בהדמית vivo של אנגיוגנזה גידול באמצעות הקרינה Confocal Videomicroscopy

במאמר זה, אנו מציגים שיטה לניתוח microvessels גידול in vivo באמצעות videomicroscopy הקרינה משופרת ניגודיות דינמי. שני פרמטרים כמותיים נרכשו: צפיפות תפקודית נימים המשקפת את כלי הדם של הגידול, וזליגת מדד המשקפת את הדליפות של קיר אנדותל.

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לכמת מיקרו-סירקולציה במודל גידול במעי הגס באמצעות מערכת מיקרוסקופ וידאו פלואורסצנטית קונפוקלית. זה מושג על ידי הזרקה תוך ורידית ראשונה של חומר ניגוד והקלטת סרטים של כלי המיקרו של הגידול. לאחר מכן מדמים ארבעה רבעים של הגידול, המאפשרים כימות של צפיפות הנימים התפקודית.

לאחר מכן, נצפה מעבר של חומר הניגוד מכלי הדם לתוך האינטרסטיציום לצורך כימות דליפת האינדקס הנימי המשקפת את חדירות דופן האנדותל. בסופו של דבר, ניתן לכמת מאפיינים מורפולוגיים ותפקודיים של כלי הגידול על מנת לזהות הבדלים בין מודלים של גידול או לאחר טיפול ממוקד. טכניקת הדמיה אופטית ניגודית דינמית זו מאפשרת ניתוח של מיקרו-סירקולציה של הגידול.

הוא משקף את הארכיטקטורה והתפקוד של כלי הגידול על ידי כימות הצפיפות והחדירות של הנימים. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי הפיזיולוגיה של הגידול, ניתן ליישם אותה גם על מערכות אחרות כגון הלם אנפילקטי, דלקת, מחלות לב וכלי דם וסוכרת. התחל בגילוח העכבר המורדם במקום העניין.

לאחר מכן חתכו את העור, מול האיבר להדמיה כאשר הדימום פסק. הזריק את חומר הניגוד כדי לכמת את צפיפות הנימים הפונקציונלית. הנח תחילה את הגשושית מול האיבר שיש לצלם.

לאחר מכן, הפעל את הלייזר המאיר את האיבר. ואז לשמור על יד יציבה. הזז לאט את הקלטת הגשושית כאשר הרשת הנימים הפלואורסצנטית מדומיינת.

כדי לייצב את הרכישה הדינמית לאורך זמן, הניחו מעט ג'ל אולטרסאונד על קצה הגשושית, ולאחר מכן הניחו את הגשושית בתמיכת המשרתת. לאחר הנחת הגשושית במגע עם האיבר המעניין, ייצב את הגשושית. לאחר שהמיקום מאובטח, הגדר את הלייזר להקליט שלוש תמונות כל 30 שניות למשך 20 דקות כדי לזהות נוכחות של דליפה נימית.

כיבוי הלייזר בין כל הקלטה כדי להפחית את ההלבנה של חומר הניגוד לאחר הקלטת סרטים של חמש שניות בכל אחד מארבעת הרבעים של האיבר המבוקש, כדי להמחיש את תהליך הרשת הנימים, הסרטים, באמצעות התוכנה המתאימה, מבצעים פילוח אוטומטי של כלי הדם בתמונות סביב קוטר נבחר כדי לכמת את צפיפות הנימים הפונקציונלית, זהו היחס בין שטח הכלי הכולל לשטח הכולל של התמונה. לאחר מכן, מהרכישה הדינמית שבוצעה לאיתור נוכחות של דליפת נימים, צייר שלושה אזורי עניין בנימים ושלושה אזורי עניין באינטרסטיציום בנקודות הזמן של 0, 5, 10 ו-20 דקות. לבסוף, ממוצע את עוצמות האות בתוך שלושת הנימים השונים ואזורי הביניים הרציפים, וחשב את אחוז דליפת האינדקס.

על פי נוסחה זו, כאשר IP הוא העוצמה הפרי-וסקולרית או הבין-רקמתית, ו-II היא העוצמה התוך-וסקולרית, פרמטר צפיפות הנימים התפקודי הוא סמן חלופי לצפיפות מיקרו-וסקולרית, הנמדד בדרך כלל באמצעות כלים פתולוגיים. כאן מוצגת דוגמה לסוגי התמונות המתקבלות ותוצאת פילוח הכלים. בדוגמה זו, צפיפות הנימים התפקודית נמדדה ב-36%בתמונות אלה, דוגמה לדליפת חומר ניגוד באינטרסטיציום עם דליפת אינדקס של 1.47 מוצגת ב-0, 5, 10 ו-20 דקות לאחר ההזרקה.

בכל אחת מהתמונות, הכלים מופיעים כמבנים ליניאריים עם אותות גבוהים מיד לאחר ההזרקה. לא נראה אות בתקופת הביניים. עם זאת, עם הזמן, ניתן לראות את חומר הניגוד דולף לתוך האינטרסטיציום דרך הגידול הלא תקין.

מחסום אנדותל ניסיון הכרחי כדי לשלוט בהליך זה. עם זאת, לאחר שליטה, ניתן להשלים את הטכניקה תוך 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי.