin, שמעניק paramagnetism על הטפיל, הוא מטבוליט משותף לסוג. Parasitemia גבוה (3-10%) בתרבות שמומלץ להגיע תשואות טובות יותר עם פרוטוקול זה, למרות שתרבות טיפוסית תכיל 2-4% המטוקריט (אחוז הנפח של תאי דם אדומים) ו1-8% parasitemia (אחוז נגוע תאי דם אדומים). טפילים יכולים להיות מתורבתים כפי שתואר על ידי טרייגר וינסן 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנה פשוטה, חלק רב צריכה להרכיב אותו על כל הליך בידוד schizont. לשם כך, עמודות LS, מפריד MidiMACS מגנטי וMultiStand MACS מMiltenyi BIOTEC (איור 1 </חזק&gt;) משמשים. ראשית, חבור את המפריד המגנטי למעמד המתכת ולאחר מכן הנח את העמודה המגנטית על המפריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצינור נפרד (שימוש 50 מ&quot;ל conicals לאורך), לערבב 23.2 מ&quot;ל של RPMI 1640 ו 750 μl של 7.5% סודיום ביקרבונט כדי ליצור את פתרון העבודה. יש צינורות נוספים על ידו עבור שלכת ואיסוף הזרימה דרך מהתרבות הטפילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 3 מ&quot;ל של תמיסת העבודה לעמודה לאזן אותו, והשלך את הזרימה דרך לתוך צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 8 מ&quot;ל של פ falciparum התרבות לעמודה, ולוודא כי ברגע שהחלק האחרון של פתרון העבודה נדחקה אל מחוץ לטור על ידי התרבות, הצינור שקבל הוא הוחלף על ידי אחד האיסוף להתחיל התאוששות של התרבות לא המאוגדת. זה הכרחי כדי להימנע מדילול התרבות יותר מזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזרימה של התרבות דרך העמודה חדל, להוסיף 1 מ&quot;ל של פתרון העבודה כדי לדחוף החוצה את RBCs הנותר של העמודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כביסת צעד: הוסף עוד מ&quot;ל 3 לפתרון העבודה לעמודה ואוסף את הנוזל זורם לתוך הצינור &quot;נזרק&quot; על מנת להימנע מדילול התרבות שנשמרה כזרימה דרך בצינור האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Elution: לאחר 3 המ&quot;ל עבר דרך העמודה, לנתק את האחרון מהדוכן ולמקם אותו על גבי צינור מ&quot;ל 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוב, להוסיף 3 מ&quot;ל של תמיסת עבודה לעמודה. צעד זה elutes את אריתרוציטים נגועים בטפילים בשלב מאוחרים שהיו לכודים בחרוזים של העמודה. </li></ol> הערה: בשלב זה, ובהתאם לכמות הטפילים הנדרשים, מתחיל סיבוב נוסף / ים של אוסף, כמובן בכפוף למגבלות של parasitemia בתרבות המקורית. העמודה ניתן לעשות שימוש חוזרת כל עוד הזרימה שומרת על מצב יציב. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוז של הטפילים שנאספו: צנטריפוגה שפופרת המכילה 15 המ&quot;ל eluate למשך 5 דקות ב 150 XG בטמפרטורת חדרכדי ליצור גלולה כהה מאריתרוציטים parasitized. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant משאיר מספיק נוזלים לקחת דגימה קטנה מאוד ולקבוע את הריכוז ואת התשואה כוללת באמצעות מיקרוסקופיה (ראה שלב 2 להלן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע זה, אם הבידוד ולכידתו של טפילים בשלב מאוחרים נעשה משביע רצון, דגירת התרבות נאספה שוב עם תקשורת טריה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את הטפילים שנאספו בהיקף והפתרון הנדרש לניסויים באים. </li></ol> 2. טוהר וניתוח תשואה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא הריכוז של טפילים המתקבלים באמצעות hemocytometer וספירה תחת מיקרוסקופ אור. כדי לספור, להוסיף 10 μl של התמהיל של טפילים שנאספו והתקשורת תחת תלוש השער של hemocytometer. לספור את מספר הטפילים בארבעת הרביעים של hemocytometer ומחלק את המספר הכולל של 4. להכפיל מספר זה ב 10 4 לקבל הריכוז של דואר נגועrythrocytes למ&quot;ל. </li></ol> הערות: א) ריכוז של התמהיל שיוחלט על ידי המשתמש ברגע resuspending הגלולה, על ידי הוספה פחות או יותר בינוני. ריכוז עבודה הציעה הוא 5.5 X 10 4 schizontes לμl (זו מושגת בדרך כלל על ידי הוספת 100-300 μl לטפילים שנאספו). אם 20 μl ריכוז זה מתווסף לנפח סופי של תערובת μl 100 של תקשורת ואריתרוציטים, parasitemia של כ 1% ב4% המטוקריט תרבות טיפוסית יושג. ב) ספירה תחת hemocytometer צריך להיות מהיר, מאז אריתרוציטים להתחיל lysing עם התייבשות המדגם בתוך החדר. אריתרוציטים נגועים, אשר אמור להיות הרוב, יציגו בתוך כתם כהה, שמבדיל אותם מאלה שלא נדבקו. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע Giemsa דק שכבת הכתם להעריך את הטוהר של האוסף על ידי תיקון את השקופיות בקצב מהיר מאוד במתנול 10%, מייבש אותם, וטבילה לאמכפלת בפתרון 20% מGiemsa כתם מדולל במים מזוקקים. להכתים את השקופיות עבור 10 דקות, לאחר שהם יכולים להיות מיובשים באוויר ונבדקים תחת המיקרוסקופ. Parasitemia הרבה מעל 70% צריך להיות בר השגה. </li></ol>

