Name: איסכמיה Photothrombotic: דגם נגע פולשנית לשעתק פוטו קליפתיים לעכבר מחקרי שבץ (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: למדו את שיטת הפוטותרומבוזה ליצירת איסכמיה קורטיקלית ממוקדת בעכברים באמצעות צבע רוז בנגל רגיש לאור. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות תאיות ומולקולריות לפגיעה מוחית ופלסטיות קורטיקלית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים Annalisa Buffo להצעות והערות, תובנות ומאוריציו Grassano, מרינה Boido וErmira Pajaj לירי. עבודה זו מומנה על ידי FP7-MC-214,003-2 (מארי קירי ראשוני ההדרכה AXREGEN רשת) וCompagnia די סן פאולו, פרויקט gliarep.

1. טרום ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל רוז בנגל בצינור 1.5 מ&quot;ל ולהתמוסס בתמיסת מלח סטרילית עד שמגיע לריכוז סופי של 15 מ&quot;ג / מ&quot;ל. סנן לעקר דרך מסנן 0.2 מיקרומטר ולאחסן אותו בחושך בטמפרטורה של עד חודשים חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל מכשירי הניתוח ידי מעוקר. אזור הניתוח צריך להיות מחוטא פחות משעה לפני ביצוע הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את משקל גוף העכבר כדי להתאים את המינון של רוז בנגל להיות מוזרקת. הזרקנו 10 משקל חיה μl / g בCD1 נקבות עכברי 12 שבועות ישנים בפרוטוקול הנוכחי. הסכום של רוז בנגל דרוש כדי לייצר ניתן לקבוע את גודל נגע קליפת המוח הרצוי בקלות בקבוצה נפרדת של ניסויים ראשוניים על ידי בדיקת מינונים שונים (בדרך כלל 2 μl / g, 5 μl / g או 10 משקל גוף μl / ז). שימו לב שהסכום של רוז בנגל להיות מוזרקים תלוי מאוד בתנאי הניסוי, בעיקר הסוג של מקור אורבשימוש ומשך החשיפה לאור. במחקר הנוכחי, 10 (150 מיקרוגרם / גרם) מינון נמצא μl / g להיות נחוץ כדי לגרום photothrombosis בחשיפה לאור במשך 15 דקות, ואילו קבוצות אחרות דיווחו כי גם 50 מיקרוגרם / g 6,8 ו -100 מיקרוגרם / g 10 זריקת intraperitoneal הייתה מספיקה לגרימת נגע photothrombotic. </li></ol> 2. נוהל הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים עם isoflurane בתא שקוף אינדוקציה (3.5-4% לזירוז, 1.5-2% לשמירה) בשיעור של 50% (V / V) תערובת גז חד תחמוצת dinitrogen oxygen/50% (V / V). הרדמה גזים מאפשרת בעקבות מהיר עד של בעלי החיים והן ברמה של גז הרדמה יכולה להיות מותאמת בקלות. לחלופין, עכברים יכולים גם להיות מורדמים על ידי תערובת קטמין-xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשהוא הגיע הרדמה עמוקה, להסיר את החיה מורדמת מתא האינדוקציה, למקם אותו במסגרת stereotaxic ולשמור על הרדמה באמצעות מסיכת הפנים. התאם isofluraמינון ne כדי להשיג רמה נאותה הרדמה. לפקח על קצב הנשימה לאורך כל ההליך ולוודא שהוא קבוע (40 - 60 נשימות לדקה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש צובט הבוהן על מנת להבטיח את החיה מורדמת היא עמוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה העין, על מנת למנוע את העיניים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את הבדיקה רקטלית כדי לנטר את הטמפרטורה לאורך כל ההליכים כירורגיים. הגדר את כרית חימום משוב מבוקרת הקשורים לשמירה על טמפרטורת גוף העכבר על 37 ± 0.5 ° C. </li></ol> 3. ניתוח להארת אזור היעד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את קרקפת העכבר עם מכונת גילוח חשמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקיפות לאבטח את הראש ולהכניס את סורגי האוזן לתוך meatus החיצוני. היזהר שלא עור התוף של נזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור על פני השטח עם לסירוגין swipes של אתנול 70% ובטאדין באמצעות צמר גפן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באזמל כדי לעשות חתך לאורך קו האמצע מעין leVEL עד לצוואר. החל retractors עור כדי לשמור על הגולגולת חשופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחזור periostium את הקצוות של הגולגולת עם אזמל ולתת פני הגולגולת לייבש באמצעות צמר גפן סטרילי. זהה את גבחת ולמבדה. הנח micropipette זכוכית על גבחת כנקודת ייחוס, ולאחר מכן להעביר אותו לקואורדינטות של אזור עניין שלך. האזור של עניין נבחר למאמר זה הוא בערך בצורה נמרצות, שמרכז כ 2 מ&quot;מ לרוחב גבחת, ומשתרע על שטח של כ -30 מ&quot;מ 2, הכולל את חלק גדול של קליפת המוח הסנסורית פי עכבר המוח על ידי האטלס ופרנקלין 11 Paxinos. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן את המיקום של ריבית עם נקודות התייחסות והכניס סיבים אופטיים בקשר הדוק עם משטח הגולגולת כדי למנוע פיזור אור, אך לשים לב לא להפעיל לחץ עליו. האזור המואר יכול להיות מוגבל על ידי יישום על גולגולת מסכה עם צמצם קטן או כובע בקצה הסיב האופטי GUIדה. </li></ol> 4. הזרקת רוז בנגל והפעלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את פתרון נגל רוז במזרק 1 מ&quot;ל ולחשב את הסכום כדי להיות מוזרק בהתאם למינון של 10 μl / גרם של משקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך זריקת intraperitoneal איטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוא המפוזר הצבע ולהזין את זרם הדם. לאחר 5 דקות, לעבור על נורת האור הקרה. הימנע מתאורה של בעלי החיים על ידי כל מקור אחר של אור. אנחנו השתמשנו הפנס סיבים אופטי של עצמת W 150. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 15 דקות של תאורה, להפסיק חשיפה לאור ותפר את הפצע. חמש דקות של תאורה כבר מייצרות אוטם ו10 דקות היא סביר מספיק כדי להשיג אפקט מקסימאלי 12. על מנת למזער את השונות, אנו בוחרים להאיר במשך 15 דקות. </li></ol> 5. תפר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את retractors העור ולהחיל את תמיסת מלח סטרילית כדי למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את הפצע באמצעות needl חיתוך הפוךדואר ומשי או חוט תפר ניילון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקטוע את אספקת הרדמה, להסיר בזהירות את העכבר ממנגנון stereotaxic ולשים אותו על כרית חימום מראש חימם עד שהוא ער לחלוטין, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב שלה. טמפרטורת גוף צריך להיות במעקב צמוד לאורך כל ההליכים כדי להגביל את ההשתנות בהארכת האוטם. על פי הריכוז והתוואי של ממשל, רוז עדיין ניתן להבחין בנגל בזרם הדם במשך כמה שעות לאחר הזרקת 13. מעדיף את שמיכת החימום למנורת ההתחממות, כדי למנוע נזקים משניים פוטנציאליים (רוז בנגל קליטת אורך הגל הוא בספקטרום הירוק). </li></ol>

