Name: ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: למדו לזהות פגמים התנהגותיים בזחלי דג הזברה לאחר חשיפה לרעלנים או תרופות באמצעות מערכת הדמיה אוטומטית בעלת תפוקה גבוהה. השיטה מאפשרת ניתוח מהיר ויעיל של התנהגויות מורכבות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים שון Pelkowski לסיוע באופטימיזציה של assay התנהגותית. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות ילד והתפתחות אדם, R01 HD060647 והמכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה, F32 ES021342 וR03 ES017755.

1. אוסף של עוברי דג הזברה וגיוס זחלים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות זכוכית פיירקס עם דשא &quot;מזויף&quot; (עשוי מחוט ירוק) (איור 1) צריכים להיות מוכנסות למכלי עם שחר ועזבו בלמשך שעתיים כדי לאסוף עוברי דג הזברה. מנות הזכוכית המכילות את העוברים צריכים להיות שפך על מסננת כף יד ולשטוף עם מים deionized. את העוברים ואז צריכים להיות מבוגרים במי ביצה. המים הביצה מכילים 60 מ&quot;ג / ליטר של אוקיינוס ​​מיידי במי deionized ו0.25 מ&quot;ג / ל &#39;של מתילן כחול, המשמש כמעכב עובש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם להשערה של הניסוי הבודד, ניתן לטפל בעוברים באופן מיידי או במהלך שלבים מסוימים של פיתוח באמצעות toxicants או תרופות. את toxicants והתרופות בדרך כלל מומסים DMSO (בריכוז X 1,000) וצריכים להיות מדולל נוסף ישירות במדיום המים הביצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך טיפול עוברי וזחל עם תרופות או toxicantים, יכולים להיות שוכנו הזחלים והעוברים בצלחות פטרי עמוקים בצפיפות של כ 50-60 זחלים לכל 50 מ&quot;ל עד ניתוחי ההתנהגות ב7 DPF (פתרון מים ביצה צריך להיות שונה לפחות בכל יום אחר, כדי למנוע התפתחות של פטרייה / חיידק מעוברים מתים). </li></ol> 2. הכנת תבניות לניתוח התנהגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במיוחד התפתח תבניות פלסטיק שבם נמדד 11.7 ס&quot;מ X 7.6 ס&quot;מ X 5 מ&quot;מימ מותאמים אישית שנבנו בתוך הבית. את התבניות יש צורך ליצור נתיבים באמצעות agarose שהוא שפך לתוך צלחות פלסטיק גם בודדות מThermo Scientific. מדד הצלחות גם אחת 12.4 ס&quot;מ X 8.1 ס&quot;מ X 1.2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את התבניות מכילות חמישה נתיבים שבו הצדדים הם בזווית של 60 מעלות. הנתיבים בתבניות הם 3.5 מ&quot;מ גבוה עם בסיס של 18 מ&quot;מ בחלקו העליון שהוא הרחב ביותר ואילו הרוחב התחתון הוא 14 מ&quot;מ. יש פער בין 4 מ&quot;מ נתיבים בתבנית (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את הנתיבים לשפוך 50 מ&quot;ל של agarose נמס (0.8% agarose בdeionizeמים D עם 60 מ&quot;ג / ליטר מיידי אוקיינוס) בצלחת גם יחידה. אז העובש צריך להיות ממוקם באיטיות על גבי agarose הנוזלית כדי לחסל כל היווצרות בועה וניתן להסיר כאשר agarose מתקררת (שלוקח בערך 45 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתיבי agarose צריכים להתבצע לא לפני יום אחד לפני הניסוי התנהגותי הוא להיות לרוץ (כדי למנוע התייבשות agarose) יכולים להיות מאוחסנים הנתיבים בטמפרטורת חדר עם את המכסים על הכלים עד בערך 36 שעות. נתיבי agarose יש להשתמש רק בניסוי אחד ולאחר מכן צריכים להיות מושלך. </li></ol> 3. לכידת תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עד 20 זחלים יכולים להיות ממוקמים בכל מסלול של הצלחות. בדרך כלל 5 זחלים לכל נתיב המשמשים כדי להקל על המעקב מדויק ביותר של מהירות השחייה ולהפחית את מספר הזחלים שיש צורך לניסוי. יכולות להיות מלאות בסמטאות במי ביצה עם או בלי תרופות או toxicants בהתאם לניסוי. עם זאת, מסלולים לא צריכים להיות Filled את כל הדרך עד שהם ממוקמים בארונות ההדמיה; זה ימנע הצפה. לעקביות, הזחלים צריכים תקופת התאקלמות של עשר דקות אחרי שהם ממוקמים בתבניות agarose ואת מיקומו על גבי מסך המחשב הנייד. יעילות העברת הזחלים מצלחת פטרי לנתיב agarose תעזור להפחית את לחץ זחלים. זה קל כשהם שוכנו בזחלי טנקים רדודים או צלחות פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את ארונות ההדמיה כוללים מצלמה דיגיטלית Canon משמשת לצילום זמן לשגות ומחשב נייד. המצלמה צריכה להיות ממוקמת בחלקו העליון של הארון וכיוון לעבר לחלקו התחתון של הארון שבו מחשב נייד מסך 15.6 אינץ&#39; צריך להיות ממוקם עם המסך כלפי מעלה (איור 3). ארבע צלחות צריכים להיות ממוקמות ביד ישירות על גבי מסך המחשב הנייד. בשלב זה ניתן עקף את הנתיבים במי ביצה או טיפול כימי, כך שהוא ברמה עם החלק העליון של המסלול (כדי לחסל את הצללים בשולי Lanes בתמונות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצגת PowerPoint משמשת כגירוי מרתיע לזחלים. בכדורים האדומים הנעים בעבר הוצגו בדג הזברה זחלים 6 או 12 צלחות רב גם 15,17,18. PowerPoint הנוכחי מתחיל עם רקע לבן ריק במשך 15 דקות, ואחרי 15 דקות של בר אדום נע במחצית העליונה של הצלחת (איור 4). על מנת למנוע התחממות יתר של הזחלים, עדיף לרכוש מחשב נייד עם מסך טמפרטורה שאינו עולה מעל 28 מעלות צלזיוס כדי למנוע אידוי של הנוזל בתוך נתיבי agarose, זמן ההדמיה המקסימאלי צריך להיות כל הזמן מתחת לשעה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצלמה הדיגיטלית צריכה להיות מתוכנת לצילום זמן לשגות, לצלם כל 6 שניות לסכום כולל של 300 תמונות לכל ניסוי. עם זאת, ניתן להתאים את התדירות ואת האורך בהתאם לניסוי והכימות התנהגותית. בכל הפעמים האחרונות הרחבנו ההדמיה הועסקו באמצעות מרווחי זמן בין כל תמונה. Camerניתן להגדיר ברזולוציה נמוכה יותר עבור הדמיה במהירות וידאו (30 פריימים לשנייה). אמנם הרזולוציה הנמוכה מגבילה את ההקלטות לצלחת multiwell אחת, את קלטות הווידאו מתאימות לאירועי שחייה מהירות הדמיה 15. </li></ol> 4. ניתוח תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את התמונות יש לפתוח עם ImageJ ולהשתמש בו עם מאקרו שנכתב במיוחד בבית. מאקרו באופן אוטומטי מחלק את ערוצי הצבע, כך שניתן להסיר את הצבע האדום, מחסיר את הרקע, חל סף, ומזהה את הזחלים על ידי ניתוח חלקיקים. מאקרו העדכני ביותר עבור חמישה ניתוח הזחל ליין הוא Zebrafish_macro25k. השתמש בהנחיות במאקרו כדי להגדיר מספר התמונות, צבע שיורד, סף תמונה, וכו &#39; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כל התמונות מנוהלים באמצעות מאקרו ImageJ, קובץ יוצג תוצאות ויכיל x, y קואורדינטות של הזחלים פרטניים לכל תמונה, יחד עם מספר התמונה ומספר המסלולים. </p&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> קובץ התוצאות צריך להישמר בפורמט אקסל ומסודר על בסיס רקע ריק לעומת רקע שורה מרגשת ולאחר מכן את המספר היטב. תבנית Excel צריכה להיות בשימוש שיש משוואות שנבנו שבקובעו באופן אוטומטי את המיקום של זחלים בבארות, מרחק בין זחלים, מהירות תנועה, ואת סכום של מנוחה. התבנית הנוכחית של Excel ביותר נוצרה במעבדה 25ib Creton, אשר זמינה על פי דרישה. גרפים מראים קבוצות טיפול שונות צריכים להיות מובנים בתוך גיליון Excel יחד עם מבחני t להשוואה בין קבוצות טיפול ובקרה. ניתן לבצע ניתוח סטטיסטי נוסף באמצעות SPSS. </li></ol>

<ol><li>Gerlai, R., Lahav, M., Guo, S., Rosenthal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drinks+like+a+fish%3A+zebra+fish+%28Danio+rerio%29+as+a+behavior+genetic+model+to+study+alcohol+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Biochem.+Behav%22%5BJournal%5D)">Drinks like a fish: zebra fish (Danio rerio) as a behavior genetic model to study alcohol effects.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 67, 773-782 (2000).</li>
<li>Selderslaghs, I. W. T., Hooyberghs, J., De Coen, W., Witters, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+in+zebrafish+embryos%3A+A+new+method+to+assess+developmental+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity in zebrafish embryos: A new method to assess developmental neurotoxicity.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32, 460-471 (2010).</li>
<li>Norton, W., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+zebrafish+as+a+model+organism+for+behavioural+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics.</a> BMC Neuroscience. 11, 90(2010).</li>
<li>Levin, E. D., Cerutti, D. Ch. 15. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLevin%2C+ED+%22Methods+of+behavioral+analysis+in+neuroscience%22">Methods of behavioral analysis in neuroscience</a>. Buccafusco, J. J. , CRC Press. (2009).</li>
<li>Kimmel, C., Ballard, W., Kimmel, S., Ullmann, B., Schilling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. , 203-253 (1995).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 5 edn, Univ of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Kokel, D., Bryan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+behavior-based+identification+of+neuroactive+small+molecules+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Rapid behavior-based identification of neuroactive small molecules in the zebrafish.</a> Nat. Chem. Biol. 6, 231-237 (2010).</li>
<li>Rihel, J., Prober, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Behavioral+Profiling+Links+Drugs+to+Biological+Targets+and+Rest%2FWake+Regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Behavioral Profiling Links Drugs to Biological Targets and Rest/Wake Regulation.</a> Science. 327, 348-351 (2010).</li>
<li>Cachat, J., Stewart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+behavioral+and+endocrine+responses+to+novelty+stress+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measuring behavioral and endocrine responses to novelty stress in adult zebrafish.</a> Nat. Protoc. 5, 1786-1799 (2010).</li>
<li>Cachat, J., Stewart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Neurophenotyping+of+Adult+Zebrafish+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Neurophenotyping of Adult Zebrafish Behavior.</a> PLoS ONE. 6, e17597(2011).</li>
<li>Sledge, D., Yen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+duration+of+exposure+for+developmental+chlorpyrifos-induced+neurobehavioral+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Critical duration of exposure for developmental chlorpyrifos-induced neurobehavioral toxicity.</a> Neurotoxicol. Teratol. 33, 742-751 (2011).</li>
<li>Stewart, A., Wu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+modulation+of+anxiety-like+phenotypes+in+adult+zebrafish+behavioral+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neuropsychopharmacol.+Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Pharmacological modulation of anxiety-like phenotypes in adult zebrafish behavioral models.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 35, 1421-1431 (2011).</li>
<li>Eddins, D., Cerutti, D., Williams, P., Linney, E., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+provide+a+sensitive+model+of+persisting+neurobehavioral+effects+of+developmental+chlorpyrifos+exposure%3A+comparison+with+nicotine+and+pilocarpine+effects+and+relationship+to+dopamine+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish provide a sensitive model of persisting neurobehavioral effects of developmental chlorpyrifos exposure: comparison with nicotine and pilocarpine effects and relationship to dopamine deficits.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32, 99-108 (2010).</li>
<li>Emran, F., Rihel, J., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavioral+assay+to+measure+responsiveness+of+zebrafish+to+changes+in+light+intensities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A behavioral assay to measure responsiveness of zebrafish to changes in light intensities.</a> J. Vis. Exp. (20), e923(2008).</li>
<li>Pelkowski, S., Kapoor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+high-throughput+imaging+system+for+automated+analyses+of+avoidance+behavior+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A novel high-throughput imaging system for automated analyses of avoidance behavior in zebrafish larvae.</a> Behav. Brain Res. 223, 135-144 (2011).</li>
<li>Richendrfer, H., Pelkowski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+developmental+toxicity+by+automated+analyses+of+behavior+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Unpublished+observations%22%5BJournal%5D)">Assessment of developmental toxicity by automated analyses of behavior in zebrafish larvae.</a> Unpublished observations. , (2012).</li>
<li>Richendrfer, H., Pelkowski, S., Colwill, R. M., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+edge%3A+pharmacological+evidence+for+anxiety-related+behavior+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the edge: pharmacological evidence for anxiety-related behavior in zebrafish larvae.</a> Behav. Brain Res. 228, 99-106 (2012).</li>
<li>Richendrfer, H. A., Pelkowski, S., Colwill, R., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+sub-chronic+exposure+to+chlorpyrifos+reduces+anxiety-related+behavior+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Developmental sub-chronic exposure to chlorpyrifos reduces anxiety-related behavior in zebrafish larvae.</a> Neurotoxicol. Teratol. , (2012).</li>
<li>Egan, R. J., Bergner, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behav. Brain Res. 205, 38-44 (2009).</li>
<li>Colwill, R., Creton, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aColwill%2C+R+%22Zebrafish+protocols+for+neurobehavioral+research%22">Zebrafish protocols for neurobehavioral research</a>. Kalluef, A., Stewart, A. 66, Springer Protocols. (2012).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

