Name: דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-25T18:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: למד ליצור קסנוגרפטים תת-עוריים ותוך-כבדיים של קרצינומה hepatocellular אנושית בעכברים בעלי מערכת חיסון חלשה. שיטה זו מאפשרת חקר ביולוגיית גידולים ותגובות לטיפולים חדשניים במודל ריאליסטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מכון קנדי ​​לבריאות מחקר שלב 1 המטפל-פרס מדען (AG) ושל גרנט תפעולי מהאגודה לחקר הסרטן (AG). המחברים מודים לד&quot;ר ג&#39;ון דיק לתמיכה בפרויקט זה שלו.

<ol><li>El-Serag, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma.</a> N. Engl. J. Med. 365, 1118-1127 (2011).</li>
<li>Li, Y., Tang, Z. Y., Hou, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma%3A+insight+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma: insight from animal models.</a> Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 32-43 (2012).</li>
<li>Tateishi, R., Omata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma+in+2011%3A+Genomics+in+hepatocellular+carcinoma--a+big+step+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma in 2011: Genomics in hepatocellular carcinoma--a big step forward.</a> Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 69-70 (2012).</li>
<li>Hoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+classification+and+novel+targets+in+hepatocellular+carcinoma%3A+recent+advancements%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Molecular classification and novel targets in hepatocellular carcinoma: recent advancements.</a> Semin. Liver Dis. 30, 35-51 (2010).</li>
<li>Ji, J., Wang, X. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+cancer+stem+cell+biology+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of cancer stem cell biology in hepatocellular carcinoma.</a> Semin. Oncol. 39, 461-472 (2012).</li>
<li>Villanueva, A., Hernandez-Gea, V., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medical+therapies+for+hepatocellular+carcinoma%3A+a+critical+view+of+the+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Medical therapies for hepatocellular carcinoma: a critical view of the evidence.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2012).</li>
<li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transl.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin. Transl. Oncol. 12, 473-480 (2010).</li>
<li>Sausville, E. A., Burger, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+human+tumor+xenografts+to+anticancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Contributions of human tumor xenografts to anticancer drug development.</a> Cancer Res. 66, 3351-3354 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD%2FLtSz-scid+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> J. Immunol. 154, 180-191 (1995).</li>
<li>Ohbo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+hematopoiesis+in+mice+with+a+truncated+mutant+of+the+interleukin-2+receptor+gamma+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Modulation of hematopoiesis in mice with a truncated mutant of the interleukin-2 receptor gamma chain.</a> Blood. 87, 956-967 (1996).</li>
<li>Fiebig, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vivo+imaging+of+the+murine+liver%3A+a+micro-computed+tomography-based+anatomical+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vivo imaging of the murine liver: a micro-computed tomography-based anatomical study.</a> PLoS One. 7, e31179(2012).</li>
<li>Masters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cancer+cell+lines%3A+fact+and+fantasy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human cancer cell lines: fact and fantasy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1, 233-236 (2000).</li>
<li>Yamashita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpCAM-positive+hepatocellular+carcinoma+cells+are+tumor-initiating+cells+with+stem%2Fprogenitor+cell+features%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features.</a> Gastroenterology. 136, 1012-1024 (2009).</li>
<li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-130b+Promotes+CD133%28%2B%29+liver+tumor-initiating+cell+growth+and+self-renewal+via+tumor+protein+53-induced+nuclear+protein+1%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">miR-130b Promotes CD133(+) liver tumor-initiating cell growth and self-renewal via tumor protein 53-induced nuclear protein 1.</a> Cell Stem Cell. 7, 694-707 (2011).</li>
<li>Yang, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+CD90%2B+cancer+stem+cells+in+human+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Significance of CD90+ cancer stem cells in human liver cancer.</a> Cancer Cell. 13, 153-166 (2008).</li>
<li>Park, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neoangiogenesis+and+sinusoidal+%22capillarization%22+in+dysplastic+nodules+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Surg.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neoangiogenesis and sinusoidal "capillarization" in dysplastic nodules of the liver.</a> Am. J. Surg. Pathol. 22, 656-662 (1998).</li>
<li>Sigurdson, E. R., Ridge, J. A., Kemeny, N., Daly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+liver+drug+uptake+following+hepatic+artery+and+portal+vein+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor and liver drug uptake following hepatic artery and portal vein infusion.</a> J. Clin. Oncol. 5, 1836-1840 (1987).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3, 1167-1170 (2008).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration+after+partial+hepatectomy%3A+critical+analysis+of+mechanistic+dilemmas%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration after partial hepatectomy: critical analysis of mechanistic dilemmas.</a> Am. J. Pathol. 176, 2-13 (2010).</li>
<li>Zhang, D. Y., Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis-dependent+mechanisms+of+hepatocarcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fibrosis-dependent mechanisms of hepatocarcinogenesis.</a> Hepatology. 56, 769-775 (1002).</li>
<li>Chen, K., Ahmed, S., Adeyi, O., Dick, J. E., Ghanekar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+solid+tumor+xenografts+in+immunodeficient+mice+are+vulnerable+to+lymphomagenesis+associated+with+Epstein-Barr+virus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human solid tumor xenografts in immunodeficient mice are vulnerable to lymphomagenesis associated with Epstein-Barr virus.</a> PLoS One. 7, e39294(2012).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

