Name: השתלה ללשכה הקדמית של העין לאורך, לא פולשני בחי הדמיה ברזולוצית תא בודד בזמן אמת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: למדו שיטת השתלת איי לangerה ללשכה הקדמית של העין בעכברים, המאפשרת הדמיה לא פולשנית לאורך זמן ברזולוציית תא בודד. גלו כיצד מיקרוסקופיית קונפוקל עוקבת אחר חיישניות השתלה ושילובן בגוף החי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים בבני זוג. קמילו Ricordi, אנטונלו Pileggi, ר &#39;דמאריסו Molano, סטפן Speier ודניאל Nyqvist לדיונים פוריים. אנו מודים גם לEleut הרננדז ודייגו אספינוסה-Heidmann לתמיכה טכנית, ומייק ואלדס ומרגרט Formoso לעזרה עם הקלטת וידאו. ביירון מלדונאדו נרשם, הערך והפיק את הווידאו הסופי. תמיכה במחקר סופקה על ידי מכון מחקר סוכרת הקרן <a href="http://www.DiabetesResearch.org" target="_blank">(www.DiabetesResearch.org),</a> NIH / NIDDK / פוסי (F32DK083226 לMHA; NIH RO3DK075487 לAC; U01DK089538 לPO.B.). תמיכה במחקר נוספת כדי PO.B סופקה באמצעות כספים מקרולינסקה, מועצת המחקר השבדית, קרן הסוכרת השבדית, Erling-פרסון קרן המשפחה, המשפחה הקנוטה ואליס ולנברג הקרן, Skandia החברה לביטוח בע&quot;מ, תוסס ( FP7-228933-2), תכנית מחקר אסטרטגי בסוכרת בקרולינסקה Institutet, נובו נורדיסק הקרן, וקרן המעגן פון של Kantzow.