<ol><li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+in+culture%3A+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li>
<li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li>
<li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemoglobin+catabolism+and+iron+utilization+by+malaria+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Hemoglobin catabolism and iron utilization by malaria parasites.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 83 (2), 131-139 (1996).</li>
<li>Fitch, C. D., Chevli, R., Kanjananggulpan, P., Dutta, P., Chevli, K., Chou, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+ferriprotoporphyrin+IX+is+a+lytic+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Intracellular ferriprotoporphyrin IX is a lytic agent.</a> Blood. 62 (6), 1165-1168 (1983).</li>
<li>Hebbel, R. P., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathobiology+of+heme+interaction+with+the+erythrocyte+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Pathobiology of heme interaction with the erythrocyte membrane.</a> Semin. Hematol. 26 (2), 136-149 (1989).</li>
<li>Egan, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemozoin+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Haemozoin formation.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 157 (2), 127-136 (2008).</li>
<li>Hempelmann, E., Marques, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+malaria+pigment+from+Plasmodium+falciparum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of malaria pigment from Plasmodium falciparum.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 32 (1), 25-30 (1994).</li>
<li>Fitch, C. D., Kanjananggulpan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+ferriprotoporphyrin+IX+in+malaria+pigment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The state of ferriprotoporphyrin IX in malaria pigment.</a> J. Biol. Chem. 262 (32), 15552-15555 (1987).</li>
<li>Moore, L. R., Fujioka, H., Williams, P. S., Chalmers, J. J., Grimberg, B., Zimmerman, P. A., Zborowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemoglobin+degradation+in+malaria-infected+erythrocytes+determined+from+live+cell+magnetophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Hemoglobin degradation in malaria-infected erythrocytes determined from live cell magnetophoresis.</a> FASEB J. 20 (6), 747-749 (2006).</li>
<li>Spadafora, C., Gerena, L., Kopydlowski, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+in+vitro+invasive+capabilities+of+Plasmodium+falciparum+schizonts+isolated+by+Percoll+gradient+or+using+magnetic+based+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+J%22%5BJournal%5D)">Comparison of the in vitro invasive capabilities of Plasmodium falciparum schizonts isolated by Percoll gradient or using magnetic based separation.</a> Malaria J. 10, 96(2011).</li>
<li>Jackson, K. E., Spielmann, T., Hanssen, E., Adisa, A., Separovic, F., Dixon, M. W., Trenholme, K. R., Hawthorne, P. L., Gardiner, D. L., Gilberger, T., Tilley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+permeabilization+of+the+host+cell+membrane+of+Plasmodium+falciparum-infected+red+blood+cells+with+streptolysin+O+and+equinatoxin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Selective permeabilization of the host cell membrane of Plasmodium falciparum-infected red blood cells with streptolysin O and equinatoxin II.</a> Biochem. J. 403, 167-175 (2007).</li>
<li>Goodyer, I. D., Johnson, J., Eisenthal, R., Hayes, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+mature-stage+Plasmodium+falciparum+by+gelatine+flotation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Trop.+Med.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Purification of mature-stage Plasmodium falciparum by gelatine flotation.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 88 (2), 209-211 (1994).</li>
<li>Pasvol, G., Wilson, R. J., Smalley, M. E., Brown, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+viable+schizont-infected+red+cells+of+Plasmodium+falciparum+from+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Trop.+Med.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Separation of viable schizont-infected red cells of Plasmodium falciparum from human blood.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 72, 87-88 (1978).</li>
<li>Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractionation+of+cells+and+subcellular+particles+with+Percoll%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biochem.+Biophys.+Methods%22%5BJournal%5D)">Fractionation of cells and subcellular particles with Percoll.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 44 (1-2), 1-30 (2000).</li>
<li>Paul, F., Roath, S., Melville, D., Warhurst, D. C., Osisanya, J. O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+malaria-infected+erythrocytes+from+whole+blood%3A+use+of+a+selective+high-gradient+magnetic+separation+technique%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Separation of malaria-infected erythrocytes from whole blood: use of a selective high-gradient magnetic separation technique.</a> The Lancet. 318, 70-71 (1981).</li>
<li>Trang, D. T., Huy, N. T., Kariu, T., Tajima, K., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+concentration+of+malarial+parasite-infected+red+blood+cells+and+removal+of+contaminating+white+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Malar.+J%22%5BJournal%5D)">One-step concentration of malarial parasite-infected red blood cells and removal of contaminating white blood cells.</a> Malar. J. 3, 7(2004).</li>
<li>Nillni, E. A., Londner, M. V., Spira, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+separation+of+uninfected+erythrocytes+from+those+infected+with+Plasmodium+berghei+and+for+isolation+of+artificially+released+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Parasitenkd%22%5BJournal%5D)">A simple method for separation of uninfected erythrocytes from those infected with Plasmodium berghei and for isolation of artificially released parasites.</a> Z. Parasitenkd. 64, 279-284 (1981).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