יש לנו תארנו מגוון של טכניקות כדי להקים תת עורי וxenografts HCC האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים intrahepatic שיכול להיות מיושמים על מגוון רחב של שאלות ומבחנים ניסיוניים. בעוד xenografts תת עורי הייתה בשימוש נרחב ללמוד היבטים שונים של הביולוגיה HCC, xenografts intrahepatic מתוארות בספרות רק לעתים נדירות. יתר על כן, רוב המחקרים המתארים את השימוש בxenografts יצרו אלה משורות תאים מבוססות היטב. בהתחשב במגבלות של שורות תאי סרטן בדוגמנות הביולוגיה גידול אנושית 12, היינו מו...

קרצינומה hepatocellular (HCC) היא הסרטן החמישי הנפוץ ביותר בעולם והסיבה הכי בקצב המואץ למוות מסרטן בצפון אמריקה. גורם הסיכון הנפוץ ביותר עבור HCC הוא שחמת כבד, בתדירות הגבוהה ביותר מתרחש עקב דלקת כבד כרונית נגיפית, שימוש לרעה באלכוהול, מחלות אוטואימוניות, או הפרעות מטבוליות תורשתיות 1. למרות נטל מחלת הכבד שהוטל על ידי HCC על אוכלוסיות ברחבי העולם, הפתופיזיולוגיה של HCC מובנת יחסית גרוע בהשוואה לסוגי סרטן שכיח אחרים כגון מעי גס, שד, או סרטן הערמונית. לדוגמא, אירועים מולקולריים ותאיים ספציפיים נהיגה tumorigenesis להישאר להיות מוגדרים 2 באופן ברור. כמו רוב סוגי סרטן אפיתל מוצקים אחרים, גישות הגנומי חשפו את ההטרוגניות בסטיות קשורות עם HCC 3. מספר המחקרים גילו פעילות מסודרות של מגוון רחב של מסלולי איתות מעורבים בהתפשטות תאים, survival, בידול ואנגיוגנזה 4. בנוסף, תפקידם של תאי גזע סרטני בpathobiology HCC נשאר להתברר 5. עם הבנה מוגבלת של הפתופיזיולוגיה HCC, בארסנל של טיפולים יעילים לHCC גם נשאר מוגבל יחסית. חולים בשלב מוקדם, עם גידולים מוגבלים לכבד הם מועמדים לטיפול מרפא באמצעות אבלציה גידול או כריתה כירורגית, אם כי ההישנות היא שכיחה. עבור חולים עם מחלה מתקדמת יותר, כימותרפיה והקרנות הם בעלי יעילות מוגבלת ומשמשים בעיקר לבקרת מחלות בכוונה פליאטיבי 6. באיכות גבוהה במודלי ניסויי vivo של HCC האנושי ובכך מספקת פלטפורמה רבת ערך למחקר בסיסי נחוץ להפתופיזיולוגיה של HCC האנושי, כמו גם להערכה של גישות טיפוליות חדשניות. בהשוואה לשימוש בשורות תאים או מודלים עכבר מוגדרים מאוד, xenografts של פריגידולים אנושיים בעכברים עם מערכת חיסון חלשים מרי צמחו ככלים רבי ערך למחקרים מסוג זה שכן הם מסוגלים משחזרים מחלות של בני אדם עם נאמנות גבוהה גם בעת לכידת הטרוגניות שקיימת בתוך ובין חולים השונים 7,8. לשם כך, פיתחנו מגוון רחב של שיטות להקמת xenografts HCC האנושית בעכברים עם מערכת חיסון חלש. בעוד שרוב המחקרים שפורסמו מעורבים xenografts HCC לתאר את השימוש בשורות תאי HCC האנושי מבוססות היטב למטרה זו, אנו מתמקדים באופטימיזציה של מבחני שלנו כדי ליצור xenografts מדגימות HCC עיקריות מתקבלת מייד לאחר כריתה כירורגית של חולים. טכניקות xenografting שונות עשויות להידרש למחקר יישומים שונים. לדוגמא, xenografts תת עורי שנוצרה מתוך שברי גידול נוצרות במהירות, נמצאת במעקב בקלות, ועשוי להיות מתאים יותר לממשל מקומי של הרפוי רומן עם נוחניטור של תגובת גידול. xenografts intrahepatic עשויה להיות רלוונטית יותר למחקרים הנוגעים לתפקידו של המיקרו בכבד בביולוגיה HCC. Xenografts שנוצרה מהשעיות תא גידול נחוצות לזיהוי והאפיון של תת תא ייזום גידול או לניסויים הדורשים במניפולציות מבחנה של תאים סרטניים לפני xenotransplantation. וכך פיתחנו ומאומתים הפרוטוקולים הבאים להקים תת עורית או xenografts intrahepatic מהשעיות תא או שברי גידול נבעו מדגימות HCC האנושי ראשוניות.