ההליך הבא מבוצע בסטריאוסקופ ב 2 שלבים, השלב הראשון כרוך בטעינת האיונים לתוך הצינורית והשלב השני הוא השתלה בפועל לאייס. כל הניתוחים שבוצעו על בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בבעלי החיים ועדה המוסדי שימוש (IACUC) מאוניברסיטת מיאמי. 1. איי טוען בקנייה להשתלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרכז האיים במנת התרבות של ספינינג המנה בחוגים צרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתק את הצינורית מ&quot; המאגר &quot;ולמקם את הצינורית וחיבור צינור על משטח נקי. המאגר יכול להתבצע מתוך קצה 300 μl פנוי פלסטיק פיפטה ללא סינון (האיור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את בועות אוויר מתוך המאגר על מנת להבטיח זרם רציף של איונים כאשר aspirating למאגר. פלאשינג המאגר נעשה על ידי נוסע קדימה מזרק הנהג ללא ידות הממונעות באמצעות דוושת הרגל(האיור 1b, ג). זה יהיה גם להפוך את החלל במזרק כדי לאפשר שאיפה של האיים למאגר (נטען מראש בתמיסה סטרילית כגון תקשורת המלוחה, PBS או תרבות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לשאוב כמות רצויה של איונים למאגר. איונים נוטים מערבולת בה הם נכנסים למאגר ויישארו ביחד לכיוון התחתי. שאיפה נעשית על ידי נהיגת מזרק הנהג ממונע אחורה באמצעות דוושת הרגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר מחדש את הצינורית למאגר דרך הצינור המקשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את קצה הצינורית שוב בצלחת התרבות ושטוף את האיים מתוך המאגר לצינורות ואז לתוך הצינורית. ודא שאיונים להישאר ביחד כמו שאתה גב למלא את הצינור / הצינורית ידי בעדינות &quot;מצליף&quot; (ציתות) צינורות (איור 1 ד). עצור לפני או אחרי כל בועות האוויר לפני האיונים הם שטפו את הצינורית. אם אינך בטוח, תפסיקו להיכנס כאיונים האחוריים של הצינורית כמו אוויר שנותרבועות לפני האיונים יכולים לסייע במניעת רפלוקס (זרימה חוזרת) של איונים מתוך ACE. הוא ייעלם בן לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, אתה מוכן להזרים האיונים לACE (ראה שלבים הבאים). </li></ol> 2. איון השתלה ללשכה הקדמית של העין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר מורדם על משטח חם תחת סטריאוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את פרצופו של העכבר להרדמה &quot;מסכה&quot; מחוברת לחמצן / מכונת הרדמת isoflurane. המסכה עשויה מקצה 1 מ&quot;ל פנוי פלסטיק פיפטה (ללא מסנן) ומחוברת לצינורות הרדמה עד הסוף הצר (האיור 2a, ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עדינות חוזר בי את העפעפיים של העין כדי להיות מושתלים באמצעות אצבע והאגודל של היד החופשית שלך ו&quot; פופ &quot;העין על חשיפה טובה יותר וגישה נוחה (איור 2 ג). זה ידרוש קצת תרגול כדי לשכלל בלי לפגוע פגיעה קשה נשימה של העכבר על ידי לחץ מוגזם עלצוואר או חסימת זרימת דם לראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש במזרק אינסולין חד פעמי (29 - 31G) כאזמל, לחדור בזהירות רק הקצה בקרנית ולעשות חתך רוחבי אחד. הפוך את החתך באמצע בין השיא של הקרנית וגובל למזער ריפלוקס של האיים במהלך הזרקה מתוך ACE (איור 2 ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להכניס צינורית (preloaded עם איונים) דרך החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט להוציא איונים מתוך הצינורית ולהפקיד אותם בחלק העליון של הקשתית. כדי להימנע מריפלוקס איון בשל הצטברות לחץ מוגזמת בACE, להוציא את האיים בדחיפות קצרות כבנפח קטן (הים) שאפשר ברבע השני לחתך. זה יכול להיות עוד יותר על ידי הדחיסה הבטיח איונים בצינורות בעת טעינת הצינורית (אנא ראה שלב 1.6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט לחזור בי הצינורית מתוך ACE. זהו צעד קריטי, במיוחד, אם נפח גדול של איונים הוזרק כריפלוקס איון בשל presבטוח לבנות בתוך ACE עשוי להיות בלתי נמנע. כדי למנוע / למזער ריפלוקס איון, בעדינות לסובב את הצינורית ואילו בתוך ACE לשחרר לחץ עודף דרך החתך מסביב לצינורית. לבדוק סימנים של ריפלוקס כפי שאתה מנסה לחזור בו צינורית ואם צריך, יש להמתין עד שוך לחץ לפני לחלוטין retracting הצינורית מתוך ACE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את העיניים עם מושתלות סטרילי PBS או תמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק עצירות לשיכוך כאבים שלאחר הניתוח (0.05-0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג, תת עורי) עבור 48 השעות הראשונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה אנטיביוטית עיני אריתרומיצין לעין המושתלת מייד לאחר השתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החיה חזרה בכלוב מחומם כדי לאפשר התאוששות מן ההרדמה. </li></ol>

