Name: שיטה לא פולשנית ל באתרו קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה ( Americanus Homarus) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: למדו שיטה לא פולשנית להערכת הצלחת הזיווג בלובסטרים אמריקאיים נקבה (Homarus americanus) באמצעות דגימת זרע מהקיבולית הזרעית. שיטה זו תומכת בניהול בר-קיימא של דגי הלובסטר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לכל lobstermen ניו אינגלנד המסחרית שהסירות נתנו לנו לטעום מ-- שיתוף הפעולה שלהם זוכה להערכה רבה. כמו כן, אנו מודים למפרץ קטן לובסטר חברה (Newington, NH) ומאכלי הים של Champlin (נקודה יהודית, RI) שאפשר לנו לבצע דגימה במתקנים שלהם. תלמידי UNH הבאים סיפקו סיוע רב ערך לאורך כל המחקר הזה: היילי לבנה, פרנסואז מוריסון, שרה Havener, אודרה Chaput, ומאי גרוז. פרויקט זה נתמך על ידי מענקים מSeaGrant NH לWHW (פרויקט # R/CFR-11) וגרנט UNH הימי תכנית לJSG.

חלק א &#39;: טכניקת שדה דגימה 1. מדידות נקבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכל נקבת לובסטר, למדוד את אורך השריון (CL) ורוחבו של קטע הבטן השני ל1.0 מ&quot;מ הקרוב ביותר בעזרת זוג מחוגה. הערה: קטע הבטן השני נמדד בגלל הרוחב של הבטן (שבו נקבות נושאות את ביציהן) הוא אינדיקטור של בגרות מינית. בנוסף, זה יכול להיות יתרון לברר את שלב הנשירה מאוחר יותר כדי להתאים את הנתונים הללו עם שלב רבייה (ראה שלב 1.2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ חלק הדיסטלי קטן מאחד pleopods הבטן (פרוטוקול מתודולוגיים סטנדרטי בלובסטרים) ולאחסן את pleopod במי ים נקי לשימוש מאוחר יותר צפייה עם מיקרוסקופ לנתח 9. הערה: צעד זה עשוי גם לחשוף את הנוכחות של בלוטות מלט על pleopods, שהם אינדיקציה לכך שנשים מתכוננים extrude ביציהם 10. </li></ol> 2. מחט insertion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את מחט המזרק (18 G, ראה טבלה 1) ~ 1 סנטימטר לתוך כלי קיבול הזרע, בזווית לכיוון הזנב ב ~ 45 ° (איור 1). הערה: בלובסטרים עם תקעי זרע שלמים, המחט עשויה לפגוש התנגדות מסוימת במהלך החדרה, כפי שהוא נדחף דרך תקע הזרע לפני שהגיע לריכוז הגבוה ביותר של זרע בתחתית כלי קיבול הזרע (איור 1). הערה: הנוכחות של התקע, בעצמו, היא אינדיקטור אמין שלובסטרים שהזדווגו. אצל בעלי חיים מסוימים ייתכן שיש מעט התנגדות, ואולי משום שאיש לא spermatophore הוא הווה, spermatophore הוא קטן, זה לא התקשה לתקע עדיין, או שהוא עשוי כבר משמש לדישון מצמד אחד או יותר של ביצים. </li></ol><img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig1.jpg" widה = /&gt; &quot;600px&quot; איור 1. החדרת מחט ותצוגה של כלי קיבול זרע לובסטר. החדרת המחט הקהה ​​שקצהו לתוך כלי קיבול הזרע של הלובסטר לחלץ דגימת זרע. הזווית והעומק של המחט שניהם קריטיים לקבלת דגימות עקביות. מימין: תצוגה של כלי קיבול זרע שכבר גזורים ולפצל בצורה אנכית. תקע הזרע תופס את החלק העליון או חיצוני של כלי הקיבול, ואילו תאי הזרע נמצאים בתחתית (הנקודה העמוקה ביותר) של כלי הקיבול. חשוב לציין כי דגימה מתחת לעומק זה עלולה לנקב את הקיבול והתוצאה במדגם מזוהם בדם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50498/50498fig1highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a> 3. חודר Plug הזרע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכניסה הראשונית, תלול הזווית של המחט לכמעט אנכי (בניצב לציר הגוף), ומאוד להתחיל לאט לעבוד אותוכלפי מטה לתוך כלי הקיבול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את המחט הנטויה בזווית, כך שקצו מחודד מעט לכיוון הזנב. במקרה זה קצה מחט דחיסה העליון של התקע, עד שסופו של דבר חודר לתוך המטריצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממשיך לדחוף את המחט באיטיות כלפי מטה עד שההתנגדות מורגשת פעם נוספת - זה החלק התחתון של המכל ובו המדגם נלקח. </li></ol> 4. הסרת זרע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מדגם (לעתים קרובות בחומרי התוספת מוצקים, נוזל זרע ונוזלים אחרים) מהחלק התחתון של המכל ולהפקיד את הדגימה לתוך צינור פלסטיק 2.0 מיליליטר שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את השקע עם ~ 0.1-0.5 מיליליטר של מי ים קר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כ 0.3 מיליליטר של נוזל ומקום באותו הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות זרע חנות על קרח עד שהם יכולים להיבחן במעבדה. חלק ב &#39;: בדיקה של דגימות זרע במעבדה הערה: דוגמאות הוסרו מקיבול הזרע של ליטר בודד<html> obsters יש לבחון כדי לקבוע אם תאי זרע היו נוכחים או תיעדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר ~ 50 μl של נוזל מצינור פלסטיק, מקום בשקופית זכוכית עם להחליק את מכסה, ולהציג ב100X עם מיקרוסקופ מתחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון דוגמאות כמו: זרע מועט, רב, או נעדר (מחקר זה לא לכמת מספרים בפועל זרע, איור 2). </li></ol><img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50498/50498fig2.jpg" width="600px" /> איור 2. דגימת זרע Lobster תמונות. תמונות של דגימות זרע שנלקחו מלובסטר קיבול הזרע של נקבה, כפי שנצפו במיקרוסקופ מתחם ב40X ההגדלה. תמונה משמאל מציגה מדגם שהכיל זרע רב ואילו השני (מימין) ממחיש מדגם דליל (סרגל קנה מידה = 10 מיקרומטר).&quot;Target =&quot;. Jpg _blank &quot;&gt; לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