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&#8217; s Mod. איגל מדיום/חזיר&#8217; s F12 50/50 Mix x1(DMEM-F12) </td><td>WISENT Bioproducts</td><td>319-075-CL</td><td></td></tr><tr><td> קולגנאז TypeIV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td> Dispase II </td><td>Stemcell Technologies</td><td>7923</td><td></td></tr><tr><td> מטריג'ל מטריקס</td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td> 10% תמיסת פורמלין חוצצת</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>0.9% תמיסת מלח תמיסה (NaCl),</td><td>סקריל בית סטרילי מותג</td><td>1011-L8001</td><td></td></tr><tr><td>בטדין פילינג כירורגי Purdue</td><td>Pharma</td><td>NPN 00158313</td><td></td></tr><tr><td> בופרנורפין (טמגסיק) NR 0.3 מ"ג/מ"ל</td><td>רקיט בנקיזר</td><td></td><td></td></tr><tr><td> איזופלורן USP, 99.9%, חומר הרדמה באינהלציה</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>M60302</td><td></td></tr><tr><td>דמעה-ג'ל </td><td>נוברטיס פרמצבטיקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td> תרכובת קטע קפוא </td><td>VWR</td><td>95057-838</td><td></td></tr><tr><td> Cryomold, Tissue -Tek </td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td> מחט גלישה מדויקת 18G 1 & #189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td> מחט גלישה מדויקת 27G &#189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td> מזרק אינסולין, 3/10 סמ"ק U-100, 29G&#189; </td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td> להב כירורגי מס' 10</td><td>Feather Safety Razor Co.</td><td>08-916-5A</td><td></td></tr><tr><td> #5-0 תפר כירורגי משי רך, מחט נקודתית מתחדדת 3/8 אינץ' </td><td>Syneture</td><td>VS-880</td><td></td></tr><tr><td> סרט כירורגי Transpore</td><td>3M Health Care</td><td>1577-1</td><td></td></tr><tr><td> מוליך כותנה </td><td>Medpro</td><td>018-425</td><td></td></tr><tr><td> Surgicel, תאית מחודשת מחומצנת</td><td>Ethicon</td><td>1951</td><td></td></tr><tr><td> מסננת תאים 100 & #956; m ניילון</td><td>Becton-Dickinson Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td> תאורת הגדלה עם בסיס נייד</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td>דגם: RLM-CLT-120V</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים סטריליים 100x20 מ"מ </td><td>Sarstedt</td><td>821474</td><td></td></tr><tr><td> רקמות, 1x2 שיניים, 4-1/2 אינץ'</td> <td>Almedic</td><td>A10-302</td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים חבישה אדסון 4-3/4 אינץ'</td> <td>Almedic</td><td>A10-220</td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים לתחבושת עיניים, משונן, ישר, 4 אינץ' </td><td>Almedic</td><td>A19-560</td><td></td></tr><tr><td> Hartman מלקחיים המוסטטיים, מעוקל, 3-1/2 אינץ' </td><td>אלמדיק</td><td>A12-142</td><td></td></tr><tr><td> מספריים איריס, מעוקל, 4-1/4 אינץ'</td> <td>אלמדיק</td><td>A8-690</td><td></td></tr><tr><td> מספריים איריס, ישר, 4-1/2 אינץ' </td><td>אלמדיק</td><td>A8-684</td><td></td></tr><tr><td> אולסן-הגן נהג מחט, 5-1/2 אינץ' </td><td>אלמדיק</td><td>A17-228</td><td></td></tr></tbody></table>