<ol><li>Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+a+novel+tool+to+study+cell+biology+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals.</a> Histochem. Cell Biol. 133 (5), 481-491 (2010).</li>
<li>Leibiger, I. B., Caicedo, A., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+%3F-cell+function+and+survival+-+a+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Non-invasive in vivo imaging of pancreatic ?-cell function and survival - a perspective.</a> Acta Physiol. (Oxf). , (2011).</li>
<li>Wang, Y., Maslov, K., Kim, C., Hu, S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+photoacoustic+and+fluorescence+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Integrated photoacoustic and fluorescence confocal microscopy.</a> IEEE Trans Biomed. Eng. 57 (10), 2576-2578 (2010).</li>
<li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Going+deeper+than+microscopy%3A+the+optical+imaging+frontier+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat. Methods. 7, 603-614 (2010).</li>
<li>Aswathy, R. G., Yoshida, Y., Maekawa, T., Kumar, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+quantum+dots+for+deep+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Near-infrared quantum dots for deep tissue imaging.</a> Anal. Bioanal Chem. 397 (4), 1417-1435 (2010).</li>
<li>Ghoroghchian, P. P., Therien, M. J., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fluorescence+imaging%3A+a+personal+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev.+Nanomed+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo fluorescence imaging: a personal perspective.</a> Wiley Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 1 (2), 156-167 (2009).</li>
<li>Prescher, A., Mory, C., Martin, M., Fiedler, M., Uhlmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FTY720+treatment+on+postischemic+pancreatic+microhemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of FTY720 treatment on postischemic pancreatic microhemodynamics.</a> Transplant Proc. 42 (10), 3984-3985 (2010).</li>
<li>Leblond, F., Davis, S., Valdés, P., Pogue, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+whole-body+fluorescence+imaging%3A+Review+of+instruments%2C+methods+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Photochem.+Photobiol.+B%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical whole-body fluorescence imaging: Review of instruments, methods and applications.</a> J. Photochem. Photobiol. B. 98 (1), 77-94 (2010).</li>
<li>Toso, C., Vallee, J. P., Morel, P., Ris, F., Demuylder-Mischler, S., Lepetit-Coiffe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+magnetic+resonance+imaging+of+pancreatic+islet+grafts+after+iron+nanoparticle+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Clinical magnetic resonance imaging of pancreatic islet grafts after iron nanoparticle labeling.</a> Am. J. Transplant. 8 (3), 701-706 (2008).</li>
<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li>
<li>Wang, B. G., Konig, K., Halbhuber, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+of+deep+intravital+tissues+and+its+merits+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy of deep intravital tissues and its merits in clinical research.</a> J. Microsc. 238 (1), 1-20 (2010).</li>
<li>Denk, W., Delaney, K. R., Gelperin, A., Kleinfeld, D., Strowbridge, B. W., Tank, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+and+functional+imaging+of+neurons+using+2-photon+laser+scanning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy.</a> J. Neurosci. Methods. 54 (2), 151-162 (1994).</li>
<li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li>
<li>Khorshidi, M. A., Vanherberghen, B., Kowalewski, J. M., Garrod, K. R., Lindstrom, S., Andersson-Svahn, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+transient+migration+behavior+of+natural+killer+cells+imaged+in+situ+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Analysis of transient migration behavior of natural killer cells imaged in situ and in vitro.</a> Integr. Biol. (Camb). 3 (7), 770-778 (2011).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoimaging%3A+studying+immune+system+dynamics+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Immunoimaging: studying immune system dynamics using two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2011, pdb.top99(2011).</li>
<li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCelli%2C+S+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. , (2011).</li>
<li>Fan, Z., Spencer, J., Lu, Y., Pitsillides, C., Singh, G., Kim, P., et al. In vivo tracking of 'color-coded' effector, natural and induced regulatory T cells in the allograft response. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFan%2C+Z+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. 16 (6), 718-722 (2010).</li>
<li>Sabek, O., Gaber, M. W., Wilson, C. M., Zawaski, J. A., Fraga, D. W., Gaber, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+human+islet+vascularization+using+a+dorsal+window+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Imaging of human islet vascularization using a dorsal window model.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2112-2114 (2010).</li>