בעוד אנו שיפור assay התנהגותי הרומן שלנו ללא הרף, זה תמיד היה שימושי לזיהוי של הימנעות והתנהגות thigmotaxis בזחלי דג הזברה 15. ניסויים רבים בוצעו כדי לייעל את התוצאות של assay, כגון צבע של גירוי בשימוש, מספר האידיאלי של זחלים לכל נתיב, ואורך של assay התנהגותית. בעבר, השתמשנו בצלחות רב היטב (עם 6 או 12 בארות) 15,17,18. עם זאת, לאחרונה יצרנו את תבנית נתיב הרומן ליצור מרחב שחייה גדול יותר לזחלים ומאפשרים לנו לאסוף מספר גדול יותר של אמצעים התנהגותיים בassay אחת 16 (איור 5). שינויים נוספים כוללים וריאציות של שהעל&quot;ל המוצג PowerPoint (תנועה או אורך שונים של assay) ואת הגודל של הנתיבים בשימוש (יש לנו גם תבניות לסמטאות צרות יותר). נכון לעכשיו, מערכת האוטומטית של תפוקה גבוהה זה היא ייחודית ביכולתו למדוד מגוון רחב של התנהגויות בzebrזחלי afish באותו הזמן, כגון מהירות, הימנעות, קרבה לזחלים אחרים, וthigmotaxis בצלחות רב נתיבים. ניתן להשיג תוצאות במהירות ובמספר גדול של זחלים ניתן לנתח בזמן ההדמיה. המערכת היא גם זולה לבנות ומהירה וקלה להתקנה. מגבלה של שיטה זו היא שלא ניתן להעריך את תנועות 3-D בזחלי דג הזברה. מערכות אוטומטיות העוקבות אחר דג הזברה מבוגר שיש לו את יכולת 3-D וניתן לזהות מגוון רחב יותר של התנהגויות כגון תנועה למעלה או למטה בעמודת המים 10,19. מגבלה נוספת היא שמערכת ההדמיה שלנו כיום אינה מותאמת לניתוחי תפוקה גבוהה במהירות וידאו. ההדמיה מהירות וידאו אפשרית בעת הגדרת המצלמה לרזולוציה נמוכה יותר 15, אבל זה מגביל את הניתוח לצלחת אחת. בשימוש בשיטה חדש שנוצרה &quot;הנתיב&quot;, כמה חלקים של assay צריכים להיות מוצאים להורג באופן מדויק. כאשר מניחים את הזחלים בtהוא נתיבים, זה הוא קריטי כדי לוודא את רמת הנוזל היא מאוד רדודה עד שהצלחות ממוקמות על גבי מסך המחשב הנייד. אם הנתיבים מלאים מדי של נוזל, הזחלים יהיו להימלט אל שולי הצלחת. בנוסף, בעת הכנסת התבנית לתוך agarose, יש להקפיד להוריד את התבנית באיטיות רבה. אם העובש מוכנס במהירות רבה מדי, בועות יהוו בagarose ותזוהינה על ידי מאקרו J התמונה כזחלים נוספים. מומלץ כי אם יש לי נתיבי agarose אפילו כמה בועות, עדיף לעשות חדשות. בעתיד, ברצוננו לייעל את assay ההתנהגות שלנו לנתח התנהגויות אחרות מורכבות כגון למידה בזחלי דג הזברה ולבחון כיצד למידה יכולה להיות מושפעת מחשיפה לרעלים ותרופות בשלבי פיתוח מוקדם. אנחנו עובדים כרגע על מבחני שעשויות להיות שימושית לניתוח התנהגות למידה בה את התוצאות התנהגותיות עשויות להקל על קביעה אילו אזורים במוח הםמושפע toxicants או תרופות מסוימים במהלך פיתוח. מבחני אוטומטיים פותחו למדידת למידת התנהגויות בדג זברת זחלים 20 ומבחנים אלה עשויים להיות amendable להקרנת תפוקה גבוהה על ידי שימוש בתגובת ההימנעות החזקה בצלחות רב נתיבים. אנו מציעים כי התנהגות assay זה יכול לשמש במחקרים עתידיים לבדיקת ההשפעות התפתחותיות של מספר רב של תרופות וtoxicants. מחקרים מסוג זה מספקים שפע של מידע על גורמי סיכון ספציפיים ולתרום לקביעת הנחיות בטיחות ובריאות טובות יותר לנשים בהריון וילדים.