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo מודלים ניסיוניים של קרצינומה hepatocellular (HCC) כי לשחזר את המחלה האנושית מספקים פלטפורמה רבת ערך למחקר להפתופיזיולוגיה מחלה ולהערכה קליני של טיפולים חדשניים. אנו מציגים מגוון רחב של שיטות ליצירה תת עורית או xenografts HCC האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים orthotopic שיכול להיות מנוצל במגוון רחב של יישומי מחקר. עם דגש על השימוש ברקמת גידול ראשונית מחולים שעברו כריתה כירורגית כנקודת התחלה, אנו מתארים את ההכנה של השעיות תא או שברי גידול לxenografting. אנו מתארים טכניקות ספציפיות לxenograft רקמות אלה תת עורי), או ii) intrahepatically, או על ידי השתלה ישירה של תאים סרטניים או שברים בכבד, או בעקיפין על ידי הזרקה של תאים לתוך טחול העכבר. אנו גם מתארים את השימוש של כריתה החלקית של כבד עכבר הילידים בזמן xenografting כאסטרטגיה ללגרום למצב של התחדשות כבד פעילה בעכבר הנמען שעשוי להקל על קליטתם intrahepatic של תאים סרטניים אנושיים ראשוניים. התוצאות הצפויות של טכניקות אלה באים לידי ביטוי. הפרוטוקולים שתוארו אומתו באמצעות דגימות אנושיות ראשוני HCC וxenografts, אשר בדרך כלל לבצע פחות וחסונה יותר משורות תאי HCC האנושי המבוססות היטב כי נמצא בשימוש נרחב ומצוטטות לעתים קרובות בספרות. בהשוואה לשורות תאים, אנו דנים גורמים אשר עשוי לתרום לסיכוי הנמוך יחסית של engraftment HCC העיקרי במודלי xenotransplantation ולהגיב על בעיות טכניות שעלולות להשפיע על קינטיקה של צמיחת xenograft. אנחנו גם מציעים שיטות שיש ליישם כדי להבטיח שxenografts השיגה במדויק דומה רקמות HCC הורה.