<li>Coppieters, K., Martinic, M. M., Kiosses, W. B., Amirian, N., von Herrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+the+in+vivo+imaging+of+autoimmune+diabetes+development+in+the+pancreas+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel technique for the in vivo imaging of autoimmune diabetes development in the pancreas by two-photon microscopy.</a> PLoS One. 5 (12), e15732(2010).</li>
<li>Martinic, M. M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+the+pancreas+during+development+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of the pancreas during development of diabetes.</a> Immunol Rev. 221, 200-213 (2008).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+2-Photon+Imaging+of+Blood+Flow+in+the+Neocortex+through+a+Cranial+Window%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window.</a> J. Vis. Exp. (12), e678(2008).</li>
<li>Palmer, G. M., Fontanella, A. N., Shan, S., Hanna, G., Zhang, G., Fraser, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia%2C+vasculature+and+fluorescent%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent.</a> 6 (9), 1355-1366 (2011).</li>
<li>Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+tumour+pathophysiology+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).</li>
<li>Taylor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+capillary+endothelium+to+changes+in+intravascular+pressure%2C+as+seen+in+the+rabbit%27s+ear+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Aust.+J.+Exp.+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The response of capillary endothelium to changes in intravascular pressure, as seen in the rabbit's ear chamber.</a> Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 31 (5), 533-543 (1953).</li>
<li>Shan, S., Sorg, B., Dewhirst, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+mammary+window+of+orthotopic+breast+cancer+for+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel rodent mammary window of orthotopic breast cancer for intravital microscopy.</a> Microvasc. Res. 65 (2), 109-117 (2003).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Cabrera, O., Yu, J., Molano, R. D., Pileggi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+islet+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo imaging of pancreatic islet cell biology.</a> Nat. Med. 14 (5), 574-578 (2008).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Kohler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat. Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li>
<li>Falck, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site+of+production+of+oestrogen+in+the+ovary+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Site of production of oestrogen in the ovary of the rat.</a> Nature. 184, Suppl 14. 1082(1959).</li>
<li>Bickford-Wimer, P., Granholm, A. C., Bygdeman, M., Hoffer, B., Olson, L., Seiger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+cerebellar+and+cortical+tissue+transplanted+to+the+anterior+eye+chamber+of+athymic+rats%3A+electrophysiological+and+structural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Human fetal cerebellar and cortical tissue transplanted to the anterior eye chamber of athymic rats: electrophysiological and structural studies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84 (16), 5957-5961 (1987).</li>
<li>Adeghate, E., Donath, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+findings+in+long-term+pancreatic+tissue+transplants+in+the+anterior+eye+chamber+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Morphological findings in long-term pancreatic tissue transplants in the anterior eye chamber of rats.</a> Pancreas. 5 (3), 298-305 (1990).</li>
<li>Abdulreda, M. H., Faleo, G., Molano, R. D., Lopez-Cabezas, M., Molina, J., Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution%2C+noninvasive+longitudinal+live+imaging+of+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High-resolution, noninvasive longitudinal live imaging of immune responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , (2011).</li>
<li>Unutmaz, D., Xiang, W., Sunshine, M. J., Campbell, J., Butcher, E., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primate+lentiviral+receptor+Bonzo%2FSTRL33+is+coordinately+regulated+with+CCR5+and+its+expression+pattern+is+conserved+between+human+and+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The primate lentiviral receptor Bonzo/STRL33 is coordinately regulated with CCR5 and its expression pattern is conserved between human and mouse.</a> J. Immunol. 165 (6), 3284-3292 (2000).</li>
<li>Pileggi, A., Molano, R. D., Berney, T., Cattan, P., Vizzardelli, C., Oliver, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+induction+in+islet+cells+results+in+protection+from+apoptosis+and+improved+in+vivo+function+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 induction in islet cells results in protection from apoptosis and improved in vivo function after transplantation.</a> Diabetes. 50 (9), 1983-1991 (2001).</li>
</ol>

