Name: פרוטוקול גנטי אינדוקציה ויזואליזציה של גידולים שפירים ופולשני בסוג cephalic מכלולי Melanogaster דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: חקור אינדוקציה גנטית של גידולים שפירים ופולשניים ב-Drosophila melanogaster באמצעות חציית זנים וניתוח מורכז הראשי. שיטה זו מאפשרת הדמיה של תכונות הגידול ומסייעת בחקר אונקוגנים ומוטציות בגני קוטביות התא.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר במעבדה שלי הוא נתמך על ידי משרד wku של קופות הפעלת ביולוגיה, מחקר wku קרן RCAP-אני מעניק # 11-8032 ועל ידי מענק KBRIN-AREA במימון באמצעות מענק הורה מהמכון הלאומי למדעי רפואה כלליות של המכון הלאומי בריאות תחת מספר הפרסים 5P20GM103436-13. אני רוצה גם להודות ד&quot;ר טיאן שו במעבדה שהכיר לי את הטכניקה הזאת ואת ד&quot;ר ריימונד Pagliarini שהוקמה בטכניקה זו ראשונה במעבדה שו.

1. אינדוקציה של גידולים לא פולשני שפירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במניות רשומות בטבלה 2 לאינדוקציה של גידולים שפירים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את תרבות המתנע עבור המניה &quot;בוחן&quot; של גנוטיפ הבא: y, w, אי-FLP1; Tub-Gal80, FRT40A;&gt; y Act5C +&gt; Gal4, כטב&quot;מ-GFP </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את תרבות המתנע עבור המניה &quot;נבדקה&quot; של גנוטיפ הבא: w; FRT40A, כטב&quot;מ-V12 ראס / ארגון נוער קתולי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף עשר בתולות מהמלאי &quot;הבוחן&quot; ועשרה זכרים מהמלאי &quot;נבדק&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצות את הזכרים ונקבות מ&quot; הבוחן &quot;והמנייה&quot; נבדקה &quot;על ידי הצבת את שניהם בבקבוקון עם אוכל לטוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הצלב בחממה 25 ° C ולאפשר הזכרים ונקבות להזדווג ולהטיל ביצים ל24-48 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הבקבוקונים לתצהיר ביצה מספיק ואת הימצאותם של זחלי instar הראשונים ולוודא כי התרבות היא לא להתייבש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף כמה טיפות של autoclavedמים מזוקקים לתרבות כדי לשמור אותו הלח (אם התרבות היא התייבשות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לעקוב אחר התרבות וחזור על שלב 1.7.1 במידת הצורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב נדודי זחלי instar שלישיים תחת סטראו הקרינה כפי שתואר בסעיף 3. </li></ol> 2. אינדוקציה של גידולים פולשניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במניות רשומות בטבלה 2 לאינדוקציה של גידולים פולשניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתרבות המתנע מצעד 1.2 לעיל של גנוטיפ הבא: y, w, אי-FLP1; Tub-Gal80, FRT40A; Act5C y&gt; +&gt; Gal4, כטב&quot;מ-GFP </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את תרבות המתנע עבור המניה &quot;נבדקה&quot; של גנוטיפ הבא: w;, FRT40A, ראס כטב&quot;מ V12 / ארגון נוער הקתולי LGL 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף עשר בתולות מהמלאי &quot;הבוחן&quot; ועשרה זכרים מהמלאי &quot;נבדק&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצות את הזכרים ונקבות מ&quot; הבוחן &quot;והמנייה&quot; נבדקה &quot;על ידי הצבת את שניהם בבקבוקון עם f זבובood. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הצלב בחממה 25 ° C ולאפשר הזכרים ונקבות להזדווג ולהטיל ביצים ל24-48 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הבקבוקונים לתצהיר ביצה מספיק ואת הימצאותם של זחלי instar הראשונים ולוודא כי התרבות היא לא להתייבש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף כמה טיפות של autoclaved מים מזוקקים לתרבות כדי לשמור אותו הלח (אם התרבות היא התייבשות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לעקוב אחר התרבות לצעד יובש וחזור על 2.7.1 לפי צורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לזחלי instar שלישיים תחת סטראו הקרינה כפי שתואר בסעיף 3. </li></ol> 3. תצפית של גידולים שפירים ופולשני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זחלי instar שלישיים לבידוד גידול שפיר וויזואליזציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב מברשת צבע במים מזוקקים, ובאמצעות מברשת צבע זה לגרד כמה זחלי instar שלישיים מהקיר של בקבוקון התרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח זחלים בשקופית דיכאון עם 1X PBS ולאחר מכן באמצעות גרוטאות מברשת צבע רטובותדואר את כל חומר מזון מהאפידרמיס הזחל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הזחלים בצלחת פטרי ולהשאיר במקפיא -20 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות כדי לשתק את הזחל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטה חלופית כדי לשתק זחלים באמצעות FLYNAP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את שרביט FLYNAP טבול בFLYNAP לבקבוקון מ3.1.3.2 ולאחר חיבור הבקבוקון פקוק בואו בקבוקון עם זחלים לעמוד 30-40 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הזחל המשותק בשקופית זכוכית, להוסיף טיפה של שמן halocarbon אור, מכסה עם מכסה זכוכית ולהתבונן תחת סטראו הקרינה עם היכולת לדמיין חלבון פלואורסצנטי הירוק (GFP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זחלי נושאות גידול השפירים יהיו לזרוח ירוקים באזור הקדמי שבו מורכב cephalic הוא הווה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר יום 10 זחלים (אחרי גיוס) מהתרבות שנקבעה בשלב המס &#39;2 לעיל לתצפית של גידולים פולשניים. יום 10 זחלים נבחרו בגלל שיש לי זחלי נושאות גידול פולשני l מורחבשלב Arval ובאופן כללי לא מצליח pupariate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקוב 3.1.1 צעדים ל3.1.4 אלא שבמקום יום שימוש זחלי instar השלישי 10 זחלים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זחלי נושאות גידול פולשני יום 10 יהיו לזרוח ירוקים באזור הקדמי שבו מורכב cephalic הוא הווה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד במצלמה דיגיטלית ואז לקחת תמונות של זחלי נושאות גידול השפירים ופולשנית fluorescing. </li></ol> 4. Dissection של התצפית מורכבת ונוספת מסוג cephalic של גידולים שפירים ופולשני האפידרמיס השקוף של הזחל מקשה לשמור על המידה של פלישה של גידולים. כך המידה של פלישה היא מדמיין טוב יותר על ידי ביתור מורכב cephalic מהזחל. צריכים להיות מנוצלים בשלבים הבאים כדי לנתח מורכב cephalic. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מברשת צבע רטובה בחר זחלים שלישיים instar (לגידולים שפירים) ויום 10 זחלים (עבור גידולים פולשניים) from צלוחיות התרבות, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח זחלים בטוב של צלחת לנתיחה המכילה קר 1X PBS. השתמש במברשת צבע כדי לגרד את כל חלקיקי מזון מן האפידרמיס הזחל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזחלים נקיים גם טרי של הצלחת לנתיחה המכילה קר 1X PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק לנוכחות של הקרינה ה-GFP באמצעות סטראו מסוגל לאתר הקרינה. בטל זחלים אינן נושאים ה-GFP. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 1.0ml של קר 1X PBS ולטרי על הצלחת לנתיחה ובאמצעות זוג המלקחיים להעביר זחל נושאת או גידולים שפירים או פולשני (פרוטוקול הנתיחה נשאר זהה לאלה שני סוגים של גידולים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הזחל מטה בעזרת זוג מלקחיים על 2/3rds מהקצה הקדמי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג מלקחיים האחר וזריזות להפריד 1/3rd האחורי של הזחל וזורקים אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עזוב את 2/3rds הקדמי של הזחל. ככל שהלחץ בתוך הזחל משתחרר תוכןזחל יהיה לטפטף מתוך חלל הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג מלקחיים כדי להסיר את הבטן, שומן גוף ואת התוכן פנימי אחר של הזחל שניגר מתוך חלל הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג המלקחיים להחזיק את הקרס בפה של הזחל ולדחוף אותו לתוך האפידרמיס הזחל ובאמצעות זוג מלקחיים האחר להפוך את הזחל לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים בעדינות ובזהירות כדי להסיר את השומן בגוף, בלוטות רוק, מעיים, מורכבת דיסק כנף וכל צינורות לקנה הנשימה. מורכב cephalic צריך להיות גלוי כעת מחובר לקרס הפה של הזחל ההפוך. אונות המוח ואת חוט עצב הגחון (VNC) עדיין תהיינה מחוברים לאפידרמיס הזחל דרך העצבים הנובעים מVNC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג מלקחיים כדי לשבור בעדינות את הקשרים בין עצבי cephalic והאפידרמיס הזחל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> , שיתוף cephalic כמו חיבורי העצב בין VNC והאפידרמיס הזחל שבורים וגוף עודף שומן ורקמות אחרות הוסרוmplex יהיה ברור לעין ויצורף האפידרמיס הזחל רק בווי הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורכב cephalic ניתן להשאיר מצורף האפידרמיס הזחל אם מורכב צריך להיות קבוע עבור יישומים במורד הזרם כמו מכתים נוגדן או להדמיה מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אין יישומים נוספים במורד הזרם הייתי להתבצע לאחר מכן מורכב cephalic יכול להיות מנותק מן האפידרמיס הזחל והניח בטיפת גליצרול תקשורת הרכבה המבוסס על התבוננות וניתוח נוספים. השתמש Vectashield כתקשורת הרכבה. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Bale, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+signaling+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Hedgehog signaling and human disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 3, 47-65 (2002).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Coombs, G. S., Covey, T. M., Virshup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+in+development%2C+disease+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling in development, disease and translational medicine.</a> Curr Drug Targets. 9, 513-531 (2008).</li>
<li>Gistelinck, M., Lambert, J. C., Callaerts, P., Dermaut, B., Dourlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+tauopathies%3A+what+have+we+learned%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of tauopathies: what have we learned.</a> Int J Alzheimers Dis. 2012, 970980(2012).</li>
<li>Marsh, J. L., Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+in+the+study+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila in the study of neurodegenerative disease.</a> Neuron. 52, 169-178 (2006).</li>
<li>Reiter, L. T., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Drosophila+melanogaster+to+uncover+human+disease+gene+function+and+potential+drug+target+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Ther+Targets%22%5BJournal%5D)">Using Drosophila melanogaster to uncover human disease gene function and potential drug target proteins.</a> Expert Opin Ther Targets. 6, 387-399 (2002).</li>
<li>Valenta, T., Hausmann, G., Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+faces+and+functions+of+beta-catenin%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">The many faces and functions of beta-catenin.</a> EMBO J. 31, 2714-2736 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+in+Drosophila+for+metastatic+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior.</a> Science. 302, 1227-1231 (2003).</li>
<li>Wu, J. S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+%28MARCM%29+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila.</a> Nat Protoc. 1, 2583-2589 (2006).</li>
<li>Boccaccio, C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+growth%3A+a+MET-driven+genetic+programme+for+cancer+and+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Invasive growth: a MET-driven genetic programme for cancer and stem cells.</a> Nat Rev Cancer. 6, 637-645 (2006).</li>
<li>Srivastava, A., Pastor-Pareja, J. C., Igaki, T., Pagliarini, R., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basement+membrane+remodeling+is+essential+for+Drosophila+disc+eversion+and+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Basement membrane remodeling is essential for Drosophila disc eversion and tumor invasion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 2721-2726 (2007).</li>
<li>Wang, W., Eddy, R., Condeelis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cofilin+pathway+in+breast+cancer+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The cofilin pathway in breast cancer invasion and metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 429-440 (2007).</li>
<li>Brand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+as+a+cell+and+developmental+marker+in+the+Drosophila+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">GFP as a cell and developmental marker in the Drosophila nervous system.</a> Methods Cell Biol. 58, 165-181 (1999).</li>
<li>Brand, A. H., Dormand, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GAL4+system+as+a+tool+for+unravelling+the+mysteries+of+the+Drosophila+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The GAL4 system as a tool for unravelling the mysteries of the Drosophila nervous system.</a> Curr Opin Neurobiol. 5, 572-578 (1995).</li>
<li>Vidal, M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Drosophila models for cancer research.</a> Curr Opin Genet Dev. 16, 10-16 (2006).</li>
<li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nat Genet. 36, 288-292 (2004).</li>
<li>Blair, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+mosaic+techniques+for+studying+Drosophila+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Genetic mosaic techniques for studying Drosophila development.</a> Development. 130, 5065-5072 (2003).</li>
<li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li>
<li>Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+tumor+suppressors+in+genetic+mosaics%3A+the+Drosophila+lats+gene+encodes+a+putative+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase.</a> Development. 121, 1053-1063 (1995).</li>
<li>Rebay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+for+novel+components+of+the+Ras%2FMitogen-activated+protein+kinase+signaling+pathway+that+interact+with+the+yan+gene+of+Drosophila+identifies+split+ends%2C+a+new+RNA+recognition+motif-containing+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A genetic screen for novel components of the Ras/Mitogen-activated protein kinase signaling pathway that interact with the yan gene of Drosophila identifies split ends, a new RNA recognition motif-containing protein.</a> Genetics. 154, 695-712 (2000).</li>
<li>Therrien, M., Morrison, D. K., Wong, A. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+for+modifiers+of+a+kinase+suppressor+of+Ras-dependent+rough+eye+phenotype+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A genetic screen for modifiers of a kinase suppressor of Ras-dependent rough eye phenotype in Drosophila.</a> Genetics. 156, 1231-1242 (2000).</li>
<li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Res. 47, 3239-3245 (1987).</li>
<li>Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+direct-viewing+chemotaxis+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">A new direct-viewing chemotaxis chamber.</a> J Cell Sci. 99 (Pt 4), 769-775 (1991).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+in+vivo+models+of+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">New developments in in vivo models of neoplasia.</a> Cancer Metastasis Rev. 10, 191-192 (1991).</li>
<li>Mueller, B. M., Romerdahl, C. A., Trent, J. M., Reisfeld, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+spontaneous+melanoma+metastasis+in+scid+mice+with+an+antibody+to+the+epidermal+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor.</a> Cancer Res. 51, 2193-2198 (1991).</li>
<li>Konantz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266, 124-137 (2012).</li>
<li>McIntyre, R. E., vander Weyden, L., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+gene+discovery+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Cancer gene discovery in the mouse.</a> Curr Opin Genet Dev. 22, 14-20 (2012).</li>
<li>Mattison, J., vander Weyden, L., Hubbard, T., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+gene+discovery+in+mouse+and+man%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Cancer gene discovery in mouse and man.</a> Biochim Biophys Acta. 1796, 140-161 (2009).</li>
<li>Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila.</a> Dis Model Mech. 4, 753-761 (2011).</li>
<li>Stefanatos, R. K., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila%3A+a+bold+past%2C+a+bright+future%5BTitle%5D)+AND+%22J+Genet+Genomics%22%5BJournal%5D)">Tumor invasion and metastasis in Drosophila: a bold past, a bright future.</a> J Genet Genomics. 38, 431-438 (2011).</li>
<li>Beaucher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+brain+tumor+metastases+express+both+neuronal+and+glial+cell+type+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila brain tumor metastases express both neuronal and glial cell type markers.</a> Dev Biol. 301, 287-297 (2007).</li>
<li>Beaucher, M., Hersperger, E., Page-McCaw, A., Shearn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+ability+of+Drosophila+tumors+depends+on+MMP+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Metastatic ability of Drosophila tumors depends on MMP activity.</a> Dev Biol. 303, 625-634 (2007).</li>
<li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 9, 239-252 (2009).</li>
<li>Igaki, T., Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+cell+polarity+drives+tumor+growth+and+invasion+through+JNK+activation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Loss of cell polarity drives tumor growth and invasion through JNK activation in Drosophila.</a> Curr Biol. 16, 1139-1146 (2006).</li>
<li>Uhlirova, M., Jasper, H., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-cell-autonomous+induction+of+tissue+overgrowth+by+JNK%2FRas+cooperation+in+a+Drosophila+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Non-cell-autonomous induction of tissue overgrowth by JNK/Ras cooperation in a Drosophila tumor model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13123-13128 (2005).</li>
<li>Uhlirova, M., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK-+and+Fos-regulated+Mmp1+expression+cooperates+with+Ras+to+induce+invasive+tumors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">JNK- and Fos-regulated Mmp1 expression cooperates with Ras to induce invasive tumors in Drosophila.</a> EMBO J. 25, 5294-5304 (2006).</li>
<li>Menut, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mosaic+genetic+screen+for+Drosophila+neoplastic+tumor+suppressor+genes+based+on+defective+pupation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A mosaic genetic screen for Drosophila neoplastic tumor suppressor genes based on defective pupation.</a> Genetics. 177, 1667-1677 (2007).</li>
<li>Wu, M., Pastor-Pareja, J. C., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+Ras%28V12%29+and+scribbled+clones+induces+tumour+growth+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interaction between Ras(V12) and scribbled clones induces tumour growth and invasion.</a> Nature. 463, 545-548 (2010).</li>
</ol>

