Name: מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למדו כיצד לייצר מודל של לחץ תוך עיני כרוני בעכברים באמצעות לייזר פוטוקואגולציה של רשתית הטרבקולרית. השיטה מאפשרת מעקב אחר לחץ תוך עיני ואת השפעתו על הראייה לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה הכלולה במסמך זה כבר נתמך על ידי פרס ד&quot;ר דאגלס ח ג&#39;ונסון לחקר גלאוקומה מבריאות סיוע הקרן האמריקנית (XL), פרס ויליאם ומרי Greve המיוחד Scholar מהמחקר למניעת עיוורון (XL), חברת אילינוי למניעת עיוורון (HC) והמענק NIH R01EY019034 (XL).

נהלים C57BL/6J עכברים (ג&#39;קסון המעבדה, בר הרבור, ME) הם העלו במתקן הטיפול בבעלי החיים באוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן. כל בעלי החיים נמצאים בשימוש בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי טיפול באוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש ותאם את ההנחיות בנוגע לשימוש בבעלי חיים במחקר מדעי המוח מ-NIH. 1. לייזר photocoagulation ההליך של טיפול לייזר הוא שונה מפרוטוקולים שפורסמו בעבר 5-7. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר 40-60 יום ישן על ידי זריקת intraperitoneal של קטמין (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג, בריאות בעלי חיים שיין באטלר, OH) וxylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג, לויד Inc של איווה, אללי, IA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרחיב את האישון של העין של בעלי החיים ניסיוני זכות על ידי טיפול מקומי עם טיפה אחת או שתיים של 1% פתרון סולפט (אטרופין אלקון Labs, Inc, פורט וורת&#39;, טקסס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר mydriasis, לשטחקאמרי nterior כדי לשפר את האינדוקציה לייזר 6. הכנס micropipette זכוכית עם קצה חד (עולם מכשירי דיוק Inc, סרסוטה, פלורידה) אל תוך החלל הקדמי תחת מנורת הסדק (SL-3E, Topcon, אוקלנד, ניו ג&#39;רזי) כדי לנקז את הנוזל בלשכה הקדמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסן את העכבר בבעל חרוט פלסטיק (Braintree המדע בע&quot;מ, MA) וקשר על פלטפורמה מתוצרת בית (ראה איור 1 א). החזק את העכבר עם עוצר וחושף את העין הימנית של העכבר למקור האור מאחורי מנורת הסדק. יישר את עינו של העכבר הרדים ממש מתחת למנורת הסדק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מחזיק את עוצר העכבר עם שתי ידיו, להחיל את תאורת לייזר לימבוס הקרנית באמצעות לייזר ארגון (Ultima 2000SE, קוהרנטית, סנטה קלרה, קליפורניה). לספק כ 80-100 נקודות לייזר (514 ננומטר, 100 מגה ואט, 50 אלפיות שני דופק, וספוט מיקרומטר 200) ניצב סביב ההיקף של meshwork trabecular. יש עכברי C57BL / 6 קשתית פיגמנט המשמש כמחסום לכל pאנרגיה תועה otential 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להנחיל אקטואלי 0.5% moxifloxacin (אלקון Labs, Inc, פורט וורת&#39;, טקסס) על פני השטח של העין כדי לחטא את האזור שטופל בליזר ו0.5% Proparacaine (Bausch &amp; Lomb, רוצ&#39;סטר, ניו יורק) כדי להקל על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את החיה על כרית חימום (Sunbeam Products Inc, בוקה רטון, פלורידה) להתאוששות במשך כשעה עד שהוא ער לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עין השמאל היא לא מטופל לשמש כשליטה. </li></ol> 2. מדידות לחצו תוך עיניות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר ער לתוך צינור כדי לטעון לתוך מחזיק חרוט הפלסטיק ולאחר מכן לרסן אותה על הפלטפורמה (ראה איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לחמש עד עשר דקות כדי לאפשר לעכבר מותאם למקבל את עמדת בעל. מתקרב tonometer הריבאונד (TonoLab, אספקה ​​רפואית קולוניאלית, פרנקוניה, ניו המפשייר) לעין העכבר עד הקצה החללית הוא מהמשטח של קרנית 14 2-3 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על לחצן מדידה כדי לאפשר הבדיקה הקצה פגע בשטח המרכזשל קרנית בעדינות. שלושה סטים רצופים של שש מדידות של לחץ תוך עיני של אותו עין ונרכשים בממוצע כIOP של העין. העין שליטת מטופל נמדדה תמיד ראשונה כדי לקבל קריאת בסיס לליזר בעיניים שטופלו שנמדדה הבא. </li></ol> 3. מבחן Optomotor חדות ראייה ורגישות לניגודיות נבדקות 14,15. שתי העיניים של עכברים בודדים נבחנות בנפרד על ידי היפוך הכיוון הצורם נסחף, כלומר צורם נסחף כיוון השעון משמש לזיהוי תפקוד הראייה של עין השמאל וצורם נסחף נגד כיוון השעון לעין ימין 16. כל מבחן נמשכים כ -15 דקות וחוזר על עצמו על ידי שני משקיפים באופן עצמאי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר ולאפשר בעכבר כדי לנוע בחופשיות על פלטפורמה מוגבהת מוקפת בארבעה מסכי מחשב (איור 3A-B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את המוניטורים בצורה אופקית, כך שהם נסחפים להציג סינוסישבכות כגירויים חזותיים עם בהירות ממוצעת של 39 cd / m 2. כיוון הזזת של הסורג צריך להחליף ברצף שבין עם כיוון שעון ונגד כיוון שעון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את התנועות של בעלי החיים. התנועות של בעלי החיים בקונצרט עם השבכות נסחפו נחשבות &quot;חיובית&quot; בתוך 15 שניות לאחר הגירוי החזותי הוא על ולאחר מכן עלה בהדרגה. התגובה-לעורר גירוי חזותי הגבוהה ביותר מוגדרת כחדות 17 של בעל החיים ויזואלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבחון את הרגישות לניגודיות בשלושה תדרים שנבחרו מראש מרחביים: 0.075, 0.16, ו 0.3 מחזורים לתואר (CPD). סף הניגוד לכל עין מוגדר כניגוד הנמוך ביותר שגורר תגובות חזותיות בתדירות הקבועה מראש. הרגישות לעומת זאת היא הדדית של הסף 17. </li></ol>