איור 3 מדגים את המראה האופייני של xenograft HCC האנושי תת עורי ואת מראה histopathological המקביל של הגידול. ההתפתחות והצמיחה של xenografts תת עורית ניתן לפקח בקלות על ידי בחינה יומית של עכברי נמען. מרווח הזמן בין xenografting ופיתוח של גידול עשוי להשתנות במידה רבה בהתאם לסוג של רקמה (שבר גידול לעומת השעיה תא), המקור של רקמות (מדגם עיקרי מטופל, xenograft passaged, או שורת תאים), והכמות של רקמה המושתלת ( מספר התאים או בגודל של שבר גידול). לדוגמא, xenografts הגדולה ע...

xenografts גידול האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים הם כלים רבי ערך כדי ללמוד ביולוגיה בסרטן. פרוטוקולים ספציפיים כדי ליצור xenografts תת עורי וintrahepatic מתאי אנושיים hepatocellular קרצינומה או שברי גידול מתוארים. התחדשות כבד הנגרמת על ידי כריתה חלקית בעכברי נמען מוצגת כאסטרטגיה כדי להקל על קליטתם intrahepatic.

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור קסנוגרפטים תת-עוריים או תוך-כבדיים של קרצינומה של תאי הכבד האנושיים (HCC) בעכברים עם חסר חיסוני. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת פרגמנטים של גידול או תרחיף של תאים בודדים מדגימת HCC אנושית טרייה להשתלה בעכברים עבור קסנוגרפטים תת-עוריים. השלב הבא הוא הזרקת תאי גידול או השתלת פרגמנטים של גידול לתוך כיס גבי תת-עורי עבור קסנוגרפטים תוך-כבדיים.השלב הבא הוא הזרקת תאי גידול אל הטחול או אל הכבד, או השתלת מקטעי גידול ישירות אל הכבד בשלב הסופי. בעלי החיים נצפים במשך מספר שבועות עד להתפתחות גידולים. בסופו של דבר, ניתן להשתמש במודלי ה-HCC Xenografts אנושיים כדי לחקור היבטים רבים של ביולוגיית הגידול, כולל מנגנוני התומוגנזה ותגובות לטיפולים חדשניים.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון שימוש בקווי תאים או בשימוש בשיכבות זרות (xenografts) תת-עוריות בלבד, הוא שבטכניקה זו, דגימות ראשוניות של סרטן כבד אנושי ושיכבות זרות תוך-כבדיות המופקות מחולים מספקות מודל ביולוגי ריאליסטי יותר של קרצינומה הפטוצלולרית אנושית. את הפרוצדורה יעגים Sharif Ahmed, חוקר פוסט-דוקטורנט מהמעבדה שלי, עבור השתלה תת-עורית של פרגמנטים של הגידול. ראשית, מקמו את העכבר המורדם במצב שכיבה על הבטן (prone position), תוך שמירה על הרדמה שאיפתית ב-isof fluorine באמצעות פיה.יש למרוח ג'ל דמעות כדי להגן על עיני בעל החיים מפני פגיעה טראומטית, ולאחר מכן לעקר את האזור הגבגבי המגולח באמצעות Betadine surgical scrub, לאחר מכן ב-70% ethanol, ולבסוף בתמיסת povidone iodine. בשלב הבא, השתמש במספריים חדות כדי לבצע חתך של חמישה מילימטרים בעור. הכנס את קצהן של מספריים קהות במצב סגור אל החלל התת-עורי, ולאחר מכן פתח בעדינות את המספריים כדי ליצור כיס גדול מספיק להכנסת מקטע גידול.