אין לי מה לחשוף.

הסרטן הוא מחלה מורכבת עם הבנה הרבה יותר טובה היום מאשר בעבר. עם זאת, הרבה עדיין צריכה ללמוד והסביר לפני שיש לנו תמונה של המנגנונים שלמה. הפרוטוקול פשוט שהוצג כאן מאפשר לגרום גנטי גידולים שפירים ופולשני בהאורגניזם כולו ולאחר מכן ללמוד את הביולוגיה הקשורים להתפתחות של גידולים במודל זה. רוב הטכניקות קיימות בדרוזופילה ואורגניזמים אחרים או לנצל את מערכת תרבות המבוססת תא להבין tumorigenesis וגרורות או מערכת שמעסיקה השתלה של רקמות גידול ראשוניות למארחים מבוגרים 23-27....

התפתחות של גידולים משפירים למצב גרורתי היא תהליך חכם צעד שמאופיין בהתחמקות ממנגנוני הגנה בגוף נוכחי 8. לדוגמא תאים סרטניים בגוף חייבים להיות מסוגלים להתחמק ממערכת החיסון ואפופטוזיס, פריצת דרך המטריצה ​​תאית מיוחדת (ECM) הנקראת קרום במרתף, ולהתגבר על כל פקדים חברתיים שהוטלו על ידי התאים המקיפים את 8. זוהי דרך התקדמות חכמה צעד שהתאים הסרטניים לרכוש את היכולת להעביר וליישב אתרים מרוחקים בתהליך הנקרא גרורות. ההבנה של אופן שבו התאים הסרטניים מתגבר על החסמים שהוטלו על ידי הגוף שלנו היא עדיין בחיתוליו, לעומת זאת, התמונה המצטיירת ממחקר שנעשתה עד כה מצביע על שימוש חוזר של תהליכים התפתחותיים נורמלים ומסלולי איתות על ידי התאים הסרטניים 11-13. זבוב הפירות דרוזופילה melanogaster תרם מאוד לunderstanding של התפתחות נורמלית ומחלה באמצעות שימוש בטכניקות גנטיות מתוחכמות שפותחו בעשורים האחרונים 14-17. באמצעות mutagenesis וכלי ביטוי יתר שהגענו להבנה טובה יותר של אונקוגנים שונים וגני מדכאי סרטן 18-22. עם זאת, גרורות סרטניים היא תוצאה של שיתוף פעולה בין כמה נגעים גנטיים שנחקר בעיקר במודלים של תרבית תאי 23,24 כמו גם מודלים xenograft שונים 25-27. יש מודלים אלו אם כי עוצמה המגבלות שלהם כמו שהם לא לחקות לחלוטין את התנאים נמצאו בכל יצור חי. יתר על כן, מודלים מהונדסים זמינים בעכברים הם מסורבלים ולא תורם לניתוח גנטי של התנהגות 28,29 פולשנית. מספר מחקרים ניסו להבין פלישה של תאים סרטניים בדרוזופילה 30,31. טכניקות אלו בעיקר לנצל השתלה של גידולים ראשוניים למארחים ולאחר מכן מסתמכות על מעקב טרהnsplanted גידולים לפלישה לרקמות שכנות 32,33. טכניקה רבת עוצמה בשם MARCM 10 הותאמה על ידי Pagliarini ושו למודל פלישת גידול בדרוזופילה 9. דוגמנות גנטית אלגנטית זה של פלישת גידול ניצלה את שיתוף הפעולה בין אונקוגן הופעל ואובדן קוטביות תא. כוחו של דוגמנות זה טמון בעובדה שהגידולים פולשניים נוצרים באורגניזם שלם ובכך לעקוף את הצורך בהשתלה של רקמות. כדי להביא לשיתוף פעולה בשעור, אונקוגן הופעל כמו ראס V12 מתבטא בשיבוטים של תאים בדיסק עיניים מחושים הזחל. כתוצאה מטכניקת MARCM שיבוטים אלה גם מסומנים בחלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) להדמיה קלה ונעשים הומוזיגוטים למוטציות קוטביות תא כמו זחלים קטלניים ענק, שרבט, ודיסקים גדולים. התוצאה היא ה-GFP מתויגת גידולים פולשניים ב מורכב cephalic. בדו&quot;ח זה אניתדגים כיצד לגרום, ולחזות גידולים פולשניים אלה הן בהקשר של זחלים שלמים והמורכב בcephalic גזור החוצה. האינדוקציה הגידול המובאת כאן מנצלת חומרים כימיים בכרומוזום השני של דרוזופילה. בטבלה 2, אני מספק רישום של מניות על כרומוזומים X ו -3 שניתן לנצלם לאותה מטרה. אני מאמין כי פרוטוקול פשוט זו יהפוך את הטכניקה הזו נגישה לחוקרים המעוניינים בהבנת הבסיס המולקולרי של התקדמות גידול.

<table><tbody><tr><td>10X PBS (מי מלח עם חוצץ פוספט) pH 7.2 תמיסת מלאי</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chilled 1X PBS pH7.2 תמיסת עבודה</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td>Make fresh and Secure, ניתן להשתמש עד שבוע</td></tr><tr><td>Flynap</td><td>Carolina Biologicals</td><td></td><td>הרדמת זבובים הדרושה להרדמת זחלים</td></tr><tr><td>Fixative</td><td>0.1M PIPES, pH 7.2, 4% Paraformaldehyde</td><td></td><td>דרוש לתקן את קומפלקס הצפאלי המנותח</td></tr><tr><td>דלי קרח</td><td>מספר</td><td></td><td>תמיסות תחזוקה על קרח. כמו כן, יש לנתח קומפלקס צפאלי ב-1X PBS מקורר ולאחר מכן להניח על קרח בצינור אפנדורף</td></tr><tr><td>1.7 מ"ל צינור אפנדורף</td><td></td> שקופיות זכוכית שונות<td></td><td></td></tr><tr><td>, כיסוי זכוכית</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vectashield Mounting Media או כל אמצעי הרכבה אחר</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Halocarbon 200 או 700 Oil</td><td>Polysciences Inc. או Halocarbon.com</td><td></td><td>Halocarbon 200 משמש להרכבת הזחלים להדמיה על סטריאוסקופ פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>לק סאלי הנסן "קשה כמו מסמרים"</td><td>ניתן למצוא בכל חנות</td><td></td> סחורה כללית <td>דרוש לאיטום הקצוות של</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי Leica MZ16.5 או כל סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי אחר</td><td>Leica ואחרים</td><td></td><td>דרוש כדי לצפות בפלואורסצנטיות GFP בזחלים</td></tr><tr><td>מלקחיים Dumont #5</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 9 באר צלחת ספוט או כל צלחת חיתוך אחרת</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>ניתן למצוא בכל חנות</td><td></td><td></td></tr><tr> סחורה כללית<td colspan="4">טבלה 1. חומרים הדרושים לביצוע פרוטוקול הניסוי המוצג במאמר זה.</td></tr></tbody></table>

פרוטוקול גנטי אינדוקציה ויזואליזציה של גידולים שפירים ופולשני בסוג cephalic מכלולי<em&gt; melanogaster דרוזופילה</em