דג הזברה הופכת מודל פופולרי למדעים גנטיים, התפתחותי והתנהגותי 1-4. הם בוקעים מchorions על ידי לאחר הפריה ימים 2-3 (DPF), לפתח באופן מלא על ידי איברים מתפקדים DPF 4-5, ולהציג מספר גדול של התנהגויות של 7 DPF 5,6. זחלי דג הזברה מתאימים בצורה אידיאלית לניתוחי תפוקה גבוהה בגלל הגודל הקטן שלהם 7,8. תוכנה זמינה מסחרי עבור ניתוחים אוטומטיים של התנהגות בדג זברת הזחל ומבוגר 9-14. עם זאת, תוכנה זו יכולה להיות יקרה ויש לו אפשרויות מוגבלות למדידת התנהגויות מורכבות של זחלי דג הזברה בצלחות רב כן. יצרנו מערכת הדמיה תפוקה גבוהה רומן שהיא זול להקמה ויכול לכמת את מספר ההתנהגויות שונות ב7 זחלי דג הזברה DPF 15,16. המערכת מאפשרת לנו לבחון במהירות וביעילות הפרעות התנהגותיות עדינות לאחר חשיפה עוברית למספרתרופות וtoxicants סביבתי 16-18. המערכת נבנתה באמצעות ארונות מעץ, שבית מצלמה דיגיטלית בחלק העליון של הארון. המצלמה פונה כלפי מטה אל החלק התחתון של הארון שבו מחשב נייד ממוקם עם המסך כלפי מעלה 15. זמן לשגות הדמיה משמשת כדי ללכוד את המיקום של הזחלים בסמטאות. זחלים יכולים להיות שוכנו בעד ארבע צלחות רבת או רב גם מסלולים אשר ממוקמות על גבי מסך המחשב הנייד. אנו משתמשים במצגת PowerPoint כגירוי מרתיע כדי שהזחלים להגיב על ידי מתרחק (הימנעות) ושוחה לכיוון הקצה (thigmotaxis) 15,17. את התמונות מיובאות לImageJ הבמשמש מאקרו אוטומטי לפצל את ערוצי הצבע, לחסר רקע, ולהחיל את סף לזהות זחלי פרט. קואורדינטות רשומות לכל זחל בכל תמונה ויכולות להיות מוכנסת לתוך קובץ Excel שבו אנו משתמשים כדי לכמת והימנעות thigmotaהתנהגות xis, דגים למרחק דגים, לשחות במהירות, וסכום של מנוחה 16.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>Instant Ocean</td><td>That Pet Place</td><td>198262</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Fisher</td><td>BP1356-100</td><td></td></tr><tr><td>Methylene Blue</td><td>That Pet Place</td><td>214325</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr>One <tr><td>Well plates</td><td>Fisher</td><td>12-565-493</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה דיגיטלית</td><td>Canon</td><td>EOS Rebel T1i</td><td></td></tr><tr><td>ארונות הדמיה</td><td>מגדלי</td><td></td><td></td>WoodCraft</tr><tr><td>מחשבים ניידים</td><td>Acer Aspire</td><td>כל אחד טוב כל עוד יש לו 15.6 אינץ'. מסך LCD ברזולוציה של 1366 x 768 פיקסלים ובהירות של 220 cd/m2.</td><td></td></tr><tr><td>עדשת מצלמה</td><td>Canon</td><td>EF-S 55 - 250 מ"מ f/4.0 - 5.6 IS עדשת</td><td></td>זום</tr><tr><td>מפזר פלסטיק</td><td>Pendaflex</td><td>52345</td><td></td></tr><tr><td colspan="4" >Software</td></tr><tr><td>PowerPoint 2010</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><<td>a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/" target="_blank">http:// rsb.info.nih.gov/ij/</א></td></tr><tr><td>אקסל 2010</td> תוכנה סטטיסטית <td>של מיקרוסופט</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>SPSS 20</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