<ol><li>Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+burden+of+disease+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional burden of disease and risk factors.</a> Lancet. 367, 1747-1757 (2001).</li>
<li>Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+causes+of+death%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+Bull%22%5BJournal%5D)">Global and regional causes of death.</a> Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).</li>
<li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation%3A+effect+of+aspirin+and+other+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circ. Res. 40, 320-328 (1977).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Bergeron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+photochemical+cortical+lesions+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inducing photochemical cortical lesions in rat brain.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, Unit 9 16(2003).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surg. Neurol. 67, 620-625 (2007).</li>
<li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathol. 72, 315-325 (1987).</li>
<li>Schroeter, M., Jander, S., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+induction+of+focal+cerebral+ischemia+in+mice+by+photothrombosis+of+cortical+microvessels%3A+characterization+of+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Non-invasive induction of focal cerebral ischemia in mice by photothrombosis of cortical microvessels: characterization of inflammatory responses.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 43-49 (2002).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 570-579 (1998).</li>
<li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> J. Neurosci. Methods. 170, 35-44 (2008).</li>
<li>Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 1st, Academic Press. New York. (1997).</li>
<li>Piao, M. S., Lee, J. K., Jang, J. W., Kim, S. H., Kim, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+photochemically+induced+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Korean+Neurosurg.+Soc%22%5BJournal%5D)">A mouse model of photochemically induced spinal cord injury.</a> J. Korean Neurosurg. Soc. 46, 479-483 (2009).</li>
<li>Silva, V. M., Corson, N., Elder, A., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rat+ear+vein+model+for+investigating+in+vivo+thrombogenicity+of+ultrafine+particles+%28UFP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The rat ear vein model for investigating in vivo thrombogenicity of ultrafine particles (UFP).</a> Toxicol. Sci. 85, 983-989 (2005).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+spinal+cord+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced spinal cord injury in the rat.</a> Brain Res. 367, 296-300 (1986).</li>
<li>Van Reempts, J., Van Deuren, B., Van de Ven, M., Cornelissen, F., Borgers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flunarizine+reduces+cerebral+infarct+size+after+photochemically+induced+thrombosis+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Flunarizine reduces cerebral infarct size after photochemically induced thrombosis in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 18, 1113-1119 (1987).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Kleinschnitz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+of+platelets+or+intrinsic+coagulation+pathway-driven+thrombosis+does+not+prevent+cerebral+infarctions+induced+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blocking of platelets or intrinsic coagulation pathway-driven thrombosis does not prevent cerebral infarctions induced by photothrombosis.</a> Stroke. 39, 1262-1268 (2008).</li>
<li>Porritt, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombosis-induced+infarction+of+the+mouse+cerebral+cortex+is+not+affected+by+the+Nrf2-activator+sulforaphane%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Photothrombosis-induced infarction of the mouse cerebral cortex is not affected by the Nrf2-activator sulforaphane.</a> PLoS One. 7, e41090(2012).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J. Neurosci Methods. 129, 87-93 (2003).</li>
<li>Markgraf, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+histopathologic+consequences+of+photothrombotic+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery+in+Sprague-Dawley+and+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Comparative histopathologic consequences of photothrombotic occlusion of the distal middle cerebral artery in Sprague-Dawley and Wistar rats.</a> Stroke. 24, 286-292 (1993).</li>
<li>Wester, P., Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photothrombotic+%27ring%27+model+of+rat+stroke-in-evolution+displaying+putative+penumbral+inversion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A photothrombotic 'ring' model of rat stroke-in-evolution displaying putative penumbral inversion.</a> Stroke. 26, 444-450 (1995).</li>
<li>Hu, X., Wester, P., Brannstrom, T., Watson, B. D., Gu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+and+reproducible+focal+cortical+ischemia+with+or+without+late+spontaneous+reperfusion+generated+by+a+ring-shaped%2C+laser-driven+photothrombotic+lesion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Brain+Res.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Progressive and reproducible focal cortical ischemia with or without late spontaneous reperfusion generated by a ring-shaped, laser-driven photothrombotic lesion in rats.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 7, 76-85 (2001).</li>
<li>Maxwell, K. A., Dyck, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+focal+ischemic+lesions+in+neonatal+mice+by+photothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible focal ischemic lesions in neonatal mice by photothrombosis.</a> Dev. Neurosci. 27, 121-126 (2005).</li>
<li>Kuroiwa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+model+of+photothrombotic+ischemia+and+infarction+within+the+caudoputamen%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen.</a> Stroke. 40, 248-253 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