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

דרוזופילה האירה את ההבנה של הבסיס הגנטי של התפתחות מחלה ורגילה שלנו בעשורים האחרונים, וכיום היא ממשיכה לתרום הרבה מאוד להבנה של מחלות מורכבות 1-7 שלנו. התפתחות של גידולים משפירים למצב גרורתי היא אירוע מורכב 8 וכבר הדגם בדרוזופילה כדי לעזור לנו להבין טוב יותר את הבסיס הגנטי של מחלה זו 9. כאן אני מציג פרוטוקול פשוט כדי לגרום גנטי, להתבונן ולאחר מכן לנתח את ההתפתחות של גידולים בזחלי דרוזופילה. טכניקת האינדוקציה הגידול מבוססת על מערכת MARCM 10 ומנצלת את שיתוף הפעולה בין אונקוגן הופעל, ראס V12 ואובדן של גנים קוטביות תא (שרבט, דיסקי זחלים ענק גדולים וקטלניים) כדי ליצור גידולים פולשניים 9. אני אדגים כיצד ניתן דמיינו גידולים אלה בזחלים ללא פגע ואז איך אלה יכולים להיות גזורים החוצה לניתוח נוסף. הפרוטוקול פשוטים שהוצג כאן צריך לעשות את זה אפשרי עבור טכניקה זו כדי להיות מנוצל על ידי חוקרים מעוניינים בהבנת תפקידו של גן בפלישת גידול.

כתוצאה מהפרוטוקול מובאת כאן המשתמש יהיה מסוגל לגרום לגידולים שפירים על ידי overexpressing אונקוגן הופעל בדיסק דמותי מחושים עיני הזחל. משתמש גם תוכל לגרום לגידולים פולשניים בדיסק המחושים העין על ידי overexpressing אונקוגן הופעל בשיבוטים של תאים גם למוטציה גנטית קוטביות תא. הגידולים יכולים להיות דמיינו בקלות בעזרת סטראו ניאון כרקמת &quot;ניאון ירוק&quot; בכל הזחלים או במתחמי cephalic כי כבר גזורים מתוך חלל גוף הזחל (איור 1). גידולים שפירים יהיו מקומיים למתחם דיסק המ...

שיתוף פעולה בין אונקוגן הופעל כמו RAS V12 ומוטציות בגנים קוטביות תא כמו שרבטה, לגרום לצמיחת גידול בדרוזופילה שבו תאים סרטניים גם להציג התנהגויות פולשנית. הנה פרוטוקול פשוט לאינדוקציה והתבוננות בגידולים שפירים ופולשנית מוצג.