יצרנו מערכת הדמיה תפוקה גבוהה חדשנית לניתוח התנהגות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת בצלחות רב נתיבים. מערכת זו מודדת התנהגויות ספונטניות והתגובה לגירוי מרתיע, אשר מוצגת לזחלים באמצעות מצגת PowerPoint. את התמונות שתועדו מנותחות עם מאקרו ImageJ, אשר באופן אוטומטי מחלק את ערוצי הצבע, מחסיר את הרקע, וחל סף לזהות מיקום זחלים בודד בסמטאות. אז אנחנו יכולים לייבא את הקואורדינטות לגיליון Excel לכמת מהירות השחייה, העדפה לקצה או בצד של הנתיב, התנהגות מנוחה, thigmotaxis, מרחק בין זחלים, והתנהגות הימנעות. שינויים קלים בהתנהגות מזוהים בקלות באמצעות המערכת שלנו, מה שהופך אותו לשימושי עבור ניתוחים התנהגותיות לאחר חשיפה לרעלים או תרופות סביבתיים.

במבחנים הקודמים שלנו, תוך שימוש בגירוי מרתיע הכדור המקפץ, זחלי סוג בר שהמטופל מגיבים לכדור לנוע על ידי שהלך לשחות ב( התנהגות ההימנעות) וגם לכיוון הקצוות (התנהגות thigmotaxis) 15 כן. מאוחר יותר אנו מאשרים כי התנהגות thigmotaxis בassay זה היא מדד של התנהגות הקשורה לחרדה בזחלי דג הזברה 17. היו הבדלים משמעותיים בתנועת הזחלים הרחק מכדור וההעדפה לקצה בהשוואה לרקע הלבן הריק. התנהגויות אלו גם אושרו בבדיקה החדשה שלנו באמצעות הסרגל האדום המרגש והם אפילו יותר חזקים 16. יתר על כן, כעת אנו יכולים לדגום מספר גדול יותר של התנהגויות בassay בודד כולל מהירות השחייה, מנוחה, העדפה לסוף או בצד של הבאר, ומרחק בין דגים (איור 5). זחלי בקרה גדלו במי ביצה מראים העדפה מוגברת להיות למטה בצלחת ועל קצה השבילחרה שהם מוצגים עם גירוי מרתיע (נע פס אדום). תוצאות דומות מתקבלות כאשר זחלים גדלים במי ביצה המכילים 1 מיקרוגרם / מיליליטר DMSO, ממס המשמש בדרך כלל להמסת תרופות וtoxicants שונים כ1,000 פתרונות מניות X. נציג תוצאות מוצגות באיור 5 בזחלי מטופלים עם ביצת מים וDMSO (כקבוצת ביקורת) וריכוזים שונים של חומרי הדברה organophosphate הנפוצים במזונות שאינם אורגניים. התוצאות המוצגות הן דגימה מניסוי אחד. עם זאת, כאשר חזרו, התוצאות מצביעות על כך שמהירות השחייה והתנהגות thigmotaxis משתנה על ידי ריכוזים נמוכים של חומרי ההדברה organophosphate, המחקים את הרמות בצריכת מזון אנושית 18. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig1.jpg" /> איור 1. מגשי אוסף. מנות פיירקס זכוכית משמשים לאיסוף דוארmbryos מהטנקים הדגים הבוגרים. מכסים מצלחות פיירקס נחתכו ונוסף עם רשתות פלסטיק וחוט ירוק שנתפרו על גבי הרשתות בפלסטיק. זה יוצר אווירה פורה לדג הזברה המבוגר על ידי חיקוי הסביבה הטבעית. <img alt="איור 2" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig2highres.jpg" fo:width="6in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig2.jpg" /> איור 2. תבנית פלסטיק ונתיבי agarose. א) העובש מוצג בצד השמאל. 0.8% agarose הוא שפך לתוך צלחת אחת היטב; העובש מוכנס לאט ולאחר מכן הוסר כאשר agarose מתקררת ב &#39;) את הצלחת על ימין מראה את הנתיבים שנוצרו בagarose ידי תבנית הפלסטיק.. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig3.jpg" /> איור 3. ארונות הדמיה. ארונות הדמיה היו specially שנבנה במעבדה שלנו ומשמש לניתוחים התנהגותיים תפוקה גבוהה. מצלמה 15 מגה פיקסל דיגיטלית הייתה מחוברת לחלקו העליון של הארון פונה כלפי מטה על מנת לאסוף תמונות זמן לשגות של הזחלים בצלחות multilane ממוקמות על גבי המסך של מחשב נייד. בין הצלחות והמסך יש מפזר פלסטיק שמשמש למניעת דפוסי moiré בתמונות שנאספו. <img alt="איור 4" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig4highres.jpg" fo:width="4.5in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig4.jpg" /> איור 4. רקע ריק וגירוי מרתיע-PowerPoint. זוהי PowerPoint הנוכחי המשמש כדי לעורר שינויים התנהגותיים בזחלי דג הזברה. הוא מספק בדלים התנהגותיים בין חזקים) רקע ריק ו-B) בר האדום המרגש. <img alt="איור 5" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig5highres.jpg" fo:width="5.5in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig5.jpg" /> איור 5. התנהגויות לכמת בassay התפוקה גבוהה. דוגמה להתנהגויות שהם לכמת מassay ההתנהגות שלנו בתוך גיליון Excel שאנו משתמשים עבור x, y קואורדינטות של הזחלים. את הסורגים הלבנים מראים מידע מזחלים שנחשפו לרקע ריק ואת הקווים האדומים מראים מידע מהזחלים נחשפו לבר המרגש האדום ב- PowerPoint. הגרפים מראים את המדידות שניתן להשיג מניתוח התנהגות) אחוז הזחלים למטה בנתיב &#39;, ב&#39;) אחוז הזחלים בסוף השביל, C) אחוז הזחלים בקצה השביל, ד) מרחק בין דגים (מ&quot;מ), E) לשחות מהירות של אחוז שאר זחלי הזחלים (מ&quot;מ / דקה), F). בגרפים מוצגים, הנתונים הוא מtreatmאף אוזן גרון של זחלים עם DMSO שליטה וכמה ריכוזים של חומרי הדברה החל .001-0.1 מיקרומטר (רמות הנפוצות בתזונת האדם). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50622/50622fig5large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a>