בתרבויות מבחנה של המלריה הטפילה פ falciparum תערוכת parasitemia מוגבל, עם יותר ממחצית תאי הדם האדומים הנגועים בנקודה הגבוהה ביותר של התפשטות התרבות. עבור רוב ניסויי מחקר, רצוי לעבוד רק עם אריתרוציטים הנגועים. לשם כך, טכניקת הפרדה היא הכרחית כדי לחלק את התרבות בהתאם לזיהום. שיטות שימושיות כוללות שימוש בstreptolysin O ל permeabilize וlyze את RBCs הנגוע 11 וסדרה של וריאציות של centrifugations דיפרנציאלי אשר מנצלות את הצפיפות השונה של שתי קבוצות. חלק מהשיט...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Hepes השתנה </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> R4130 </td><td> בתוספת סרום 10% אדם, 2% גלוקוז, וסודה לשתיית 0.2% </td></tr><tr><td> מפריד MidiMACS </td><td> MACS Miltenyi BIOTEC </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS MultiStand </td><td> MACS Miltenyi BIOTEC </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> עמודות LS </td><td> MACS Miltenyi BIOTEC </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hemacytometer </td><td> Grafco </td><td> Grafco נויבאואר קאמרי </td><td> ניתן למצוא דרך ספקים רבים אחרים </td></tr></tbody></table>

הפרדה<em&gt; plasmodium falciparum</emאריתרוציטים&gt; שלב מאוחר נגועים באמצעי מגנטי