<ol><li>Gupta, N., Yucel, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+as+a+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Glaucoma as a neurodegenerative disease.</a> Curr. Opin. Ophthalmol. 18, 110-114 (2007).</li>
<li>Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+death+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neuronal death in glaucoma.</a> Prog. Retin. Eye Res. 18, 39-57 (1999).</li>
<li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88, 816-824 (2009).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J. Glaucoma. 16, 483-505 (2007).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43, 402-410 (2002).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+ocular+hypertension%3A+establishment+of+the+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse ocular hypertension: establishment of the model.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44, 4314-4320 (2003).</li>
<li>Grozdanic, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+mouse+model+of+chronic+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4337-4346 (2003).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 51, 207-216 (2010).</li>
<li>Ding, C., Wang, P., Tian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+general+anesthetics+on+IOP+in+elevated+IOP+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of general anesthetics on IOP in elevated IOP mouse model.</a> Experimental Eye Research. 92, 512-520 (2011).</li>
<li>Kalesnykas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+morphology+after+optic+nerve+crush+and+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell morphology after optic nerve crush and experimental glaucoma.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, 3847-3857 (2012).</li>
<li>Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61, 379-382 (1995).</li>
<li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> J. Vis. Exp. (10), e549(2007).</li>
<li>Fu, C. T., Sretavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+ocular+hypertension+in+albino+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced ocular hypertension in albino CD-1 mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51, 980-990 (2010).</li>
<li>Rangarajan, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+visual+deficits+in+aging+DBA%2F2J+mice+by+two+behavioral+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of visual deficits in aging DBA/2J mice by two behavioral assays.</a> Curr. Eye Res. 36, 481-491 (2011).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direction-specific+disruption+of+subcortical+visual+behavior+and+receptive+fields+in+mice+lacking+the+beta2+subunit+of+nicotinic+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor.</a> J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).</li>
<li>Douglas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+visual+threshold+measurements+in+the+two+eyes+of+freely+moving+rats+and+mice+using+a+virtual-reality+optokinetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system.</a> Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).</li>
<li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia%2C+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-derived+neurotrophic+factor+and+TrkB+modulate+visual+experience-dependent+refinement+of+neuronal+pathways+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina.</a> J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neonatal+development+of+retinal+ganglion+cell+dendrites+by+neurotrophin-3+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression.</a> The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).</li>
<li>Sun, W., Li, N., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+morphological+survey+of+mouse+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Ocular+Hypertension+Induces+Dendritic+Degeneration+of+Mouse+Retinal+Ganglion+Cells+that+Depends+on+Cell-type+and+Location%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. , (2013).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים. הכותבים הם עובדים במשרה מלאה באוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן. החוקרים לא קיבל מימון שהועמד על ידי חברות אשר מייצרות ריאגנטים ומכשירים המשמשים במאמר זה.