פרוטוקול גנטי אינדוקציה ויזואליזציה של גידולים שפירים ופולשני בסוג cephalic מכלולי<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila has illuminated our  understanding of the genetic basis of normal development and disease for the  past several decades and today it continues ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להשרות גידולים שפירים ופולשים ב-drosophila, ולאחר מכן להדמיות שלהם באמצעות דיסקציה של המכלול הצפלי (cephalic complex) של הזחלים. התהליך מתחיל בהקמת הכלאות בין הזנים הרצויים ובידוד צאצאי הזחלים, הנושאים גידולים פולשים או שפירים. השלב הבא הוא ביצוע דיסקציה לזחלים שנבחרו.כדי לחשוף את הקומפלקס הצפלי (cephalic complex), יש ראשית לחתוך אותם עד לשני שלישים מהדרך למטה, לקבע אותם ולאחר מכן להפוך אותם. בשלב הבא מנקים רקמות של גוף השומן ומערכת העיכול, ולאחר מכן קוטעים גם את העצבים שעדיין מחוברים לחבל העצבים הגבני ואת האפידרמיס של הלרבה. השלב הסופי הוא הדמיית הקומפלקס הצפלי או קיבועו ליישומים עוקבים.בסופו של דבר, ניתן להראות גידולי סרטן פולשניים או שפירים המסומנים ב-GFP באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לכמה מהשאלות המרכזיות בביולוגיה של הסרטן. לדוגמה, ייתכן שתרצו להבין אילו גנים עשויים לעכב את התקדמות הגידולים באורגניזם שלם.לאחר השגת המאגרים הגנטיים הנדרשים, הכין תרבית התנעה של זן הבודק. כמו כן, הכין תרבית התנעה עבור המאגר הנבדק. בצע הכלאה של 10 נקבות בתולות ממאגר הבודק עם 10 זכרים מהמאגר הנבדק.אפשרו לזבובים להזדווג ולהטיל ביצים במשך 24 עד 48 שעות בטמפרטורה של 25 degrees Celsius, ולאחר מכן העבירו אותם לבקבוקון (vial) טרי כדי להרבות צאצאים נוספים. עקבו אחר בקבוקוני ההכלאה כדי לזהות ביצים וזחלים של גיל ראשון (first instar). הכינו הכלאה חדשה.במידה והמבחנות שנאספו מראות הפקדה דלה של ביצים, ובמידה והמבחנות שנאספו מתחילות להתייבש, יש להוסיף שלוש עד ארבע טיפות של מים מזוקקים שעברו אוטוקלאב כדי לשמור על לחות התרבית. יש להמשיך במעקב אחר המבחנות עד לשלב הנדודים.נוכחות של זחלים בשלב השלישי (third instar). לאחר מכן, יש להמשיך במעקב אחריהם תחת מיקרוסקופ סטריאופלואורסצנציה. באותו הליך, יש לאסוף זבובים הנושאים גידולים פולשניים מהמC stocks המפורטים עד ליום החמישי או השישי לתרבית; זחלים נודדים בשלב השלישי יהיו זמינים מתרביות של גידולים שפירים.עם זאת, הן לא יהיו זמינות עד היום ה-10 מתרביות הגידול הפולשני. כדי לאסוף את הזחלים בשלב ה-instar השלישי, הרטב מכחול עדין במים מזוקקים וגרד אותם מדופן המבחנה. העבר את הזחלים לשקע של תבנית עם cold one XPBS, ולאחר מכן השתמש במכחול רטוב.גרדו כל שאריות מזון מהאפידרמיס שלהם. לצורך קיבוע למשך מספר דקות, הניחו את הזחל על פלטה בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לזמן קיבוע ארוך יותר, הניחו את הזחלים בתוך מבחנה תרבית המכילה רק fly nap על מוט.