שינויים והחלפות בגלל שיא הספיגה שלה ב 562 ננומטר, לייזר אור ירוק ממנורת קשת קסנון מסוננת נבחר במקור כדי להקרין רוז בנגל רגיש לאור. למרות עירור לייזר בתיווך עדיין היה בשימוש recently5, ניתן להחליף אותו על ידי מנורת אור הקרה שגם להבטיח עירור צבע 10,15. סיבים אופטיים אור קר הם קלים יותר לתמרן ופחות יקרים מאשר מקורות לייזר. עם זאת, יש לשים לב כי לייזרים משמשים בדרך כלל כדי למקד משטח arterioles הבודדים לאחר cr...

בתחילת המאה ה -21, שבץ איסכמי הוא הפרעה הרסנית, המייצגת את הגורם השני של נכות לטווח ארוכים 1 והגורם השני לתמותה בעולם, שבו השבץ היווה כ 5,7 מיליון מקרי מוות בשנת 2004 2. למרות המאמצים הרבים שהשקיעו, אין עדיין טיפול יעיל זמין כדי לשפר את ההתאוששות תפקודית לאחר שבץ. מודלים של בעלי חיים של שבץ נמצאים בשימוש נרחב בתחום מחקר שבץ מאחר שהם מאפשרים מידול של הפתופיזיולוגיה של נזק איסכמי ולבדוק את היעילות של אסטרטגיות neuroprotective שונות in vivo. רוב המודלים האלה שואפים לגרום לאוטם נרחב על ידי הפרעה (זמני או קבוע) זרימת הדם בתוך עורק המוח האמצעי, ואילו דגמים אחרים פותחו ללמוד נגעים בגודל קטן באזורים ספציפיים, בדרך כלל רכב וקליפת המוח חושי. עם זאת, מספר גורמים עשויים לתרום ליצירת ACתואר ertain של השתנות במחקרים ניסיוניים שבץ, כוללים זן העכבר בשימוש, גיל והמין של בעלי חיים שנכללו במחקר, ומעל לכל, את הטכניקה אימצה כדי לגרום את נזק איסכמי. בהתייחס לנקודה האחרונה, משך הזמן והפולשנות של הניתוח (כלומר את הצורך בפתיחת גולגולת), כמו גם את המיומנות כירורגית נדרשת למפעיל כדי לגרום לנגע איסכמי מהימן הם גורמים קריטיים להצלחה ובלתי משוחד במחקר שבץ vivo . הרעיון של photothrombosis בתחילה הוצע על ידי רוזנבלום ואל Sabban בשנת 1977 והפך 3 נודע על ידי היישום שלה במוח חולדה על ידי ווטסון ואח&#39; בשנת 1985 4 שבטכניקה השתפרה במידה רבה, ולהגדיר את הבסיס של המודל הנוכחי 3. - 6. גישת photothrombotic מטרתו לגרום לאוטם קליפת המוח דרך צילום ההפעלה של צבע רגיש לאור נמסרה בעבר למערכת דם, WHIch התוצאה פקקת כלי מקומי באזורים החשופים לאור. כאשר הצבע במחזור מואר באורך הגל המתאים על ידי מקור אור קר, הוא משחרר אנרגיה למולקולות חמצן, אשר בתורו לייצר כמות גדולה של מוצרי חמצן גופייה תגובתי. ביניים חמצן אלו לגרום לחמצון ממברנת תא האנדותל, שהובילו להידבקות ואגרגציה של טסיות דם, וסופו של דבר להיווצרות של thrombi אשר קובעת הפרעה זרימת מוחין מקומית 7. Photothrombosis הוא מודל איסכמי שאינם קנוני שלא לחסום או לשבור את עורק אחד בלבד כפי שקורה בדרך כלל בשבץ מוחי אנושי, אבל גורם לנגעים בכלי שטחיים יותר, וכתוצאה מההפרעה סלקטיבית של זרימת דם באזורים החשופים לאור. מסיבה זו, גישה זו עשויה להיות מתאימה ללימודים תאיים ומולקולריים של פלסטיות בקליפת המוח. היתרון העיקרי של שיטה זו נמצא בפשטות הפעלה שלו.