לאחר מכן, השתמשו בפינצטה עדינה כדי להחדיר את פסיקת הגידול לתוך הכיס התת-עורי, והשתמשו בתפרים לסגירת החתך לאחר הנחת הפסיקה, רגע לפני הזרקת תרחיף תאי גידול ב-matrigel באמצעות מזרק אינסולין המצויד במחט במידה 29 gauge ואורך חצי אינץ'. לאחר מכן, החדירו את המחט למרחב התת-עורי של חיה שהורדמה ועברה גילוח, דחפו את המחט מספר מילימטרים לאורך המישור התת-עורי הרחק מאתר הדקירה, ורוקנו את תוכן המזרק. כדי להכין את החיה להשתלת רקמת גידול אנושית, התחילו במתן תת-עורי של 350 µL של תמיסת סליין סטרילית באמצעות מחט במידה 27 gauge ואורך חצי אינץ' על מזרק של 1 mL לגב הצוואר של חיה שהורדמה, וזאת כדי לפצות מראש על כל אובדן נוזלים תוך-ניתוחי.לאחר הרדמת העכבר בשכיבה על פד מחומם מראש, יש לפרוש את גפיו של בעל החיים ולקבע אותן בעזרת סרט הדבקה למשטח הניתוח כדי למקסם את החשיפה של הבטן והבית שבתחתון (ventral abdomen and thorax). מקמו מנורה עם זכוכית מגדלת מעל בעל החיים ולאחר מכן סטריליזו את העור הגולח בבטן ובית החזה כפי שהודגם כעת. באמצעות מספריים חדים, בצעו חתך עורי תת-צלעי (subcostal) רוחבי דו-צדדי, ולאחר מכן הפרידו את שכבות השריר כדי לחשוף את הכבד כולו.בצעו תפר בעור מעל התהליך החרבני (xiphoid process) והדביקו אותו למסכת הפה באמצעות סרט הדבקה, כדי לאפשר חשיפה טובה יותר של הכבד והמבנים הסובבים אותו. לאחר מכן, ייצבו את הכבד באמצעות שני מקלוני צמר גפן (cotton tipped applicators) המונחים בסמוך ומאחורי הרקמה. לאחר מכן, השתמשו במספריים חדות כדי לחתוך את הרצועה המגלבנית (falciform ligament) המחוברת לאונה האמצעית של הכבד.יש לשחרר את האונה השמאלית של הכבד באמצעות מקלוני צמר ומיקום קשר רופף של תפר משי 5-0 סביב האונה. יש להסב את הקשר קרוב ככל האפשר לפדיקל הבי-פדיקל של האונה השמאלית, ולאחר מכן להדקו. לאחר מכן, השתמש במספריים כדי להסיר את האונה לטרלית לליגטורה, תוך השארת גדם קטן למניעת החלקת הקשר ודימום עוקב.בשימוש בטכניקה דומה, קשרו וכריתו את רוב האונה האמצעית של הכבד, ולאחר מכן השתמשו ב-surgicel ובלחיצה עדינה באמצעות מקלון צמר על פני השטח החתוכים של פרנכימת הכבד כדי להשיג המוסטזיס מלא. לבסוף, בצעו השתלה קסנוגרפטית תוך-כבדית של מקטע גידול או תאי גידול, או השתלה קסנוגרפטית תוך-כבדית של תאי גידול באמצעות הזרקה לספלנום, כפי שמוצג בסעיפים הבאים. עבור השתלה תוך-כבדית של מקטעי גידול, השתמשו בלהב סקלפל מספר 10 כדי לבצע תחילה חתך באורך ובעומק של 3 mm על פני השטח של הכבד.לאחר מכן, יש להניח מיד surgicel ולהפעיל לחץ עדין על מקום החתך למשך 60 עד 90 שניות להשגת המוסטזיס. כאשר הושגה המוסטזיס מלאה, השתמש בפינצטה עדינה כדי להניח פרגמנט של גידול בתוך החתך בכבד. לאחר מכן, הנח פיסת surgicel קטנה מעל החתך להשתלה של תאי גידול בכבד באמצעות הזרקה ישירה לכבד. הכנס מחט של מזרק אינסולין הטעונה בתרחיף תאי גידול אל הכבד החשוף, והקדם את הקצה מספר מילימטרים מעבר לאתר הדקירה לאורך המישור התת-קפסולרי.