אנו מדווחים כי מעל לחץ תוך עיני מוגבר מתמשך יכול להיגרם על ידי תאורת לייזר בעיני עכבר. בהשוואה למודל הזרקת סליין 18 ומודל כויה וריד 11 שניהם דורשים מיומנויות microsurgical נרחבות, תאורת לייזר היא יחסית פשוטה וקלה לביצוע. בדרך כלל אנחנו יכולים לבצע את תאורת לייזר ל4-6 עכברים ב2-3 שעות. השלבים הקריטיים כדי להשיג העלאת לחץ תוך עינית ספגה הם הלשכה הקדמית משטחת לפני לייזר והפרמטרים לתאורת לייזר. לנקז את הנוזלים בלשכה הקדמית אפשרה למקד את לייזר לאזור meshwork trabe...

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>moxifloxacin</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 0065-4013-03</td><td>0.5%, Rx בלבד</td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06</td><td>0.5%, Rx בלבד</td></tr><tr><td>תמיסת עיניים USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06.5</td><td>%, Rx רק</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>באטלר שיין בריאות בעלי חיים</td><td>NDC 11695-0550-1</td><td>100 מ"ג / ק"ג </td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>LLOYD Inc. מאיווה</td><td>NADA 139-236</td><td>10 מ"ג / ק"ג </td></tr><tr><td>תמיסת אטרופין סולפט</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 61314-303-02</td><td>1%, Rx only</td></tr><tr><td colspan="4"><חזק>ציוד </מנורת >חריץ חזקה</td></tr><tr><td>, TOPCON </td><td>Visual Systems Inc</td><td>SL-3E</td><td>מופעל על ידי PS-30A</td></tr><tr><td>OptoMotry 1.8.0 וירטואלי</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת בדיקות אופטו-קינטית</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טונומטר, TonoLab, לעכברים</td><td>קולוניאל אספקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>רפואית כרית חימום</td><td>Sunbeam Products Inc</td><td>722-810</td><td></td></tr><tr><td>ארגון לייזר </td><td>קוהרנטי בע"מ</td><td>Ultima 2000SE</td><td></td></tr><tr><td>DECAPICONE מחזיק חרוט פלסטיק </td><td>Braintree Sci Inc.</td><td>MDC-200</td><td>לעכבר</td></tr></tbody></table>