המעבדה שלנו פיתחה מערכת שהיא שימושית לצורך זיהוי של כמה התנהגויות שונות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת הדמיה אוטומטית תפוקה גבוהה רומן. המערכת יכולה לשמש לאיתור שינויים עדינים בהתנהגות לאחר הזחלים שנחשפו לרעלים או תרופות סביבתיים.

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לזהות פגמים התנהגותיים בזריקים של דגי זברה לאחר טיפול בחומרים רעילים או בתרופות. דבר זה מושג תחילה על ידי איסוף וטיפול בעוברי הדגים או בזריקים באמצעות כימיקלים עד לשבעת ימי הפיתוח הראשונים. השלב השני הוא יצירת נתיבי שחייה עבור ה-agro באמצעות תבניות שתוכננו במיוחד.בשלב הבא, הזחלים שעברו טיפול מועברים לנתיבי ה-agros לצורך ניתוח התנהגותי באמצעות צילום time-lapse. השלב הסופי הוא ייבוא התמונות לתוכנת Image J ושימוש במאקרו ייעודי שנכתב במעבדה כדי לאסוף נתוני קואורדינטות XY של הזחלים בנתיבים. בסופו של דבר, מערך הבדיקה ההתנהגותי בעל התפוקה הגבוהה משמש לזיהוי הבדלים בהתנהגות הימנעות והתנהגות ציר figma, כמו גם במהירות השחייה ובמנוחה בין קבוצות הטיפול.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון אלו הזמינות מסחרית, הוא היכולת להשתמש בשיטה שלנו כדי לצפות בהתנהגויות מורכבות יותר. כמו כן, היא זולה לבנייה וקלה להקמה. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום מדעי המוח ההתנהגותיים, כגון השפעת רעלים על התפתחות המוח וההתנהגות במהלך חשיפה עוברית מוקדמת.השיטה יכולה לספק גם תובנות לגבי פגמים מוחיים עדינים בבני אדם, שאינם ניתנים לגילוי באמצעות בדיקות רעילות שגרתיות אחרות. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו עשויים להתקשות, כיוון שתפיסת הזחלים עלולה להיות מאתגרת. הדגמה חזותית של השיטה היא קריטית, שכן לשלבים יש עקומת למידה, מכיוון שהפרוטוקול כולל מערכות שנבנו באופן מותאם אישית.כדי להתחיל בהליך זה, הכניסו למכלי הדגים צלחות זכוכית מסוג Pyrex עם דשא מלאכותי העשוי מצמר ירוק. עם עלות השחר, השאירו את הצלחות במכלים למשך שעתיים לצורך איסוף עוברי zebrafish. שפכו את תכולת צלחות הזכוכית המכילות את העוברים למסננת ידנית שנשטפה במים דה-יוניים.בשלב הבא, גדלו את העוברים במי ביצים המכילים 60 milligrams per liter של instant ocean במים דה-יוניים ו-0.25 milligrams per liter של methylene blue, המשמש כמעכב עובש. ניתן לשכן את העוברים בריכוז של 50 עד 60 לרבות ל-50 milliliters, או במיכלי גידול גדולים יותר עד שהעוברים יהיו מוכנים לטיפול בחומרים רעילים. בהתאם להשערה של כל ניסוי, ניתן לטפל בעוברים באופן מיידי או במהלך שלבי התפתחות ספציפיים באמצעות חומרים רעילים או תרופות, המומסים בדרך כלל ב-DMSO ולאחר מכן מדוללים עוד יותר ישירות בתווך מי הביצים.הצבע הכחול משמש למטרות הדגמה בווידאו במהלך הטיפול בעוברים ובזחלים. ניתן לשמור את הזחלים והעוברים בצלחות פטרי עמוקות בצפיפות של כ-50 עד 60 זחלים ל-50 milliliters עד לניתוח ההתנהגותי שבעה ימים לאחר ההפריה; יש להחליף את תמיסת מי הביצים לפחות בכל שני ימים כדי למנוע צמיחה פטרייתית או חיידקית מעוברים מתים. תבניות פלסטיק יוצרו כדי ליצור נתיבים באמצעות agarose, שנשפך לתוך פלטות פלסטיק בעלות באר בודדת מבית Thermo Scientific.התבניות מכילות חמישה נתיבים שדפנותיהם זוויתיות ב-60 מעלות. עיינו בפרוטוקול הטקסט המלווה סרטון זה לקבלת מימדי התבניות והלוחות. ראשית, הכינו את ה-aros על ידי המסה של 0.8% aros במים דאיונזים עם 60 milligrams per liter של instant ocean.בשלב הבא, צרו את הנתיבים על ידי מזיגת 50 milliliters של agarose מומס לתוך פלטת בארות בודדת. לאחר מכן, הניחו באיטיות רבה את התבנית מעל ה-agarose הנוזלי כדי למנוע היווצרות בועות. הסירו את התבנית כאשר ה-agarose התקרר.ניתן לשמור את נתיבי ה-aros בטמפרטורה של החדר כאשר המכסים על הצלחות למשך עד 36 שעות. לצורך ניתוח התנהגותי בתפוקה גבוהה, מוכנות ארונות דימוי עם מצלמה דיגיטלית בעלת 15 מגה-פיקסלים המחוברת לחלק העליון של הארון ופונה כלפי מטה אל תחתית הארון. מחשב נייד עם מסך בגודל 15.6 אינץ' ממוקם כאשר המסך פונה כלפי מעלה.