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

בניגוד למינים אחרים Plasmodium, פ falciparum יכול להיות מתורבת במעבדה, המאפשרת המחקר שלה 1. בעוד parasitemia הושג יכול להגיע לגבול ≈ 40%, החוקר בדרך כלל שומר על אחוז בסביבות 10%. במקרים רבים יש צורך לבודד את תאי טפיל המכילים דם האדומים (RBCs) מאלה הנגועים, כדי להעשיר את התרבות ולהמשיך בניסוי נתון. כאשר פ falciparum מדביק הכדורי האדום, הטפיל מפרק ונזון מהמוגלובין 2, 3. עם זאת, הטפיל צריך לטפל במחצית רעילה מאוד המכיל ברזל haem 4, 5. הטפיל חומק רעילותו על ידי הפיכת haem לתוך פולימר אינרטי גביש קרא 6 haemozoin, 7. מולקולה המכיל ברזל זה מאוחסן בvacuole המזון והמתכת שביש מצב חמצונים שונים מהאחד בhaem 8. מצב הברזל של ברזל בhaemozoin מעניק לו רכוש פאראמגנטיים נעדר באריתרוציטים הנגועים. כטפיל הפולש מגיע לפדיון, תוכן haemozoin גם מגדיל 9, שמעניק עוד יותר paramagnetism בשלבים האחרונים של פ falciparum בתוך כדורי האדום. בהתבסס על נכס זה פאראמגנטיים, בשלבים האחרונים של פ תאי דם אדומים נגועים falciparum יכולים להיות מופרדים על ידי עובר דרך תרבות עמודה המכילה חרוזים מגנטיים. חרוזים אלו הפכו מגנטיים כאשר העמודות שמכילות אותם מונחות על בעל מגנט. RBCs הנגוע, בשל paramagnetism, אז יהיה לכוד בתוך הטור, ואילו זרימה דרך יכיל, על פי רוב, אריתרוציטים נגועים ואלו שלבים מוקדמים של המכילים את הטפיל. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה להעשרת האוכלוסייה של טפילים בשלב מאוחר עם עמודות מגנטיות, אשר שומרת על יכולת קיום טפיל טובה 10.לאחר ביצוע הליך זה, התרבות הפנויה יכולה להיות מוחזרת לאינקובטור על מנת לאפשר לטפילים שנותרו להמשיך ולצמוח.

באיור 2, התרבות עוברת דרך העמודה המגנטית מוצגת, לפני () ואחרי ההליך (B). אחת עד שניים אריתרוציטים נגועים בדרך כלל ראו בתחום הגדלת 100X כפי שמוצגים באיור 2, עם החצים המצביעים על אריתרוציטים הנגועים באיור 2A. בהליך טיפוסי, החל בתרבות בparasitemia 5% (איור 2 א), ביצוע נוהל זה בדרך כלל מייצר אריתרוציטים עם parasitemia של 97%% -100 (איור 2 ב &#39;). העשרת parasitemia ע...

את המאפיינים של פאראמגנטיים hemozoin משמשים כדי לבודד שלבים מאוחרים של<em&gt; Plasmodium falciparum</emתאים&gt; נגועים-דם אדומים הגדלים בתרבות. השיטה היא פשוטה ומהירה ואינו משפיעה על היכולות פולשניות הבאות של הטפילים.

הפרדה<em&gt; Plasmodium falciparum</emאריתרוציטים&gt; שלב מאוחר נגועים באמצעי מגנטי

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Plasmodium Falciparum הוא טפיל אנושי החי אך ורק בתוך תאי דם אדומים. בתהליך הגדילה, הוא משתמש במולקולות שבתוך האריתרוציטים כדי להזין את עצמו, ומכיוון שמולקולות הברזל בתוך ההמוגלובין עשויות להיות רעילות עבור הטפיל, הוא לוקח אותן ומניח אותן בתוך גביש אינרטי הנקרא hemin. גביש hemo זה מקנה לטפילים תכונות של פארא-מגנטיות.תכונה פראמגנטית זו היא המשמשת להפרדת אריתרוציטים נגועים מאלו שאינם נושאים טפיל בתוכם. באמצעות שימוש במגנט, ניתן לרכז תרבית עם אחוז נמוך מאוד של טפילים כדי להגיע לכמעט מאה אחוזים של טפילים. הפרדה זו של תאי דם אדומים נגועים מאלו שאינם נגועים רצויה מאוד במספר ניסויים שבהם יש צורך לחקור תכונה מסוימת של הטפיל ללא הגורמים המבלבלים של עודף אריתרוציטים.המתודולוגיה המוצגת כאן היא מהירה, פשוטה ואינה מזיקה לטפיל. כיום נתאר את הליך הפרדת Plasmodium falciparum בשלב הציסונט (chizen). יש להרכיב את הציוד הרב-רכיבי הזה עבור כל בידוד של ציסונטים.ראשית, הניחו את מחזיק העמוד על המעמד המתכתי, ולאחר מכן מקמו את העמוד המגנטי על המחזיק שהוכן. עבור הפרוצדורה שלנו, אנו משתמשים בעמודי Ls של milian. לאחר מכן, נשתמש במבחנה של 50 ml כדי להוסיף 23.2 ml של RPMI 1640 ו-750 µl של תמיסת sodium carbonate בריכוז 7.5%, שתשמש כתמיסת העבודה. כדי שתהליך זה יצליח, יש להכין את העמוד (calibrate) לפני התחלת העבודה.

separation-plasmodium-falciparum-late-stage-infected-erythrocytes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מבחר Plasmodium falciparum טפילים עבור Cytoadhesion לתאי המוח האנושי האנדותל

ניתוח של שעתוק גנים מהתא הבודד על ידי RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה (דגים)

<em&gt; במבחנה</em&gt; שיתוף זיהום דגם ללמוד<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-HIV-1 אינטראקציות אדם מונוציטים הנגזרות תאים ראשוניים החיסון

שיטה זו חוקרת את הפנוטיפ הצטברויות טסיות דם בתיווך...