יתר על כן, ניתן לבצע בקלות בphotothrombosis כארבעים דקות לכל בעל חיים, כולל המתנה בת עשרים דקות (3 דקות להרדמה; 1 דקות לגלח את הקרקפת; 3 עד 5 דקות למקום את החיה על מנגנון stereotaxic; 2 דקות לקרצף קרקפת עם תמיסת חיטוי, עושה חתך ולנקות את הגולגולת; 2 עד 4 דקות למקום הקרים סיבי האור; 1 דקות להזריק את פתרון נגל הוורד; 5 דקות-ההמתנה לדיפוזיה intraperitoneal; 15 דקות של תאורה, ו5 דקות כדי לנקות את הפצע ותפר את בעלי החיים). יתר על כן, אין צורך במומחיות כירורגית לבצע טכניקה זו כנגע מושרה באמצעות תאורה פשוטה של ​​הגולגולת השלמה. בניגוד לחסימת עורקים קלסית, בשיטה זו קובעת occlusions סלקטיבית של microvessels pial וintraparenchymal בתוך האזור המוקרן ומקטינה את השונות בין נגעים ככלי אין ביטחונות שנותר כדי לספק חמצן באזור ממוקד. למרות האופי המסוים שלה,מניות נזק photothrombotic מנגנונים חיוניים המתרחשים בשבץ מוחי. בדומה לחסימת עורק בשבץ מוחי אנושי, הצטברות טסיות דם והיווצרות קריש דם לקבוע הפרעה של זרימת דם באזור המוקרן 7. כמו כן, מודל זה גם מניות תגובות דלקתיות חיוניות כמו בחסימת עורק מוח אמצעית 8. עם זאת, בגלל גבולות delimitated היטב, אזור פנומברה, אשר מתאים לאזור של חילוף חומרים נשמרו באופן חלקי, הוא מאוד מופחת או חסר של אחרי נגע photothrombotic. גבול ברור זה יכול להקל על המחקר של תגובות הסלולר באזור קליפת המוח איסכמי או בשלמותה. מודל עכבר Photothrombosis מתאים במיוחד למחקרי שבץ במגוון רחב של בעלי חיים מהונדסים. ואכן מודלים הקלסיים לא יכולים להתאים לכל הזנים והמחקרים תקופה ארוכות בC57BL / 6 זן עכבר דיווח יחס תמותה גבוה שיכולים לגרום להטיה 9.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><חזק>תמיסות וכימיקלים</חזק></td></tr><tr><td>רוז בנגל </td><td>סיגמה, איטליה</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Vet </td><td>Merial</td><td>103120022</td><td></td></tr><tr><td>Betadine </td><td>Asta Medica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>חומר וציוד כירורגי</ חזק></td></tr><tr><td>Fluosorber מסנן </td><td>Havard מנגנון Havard</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>150W סיבים אופטיים תאורה</td><td>פוטונית</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה עבור צלחת TCAT-2DF </td><td>Havard מכשיר</td><td>727561</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי </td><td>Stoelting</td><td>51950</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפעלה </td><td>Takagi</td><td>OM8</td><td></td></tr><tr><td>כרית </td><td></td><td></td><td></td>חימום</tr> כלי ניתוח <tr><td>גז חמצן וחנקן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>מכשיר</td><td></td> דיוק עולמי <td>ברזי סיבים אופטיים ומסכה מיוצרים בהתאמה אישית </td></tr></tbody></table>