<ol><li>FAO and Agriculture Organization of the United Nations). Fisheries and Aquaculture Department. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org">http://www.fao.org</a> (2012).</li>
<li>MacDiarmid, A., Butler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+economy+and+limitation+in+spiny+lobsters%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Ecol.+Sociobiol%22%5BJournal%5D)">Sperm economy and limitation in spiny lobsters.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 46, 14-24 (1999).</li>
<li>Kendall, M. S., Wolcott, D. L., Wolcott, T. G., Hines, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+male+size+and+mating+history+on+sperm+content+of+ejaculates+of+the+blue+crab+Callinectes+sapidus%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Influence of male size and mating history on sperm content of ejaculates of the blue crab Callinectes sapidus.</a> 230, 235-240 (2002).</li>
<li>Sato, T., Ashidate, M., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+male+mating+frequency+and+male+size+on+ejaculate+size+and+reproductive+success+of+female+spiny+king+crab%2C+Parolithodes+brevipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Ecol.+Prog.+Ser%22%5BJournal%5D)">Effects of male mating frequency and male size on ejaculate size and reproductive success of female spiny king crab, Parolithodes brevipes.</a> Mar. Ecol. Prog. Ser. 296, 251-262 (2005).</li>
<li>Sato, T., Goshima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+male-only+fishing+and+sperm+limitation+in+manipulated+populations+of+an+unfished+crab%2C+Hapalogaster%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Impacts of male-only fishing and sperm limitation in manipulated populations of an unfished crab, Hapalogaster.</a> 313, 193-204 (2006).</li>
<li>Rondeau, A., Sainte-Marie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+mate-guarding+time+and+sperm+allocation+by+male+snow+crabs+%28Chionoecetes+opilio%29+in+response+to+sexual+competition%2C+and+their+impact+on+the+mating+success+of+females%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Variable mate-guarding time and sperm allocation by male snow crabs (Chionoecetes opilio) in response to sexual competition, and their impact on the mating success of females.</a> Biol. Bull. 201, 204-217 (2001).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWaddy%2C+SL+%22Mating+and+insemination+in+the+Ameri+can+lobster%2CHomarus+americanus.+Crustacean+sexual+behavior%22">Mating and insemination in the Ameri can lobster,Homarus americanus. Crustacean sexual behavior</a>. Bauer, R. T., Martin, J. W. , Columbia University Press. NY. 126-144 (1990).</li>
<li>Johnson, K. J., Goldstein, J. S., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+methods+for+determining+the+fertility+status+in+early-stage+American+lobster%2C+Homarus+americanus%2C+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Two methods for determining the fertility status in early-stage American lobster, Homarus americanus, eggs.</a> J. Crust. Biol. 31, 693-700 (2011).</li>
<li>Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proecdysis%2C+setal+development%2C+and+molt+prediction+in+the+American+lobster+%28Homarus%29%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Proecdysis, setal development, and molt prediction in the American lobster (Homarus).</a> 30, 1337-1344 (1973).</li>
<li>Aiken, D. E., Waddy, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cement+gland+development%2C+ovary+maturation%2C+and+reproductive+cycles+in+the+American+lobster+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cement gland development, ovary maturation, and reproductive cycles in the American lobster Homarus americanus.</a> J. Crust. Biol. 2, 315-327 (1982).</li>
<li>Pugh, T. L., Goldstein, J. S., Lavalli, K. L., Clancy, M., Watson, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((At-sea+determination+of+female+American+lobsters+%28Homarus+americanus%29+mating+activity%3A+Patterns+vs.+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Res%22%5BJournal%5D)">At-sea determination of female American lobsters (Homarus americanus) mating activity: Patterns vs. expectations.</a> Fish. Res. 147, 327-337 (2013).</li>
<li>Bauer, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+trends+in+sperm+transfer+and+storage+complexity+in+decapod+crustaceans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Crust.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic trends in sperm transfer and storage complexity in decapod crustaceans.</a> J. Crust. Biol. 6, 313-325 (1986).</li>
<li>Talbot, P., Helluy, S. Reproduction and embryonic development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTalbot%2C+P+%22Biology+of+the+Lobster%3A+Homarus+americanus%22">Biology of the Lobster: Homarus americanus</a>. Factor, J. R. , Academic Press. NY. 177-216 (1995).</li>
<li>Cooper, R. A., Uzmann, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCooper%2C+RA+%22Ecology+of+juvenile+and+adult+Homarus.+The+biology+and+management+of+lobsters%22">Ecology of juvenile and adult Homarus. The biology and management of lobsters</a>. Cobb, J. S. 2, Academic Press. NY. 97-142 (1980).</li>
<li>Estrella, B. T., McKiernan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catch-per-unit-effort+and+biological+parameters+from+the+Massachusetts+coastal+lobster+%28Homarus+americanus%29+resource%3A+description+and+trends%5BTitle%5D)+AND+%22NOAA+Tech.+Rep.+NMFS%22%5BJournal%5D)">Catch-per-unit-effort and biological parameters from the Massachusetts coastal lobster (Homarus americanus) resource: description and trends.</a> NOAA Tech. Rep. NMFS. 81, (1989).</li>
<li>Waddy, S. L., Aiken, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+fertilization+and+consecutive+spawning+in+large+American+lobster%2C+Homarus+americanus%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Fish.+Aquat.+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple fertilization and consecutive spawning in large American lobster, Homarus americanus.</a> Can. J. Fish. Aquat. Sci. 43, 2291-2294 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlantic+States+Marine+Fisheries+Commission+%28ASMFC%29.+American+lobster+stock+assessment+report+for+peer+review%5BTitle%5D)+AND+%22ASMFC+Stock+Assessment%22%5BJournal%5D)">Atlantic States Marine Fisheries Commission (ASMFC). American lobster stock assessment report for peer review.</a> ASMFC Stock Assessment. , Washington, D.C. (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים.