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

גלאוקומה, קשורה לעתים קרובות עם לחץ התוך עיני גבוה (IOP), היא אחד הגורמים המובילים לעיוורון. אנחנו ביקש להקים במודל עכבר של לחץ תוך עיני מוגבר כדי לחקות אדם מתח גבוה גלאוקומה. כאן תאורת לייזר מוחלת על הקרנית לימבוס photocoagulate יצוא הימי, גרימת סגירת זווית. השינויים של IOP מנוטרים באמצעות tonometer ריבאונד לפני ואחרי הטיפול בליזר. מבחן התנהגות optomotor משמש למדידת שינויים מקבילים ביכולת ראייה. תוצאת הנציג מעכבר אחד שפיתחה העלאת לחץ תוך עיניים שנגרמה לאחר תאורת לייזר מוצגת. חדות ראייה ירדה ורגישות לעומת זאת הוא ציין בעכבר יתר לחץ דם עיני זה. יחד, המחקר שלנו מציג מערכת מודל בעל ערך לחקור ניוון עצבי והמנגנונים המולקולריים שבבסיס בעכברי גלאוקומה.

כפי שמתואר בנהלים, תאורת לייזר מכוונת לmeshwork trabecular באזור limbal לphotocoagulate יצוא הימי, גרימת סגירת זווית (איור 1). עיני lasered ביותר הציגו שום נזק פיזי משמעותי, ניתוק פיגמנט או זיהום, עולה בקנה אחד עם ממצאים קודמים 6. כאשר קבוצה קטנה של עכברים (פחות מ -5% מכל בעלי החיים lasered) הפגינה סימנים פיסיים של נזק חמור כגון מנוכה כדורי עין, ניתוק פיגמנט משמעותי חמור קטרקט, או דימום, אנחנו המורדמים באופן מיידי. כ -30% מעיני lasered פיתחה צלקות בקרני...

לחץ תוך עיני מוגבר כרוני הנגרם באמצעות טיפול לייזר של meshwork trabecular בעיני עכבר. לחץ התוך עיני (IOP) הוא גבוה למשך מספר חודשים לאחר טיפול לייזר. הירידה של חדות ראייה ורגישות לקונטרסט של חיות ניסוי מנוטרת באמצעות בדיקת optomotor.