על מנת למנוע התחממות יתר של הזחלים, מומלץ להשתמש במחשב נייד שטמפרטורת המסך שלו אינה עולה על 28 °C. הניחו מפזר אור (diffuser) מפלסטיק על גבי מסך המחשב הנייד, ועליו הניחו את צלחות האגרוס. המפזר ימנע הופעת תבניות נוספות בתמונות שנאספו.כדי להתחיל בצילום, העבירו בזהירות את הזחלים מכלית הפטרי לסבב ה-agros כדי לסייע בהפחתת הלחץ המופעל על הזחלים. ניתן להניח עד 20 זחלים בכל נתיב, אך בדרך כלל משתמשים בחמישה זחלים לנתיב כדי לאפשר את המעקב המדויק ביותר אחר מהירות השחייה ולהפחית את מספר הזחלים הדרושים לניסוי. מלאו את הנתיבים במי ביצים, עם או בלי תרופות או רעלים, בהתאם לניסוי. אין למלא את הנתיבים עד הסוף עד להצבתם בארונות הצילום כדי למנוע גלישה.המתן 10 דקות להסתגלות הזחלים לאחר תקופת האקלמיזציה. הנח ידנית ארבע פלטות ישירות על גבי מסך הלפטופ. בשלב זה, ניתן למלא את הנתיבים בביצים, במים או בטיפול כימי עד שהם מגיעים לגובה השפה העליונה של הנתיב, וזאת כדי למנוע הצטברות של צללים בקצוות הנתיבים.בתוכנת הדמיות, תכנת את המחשב לצילום במרווחי זמן (time-lapse), כך שיתבצעו צילומים בכל שש שניות, עבור סך כולל של 300 תמונות לכל ניסוי. הגדר את המצלמה לרזולוציה נמוכה לצורך הדמיה במהירות וידאו. שים לב כי הרזולוציה הנמוכה מגבילה את ההקלטות לפלטה אחת בעלת מספר בארות.הקלטות הווידאו מתאימות לדימות של אירועי שחייה מהירים. השתמש במצגת PowerPoint כגירוי דוחה עבור הזחלים בהדגמה זו. ה-PowerPoint מתחיל ברקע לבן חלק למשך 15 דקות, ולאחריו 15 דקות של פס אדום נע בחציו העליון של הצלחת.כדי למנוע התאיידות של הנוזל בתוך נתיבי ה-aros, הגבילו את זמן הדימוי המקסימלי לפחות משעה אחת. פתחו את התמונות באמצעות ImageJ בהדגמה זו. נעשה שימוש במאקרו פנימי לניתוח זחלים בחמישה נתיבים, אשר יכול להיות זמין לכל משתמש.השתמשו בהנחיות במקרו כדי להגדיר את הפרמטרים, כגון מספר התמונות והצבע שיש להחסיר. לאחר מכן, המקרו מפצל באופן אוטומטי את ערוץ הצבע כך שניתן יהיה להסיר את הצבע האדום. פעולת החסרת הרקע מחילה סף (threshold) ומזהה את הזחלים באמצעות ניתוח חלקיקים.לאחר שכל התמונות יעובדו באמצעות ה-Image J Macro, יוצג קובץ תוצאות שיכיל את קואורדינטות ה-XY של כל זחל עבור כל תמונה, לצד מספר התמונה ומספר הנתיב. שמרו את קובץ התוצאות בפורמט Excel ומיינו אותו לפי רקע ריק לעומת רקע של פס נע, ולאחר מכן לפי מספר הבאר. השתמשו בתבנית Excel הכוללת נוסחאות מובנות לקביעה אוטומטית של מיקום הזחלים בבארים, המרחק בין הזחלים, מהירות התנועה וכמות המנוחה.תבנית ה-Excel העדכנית ביותר שנוצרה במעבדה של Cretin זמינה לפי בקשה; ניתן לבנות בגיליון ה-Excel גרפים המציגים קבוצות טיפול שונות, יחד עם מבחן T להשוואה בין קבוצות הטיפול לבקרות. ניתן לבצע ניתוח סטטיסטי נוסף באמצעות תוכנת הסטטיסטיקה SPSS. התוצאות מוצגות עבור פשעים שטופלו במי ביצים וב-DMSO כבקרות, ובריכוזים משתנים של קוטל חרקים אורגנו-פספטי הנמצא בדרך כלל במזונות שאינם אורגניים.כאן הפסים הלבנים מראים נתונים מזחלים שנחשפו לרקע חלק, והפסים האדומים מראים נתונים מזחלים שנחשפו לפס אדום נע. ביקורת. זחלים שגודלו במי ביצים מראים העדפה מוגברת להיות בחלק התחתון של הצלחת לאחר שהוצג בפניהם הפס האדום הנע. תוצאות דומות התקבלו כאשר זחלים גודלו במי ביצים המכילים 1 µg/mL של DMSO, ממס המשמש בדרך כלל להמסה של תרופות ורעלים שונים כתמיסות מלאי בריכוז 1000x.הגרפים מראים את המדידות שניתן להפיק מניתוח התנהגותי, כולל אחוז הזחלים שנמצאים בתחתית הנתיב, אחוז הזחלים בקצה הנתיב, אחוז הזחלים בשולי הנתיב, המרחק בין הדגים, מהירות השחייה של הזחלים, ואחוז הזמן שבו הזחלים נמצאים במצב מנוחה. התוצאות המוצגות הן דגימה מניסוי אחד. עם זאת, בבדיקות חוזרות, התוצאות מעידות כי מהירות השחייה והתנהגות ה-figma משתנות בריכוזים נמוכים של קשרי-חנקן (organophosphate) המדמים רמות הנמצאות במזון אנושי. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את הדמיה ואת ניתוח ההדמיה בתוך שעה וחצי, במידה והתהליך מבוצע כהלכה.ההיבט החשוב ביותר בנוהל זה הוא לזכור לשמור על ניקיון התווך התרביתי על ידי החלפתו בתווך חד מדי יום.