PO.B. הוא אחד ממייסדי Biocrine החברה ביוטכנולוגיה, שהוא הולך להשתמש בלשכה הקדמית של העין כפלטפורמת שירות מסחרית. AC הוא על הפטנט להגנת טכנולוגיה זו.

איי לבלב עכבריים היינו מבודדים באמצעות עיכול collagenase אחרי טיהור בשיפועים בצפיפות, כפי שתואר קודם לכן 33. איים מבודדים בתרבית הלילה לפני ההשתלה. אמנם זה לא ייתכן שיידרש, מומלץ לאפשר לאיונים להתאושש מהליך הבידוד. זה קריטי כאשר ההשתלה מתבצעת במקבלי סוכרת כפי שהוא יבטיח השתלה לשרוד / איונים חזקים. ההשתלה מתבצעת בהרדמה כללית עם חמצן / שאיפה להשפעת תערובת isoflurane (1.5-3%). הרדמת משאיפת או הזרקה אלטרנט...

התקדמות במיקרוסקופיה intravital חשפה תופעות פיסיולוגיות לא נחזו על ידי מחקרים במבחנה 1. זה מדגיש את האתגר בתרגום ממצאים שהושגו על ידי קונבנציונלי שיטות מבחנה לחי. בעשור האחרון, להדמיה של רקמות חי חיות השתפרה במידה ניכרת על ידי התקדמות טכנולוגית בשיטות הדמיה 2, 3, 4, 5, 6. זה דרבן את צורך בגישות הדמית vivo עם יישום אפשרי במודלים של בעלי חיים ניסיוניים כדי לאפשר הדמית אורך של רקמות היעד הלא פולשני. שיטות הדמיה כגון הדמיה בתהודה מגנטית וטומוגרפיה של פליטת פוזיטרוני פליטת אור או אפשרו הדמיה לא פולשנית של איברים / רקמות עמוקים בתוך הגוף 7-8, 9. אבל שיטות אלה לא יכולים להשיג אחת ברזולוצית תא בשל אותות רקע גבוהים ורזולוציה מרחבית נמוכה, למרות השימוש of גבוהים חומרי ניגוד או 4 הארת רקמות ספציפיות. על כך אמר עם כניסתו של מיקרוסקופיה confocal פלואורסצנטי שני פוטונים 10. מיקרוסקופ שני פוטונים אפשר מחקרי ההדמיה intravital לדמיין ולכמת אירועים הסלולר עם פרטים חסרי תקדים 11, 12. העובדה זו הובילה לאפיון של תהליכים ביולוגיים מרכזיים בבריאות ומחלה 13, 14, 15, 16. בעוד שמחקרי ההדמיה intravital החלוציים שבעיקר &quot;חיקו&quot; בתנאי vivo ברקמה נכרתה (בלוטות הלימפה, לדוגמה), מחקרים אחרים השתמשו בגישות פולשניות לרקמות יעד תמונה שנחשפו באתרו 17, 18, ​​19, 20, 21. מחקרים אחרים אף נקטו &quot;מודלים קאמריים חלון&quot; כדי לעקוף מגבלות הקשורות לגישות פולשניות ורזולוצית הדמיה מוגבלת ב22 vivo, 23, 24, 25. במודל חדר החלון, חדר עם חלון שקוף הוא מושתל לתוך העור בdiffeמיקומי השכרה (עור הגבה או אוזן, כרית שומן חלב, כבד, וכו &#39;) על בעלי החיים (עכבר, חולדה, ארנבון למשל). למרות שגישה זו באופן ברור מאפשרת רזולוציה גבוהה בתחום הדמית vivo, זה דורש ניתוח פולשני להשתיל הקאמרי וייתכן שלא יהיה מסוגל להכיל מחקרי הדמיה אורכיים, למשך מספר שבועות או חודשים 22. הוא הוכיח לאחרונה כי שילוב מיקרוסקופיה confocal ברזולוציה גבוהה עם הליך פולשנית, כלומר השתלה ללשכה הקדמית של העין (ACE) מספק &quot;חלון גוף טבעי&quot; כחזק ומגוון בפלטפורמת vivo הדמית 26, 27. השתלה לתוך ACE כבר בשימוש בעשורים האחרונים כדי ללמוד היבטים ביולוגיים של מגוון רחב של רקמות 28, 29, 30; והשילוב האחרון שלה עם הדמיה ברזולוציה גבוהה אפשר ללמוד פיזיולוגיה של איי לבלב עם תא החלטה אחת שאינה פולשני ו longitudinally &lt;sup&gt; 26, 27. גישה זו הייתה בשימוש ללמוד תגובות אוטואימוניות בהתפתחות סוכרת מסוג 1 במודלים של בעלי חיים (נתונים שלא פורסמו). זה היה בשימוש גם ללמוד פיתוח לבלב, כמו גם, במחקרים של תפקוד כליות על ידי השתלה לתוך ניצני ACE הלבלב או כלית glomeruli הבודד, בהתאמה (נתונים שלא פורסמו). דו&quot;ח אחרון שימוש בגישה זו, ממשיך להדגים היישום שלה כדי ללמוד את התגובה חיסונית לאחר השתלת לבלב איון 31. חשוב מכך, מחקר זה הראה כי השתלה ללשכה הקדמית של העין מספק חלון טבעי גוף לביצוע: (1) הדמית אורכית, לא פולשנית של רקמות מושתלות בגוף חי; in vivo (2) cytolabeling להעריך פנוטיפ וכדאיות סלולריים ב אתר; (3) מעקב בזמן אמת של חדירת תאי מערכת חיסון ברקמות המטרה, וב( 4) התערבות מקומית על ידי יישום מקומי או הזרקה תוך עיניים. כאן, אנו iv שemonstrate כיצד לבצע את ההשתלה בלשכה הקדמית של העין באמצעות איי לבלב.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תיאור / תגובות </td></tr><tr><td> IsoTHESIA (isoflurane) </td><td> אספקת לבריאות בעלי חי Buttler </td><td> 11695-6775-2 </td><td> 99.9% isoflurane / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Ketaset (קטמין HCL) </td><td> לבריאות בעלי חי דודג פורט </td><td> 0856-2013-01 </td><td> הרדמת זריקות אלטרנטיבית </td></tr><tr><td> Beprenex (העצירות HCL) </td><td> רקיט בנקיזר בריאות (בריטניה) בע&quot;מ </td><td> 12496-075-7-1 </td><td> 0.3 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> USP אריתרומיצין אופטלמולוגית משחה, 0.5% </td><td> אקרון </td><td> 17478-070-35 </td><td> אפלייד מונע לעין מושתלת </td></tr><tr><td> 0.9% כלוריד הנתרן (מלוח) </td><td> Hospira בע&quot;מ </td><td> 0409-7983-03 </td><td> להזרקת IV. סטרילי </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Gibco </td><td> 10010-023 </td><td> 1X. סטרילי </td></tr><tr><td> CMRL בינוני 1066 </td><td> Cellgro </td><td> 98-304-CV </td><td> תוספת, שינוי CIT. תקשורת המועדפת לאיונים </td></tr></tbody></table>