פרוטוקול פשוט לclumping טסיות דם בתיווך של<em&gt; Plasmodium falciparum</emאריתרוציטים&gt; נגועים בסביבה מסכנה משאבים

סרטון זה מדגים בדיקת פאגוציטוזיס מבוססת ציטומטריה של זרימה הכוללת אריתרוציטים נגועים בפלסמודיום פלציפרום מסומנים ואופסוניים על ידי מונוציטים. ציטומטריית זרימה מזהה פלואורסצנטיות במונוציטים, המאשרת את הזיהוי המוצלח של אריתרוציטים opsonized באמצעות phagocytosis.

בדיקה לכימות פגוציטוזה בתיווך נוגדנים של אריתרוציטים נגועים בטפילים

מדידת פונקצית נוגדן היא מפתח להבנה חסינות למלרית falciparum Plasmodium. שיטה זו מתארת ​​את הטיהור של merozoites קיימא, ומדידה של phagocytosis opsonization תלוי על ידי cytometry זרימה.

טיהור תשואה גבוהה של<em&gt; Falciparum Plasmodium</em&gt; Merozoites לשימוש בOpsonizing נוגדן מבחני

מיקרו-רנ"א אנושי עובר מאריתרוציטים מאריח לטפילי פלסמודיום פלציפרום. כאן מתוארות הטכניקות המשמשות להעברת מיקרו-רנ"א סינתטיים לאריתרוציטים מארחים ולבידוד כל ה-RNA מ-P. falciparum.  בנוסף, מאמר זה יפרט שיטה לבידוד פוליזומים ב-P. falciparum כדי לקבוע את התפוסה הריבוזומלית ואת פוטנציאל התרגום של תעתיקי טפילים.

שיטות כדי לחקור את תפקיד הרגולציה של RNA הקטן וריבוזומלי תפוסה של<em&gt; Falciparum Plasmodium</em

כאן, אנו מציגים פרוטוקול זיהוי, כימות של הפלזמודיום falciparum מימית אדום דם תאים נגועים באמצעות ספקטרומטר אינפרא-אדום השתקפות הכולל הקלוש של ניתוח נתונים רב משתנית.

זיהוי, כימות של הפלזמודיום falciparum ב מימית כדוריות דם אדומות על ידי הקלוש הכולל השתקפות ספקטרוסקופית אינפרא אדום וניתוח נתונים Multivariate

בעבודה זו, אנו מתארים פרוטוקולים לחקור את התפקיד של שלפוחית חוץ-תאית (EVs) שפורסמו על ידי הפלזמודיום falciparum זיהום אריתרוציטים. בפרט, אנו מתמקדים האינטראקציות של EVs עם תאי אנדותל.

הערכה של תפקוד שלפוחית חוץ-תאית במהלך מלריה זיהום

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לספק הוראה כיצד למדוד את היכולת של נוגדנים הנוכחי סרה או פלזמה של אנשים, באופן טבעי חשוף Plasmodium זיהום falciparum, כדי opsonize ו לגרום phagocytosis של אריתרוציטים נגועים טפילים (IEs).

מדידת נוגדנים הרום Phagocytosis-באופן טבעי כדי Plasmodium falciparum טפילי על ידי אסאי מבוסס ציטומטריה זרימה

שימוש בכרסום קרן יונים ממוקדת כדי לייצר זגוגית על הרשת מדגימות ביולוגיות קפואות עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרונית.

הכנת Lamellae מדגימות ביולוגיות זגוגית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק קרן כפולה עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרונים

למדו הפרדה מגנטית של תאי דם אדומים נגועים ב-Plasmodium falciparum בשלב מאוחר. השיטה מנצלת את התכונות הפרמגנטיות של ההמוזואין להשגת טוהר של כמעט 100% תוך שימור יכולת הפלישה של הטפילים.

הפרדה

גלה סרטונים נוספים