רוקנו בעדינות את תכולת המזרק והוציאו את המחט מהכבד. לאחר מכן, הניחו surgicel מעל אתר הדקירה והפעילו לחץ עדין באמצעות מקלון צמר כדי למנוע דליפה של תרחיף תאי הגידול ולהשיג המוסטזיס מלא עבור קסנוגרפט תוך-כבדי של תאי גידול באמצעות הזרקה לטחול. מקמו את העכברים במנח שכיבה צדית ימנית והשתמשו במספריים חדות כדי לבצע חתך תת-צלעי שמאלי באורך של one centimeter כדי להיכנס לחלל הפריטונאום.לאחר מכן, השתמש במקלון צמר כדי להזיז את הקיבה לכיוון הקרניאל (למעלה) אל צדו הימני של בעל החיים. כדי לחשוף את הטחול, טפל ברקמות השומן שסביבו באמצעות פינצטה עדינה לא טראומטית, הוצא את הטחול אל החתך והנח מקלון צמר מאחורי הטחול כדי לייצב את הרקמה. כעת, השתמש בתפר משי 5-0 כדי לקשור קשר pretti רפוי סביב הטחול, מעל הקוטב התחתון.החדירו מחט של מזרק אינסולין הטוענת תרחיף תאי גידול אל הקוטב התחתון של הטחול, והעבירו אותה מעבר למפלס הקשר הרפוי. לאחר מכן, רוקנו לאט את תכולת המזרק, הוציאו את המחט מהטחול והדקו את הקשר כדי למנוע דליפה של תרחיף התאים המוזרק. לבסוף, החזירו את הטחול אל חלל הפריטוניאום.בתמונה זו מוצגת דגימה של כריתת כבד מחולה עם HCC שלא קיבל טיפול עזר (adjuvant therapy) לגידול. הריבוע הלבן מציין חלק חיוני של הגידול סמוך להיקף, שהושג לצורך השתלת קסנוגרפט (xenograft). ניתן לנטר בקלות את ההתפתחות והצמיחה של קסנוגרפטים תת-עוריים באמצעות בדיקה יומית של העכברים המקבלים.לדוגמה, מוצגים המראה הטיפוסי של קסנוגרפט תת-עורי של HCC אנושי, הנבדל חזותית מהרקמות הסובבות אותו, והמראה ההיסטופתולוגי התואם של הגידול. ההיסטולוגיה של הגידול מדגימה את המאפיינים הטיפוסיים של HCC, כולל תאים דמויי הפטוציטים עם AIA גרעיני ויחס גרעין-ציטופלזמה גבוה, היעדר מסלולים פורטליים (portal tracks) וטרבקלות מעוותות עם עובי מוגבר של לוחיות הפטוצלוולר. בתמונות אלו מוצגים המראים הטיפוסיים של קסנוגרפט HCC אנושי תוך-כבדי שהושג מהשתלה ישירה של רקמת גידול לכבד, וכן זה שהושג מהזרקת תאי גידול לטחול, כאשר הגידולים האינטרא-פרנכימליים מסומנים על ידי החץ השחור בכל תמונה.סרט היסטולוגי זה דרך השוליים של השתלת xog תוך-כבדית מדגים את המאפיינים הטיפוסיים של HCC אנושי ואת כבד העכבר הנורמלי הסמוך לו. הטבלה מסכמת את שיעורי קליטת הגידול שהושגו לאחר השתלה של רקמות ראשוניות של קרצינומה הפטוצלולרית אנושית בעכברים עם חסר חיסוני. בשימוש בטכניקות השונות שהודגמו עבור כל שיטת השתלה, המכנה של שיעור קליטת הגידול משקף דגימה ייחודית של HCC אנושי.נתונים אלו מדגימים כי עבור רקמות HCC אנושיות ראשוניות, שיעורי השתבשות תת-עורית נמוכים יותר משיעורי ההשתבשות תוך-כבדית המושגים על ידי הזרקת תאי גידול תוך-טחולית או השתלה של פרגמנט גידול תוך-כבדית, וכי כריתה חלקית של הכבד (partial hepatectomy) נראית כמשפרת את ההשתבכות תוך-כבדית. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להשתמש בטכניקה סטרילית ולהשיג המוסטזיס מלא, שכן עכברים מדוכאי חיסון קטנים בני ששה עד שמונה שבועות רגישים לזיהומים ועשויים שלא לשרוד אפילו כמות קטנה של דימום לאחר הניתוח.

