שימוש בvivo הדמיה למעקב אחר ההתקדמות של זיהום ציטומגלווירוס עכבר ניסיוני בילודים

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע הדמיה in vivo של יילודים עכברים כדי לחקור את התפשטות הציטומגלווירוס הזוהר. זה מושג על ידי הכנת הדילול המתאים של הנגיף מתמיסת מלאי. לאחר מכן מוזרקים ליילודים MCMV זוהר בחלל הצפק.

בנקודות זמן לאחר ההזרקה. הגורים מורדמים ומוזרקים עם לוציפר לפני הדמיית in vivo. בסופו של דבר, הדמיה in vivo משמשת כדי להראות ולכמת את השכפול וההתפשטות של הנגיף בחלל הצפק ובמערכת העצבים המרכזית.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו סינון ויראלי באיברים לאחר המתת חסד של בעלי חיים נגועים, הוא שפחות זמן ופחות משאבים נצרכים. מי שתדגים את ההליך תהיה Mr.Il מקאן, טכנאית מהמעבדה שלי. במחקר הבא נעשה שימוש בזן של MCMV המבטא לוציפראז שהתקבל ממעבדת אולריך קובסקי.

כדי להגביר את הזן, הוסף את הנגיף לתאים מתורבתים במדיום נטול סרום ב-37 מעלות צלזיוס. לאחר שעה, הסר את הסופרנטנט והחלף אותו ב-DMEM בתוספת סרום עגל עוברי של 10%. חמישה ימים לאחר מכן, התרבית נקצרת ומאחסנים את האליקוטים במינוס 80 מעלות צלזיוס.

עד לשימוש נוסף. לאחר טיטרציה של התרחיף הנגיפי על ידי בדיקת פלאק, יש לדלל את הדגימה ל-50 pfu ב-50 מיקרוליטר DMEM ולהשאיר על קרח עד לביצוע זריקות מוכנות לשימוש ביילודים בני ארבע עד 20 שעות. לפני הטיפול בגורים, תפעל את החול והצואה בידיים עטויות כפפות.

כדי להימנע מהכנסת ריחות זרים שעלולים להלחיץ את האם לבצע זריקת תרגול, מלאו מזרק אינסולין ב-1% מתילן כחול מדולל ב-DPBS. כשהוא מוכן, החזק את היילוד בעור הגב כפי שניתן לראות כאן כשצד הגחון כלפי מעלה. הכניסו את המחט מתחת לארבע הרגליים ודחפו אותה בעדינות תת עורית לחלל הצפק.

ברגע שקצה המחט נמצא במיקום הנכון, הזריק את המתיל בכחול. לאחר מכן, משוך לאט את המחט ונגב כל דם ממקום ההזרקה. החזירו את היילוד לכלוב הביתי לאחר ההזרקה לאחר הזרקת תרגול מוצלחת, חזרו על הליך זה עם התרחיף הנגיפי שהוכן קודם לכן.

התמונות מצולמות שבעה ימים לאחר ההזרקה, ומטפלות ביילודים בזהירות כפי שהוצג קודם לכן. הזרקו לכל אחד תערובת של חומרי הרדמה ולוציפר תוך המתנה של 12 עד 15 דקות כדי שה-LUCIFERIAN יגיע לפליטה המקסימלית שלו, ודא שהפלטפורמה בתא הרכישה של מכשיר ההדמיה מחוממת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף הנכונה. לאחר שהגורים מורדמים ומתוייגים לזיהוי, הם מוכנים להצבה במערכת ההדמיה.

ראשית, בצע רכישה של האור הנפלט מכל הגוף. מכיוון שהנגיף השתכפל במספר איברי מטרה, משך החשיפה צריך להיות קצר. כאן, הרכישה מתבצעת למשך 10 עד 20 שניות.

זה מועיל להשיג תמונות ברזולוציה נמוכה של כמה בעלי חיים בסבב אחד של רכישה, ואז לקרב את הפלטפורמה כדי להתמקד בחלק אחד של חיה מסוימת או באיבר מבודד לאחר הדיסקציה. כדי לקבל אות אור מהראש בלבד, כסו את שאר הגוף בנייר עבה וכהה שיסוות את הפוטונים, בצעו רכישה במשך חמש עד 10 דקות, וחזרו על כך עבור הצד הנגדי של החיה. באותם תנאים.

לאחר ההדמיה מחזירים את הגורים לכלוב מחומם כדי לשמור על טמפרטורת גופם בזמן ההרדמה. תמונות אלה צולמו ביום 7, 9, 11 ו-14 לאחר ההדבקה, נראה כי הטיטר הנגיפי הכולל בבעל החיים יורד עם הזמן. בדוגמה זו, הגופה מכוסה ומשאירה את הראש חשוף.

זה חושף נקודה דיסקרטית ברמת האוזן השמאלית שעוצמתה עולה בין היום השביעי ל-14, מה שמרמז על כך שניתן לצפות באופן דינמי בהתפשטות של MCMV למוח in vivo. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אימונוהיסטוכימיה על מנת לענות על שאלות נוספות לגבי המיקום המדויק של הנגיף במוח.