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להשרות היpertensive עינית כרונית באמצעות פוטוקואגולציה בלייזר של הרשת הטרבכולרית בעכבר. לאחר הרדמת העכבר, האישונים בעיניים המיועדות הורחבו, ולאחר מכן התא הקדמי הושטח. השלב השני הוא השראת היpertensive עינית על ידי הפגעלת קרן לייזר מסביב להיקף הרשת הטרבכולרית בניצב לפני השטח.בשלב הבא, מעקבים אחר הלחץ התוך-עיני של העכבר לאורך זמן באמצעות טונומטר. השלב האחרון הוא ביצוע בדיקות אוטומטיות להצגת שינויים בחדות הראייה. בסופו של דבר, ניתן לנטר לאורך זמן פגמים בראייה שנגרמו כתוצאה מיתר לחץ.לאחר קבלת פרוטוקול מאושר מה-I-A-C-U-C, הרדמו עכבר C 57 black six בן 40 עד 60 ימים באמצעות הזרקה תוך-פריטונית של ketamine ו-xylazine. לאחר מכן, מרחו בזהירות משחה לעין בעין שמאל המשמשת כביקורת, והרחיבו את האישון של העין הימנית על ידי טיפול מקומי של טיפה אחת או שתיים של תמיסת 1% atropine sulfate. לאחר שהאישון הגיע להרחבה מלאה, הכניסו מיקרו-פיפטית זכוכית חדה אל החלל הקדמי של העין כדי לנקז את הנוזל מהתא הקדמי.פעולה זו תשטח את התא הקדמי ותגביר את השראת הלייזר. לאחר מכן, מקמו את העכבר תחת מנורת הסבך, קבעו את העכבר בתוך מחזיק חרוט מפלסטיק והדקו אותו במקומו על גבי פלטפורמה שהוכנה במעבדה. כעת, הכינו את מקור הלייזר של Argonne על ידי הגדרת אורך הגל ל-514 nanometers, ההספק ל-100 milliwatts, אורך הפולס ל-50 milliseconds וגודל הכתם ל-200 micrometers.לאחר הכנת הלייזר, החזק את העכבר באמצעות המקבע וחשוף את עינו הימנית למקור האור שמאחורי מנורת הסדק (slit lamp) כדי לדייק את מיקום הלייזר. לאחר מכן, החל את הארת הלייזר על הלימבו של הקרנית באמצעות לייזר ארגון, והפנה בין 80 ל-100 נקודות לייזר בצורה ניצבת מסביב להיקף של רשת הטרבכולה (trabecular meshwork). ראה 57 עכברים שחורים.השתמשו בקשתית עם פיגמנט, המשמשת כמחסום מפני אנרגיה שוטה פוטנציאלית. לאחר הפרוצדורה, טפטפו 0.5% moxifloxacin מקומי על פני העין כדי לחטא את האזור שטופל בלייזר ו-0.5% propane להרגעת הכאב. השאירו את בעל החיים על משטח חימום להחלמה למשך כשעה עד להתעוררות מלאה.הניחו עכבר ער בתוך מבחנה ולאחר מכן העמידו אותם במחזיק החרוט הפלסטי. לאחר מכן, קבעו אותו על הפלטפורמה. הקפידו לא להפעיל ריסון חזק מדי על העכבר, שכן הדבר עלול לגרום למדידות מוגברות באופן מלאכותי של הלחץ התוך-עיני.המתינו חמש עד 10 דקות כדי לאפשר לעכבר להסתגל למנח במחזיק. לאחר מכן, קרבו באיטיות את הכרונומטר לעין הביקורת עד שקצה הפרובה נמצא במרחק של שני עד שלושה מילימטרים מפני השטח של הקרנית. העין השליטה שלא טופלה נמדדת תמיד ראשונה, כדי לקבל קריאת בסיס עבור העין שטופלה בלייזר, שנמדדת לאחר מכן.לאחר ששעון הריבאונד (rebound chronometer) נמצא במקומו, לחצו על כפתור המדידה, שיגרום לקצה הגשש לפגוע בעדינות במרכז קרנית העין. בצעו שלוש סדרות עוקבות של שש מדידות של הלחץ התוך-עיני באותה עין. מדידות אלו מחושבות לאחר מכן כממוצע עבור כל עין; בדקו את חדות הראייה ואת רגישות הניגודיות באמצעות בדיקה ממוטריזית.פעולה זו מבוצעת תחילה על ידי הנחת העכבר על פלטפורמה מוגבהת המוקפת בארבעה מסכי מחשב, ומתן אפשרות לו להתרחלק בחופשיות. הגדירו את המסכים של מכשיר האופטומטריה כך שיציגו פסי סינוס בעלי תזוזה אופקית כגירויים חזותיים, עם בהירות ממוצעת של 39 canula per meter squared. כיוון התזוזה של הפסים צריך להשתנות לסירוגין בין כיוון השעון לנגד כיוון השעון.במהלך הבדיקה, רשמו את תנועות העכבר באמצעות מצלמה הממוקמת מעליו. השתמשו בדירוג סחף עם כיוון השעון כדי לזהות את התפקוד הוויזואלי של העין השמאלית, ובדירוג סחף נגד כיוון השעון עבור העין הימנית.כל בדיקה נמשכת כ-15 דקות וחוזרת על ידי שני צופים באופן עצמאי; במהלך הבדיקה, תנועות התואמות את דרגות הסריקה נספרות כתנועות חיוביות. אם הן מופיעות תוך 15 שניות מההפעלה, לאחר 15 שניות, הגבירו את הגירוי החזותי כדי למצוא את התגובה הגבוהה ביותר, ותגדירו את הגירוי החזותי המעורר זאת כחדות הראייה של בעל החיים. לאחר מכן, בחנו את רגישות הניגודיות של כל בעל חיים בשלושה תדרי מרחב שנבחרו מראש; הגדירו את סף הניגודיות עבור כל עין כניגודיות הנמוכה ביותר המעוררת תגובות חזותיות בתדרים שנקבעו.הלחצים התוך-עיניים נטו להיות מוגברים כמעט בכל עין שטופלה בלייזר. עם זאת, פחות מ-5% מהעכברים הראו סימנים פיזיים לנזק חמור, כגון עיניים שקועות, קטרקט חמור, פיגמנט משמעותי, היפרדות או דימום. דוגמה אחת לשינוי בלחץ התוך-עיני מוצגת כאן.שבוע לאחר הטיפול בלייזר. הלחץ התוך-עיני של העין שטופלה היה גבוה כמעט פי שניים מזה של העין שלא טופלה, ונותר גבוה במשך כ-16 שבועות. לאחר מכן, הלחץ הגבוה חזר לרמה קרובה לנורמה.בסביבות שבוע 20, חלה ירידה בחדות הראייה בעין המטופלת לאחר הפרוצדורה. מצב זה נמשך לפחות שישה חודשים והיה ארוך יותר מהעלייה בלחץ התוך-עיני.באופן דומה, נצפתה רגישות ניגודיות נמוכה יותר בעין המטופלת עם לחץ תוך-עיני מוגבר.

