שיטות לביצוע צלבים ב Setaria viridis, מערכת דגם חדש לעשבים

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים כיצד לבצע צלבים עבור cter verus, מערכת מודל חדשה לעשבים. זה מושג על ידי בחירה תחילה, חיתוך ותיוג של הפסגה. השלב השני הוא לסרס את הפאניקה הגזומה על ידי טבילתה באמבט מים של 48 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, הפסגה הגזומה משמשת כנקבה להאבקה על ידי פסגה השופכת אבקה. השלב האחרון הוא קצירת זרעים שבועיים לאחר ההאבקה הצולבת. בסופו של דבר, נעשה שימוש בצביעה של גאס של הזרעים ההיברידיים המשוערים כדי להראות את יעילות הטכניקה.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות כמו הסרה פיזית, הוא שהיא פחות פולשנית וקלה יחסית להקמה במעבדה. שיטה זו תעזור להאיץ את האימוץ של cter verus כמודל גנטי על ידי הקלה על ביצוע הכלאות. כדי להתחיל, הסר תא אחד להשקיה ולאחר מכן מלא מגש בארבעה על תשעה תאים עם מטרו מיקס 360.

לאחר מכן ערפל קלות את התאים וזרע זרעים על פני האדמה, זרע אחד לכל תא. לאחר מכן מכסים את הזרעים בשכבת אדמה, ערפל בעובי 0.5 סנטימטרים את פני האדמה כדי להרטיב אותם, ואז להשקות שטוחים מלמטה. המשיכו להשקות את התאים מלמטה פעם עד פעמיים ביום לאחר זריעת הזרעים, והקפידו לא להשקות יתר על המידה.

הגדר את תנאי תא הגידול ל-31 מעלות צלזיוס ביום ו-22 מעלות צלזיוס בלילה עם טיפול פרדה של 15 מעלות צלזיוס בין השעות 8:30 עד 9:00 בבוקר. שמרו גם על לוח זמנים של 12 שעות חושך בהיר והגדירו את הלחות היחסית ל-50%בתנאים אלה. Satter verus a 10.1 יפרח 21 עד 22 יום מזריעת הזרעים. באופן אידיאלי, הסרה מתבצעת בשעות אחר הצהריים או הערב.

בחר את המחומש הראשי על כל צמח שיש לו פרח אחד עד חמישה פרחים. לאחר מכן חתכו את קצה המחומש והסירו את כל הפרחים בחלק התחתון של החלקים האמצעיים והבסיסיים הפרוקסימליים בעזרת מלקחיים עדינים. אם יש רק עשירית עד חמישית מהפרחים בפריחה.

על מנת לשמור על החלק התחתון של החלק הדיסטלי, האמצעי והעליון של האמצע הפרוקסימלי לצורך חיתוך נוסף, חותכים את הקצה וחותכים את הפרחים מבסיס הפאניקה. אם לפאניקה יש רבע עד מחצית פרחים בפריחה, שמור את החלק האמצעי הפרוקסימלי לגיזום נוסף וחתך את החלק האמצעי הדיסטלי. לאחר חיתוך המחומש, השתמש במספריים כירורגיים כדי לקצץ קלות את הזיפים.

הקפידו לשמור על הזיפים באזור שיואבקו על מנת להגן על הפרחים מפני נזקי חום אפשריים. עבור כל שיבולית, שמור על הפרח הבוגר העליון. לפרח העליון תהיה סבירות גבוהה יותר להאנתזה בזמן ההאבקה.

לאחר מכן הסר את כל הפרחים שפרחו ואת כל הפרחים הלא בשלים והשאיר כ-20 עד 30 פרחים לכל פסגה המפוזרים באופן שווה. לאחר מכן, סמנו צד אחד של כל פרח בטוש קבוע אדום. ורשום את מספר הפרחים על דגל הפסגה עם המידע הבא, תאריך ההסרה , משך הזמן והטמפרטורה בה מתבצעת ההסרה .

לאחר חיתוך הפאניקה, הסר את כל האדמה של כל צמח כדי להבטיח הקצאה מחדש של משאבים נוספים לפיתוח הפסגה הראשית. שעה לפני ההסרה הגדר אמבט מים ל -48 מעלות צלזיוס לטיפול בחום. לאחר החימום מראש, כופפו בעדינות את המחומשים הגזומים וטבלו שלוש עד ארבע בכל פעם במים חמים למשך שלוש עד שש דקות.

היזהר לא לשבור את גזע המחומש. עלה הדגל, המהווה תת-עשרות מהמחומש, לא אמור לבוא במגע עם מים חמים. זאת כדי למנוע נזקי חום לרקמת העלים.