השתלה ללשכה הקדמית של העין לאורך, לא פולשני<em&gt; בחי</em&gt; הדמיה ברזולוצית תא בודד בזמן אמת

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Intravital ההדמיה התפתחה ככלי הכרחי במחקר ביולוגי. בתהליך זה, רבות שיטות הדמיה פותחו כדי לחקור את התהליכים ביולוגיים שונים בבעלי החיים הלא פולשני. עם זאת, מגבלה טכנית עיקרית בשיטות הדמית intravital קיימות היא חוסר היכולת לשלב הדמיה בלתי פולשנית, אורכית עם יכולות רזולוצית תא בודד. והביאו כאן כמה השתלה ללשכה הקדמית של העין עוקפת מגבלה משמעותית כגון מציעה פלטפורמה ניסיונית תכליתית המאפשרת הדמיה לא פולשנית, אורכית עם רזולוציה סלולרית בגוף חי. אנחנו מדגימים את הליך ההשתלה בעכבר ולספק תוצאות תוך שימוש במודל מייצגות עם רלוונטיות קליניות, כלומר לבלב איון השתלה. בנוסף להפעלת הדמיה ישירה במגוון של רקמות הושתלו בלשכה הקדמית של העין, גישה זו מספקת פלטפורמה לחלוקיםתרופות n על ידי ביצוע מעקב ארוך טווח וניטור ברקמות היעד. בגלל הרבגוניות, השתלת הרקמה / תא שלה ללשכה הקדמית של הטבות לא רק טיפולי השתלת העין, הוא משתרע על השני ביישומי vivo כדי לחקור תהליכים פיסיולוגיים וpathophysiological כגון העברת אותות וסרטן או התפתחות מחלה אוטואימונית.

ישנם כמה פרמטרים שמגדירים השתלה &quot;טובה&quot;. השתלה טובה היא אחד שנמשך ללא דימום בעת ביצוע החתך כפי שניתן לראות בוידאו. דימום מנוע / ממוזער על ידי חדירה רק קצה האזמל (מחט) לתוך ACE (איור 3 א). זה גם יעזור למנוע מגע ולנקב של הקשתית. זה גם יבטיח חתך קטן שירפא היטב מבלי לגרום לעננות של הקרנית לאורך זמן (איור 3 ג, ד). היבט חשוב נוסף להשתלה מוצלחת הוא להיות מסוגל להשתיל את הסכום הרצוי הכולל של איונים ללא הפסד כתוצאה מההחזר של ACE. כאמור בשלב הפרוטו...