a-laser-induced-mouse-model-chronic-ocular-hypertension-to

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

גלאוקומה היא אחת הסיבות העיקריות לעיוורון בעולם. הלחץ התוך עיני גבוהות הוא גורם סיכון משמעותי. לייזר photocoagulation יתר לחץ דם מושרה עינית הוא אחד במודלים של בעלי חיים מבוססת היטב. וידאו זה מדגים כיצד לגרום ליתר לחץ דם עיניים על ידי טיפול לייזר ארגון בחולדה.

לייזר המושרה Ocular יתר לחץ דם כרוני דגם SD על חולדות

מקור: Lani-Louzada, R., et al., צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את האינדוקציה והניטור של לחץ תוך עיני מוגבר (IOP) במודל חולדות. התהליך כולל צריבה של כלי הדם הלימבליים, וכתוצאה מכך חסימת כלי דם ועלייה ב-IOP. לאחר מכן נותנים לחולדה להתאושש, ו-IOP מנוטר באופן קבוע הן בעיני הניסוי והן בעיני הביקורת לצורך השוואה.

 אינדוקציה של לחץ תוך עיני מוגבר במודל חולדה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגרום ליתר לחץ דם עינית בעין murine שתוצאתו אובדן תאי הגנגליון ברשתית כפי שנצפה גלאוקומה. microbeads המגנטי מוזרק לתוך החדר הקדמי ומשך לזווית iridocorneal שימוש במגנט כדי לחסום את היצוא של הומור מימי.

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

כאן, אנו מתארים את השימוש בטומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמיין מבנים ברשתית ובעין in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

כאן, אנו מתארים פרוטוקול אופטימלי לחסימת ורידים ברשתית באמצעות ורד בנגלי ומערכת מיקרוסקופ הדמיית רשתית מונחה לייזר עם המלצות למקסם את יכולת השחזור שלה בזנים מהונדסים גנטית.

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

כאן אנו מתארים טכניקת הדמיה in vivo באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית כדי להקל על האבחון והמדידה הכמותית של רטינופתיה בעכברים.

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

מטרת פרוטוקול זה היא לאפיין מודל חדשני של ניוון עצבי גלאוקומטי המבוסס על צריבה תרמית של 360° של מקלעת כלי הדם הלימבלית, הגורמת ליתר לחץ דם עיני תת-חריף.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

למדו כיצד לייצר מודל של לחץ תוך עיני כרוני בעכברים באמצעות לייזר פוטוקואגולציה של רשתית הטרבקולרית. השיטה מאפשרת מעקב אחר לחץ תוך עיני ואת השפעתו על הראייה לאורך זמן.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

גלה סרטונים נוספים