יש לסגור את מבחנת התרבית ולהמתין 40 דקות. לאחר מכן, העבירו את הזחלים המקובעים לזכוכית כיסוי. הוסיפו טיפה של שמן carb halo בהיר וכסו את הזחלים בעזרת זכוכית כיסוי.כעת, בחנו את הזחלים תחת מיקרוסקופ סטריאופלואורסצנטי. עבור ביטוי GFP, בחרו את הזחלים הפלואורסצנטיים הירוקים והמשיכו לניתוח. זחלים הנושאים גידול שפיר יפגינו פלואורסצנציה ירוקה באזור הקדמי שבו נמצא הקומפלקס הצפלי (cephalic complex).גידולים פולשים יפגינו גם הם פלואורסצנציה ירוקה באזור הקדמי של הזחלים במתחם הראש. במידת האפשר, הקפידו לתעד את הגידולים הפלואורסצנטיים בצילום. מכיוון שהאפידרמיס השקוף של הזחל מקשה על תצפית במידת נדידת הגידולים, עלינו לבצע דיסקציה של הגידולים.התחל בשימוש בפינצטה להעברת זחלה טרייה עם כל אחד מהגידולים לבאר בצלחת ניתוח המכילה מיליליטר אחד של 1x PBS קר. החזק את הזחלה באמצעות זוג פינצטות במרחק של כשני שלישים מהקצה הקדמי.השתמשו בזוג פינצטות נוסף כדי להפריד בזהירות את השליש האחורי של הזחלים והשליכו אותו. לאחר מכן שחררו את שני השלישים הקדמיים. עם שחרור הלחץ בתוך הזחלים, תוכנם יישפך החוצה מחלל הגוף.בעזרת פינצטה, הסירו את הרקמות שבלטו החוצה מחלל הגוף. לאחר מכן, אחזו בוו הפה של הזחל והדחפו אותו אל תוך אפידרמיס הזחל. בעזרת זוג הפינצטות השני, הפכו את הזחלים באופן מלא.כעת, בעזרת הפינצטה, הסירו בעדינות ובזהירות את גופי השומן, בלוטות הרוק, המעי, קומפלקס דיסקות הכנף וכל צינורות קנה הנשימה (tracheal tubes). קומפלקס הראש עשוי להיות גלוי כעת, מחובר לוו הפה. המיספרות של המוח וה-VNC עדיין מחוברים לאפידרמיס של הזחל באמצעות עצבים היוצאים מה-VNC.בעזרת פינצטה, שברו בעדינות את הקשרים הללו. לאחר מכן, הסירו שאריות של גוף השומן או רקמות אחרות, כך שהקומפלקס הצפלי יהיה גלוי בבירור. הוא מחובר לאפידרמיס של הלרבה באזור וווי הפה.השאירו את הקומפלקס הצפלי כפי שהוא לעיבוד נוסף לפני הוויזואליזציה. לחלופין, כדי לבצע ויזואליזציה ישירה של הקומפלקס הצפלי, הפרידו אותו מהאפידרמיס והניחו אותו בטיפה של מדיום הרכבה מבוסס גליצרין, כגון vector shield. באמצעות הפרוטוקול המתואר, הושרמו גידולים בעין.בדיסק האופטי, גידולים שפירים נותרו מקומיים בדיסק האופטי שבו הם הושרכו. שימו לב כי הרקמה המסומנת ב-GFP לא נדדה לאיברים סמוכים כמו חבל העצבים הגבי (ventral nerve cord) במכלול הראש; לעומת זאת, בגידולים פולשניים מזריקה של לרבה ביום 10, נצפתה גדילה יתר של רקמת הגידול. כמו כן, כפי שמוצג על ידי החץ האדום, הגידולים פלשו לאיברים סמוכים כגון ה-VNC וויתרי הפה (mouth hooks).לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשרות גנטית גידולים שפירים ופולשניים, ולאחר מכן להדמיות שלהם באמצעות נתיחה של הקומפלקס הצפלי (cephalic complex) בגישה intra ano gastro.

a-protocol-for-genetic-induction-visualization-benign-invasive-tumors

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול זה מתאר את השימוש microinjection הדמיה ברזולוציה גבוהה...