איסכמיה photothrombotic: דגם נגע פולשנית לשעתק פוטו קליפתיים לעכבר מחקרי שבץ

Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

מודל שבץ photothrombotic מטרתו לגרום נזק איסכמי באזור בקליפת המוח שניתן על ידי אמצעי צילום ההפעלה של צבע רגיש לאור הזריק בעבר. בעקבות תאורה, הצבע מופעל ומייצר חמצן גופייה שרכיבי נזקים של קרומי תאי אנדותל, עם הצטברות טסיות דם ולאחר מכן היווצרות thrombi, שסופו של דבר קובע את ההפרעה של זרימת דם מקומית. גישה זו, בתחילה הוצעה על ידי רוזנבלום ואל Sabban בשנת 1977, מאוחר יותר השתפר ובוטסון בשנת 1985 במוח חולדה ולהגדיר את הבסיס של המודל הנוכחי. כמו כן, הזמינות המוגברת של קווי עכבר מהונדסים עוד תרמה להעלאת ריבית על מודל photothrombosis. בקצרה, צבע רגיש (רוז בנגל) מוזרק intraperitoneally ונכנס לזרם הדם. כאשר מוארים על ידי מקור אור קר, הצבע הופך להיות פעיל וגורם לניזק אנדותל עם הפעלה ופקק טסיות דם, וכתוצאה מכך מקומיתהפרעה לזרימת דם. מקור האור יכול להיות מיושם על הגולגולת השלמה ללא צורך בפתיחת הגולגולת, המאפשר מיקוד של כל אזור בקליפת המוח של עניין בדרך לשחזור ולא פולשנית. העכבר לאחר מכן נתפר ואפשרו להתעורר. ההערכה של נזק איסכמי יכולה להתבצע במהירות על ידי כלוריד triphenyl-tetrazolium או כתמים סגול cresyl. טכניקה זו מייצרת אוטם בגודל קטן וגבולות מופרדים היטב, וזה יתרון מאוד לאפיון מדויק של תאים או מחקרים תפקודיים. יתר על כן, הוא מתאים במיוחד ללימוד תגובות תאיות ומולקולריים שבבסיס פלסטיות מוח בעכברים מהונדסים.