מתווה זה וידאו ונייר ולהדגים שיטה לקביעה אם לובסטרים נקבה שהזדווגו בהצלחה. גישה זו היא פשוטה מספיק שזה יכול לשמש לדגימה בקנה מידה גדולה של לובסטרים בים על ידי מגוון רחב של משתמשים. השיטה מבוססת על זיהוי הנוכחות של spermatophore בקיבול הזרע שהוא עבר מזכר לנקבת לובסטרים בעת ההזדווגות. spermatophores אלה להקשיח באופן חלקי לתוספת זרע זמן קצר לאחר שהם מופקדים בקיבול, ולכן, הנוכחות של תקע זרע היא גם מעיד על הצלחה הזדווגות. במחקר זה, כמו גם מחקר גדול יותר שלאחר מכן, בו נקבע כי רוב תקעי ה...

<html> לובסטר אמריקאי (americanus Homarus) הוא אחד מהדיג הפורה ביותר באוקיינוס ​​האטלנטי (~ 56,000 הר ב2011, מוערך על $ 390,000,000) 1 בצפון. עם זאת, יש חוסר הבנה כללי בנוגע לדינמיקת הרבייה של מין זה באוכלוסיות בר. יצירת הערכות מדויקות יותר של תפוקת רבייה, כוללים המספר והגדלים של אנשים באופן פעיל משתתף ברבייה, עשויה לשפר את תהליך הערכת המניות. לדוגמא, נשים שמנועים מלממש את הפוטנציאל המלא שלהם הרבייה עקב מגבלות זרע זוהו כדאגה לכמה סרטנים ימיים מנוצלים באופן מסחרי, כולל: לובסטרים קוצניים 2, סרטנים כחולים 3, סרטני המלך 4, סרטני אבן 5, וסרטני השלג 6. המטרה הכוללת היא לקבוע אם הגבלת זרע עשויה להיות גורם באזורים מסוימים של דיג הלובסטרים האמריקאי גם כן. NT &quot;&gt; הסימנים הראשונים של בעיה הגבלת זרע פוטנציאלית בלובסטרים נצפו בעת ביצוע מחקר שאינו קשור תיוג עם לובסטרים נקבת ovigerous (עם ביצים בעליל שלמות, נמתחים לאחרונה). לשחזר דיווחים מדייגים ציין כי ~ 15% מבעלי החיים אלה ירדו ציפורני הביצה שלהם לאחר רק 1-2 חודשים. נחת העבודה הייתה כי כמה לובסטרים נושאים את הביצים שלא היה מופרים, וכתוצאה מכך, &#39;נפלו&#39; 7. נתונים ראשוניים ממחקר שלאחר מכן אישרו את העובדה שלובסטרים יהיו extrude ביצים גם אם הם לא הזדווגו בהצלחה וביצים מופרה אלה מתבצעות רק ל~ 1 חודש 8. לכן, בהתחשב בתצפית של נקבות נושאת ביצים מופרה באוכלוסיות טבעיות, אנחנו ביקשנו לקבוע שלהגבלת זרע עשויה לתרום למידה רמת submaximal של רבייה על ידי לובסטרים לבגרות מינית. כדי להשיג מטרה זו, טכניקה פותחה כדי לזהות spermatophore שהופקד על ידי גברים בעת ההזדווגות. נייר וסרט וידאו הזה מתארים שיטה לא פולשנית, פשוטה שפותחה לבירור ההצלחה ההזדווגות של לובסטרים ממין נקבה. הטכניקה יכולה להיות מנוצל במהירות ובאופן אמין בים, או על סיפון מחקר או ספינות דיג מסחריות. הפרטים של שיטת דגימה זו, כמו גם כמה ממצאי נציג מוצגים כדי להמחיש את היישום של הטכניקה.