גישה חדשה המשלבת השתלת תוך עיני ומיקרוסקופיה confocal מאפשרת הדמית אורכית, לא פולשנית בזמן אמת עם רזולוצית תא בודד בתוך רקמות הושתלו<em&gt; In vivo</em&gt;. אנו מדגימים כיצד השתלת איי לבלב ללשכה הקדמית של עין העכבר.

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

שלום, אני דורטה ממכון למחקר סוכרת בבית הספר לרפואה מילר של אוניברסיטת מיאמי. בסרטון זה אדגים כיצד להשתיל איים של הלבלב אל תוך התא הפנימי של עין העכבר. הפרוצדורה כוללת שני שלבים.השלב הראשון הוא טעינת איורי הלבלב המבודדים לתוך הקנולה, והשלב השני הוא הליך ההשתלה עצמו. לפרטים על הכלים והריאגנטים, נא עיינו בטקסט המצורף. אנו מדגישים כאן את מפעיל המזרק הממונע עם המזרק המורכב, ואת חיבורי המאגר והקנולה, אשר יהיו במוקד הסרטון הבא.נתחיל בהכנסת טבעות העין (eyelets) אל תוך הקנולה. כל הפעולות מבוצעות תחת סטראוסקופ. התחל במרכוז טבעות העין על ידי סיבוב או סבסוב של הצלחת בתנועות מעגליות.כאשר הקנולה ממורכזת, נתקו אותה מהמאגר והוציאו בועות אוויר על ידי הנעת מזרק המנוע קדימה. פעולה זו מבוצעת על ידי לחיצה על דוושת הרגל הקדמית. כאשר המערכת מוכנה, התחילו בשאיבת הלולאות אל המאגר על ידי הנעת מזרק המנוע בכיוון האחורי.ושוב, הפעולה מבוצעת על ידי לחיצה על דוושת הרגל האחורית. שימו לב כי הלולאות נוטות להצטבר בתחתית המיכל. לאחר מכן, חברו מחדש את הקנולה למיכל והוציאו ממנו את הלולאות.לאחר מכן, דחפו את הצינור אל תוך הקנולה כדי להוציא את ה-eyelets מהמאגר ולעודד אותם להישאר דחוסים בצינור. הקישו על המאגר בזמן שאתם מפעילים את מזרק הדחיקה הממוטור קדימה. שימו לב עד כמה ה-eyelets דחוסים בצינור בעת שהם מתחילים להיכנס לחלק ה

transplantation-into-anterior-chamber-eye-for-longitudinal-non

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מעקב חיה של אבות רשתית WT בודדים רקע גנטי מובהק מאפשר הערכה של תרומת איתות שאינו אוטונומי התא במהלך הנוירוגנזה. כאן, שילוב של מציאת גן, דור הכימרה באמצעות השתלה העובר בתחום הדמית confocal זמן לשגות vivo נוצל למטרה זו.

In vivo הדמיה של ביטוי מהונדס ג&#39;ין הפרט רשתית אבות ב Chimeric דג הזברה עוברים לחקר השפעות Cell Nonautonomous

תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית יכול לשמש כטיפול חלופי תא עבור הטופס מתקדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש. פרוטוקול זה מתאר את הדור של מודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית והשתלות את subretinal של תאי אפיתל כנגד האדם מתחלקים נגזר תאי הפיגמנט ברשתית לתוך מודל זה של המחלה.

השתלת subretinal של תאי גזע עובריים אנושיים לתאי האפיתל של פיגמנט הרשתית נגזר למודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית

המטרה של הפרוטוקול היא להציג האורך intravital מעקב בזמן אמת אחר thymocytes על-ידי סריקת מיקרוסקופ ב שתלים הרתי בתא הקדמי של העין עכבר לייזר. את השקיפות של הקרנית, אמוניה השתל מאפשר הקלטה ברציפות קדמון תא גיוס ויציאה T-cell בוגרת.