פרוטוקול זה יהיה לייצר נגע קליפת המוח שכבר נראה לעין על נתיחה של קליפת המוח לעין בלתי מזוינת (איורים 1 א &#39;, 1 ג&#39;). נגע photothrombotic מתפתח בשכבות בקליפת המוח שטחיות ועמוקות שבו הרקמה שקופה במידה מספקת כדי לאפשר צילום הפעלה של רוז בנגל. מדידה של היקף אוטם מוחי יכולה להתבצע במהירות על ידי צביעה היסטולוגית עם כלוריד triphenyl-tetrazolium (TTC) על רקמה טריות או על ידי סגול cresyl לאחר קיבוע paraformaldehyde 4% (PFA). לפני הדגירה TTC, המוח טרי גזור ממוקם במבצ...

Photothrombosis היא טכניקה מהירה, מינימאלי פולשנית לגרימת אוטם קטן ומופרד היטב בתחומי העניין באופן מאוד לשחזור. זה מתאים במיוחד ללימוד תגובות תאיות ומולקולריים שבבסיס פלסטיות מוח בעכברים מהונדסים.

איסכמיה Photothrombotic: דגם נגע פולשנית לשעתק פוטו קליפתיים לעכבר מחקרי שבץ

The photothrombotic stroke model aims to induce an ischemic damage within a given cortical area by means of photo-activation of a previously injected ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשרות תרומבוזה וסקולרית ונזק איסכמי באזור קורטיקלי נתון, באמצעות הפעלה פוטו-כימית של צבע רגיש לאור שהוזרק מראש. דבר זה מושג תחילה על ידי ביצוע חתך בעור כדי לחשוף את הגולגולת. לאחר מכן, צבע הרגיש לאור, rose bengal, מוזרק באופן אינטריפריטוניאלי.חמש דקות לאחר מכן, חושפים את אזור קליפת המוח המיועד למקור אור קר למשך 15 דקות. Rose Bengal הזרים אל תוך כלי הדם. כאשר Rose Bengal מואר, הוא מופעל ומייצר חמצן סינגולט.הנזק הוא לרכיבים של ממברנות תאי האנדותל, אשר בתורם יוצרים קרישי דם בכל השטח שהומא, מה שמוביל להפסקת זרימת דם מקומית ב-RA. בסיום הפרוצדורה, העור נתפר כדי לסגור את הפצע. ניתן להשיג זיהוי מהיר יותר של אזורים איסכמיים באמצעות צביעת TTC או צביעת C crystal.שלום, אני v Abes. שלום, שמי Mon Maze. פוטו-תרומבוזה היא טכניקה מהירה ולא פולשנית להשראת נגעים איסכמיים קורטיקליים הניתנים לשחזור בעכברים.דגם זה מתאים למספר מחקרים ניסויים על שבץ מוחי, ובמיוחד להערכת פלסטיות קורטיקלית בתגובה לפגיעה מוחית ברמה התאית והמולקולרית. במודלים כימיים משתמשים בדרך כלל בחולדות, שקל יותר לתמרן מאשר עכברים. עם זאת, עכברים הם פחות יקרים ומספר רב של זני קונגניק זמין לשימוש.המודלים שבהם אנו משתמשים הם פשוטים לביצוע מבחינה טכנית, לכן כעת נדגים כיצד להשרות Romble Deion. בעכברים, המסנו Rose

photothrombotic-ischemia-minimally-invasive-reproducible

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים את ההליך ליצירת שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר על ידי הארת לייזר של גולגולת שלמה לאחר מתן צבע רגיש לאור.