<table><tbody><tr><td>קליפרס</td><td>Mitutoyo Digimatic</td><td>500-196-20</td><td>http://www.globalindustrial.com</td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק Luer-Lok</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>www.bd.com מחטים קהות רכזת אלומיניום מונוject, 18 גרם x 1</td><td>וובסטר וטרינרי</td><td>8881202348</td><td>www.mywebstervet.com</td></tr><tr><td>2.0 מ"ל צינורות אחסון מפלסטיק</td><td>Eppendorf</td><td>wu-06333-72</td><td></td></tr><tr><td>http://www.coleparmer.com מצנן קלקר עם קרח</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור מורכב</td> מערכת <td>אולימפוס</td><td>BH</td><td>http://www.olympusamerica.com</td></tr><tr><td>דפנות זכוכית עם החלקת</td><td></td><td></td> כיסוי <td>75 מ"מ x 25 מ"מ, עובי ~1 מ"מ</td></tr><tr><td>פיפטור עם קצות</td><td></td><td></td><td></td> חד פעמיים</tr></tbody></table>

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; americanus homarus</em&gt;)

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

למרות היותו אחד הדיג הפוריים ביותר באוקיינוס ​​האטלנטי מערב, הרבה עדיין לא ידוע על דינמיקת הרבייה הטבעית של לובסטרים אמריקאים. מחקר שנערך לאחרונה באוכלוסיות ניצלו סרטנים (סרטנים ולובסטרים) מצביע על כך שקיימות נסיבות שבי נקבות בוגרות אינן מסוגלות למצות את פוטנציאל הרבייה המלא שלהם בשל מגבלותיהם זרע. כדי לבחון את האפשרות הזאת באזורים שונים של דיג הלובסטרים האמריקאי, שיטה אמינה ולא פולשנית פותחה עבור דגימת מספר גדול של לובסטרים נשיים בים. שיטה זו כרוכה בהחדרת מחט קהה שקצהו לקיבול הזרע של הנקבה כדי לקבוע את נוכחותו או היעדריו של תקע זרע ולסגת מדגם שניתן לבדוק את הימצאותם של תאי זרע. סדרה של מחקרים שנערכו בשליטת המזח ובמעבדה כדי לבדוק את המהימנות של טכניקה זו. מאמצים אלה היו כרוכים בדגימת 294 לובסטרים נקבה כדי לאשר שo הנוכחותתקע זרע fa היה אינדיקטור אמין של זרע בתוך כלי הקיבול ובכך, הזדווגות. מאמר זה מפרט את המתודולוגיה ותוצאות המתקבלות מקבוצת משנה של הנקבות בסך הכל נדגמו. של 230 הלובסטרים הנשיים שנדגמו מהבנק של ג&#39;ורג&#39; וקייפ אן, MA (טווח גודל = 71-145 מ&quot;מ אורך שריון), 90.3% היו חיוביים לזרע. הסברים אפשריים להיעדר זרע בכמה נקבות כוללים: חוסר בגרות (חוסר הבשלות פיזיולוגית), התמוטטות של תקע הזרע לאחר שמשמש לדישון מצמד של ביצים, וחוסר פעילות הזדווגות. הסקרים מצביעים על כך שטכניקה זו לבחינת ההצלחה ההזדווגות של לובסטרים נקבה היא פרוקסי אמין שניתן להשתמש בם בתחום לתעד את פעילות רבייה באוכלוסיות טבעיות.