לאחר ביצוע ההסרה למשך הזמן הרצוי, הסר את הפאניקה מאמבט המים ונער בעדינות את המים מהפאניקה. לאחר מכן כסו לחלוטין את הפאניקה המחוררת בשקית לחם מיקרו מחוררת מותאמת אישית ואבטחו אותה בעניבת טוויסט. ניתן להתאים שקיות לחם מחוררות מיקרו בהתאם לגודל הפאניקה.

לבסוף, החזירו את הצמחים לתא הגידול עד למחרת. בשעה 9:00 בבוקר ביום השני וביום השלישי, העבירו הורים נקבות וזכרים לא מסורסים מחדר הגדילה למעבדה כדי לבצע הכלאות, להתבונן ולהוסיף עוד אדום. לפרחים שפרחו או פורחים.

בעזרת טוש קבוע אדום, רשום את המספר הכולל של פרחים פורחים לכל פאניקה. לאחר מכן רשום את תאריך ההאבקה ואת שם ההורה הזכר על התג כדי לעקוב אחר הצלבים שבוצעו. שימו לב לזמן השיא של אנטיתזה אצל הורים זכרים בתנאי המעבדה שלנו, פרחים על המחומשים של ההורה הזכר מתחילים פתיחה סינכרונית בסביבות השעה 10:10 בבוקר לאחר הפתיחה, המאמץ המלא של האנטתזה ושחרור האבקה יתרחשו לאחר 20 דקות.

התחל בהאבקה מיד כשהוא צהבהב. אנתרים לבנים נראים על פרחי ההורה הזכר. האבקה מבוצעת ביום השני וביום השלישי על ידי שימוש בפאניקה כדי להאביק בהלה או אחר להאבקה סטיגמטית.

השתמש בפאניקה מנותקת אחת כשהזכר משפשף בעדינות את הפאניקה יחד עם הפאניקה המסולסלת כדי להקל על ההאבקה ומשליך את הפאניקה הזכרית כדי למנוע זיהום, חזור על תהליך ההאבקה עד שכל פסגה מסולסלת הואבקה על ידי שניים עד שלושה מחומשים. השיטה היעילה ביותר היא האבקה אחרת לסטיגמה באמצעות מלקחיים. בחרו פרח הפורח עם אנתרים לבנים צהבהבים או קטפו אנתרים וגעו פיזית בצלקת הפרח על ההורה הנקבה.

השתמש בפרח אחד מההורה הזכר כדי להאביק פרח אחד על הפאניקה המסולסלת בין האבקות של הורים זכרים שונים. טבלו את המלקחיים באתנול 95%, ולאחר מכן ניגבו עם מגבוני קים כדי למנוע זיהום עקב העברת אבקה בין הכלאות שונות. לאחר ביצוע ההאבקה, כסו את הפאניקה של ההורה הנקבה בשקית לחם מיקרו מחוררת מותאמת אישית ואבטחו אותה בבסיס באמצעות עניבת טוויסט.

לאחר האבקה ועד קציר הזרעים, קצרו זרעים 14 עד 16 יום לאחר יום ההאבקה והניחו את התג באותה מעטפה כמו הזרעים. זרעים עם סימנים אדומים משני הצדדים מייצגים את הזרעים שנבעו מההכלאה הגנטית המבוקרת. השליכו את כל הזרעים ללא סימנים אדומים מכיוון שהם מייצגים את הזרעים הנובעים מפרחים חדשים שפותחו.

לאחר הסרה זרעים עם סימנים אדומים, סביר להניח שרק בצד אחד ייצגו את הזרעים הנובעים מהאבקה עצמית. לבסוף, יבש זרעים בחום של 30 מעלות צלזיוס למשך יומיים. אחסן זרעים מיובשים במעבדה, או באופן אידיאלי בתא זרעים.

כאשר מוכן לניתוח נוסף, הסר את הגופים במידת הצורך. השיטות המתוארות בסרטון זה היו תוצאות של ניסויים רבים שהשתמשו בטמפרטורות וזמני טיפול שונים כדי לייעל את תהליך ההסרה הצלחת תהליך זה נמדדה במספר הזרעים ההיברידיים שהתקבלו.

שישה זרעים מאחד ממעברי הניסוי שבהם ההורה הזכר נשא עיתונאי. קידוד גנים לבטא גלוקורונידאז מוצגים כאן. הגן המדווח גורם לזרע להפוך לכחול כאשר הוא מוכתם, מה שמקל על ספירת מספר הזרעים ההיברידיים לאחר שליטה, ניתן לחצות עד 15 מחומשים ביום אם ההליך מבוצע כראוי.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע צלבים באריה ורוס.