מידול שבץ פוטוטרומבוטי במודל עכבר: טכניקת הארה בלייזר דרך גולגולת עכבר בעקבות מתן צבע רגיש לאור כדי לגרום לפוטוטרומבוזיס

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

כאן, אנו מתארים גישת מיקרוסקופיה אופטית חצי פולשנית לאינדוקציה של קריש פוטו-טרומבוטי של רוז בנגל בקליפת המוח הסומטוסנסורית של עכבר in vivo.  ההיבטים הטכניים של הליך ההדמיה מתוארים מאינדוקציה של אירוע פוטוטרומבוטי ועד ליישום ואיסוף נתונים.

רוז בנגל Photothrombosis ידי דימות אופטי Confocal<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של שבץ כלי אחד

Photothrombosis הוא הליך זעיר פולשני וניתן לשחזור מאוד כדי לגרום לאיסכמיה מוקדית בחוט השדרה ומשמש כמודל לפגיעה בחוט השדרה בעכברים.

Photothrombosis-induced איסכמיה מיקוד כדגם של חוט השדרה פגיעה בעכברים

אנו מתארים מודל עכבר של שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות תפר מצופה סיליקון. ניתן ליישם את הפרוטוקול כדי לגרום לחסימה קבועה או איסכמיה זמנית, ואחריה רפרפוזיה.

אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

מודלים מסורתיים של שבץ פוטוטרומבוטי (PTS) גורמים בעיקר לצברי טסיות צפופים בעלי עמידות גבוהה לטיפול ליטי במפעיל פלסמינוגן רקמתי (tPA). כאן מוצג מודל PTS מורין שונה על ידי הזרקה משותפת של תרומבין וצבע רגיש לאור לצורך פוטואקטיבציה. מודל PTS משופר תרומבין מייצר קרישי טסיות מעורבים:פיברין והוא רגיש מאוד לפקקת tPA.

מודל שבץ פוטוטרומבוטי מועשר בפיברין ורגיש ל-tPA

מתואר כאן מודל שבץ פוטוטרומבוטי, שבו שבץ מיוצר דרך הגולגולת שלם על ידי גרימת איסור מיקרווסקולרי קבוע באמצעות תאורת לייזר לאחר מתן צבע רגיש לאור.

שבץ דוגמנות בעכברים: נגעים קליפת המוח מוקד על ידי פוטוטרומבוזיס

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

באמצעות גישה אופטית לחלוטין, שבץ איסכמי מושרה תוך רישום פעילות עצבית Ca2+ בו זמנית באמצעות חיישן ביולוגי פלואורסצנטי בליבת השבץ המתהווה של עכבר ער ומתנהג.

פוטותרומבוזיס ופוטומטריית סיבים בו זמנית כדי לגרום ולנטר שבץ איסכמי בעכברים מתנהגים

פרוטוקול זה מספק שיטה משולבת הכוללת העברת ויראלית, השתלת אופטרודה, השראה פוטותרומבוטית, רישום סימולטני של פעילות אסטרוציטים ונוירונים, וגירוי אופטוגנטי של אסטרוציטים. שיטה משולבת זו שואפת לספק חקירה מקבילה של מערכת היחסים בין האסטרוציטים לנוירון בשלבים החריפים ועד הכרוניים של שבץ איסכמי.

שיטה משולבת למידול שבץ פוטוטרומבוטי ורישום אופטרודה ב-vivo של פעילות נוירונית ואסטרוציטית בעכברים מתנהגים

למדו את שיטת הפוטותרומבוזה ליצירת איסכמיה קורטיקלית ממוקדת בעכברים באמצעות צבע רוז בנגל רגיש לאור. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות תאיות ומולקולריות לפגיעה מוחית ופלסטיות קורטיקלית.

איסכמיה Photothrombotic: דגם נגע פולשנית לשעתק פוטו קליפתיים לעכבר מחקרי שבץ

גלה סרטונים נוספים