<html> הנתונים שדווחו כאן היו לקבוצת משנה של לובסטרים נשיים שמקורו בשני הסמוכות לחוף ומקומות מהחוף. הקבוצה הסמוכות לחוף כללה 44 לובסטרים שנתפסו במימי החופים ליד קייפ אן, מסצ&#39;וסטס ומועברים בקירור למעבדה לבדיקה. כולל של 186 לובסטרים מהחוף נתפסו על הבנק של ג&#39;ורג&#39; וידגם במתקן החזקה מסחרי בניו המפשייר. דגימות זרע שמתקבלות מכל בעלי החיים ובדקה באופן מיידי לנוכחות או עדר הזרע על פי שיטות שתוארו לעיל. כולל של ...

שינויים הנגרמים לדיג דיג סרטנים מנוצל, כגון דיג הלובסטר האמריקאי, שעלולים להשפיע על דינמיקת הרבייה שלהם, מה שמוביל לירידה בהצלחת הזדווגות. מטרתו של מחקר זה הייתה לפתח שיטה לא פולשנית לבירור ההצלחה ההזדווגות של לובסטרים נשיים שיכול להיות מבחינה פיזיולוגית או תפקודי בוגר.

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; Americanus Homarus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

הלובסטר האמריקאי הוא סמל דומיננטי לאורך כל טווח התפוצה הגיאוגרפית שלו, מקנדה האטלנטית ועד ניו אינגלנד. באזורים רבים הוא מהווה את היעד של אחד מדיגיה הגדולים ביותר של מין בודד במזרח ארצות הברית. ההצלחה המתמשכת של דיג זה מיוחסת למגוון אמצעי ניהול, כולל בקרות ביולוגיות שנועדו לשמר את מלאי הבעלי-הבתים.תקנות אלו כוללות הגבלות על גודל מינימלי ומקסימלי להגנת נקבות נושאות ביצים, ואיסור על לכידה של נקבות עם חריץ בצורת V הנחשבות כרביימות מוכחות. עתידה של דייג הלובסטרים תלוי בחלקו באספקה בריאה של פרטים חדשים המגויסים לאוכלוסייה, התלויה בהצלחתו של מערכת ההזדווגות של הלובסטר. עם זאת, אופי הניצול העשוי של דיג זה, בדומה לדיג של סרטנים אחרים ברחבי העולם, עשוי להשפיע על הדינמיקה הרבייתית של מין זה.לפיכך, מטרת עבודה זו הייתה לפתח שיטה פשוטה ולא פולשנית לקביעת הצלחת ההזדווגות של נקבות לובסטרים בוגרות מינית. את מין הלובסטר ניתן להבדיל בצורה הטובה ביותר על ידי בחינת הצדו הגבון (ventral surface), כפי שנראה משמאל; נקבה מאופיינת בעיקר על ידי זוג ה-PLE pods הראשון, שהם שטוחים ונוצצים. לנקבות יש גם קולקולקה (seminal receptacle) בעלת צורה אליפטית שבה הן מאחסנות את הזרע שהועבר על ידי הזכר.הזכר מוצג מימין, וניתן לזהותו לפי זוג הפליאופודים (pleopods) הראשון, שהם קוניים ומוקשחים למדי. גונופודים אלו מסייעים בהעברת הספרמטופור לקולחון הזרע (seminole receptacle) של הנקבה.מוצגים גם נקבי הגונו של הזכר, מהם נדחפת מטאפורה זו של SPO. במהלך תהליך החיזור, לובסטרים זכרים ונקבות מפגינים התנהגויות מורכבות, הכוללות תקשורת המתווכת כימית ושיתוף מאורה. התנהגות של שיתוף מאורה מתרחשת הן לפני והן אחרי התחלפת השריון של הנקבה, וניתן לפרש זאת כהגנה של הזכר; הזיווג מתרחש בדרך כלל בתוך שעה לאחר התחלפת השריון של הנקבה ונמשך זמן קצר מאוד בלבד.