generation-subcutaneous-intrahepatic-human-hepatocellular-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים בדיקה ליצירת מודל עכבר xenograft אנושי. עכבר מדוכא חיסון מוזרק עם cyclophosphamide כדי לגרום לדלדול תאי החיסון. תאי גידול שמקורם במטופל מעורבבים עם תאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים (PBMCs) בהידרוג'ל מוזרקים תת עורית לעכבר, ויוצרים גידול עם תאי T חודרים.

טכניקה ליצירת מודל עכבר קסנוגרפט אנושי המושתל על ידי PBMC אנושי

ההתפשטות הגרורה של הסרטן היא הסיבה העיקרית למוות הקשורים לסרטן. אנו מספקים תיאור מעמיק של מתודולוגיה ניתוח ההישרדות שלנו להקמת מערכת "חולה-כמו" orthotopic מודל עכבר syngeneic לחקר המנגנונים של גרורות בגידולים מוצקים איבר.

&quot;מטופל כמו&quot; Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה

כאן, אנו מציגים מודל כבד עכבר אנושי חדש שנוצר בעכברי נוקאאוט של תאים מתווכים של קולטן רעלן Alb (TRECK)/SCID לאחר השתלת תאי גזע כבד אנושיים לא בשלים וניתנים להרחבה.

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל אנושי העכבר chimeric הכבד של היפרכולסטרולמיה משפחתית באמצעות hepatocytes נגזר תאי גזע pluripotent המושרה אנושי. זהו מודל ערך בדיקה טיפולים חדשים עבור היפרכולסטרולמיה.

מודל אנושי העכבר Chimeric הכבד היפרכולסטרולמיה משפחתית באמצעות Hepatocytes נגזר תאי גזע Pluripotent המושרה

פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה להקמת עכברים הומניזציה עם מערכת החיסון האנושית ותאי הכבד. השני עכברים לקויה מחדש השיגה באמצעות הזרקה התוך הטחול של האדם hepatocytes ו CD34+ תאי גזע המטרופאיות רגישים לנגיף הכשל החיסוני האנושי-1 זיהום ונזק הכבד לכידה כפי שנצפתה ב . חולים נגועים...

הקמתה של הומניזציה Dual-TK-חעוגה מודל העכבר עבור הנגיף הקשור HIV פתוגנזה

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

אורתופון האדם גרורות הכבד uveal מלנומה מבע מודלים העכבר נוצרו באמצעות שיטות כירורגי אורתוקפית עם קטע הגידול המטופל נגזר וטכניקות הזרקת מחט עם הגוף האנושי תרבותי שורות מלנומה.

הדור של מלנומה האדם Uveal האנושי פלטפורמת Xהשתל בעכברים חיסוני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת קסנושתרים אורתוטופיים של קרצינומה הפטוצלולרית עם ובלי קשירת עורק הכבד ומבצעים הדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים (PET) של היפוקסיה גידולית באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).

הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית

אורגנואידים הנוצרים מגידולי חולים מוזרקים אורתוטופית לכבד העכבר. כריתה של רקמת כבד לא גידולית מובילה לסביבה רגנרטיבית ברקמת הכבד בה נמצא הגידול.

מודל קסנוגרפט אורגנואיד שמקורו בחולי סרטן הכבד כדי לחקור את ההשפעה של התחדשות הכבד על צמיחת הגידול

למד ליצור קסנוגרפטים תת-עוריים ותוך-כבדיים של קרצינומה hepatocellular אנושית בעכברים בעלי מערכת חיסון חלשה. שיטה זו מאפשרת חקר ביולוגיית גידולים ותגובות לטיפולים חדשניים במודל ריאליסטי.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

גלה סרטונים נוספים