automated-high-throughput-behavioral-analyses-in-zebrafish-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פיתחנו את תגובת חזותית-Motor כדי לכמת את הפלט המוטורי של דג הזברה הזחל בתגובה במרווחים ו decrements אור. בחנו גם מוטנטים דג הזברה חזון, כולל לא optokinetic (NRC) מוטנטים בתגובה, אשר נחשבו עיוור לחלוטין, כאשר נבדק על ידי assay אחר חזון, רפלקס optokinetic.

Assay ההתנהגות כדי למדוד את התגובה של דג הזברה לשינויים לעוצמות אור

אנו מדווחים על פיתוח של מערכת הדמיה ניתוח אוטומטי של העוברים מהונדס דג הזברה בצלחות multiwell. זה מדגים את היכולת לאמוד את ההשפעות תלויות במינון של מולקולה קטנה, BCI, על גדילה פיברובלסטים ביטוי פקטור כתב גנים לספק טכנולוגיה להקמת תפוקה גבוהה כימיים מסכי דג הזברה.

פיתוח הדמיה ניתוח אוטומטיות עבור מסכי דג הזברה כימיים.

הסרטון מתאר את ההימנעות ובדיקת thigmotaxis של זחלי דגי זברה. הסרטון בוחן את התנהגותם של זחלי דגי זברה בתגובה לגירוי חזותי מרתיע.

הימנעות מדגי זברה ובדיקת תיגמוטקסיס: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לבחינת התנהגות הזחלים בתגובה לגירוי חזותי מרתיע

מאמר זה מתאר את התגובה ההתנהגותית של דגי זברה לתרכובות רעילות על ידי ניטור תנועת הזחל. הפרוטוקול בוחן גם דוגמה לתגובת זחלי הזברה למזהמים סביבתיים.

בדיקת תנועת זחלים: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לחקר רעילות נוירו-התנהגותית של תרכובת בזחלי דגי זברה

מתואר השימוש במערכת וידאו אוטומטית תלת מימדית שיכולה לעקוב אחר יחידים וקבוצות של דגי זברה. כדוגמה ליישום אנו בוחנים את ההשפעות של אנטגוניסט הקולטן NMDA MK-801 על דגי זברה.

שימוש במערכת מעקב תלת מימד אוטומטית לתיעוד פרטים ושל דגי זברה בוגרים

כאן, אנו מציגים לפרוטוקול תכנון, הרכיבו את העובר דג זברה סידור במערך תבנית, ולאחריו נוהל מפורט על השימוש של תבנית כזו עבור תפוקה גבוהה דג זברה סידור במערך העובר לתוך צלחת 96-ובכן.

תלת-ממדי (3D)-להדפיס תבנית עבור תפוקה גבוהה דג זברה העובר סידור במערך

המטרה של פרוטוקול זה היא למדוד את זמן העברה של fluorescently עם תוויות מזון דרך המעי של הזחל דג זברה אופנה תפוקה גבוהה.

מדידת תפוקה גבוהה הבטן מעבר הזמן באמצעות זחל דג זברה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להתפתחות ואפיון של מודל דג זברה של אפילפסיה הנובע מהעיכוב הארעי של הגן DEPDC5.

ניתוח התנהגותי ופיזיולוגי במודל דגי זברה של אפילפסיה

כתב יד זה מתאר שיטה פשוטה למדוד מתח במהלך הפעולה במהלך בגרות דג מבוגר. הגישה מנצלת את הנטייה הטבועה שדגים מעדיפים את החצי התחתון של הטנק כאשר במצב מלחיץ. כמו כן, אנו מתארים שיטות לזיווג עם פרמקולוגיה.

גישות התנהגותיות לחקר הלחץ הטבוע בדג זברה

פרוטוקול זה קובע פרדיגמת פנוטיפ התנהגותית בזחלים של דגי זברה שטופלו ב-MPTP כדי להעריך ליקויים מוטוריים ולא מוטוריים הדומים למחלת פרקינסון.

פרופיל פנוטיפי של פנוטיפים התנהגותיים דמויי פרקינסון שנגרמו על ידי MPTP בזחלי דגי זברה בהתבסס על ניסוי התנהגותי

למדו לזהות פגמים התנהגותיים בזחלי דג הזברה לאחר חשיפה לרעלנים או תרופות באמצעות מערכת הדמיה אוטומטית בעלת תפוקה גבוהה. השיטה מאפשרת ניתוח מהיר ויעיל של התנהגויות מורכבות.

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

גלה סרטונים נוספים