הזכר הופך את הנקבה שזה עתה השירה את מעטפתה על גבה, וזאת כדי להעביר את ה-S SPM אל הקולקולויה (seminal receptacle) שלה. לובסטר נקבה מסוגלת לאחסן זרע מאירוע הזדווגות למשך שנתיים או יותר, ולאחר מכן היא פולטת את מקבץ הביצים שלה. הביצים נצמדות לפלופודים (pleopods) של הנקבה בחלק התחתון של הבטן.התפתחות הביצים אורכת בדרך כלל בין תשעה ל-11 חודשים ותלויה במידה רבה בטמפרטורת מי הים. הביצים בוקעות כזחלים פלנקטוניים באביב ובקיץ ועוברות מספר שלבי התפתחות לפני שהן שוקעות לקרקעית כצעירים. השיטה המתוארת כאן מספקת טכניקה להשגת דגימות זרע ממספר רב של לובסטרים נקבות בעודן על סיפונם של סירות לובסטר מסחריות או פלטפורמות סקר אחרות בים.מחט בעלת קצה קה מוחדרת לתוך קולקולת הזרע (seminal receptacle) של הנקבה, וחלק מהספרמטופור wraz עם הזרע הנלווה מוצא החוצה. ניתן לאחר מכן לאחסן את דגימת הזרע ולבחון אותה מאוחר יותר במעבדה. בשל מבנה קולקולת הזרע, לא מצאנו תמותה הקשורה לטכניקה זו.הציוד הדרוש לדגימה בשטח כולל קירור עם קרח לשמירה על הדגימות בקור, מבחנות דגימה בנפח של 2 מיליליטר (השתמשנו בנבובות פלסטיק של einor), מחט בעלת קצה קהה בכיול 18 gauge המחוברת למזרק של 3 cc ומי ים נקיים וקרים.סטריליזציה היא אידיאלית אך לא הכרחית. כמו כן, תזדקקו לקליבר למדידת מאפיינים מורפומטריים של הלובסטר, כגון אורך הקרפוס, רוחב הבטן וממדי הצבתה במידת הצורך. גיליונות נתונים מודפסים מראש משמשים לרישום מדדים אלו יחד עם מספר הזיהוי של מבחנות הדגימה.על הדוגם לתעד גם פרטים כגון תאריך, מיקום הדגימה ושיטת הלכידה במלכודת מסחרית. לדוגמה, יש למדוד כל לובסטר עד למילימטר הקרוב באמצעות קליבר; את אורך הקראפס (carapace length) יש למדוד גבנית, מהחלק האחורי של מחסום העין ועד לקצה הקראפס. לעיתים מדידות נוספות, כגון רוחב הבטן, עשויות להועיל להערכת מדד של בגרות.מאוחר יותר, בעזרת קליבר, מדדו את אורך ה-carapace הסטנדרטי. לאחר מכן, הפכו את בעל החיים כך שהצד הגחוני פונה כלפי מעלה כדי למדוד את רוחב הבטן. כדי לאסוף את דגימת הזרע מה-seminal receptacle, החזיקו את נקבת הלובסטר כשהצד הגחוני פונה כלפי מעלה והבטן פונה אליכם.החדירו את מחט המזרק אל תוך הקולקולקה הסמינלית (seminal receptacle). אם קיים ספרמטופור, יהיה שם פקק זרע מוצק מאוד. יש לחדור בזהירות, לרוקן את המזרק לתוך מבחנה מסומנת מראש, למלא את המזרק בכמות קטנה של מי ים נקיים ולהזריק אל תוך הקולקולקה הסמינלית.פעולה זו תסייע בהפרדת הזרע מהפקק הקשיח. לאחר מכן, הרם שוב את הבוכנה והעבר דגימה נוספת זו לאותה מבחנה של הדגימה. הזווית ועומק המחט קריטיים שניהם להשגת דגימות עקביות.