בזמן אמת In Vivo המעקב של Thymocytes בתא הקדמי של העין על ידי סריקת מיקרוסקופ לייזר

מוצג כאן היא פלטפורמה מיקרוסקופית multiphoton עבור הדמיית פני השטח עינית עכבר חי. עכבר טרנסגני פלורסנט מאפשר הדמיה של גרעין התא, קרום התא, סיבי עצב ונימים בתוך פני השטח עינית. אותות לא ליניאריים של הדור ההרמוני השני הנגזרים ממבנים קולגניים מספקים הדמיה ללא תוויות עבור ארכיטקטורות סטרומה.

פלטפורמת מיקרוסקופי מרובה-פוטונים מותאמת אישית להדמיה חיה של קרנית עכבר ולחמית

הדמיית in vivo היא כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה בבריאות ובמחלות. פרוטוקול זה מתאר הדמיה טרנס-אימונית של רשתית העכבר באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי של שני פוטונים. הוא גם מדגים שיטות שונות של הדמיה חיה כדי לתייג פלואורסצנטיות קבוצות תאים מרובות של הרשתית.

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

הפרוטוקול מציג כלי חדש לפישוט הדמיה תוך חיונית באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי הפוך.

גישת הדמיה תוך-חיונית יעילה לניטור ארוך טווח של דינמיקה של רקמת אפיתל במיקרוסקופ קונפוקלי הפוך

כאן אנו מתארים פלטפורמה המאפשרת הדמיה לא פולשנית in vivo של ספרואידים בכבד המושתלים בחדר הקדמי של עין העכבר. תהליך העבודה משתרע מיצירת ספרואידים מתאי כבד ראשוניים להשתלה בעין העכבר והדמיית in vivo ברזולוציה תאית במיקרוסקופ קונפוקלי.

In Vivo הדמיה של כדורי כבד המושתלים בחדר הקדמי של עין העכבר

תדירות גבוהה אולטרסאונד דופלר היא טכנולוגיה חדשנית להערכת תפקוד שריר הלב באזור. עבודה זו מציגה את העדות הראשונה הוכחת הישימות של פלטפורמה זו הדמיה תכליתי עבור למדוד את חוזרות ונשנות של מתח שריר הלב, dp / dt, ו regurgitation צניפי בלב אדום (IR) איסכמיה reperfused Murine.

בתדירות גבוהה ברזולוציה גבוהה אקו: העדות הראשונה על מדוד לא פולשני חוזרות ונשנות של הזנים Contractility שריר הלב, ו regurgitation צניפי בלב איסכמיה reperfused Murine

אנחנו בזאת להציג מודל חולדה להשתלת כליה הלא פולשני להעריך דחיית שתל אקוטית באמצעות טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים עם 18F-fluorodeoxyglucose.

הדמיה לא פולשנית של דחיית שתל חריפה לאחר השתלת כליה באמצעות חולדה<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

אנחנו בשילוב אמצעי ספקטרוסקופיה תדר תחום קרוב אינפרא האדום של חמצון המוגלובין מוחות עם אמצעים מפוזרים מתאם ספקטרוסקופיה של מדד זרימת דם במוח כדי להעריך מדד חילוף חומרים של חמצן. בדקנו את התועלת של אמצעי זה ככלי מיון מיטה כדי להעריך את הבריאות והתפתחות המוח של התינוק.

מדידה אופטית לא פולשנית של מטבוליזם ופרמטרים המודינמיים במוח אצל תינוקות

למדו שיטת השתלת איי לangerה ללשכה הקדמית של העין בעכברים, המאפשרת הדמיה לא פולשנית לאורך זמן ברזולוציית תא בודד. גלו כיצד מיקרוסקופיית קונפוקל עוקבת אחר חיישניות השתלה ושילובן בגוף החי.

השתלה ללשכה הקדמית של העין לאורך, לא פולשני

גלה סרטונים נוספים