בתמונה זו, הקולקולת הזרעית (seminal receptacle) נחתכה ונחצת אנכית. פקק הזרע תופס את החלק העליון של הקולקולת, בעוד שתאי זרע נמצאים בחלק התחתון, בנקודה העמוקה ביותר של הקולקולת. עומקה של הקולקולת הוא כסנטימטר אחד, תלוי בגודל הנקבה, והמחט תצטרך לחדור דרך הפקק שהתקשה כדי לאסוף את דגימת הזרע.היזהרו לא לדחוף דרך החומר הדמוי קליפה בתחתית המכל. כעת נציג את תהליך הדגימה באופן איטי יותר, בתנאי מעבדה.אנו ממליצים לכל מי שמעוניין להשתמש בטכניקה זו להתאמן תחילה במעבדה לפני ניסיון איסוף דגימות בשטח. שוב, החזיקו את הלובסטר כאשר צדו הגחוני פונה כלפי מעלה והבטן פונה אליכם. השתמשו במחט בעלת קצה קהה, החל מזווית של 45 מעלות עם קצה הפונה לכיוון הבטן, כדי לחדור לקולקולה (seminal receptacle) ולבדוק אם קיים פקק זרע.אם קיים פקק, זהו המקום שבו תורגש התנגדות בעת הפעלת לחץ קבוע. סובב את המחט קלות כדי לסייע בחדירה זו. דחף דרך פקק הזרע, והחדר את המחט לעומק של כסנטימטר אחד, כפי שניתן לראות לפי סימון הייחוס השחור שעל המחט המוצגת.רוקנו את המזרק לתוך מבחנה לדגימה. לאחר מכן, מלאו את המזרק בכמות קטנה מאוד של מי ים טריים וקרים כדי לשטוף את הקיבל הזכרי (seminal receptacle), ושוב, רוקנו את התוכן לתוך מבחנת הדגימה בין לובסטר ללובסטר. ודאו שאתם שוטפים את המזרק ביסודיות כדי למנוע זיהום.נגבו את המחט, ולאחר מכן מלאו ורוקנו את המזרק מספר פעמים כדי להבטיח שכל חומר הדגימה נשטף החוצה. לפני דגימת לובסטר נוסף, אנו ממליצים להחליף את המזרק והמחט לאחר מספר שימושים לצורך עיבוד וזיהוי של הזרע. תזדקקו לפיפט של 200 microliter, טיפים חד-פעמיים לפיפט, תזרייות מיקרוסקופ וכיסויי זכוכית.יש לקחת מבחנה של דגימת זרע ולהוציא ממנה כ-200 microliters של החומר הנוזלי. יש להעביר את החומר בעזרת פיפט לשקופית מיקרוסקופ מסומנת כראוי עם זכוכית כיסוי; באמצעות מיקרוסקופ אור סטנדרטי בהגדלה של 100 x, קבע את כמות הזרע הנוכחת. תאי הזרע על שקופית המיקרוסקופ עשויים להיות מכוונים במיקומים שונים, כולל במבט אנכי וצדי.כפי שניתן לראות בתמונות לדוגמה אלו, אנו ממליצים להשתמש בתיאורים איכותניים כגון רב, מעט או כלל לא, כדי לתאר את כמות הזרע הנוכחת. השתמשנו בטכניקה זו בהצלחה במיקומים רבים בים ובדגימת לובסטרים בנמלים. התוצאות המוצגות כאן הן מלובסטרים שנלכדו במים עמוקים ב-George's bank, אותם יכולנו לדגום במתקן החזקה מסחרי.בסך הכל 84% מהנקבות הללו הכילו זרע בקולות הזרע (seminal receptacles) שלהן. באופן מפתיע, אלו שלא הכילו זרע היו בטווח הגדלים הבינוני, ולא בגדלים הקטנים יותר, שעשויים להעיד על חוסר בשלות. טכניקה זו אינה נועדה לכמת את כמויות הזרע בפועל במטאפורת הזרע.במקום זאת, היא מספקת שיטה לא פולשנית שניתן להשתמש בה בלב ים כדי לקבוע האם נקבת לובסטר הצליחה בתהליך. ככל שנדע יותר על ההצלחה הרבייתית של הלובסטרים, כך נוכל להבין טוב יותר את ההשפעות של ניצול מין זה, ובכך לנהל בצורה נאותה את משאב הימי בעל הערך הזה.

a-noninvasive-method-for-situ-determination-mating-success-female

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

פרוטוקול וידאו זה מדגים שיטה לחקר השפעות נוזל הזרע בגסטרופודים, באמצעות חילזון המים המתוקים ההרמפרודיטי Lymnaea stagnalis.

השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון

מטרת פרוטוקול זה היא לספק למשתמשים סט של שיטות לפירוק קפסולציה בתפוקה גבוהה של עוברים וזחלים של Lymnaea stagnalis כהכנה להכלאה שלמה באתר, ולטיפולים הבאים לפני ואחרי הכלאה.

הר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; כלת שיטה עבור חלזון הרכיכות<em&gt; Stagnalis Lymnaea</em

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד ולאפיין את המבנה, חוש הריח, והכוחות תגובה התנהגותית של תרכובות פרומון בשם של הים lampreys.

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation

כאן אנו מציגים פרוטוקול לעקוב בנפרד חיות על פני תקופה ארוכה של זמן. היא משתמשת ממוחשבת שיטות לזיהוי קבוצת תגים נבנה באופן ידני באמצעות קבוצה של לובסטרים כמו חקר מקרה, בד בבד עם מתן מידע כיצד הבית, להשפיע, וזכור הלובסטרים.

מעקב וידאו לטווח ארוך של בעלי חיים ימיים Cohoused: חקר מקרה של הפעילות גינקולוגיות יומי של הלובסטר של נורבגיה (Nephrops norvegicus)

ב פרוטוקול זה, שיטות לעריכת נישואין בתוך המשפחה צלבים, להערכת ההצלחה של אלה צלבים, מתוארים על הנמלה Vollenhovia emeryi. פרוטוקולים אלה חשובים עבור ניסויים להבנת בסיס גנטי של סקס נחישות מערכות דבוראים.

אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi

מאמר זה מדגים את ההליך עבור השתלת תג אקוסטית מיקרו לנוער עגולי הפה השקט, צלופח אמריקאי. האפליקציה שלנו מבוססת על נסיונות מעבדה, אשר מצביעים על כך תגיות אקוסטית יכול להיות מושתל בהצלחה ללא תופעות לכאורה על שחייה יכולת או הישרדות ואובדן תג מינימלי.

השרשה של תגית חדשה אקוסטית מיקרו עגולי הפה השקט לנוער, צלופח אמריקאי

המטרה של פרוטוקול זה היא גנוטיפ של כלנית המים ne, שושנת הימים במהלך המאבק מבלי להקריב את העובר.

הגנוזות של כלנית ימית במהלך ההתפתחות המוקדמת

זרע חייב לנווט בהצלחה דרך צינור ההטלה כדי להפרות oocyte. כאן אנו מתארים את הבקשה למדידת העברת זרע  בתוך הרחם הדו. הדבר יכול לספק נתונים כמותיים על חלוקת זרע בתוך הרחם לאחר ההזדווגות, כמו גם על מהירות, מהירות כיוונית ותדר היפוך.

מדידת הדרכה זרע ותנועתיות בתוך האלגיה של מערכת הרבייה של האנדרוגינוס

שימור מוסמי מים תלוי בניטור דפוסי הרבייה ותהליכי המינים. מחקר זה מתקן פרוטוקול שאינו קטלני לדגימת תוכן הגיל, אפיון פיתוח זחל ואספקת מאגר דיגיטלי למידע שנאסף. זה פרוטוקול-חבילת מסד הנתונים יהיה כלי חשוב עבור חוקרי מולים בהתאוששות מינים מחויילים.

סטנדרטיזציה של שיטה שאינה קטלנית לאפיון מעמד הרבייה והתפתחות הזחל של מולים מים מתוקים (ביובלויה: Unionida)

קצב לב מדידת במהלך אתגר תרמי מספק תובנה לתגובות פיסיולוגיים של אורגניזמים כתוצאה של שינוי סביבתי אקוטי. באמצעות הלובסטר האמריקאי (הומארוס אמריקאנוס) כאורגניזם מודל, פרוטוקול זה מתאר את השימוש האימפאוגרפיה עכבה כגישה בלתי פולשנית ולא קטלנית כדי למדוד את קצב הלב של חסרי חוליות בשלב מאוחר.

אימפאוגרפיה עכבה עבור מדידה פולשנית מינימלית של קצב הלב בשלב מאוחר יצורים חסרי חוליות

כאן, אנו מציגים שיטה כללית לקביעת הכדאיות העוברית והמספר הכולל של עוברים המיוצרים (brood) באמצעות אורגניזם המודל C. elegans.

מדידת כדאיות עוברית וגודל הברוד ב- Caenorhabditis elegans

למדו שיטה לא פולשנית להערכת הצלחת הזיווג בלובסטרים אמריקאיים נקבה (Homarus americanus) באמצעות דגימת זרע מהקיבולית הזרעית. שיטה זו תומכת בניהול בר-קיימא של דגי הלובסטר.

שיטה לא פולשנית ל

גלה סרטונים נוספים