Microinjection טכניקות לימוד מיטוזה ב תסיסנית melanogaster סינסיציאלי עובריים

Mesoscopic הקרינה טומוגרפיה פועלת מעבר לגבולות חדירה של מיקרוסקופיה רקמות חתך פלואורסצנטי. הטכניקה מבוססת על תאורה השלכה רב ותיאור תחבורה פוטון. אנו להדגים ב-vivo כל הגוף 3D להדמיה של המורפוגנזה ה-GFP-לבטא דיסקים דמותי האגף...

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

אנו מתארים את הליך להכין...

ויזואליזציה של מערכת העצבים כולה עובריים-Mount תסיסנית עוברים

פרוטוקול זה מדגים כיצד ליצור מסומן פלורסנטי, גידולים המשובטים מוגדר גנטית בעין תסיסנית / דיסקים דמותי מחושים (EAD). הוא מתאר כיצד לנתח את EAD והמוח מן הזחלים instar השלישי וכיצד לעבד אותם לחזות ולכמת שינויים בהתבטאות גנים הפולשנות הגידול.

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

אנו מתארים פרוטוקול לנתיחה, קיבעון, ו immunostaining של איברי steroidogenic אצל נשי זחלים בוגרים דרוזופילה ללמוד ביוסינתזה הורמון סטרואידים ואת מנגנון הרגולציה שלה. בנוסף לאיברים steroidogenic, אנו לדמיין את העצבוב של איברים steroidogenic כמו גם תאי היעד steroidogenic כגון תאי גזע germline.

הפרוטוקולים המאפשר הדמיה איברים Steroidogenic ואורגנים אינטראקטיבית שלהם עם Immunostaining ב זבוב הפירות<em&gt; תסיסנית</em

עבודה זו מפרטת שיטת אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית כדי לדמיין תחזיות נוירונים מוטוריים של שלב מאוחר 16 תסיסנית עוברי melanogaster . הכנת הפילה של עוברי קבוע מוכתמים נוגדן FasII מספק כלי רב עוצמה לאפיין את הגנים הנדרשים עבור pathoninding האקסון המנוע ואת ההכרה היעד במהלך התפתחות עצבית.

ויזואליזציה של דפוס היטל אקסונל של נוירונים מוטוריים עובריים ב<em&gt; תסיסנית</em

ניתוח פסיפס משוכפל ב תסיסנית הדיסק epithelia הדימוי הוא מודל מודל חזק ללמוד את המנגנונים הגנטיים והתאים של tumorigenesis. כאן אנו מתארים פרוטוקול כדי לגרום לגידולים בדיסקופיית כנף תסיסנית באמצעות מערכת GAL4-UAS, ולהציג שיטת אבחון לסווג את פנוטיפים הגידול.

אינדוקציה ואבחון של גידולים ב<em&gt; תסיסנית</em&gt; אפיתלציה דיסק Imaginalia

פרוטוקול זה מיועד הדמיה וניתוח של הדינמיקה של כיוון התאים ואת צמיחת רקמות בתוך הבטן הדרוזולה epithelia כמו זבוב הפרי עובר מטמורפוזה. המתודולוגיה המתוארת כאן ניתנת להחלה על חקר שלבים, רקמות ומבנים תת-סלולאריים שונים בדרוזופילה או באורגניזמים אחרים במודל.

הדמיה וניתוח של כיוון רקמות ודינמיקה בפיתוח הדרוזולה אפיתליה במהלך שלבי pupal

פרוטוקול מוצג המאפשר הדמיה של Drosophila melanogaster שלם בכל שלב של פיתוח באמצעות טומוגרפיה מיקרו מחשב.

הדמיה חיה שלמה של Drosophila melanogaster באמצעות טומוגרפיה מיקרו-מחשבתית

פרוטוקול זה מספק הדרכה מפורטת להקצאה הדורית הראשונית והמתמשכת של גידולי דרוזופילה לתוך בטנם של מארחים בוגרים לחקר היבטים שונים של ניאופלזיה. באמצעות מנגנון autoinjector, חוקרים יכולים להשיג יעילות משופרת ותפוקת הגידול בהשוואה לאלה שהושגו על ידי שיטות מסורתיות, ידניות.

אלוטרנספלנטציה של גידול בדרוזופילה מלנוגסטר עם מזרק אוטו-ננולטר הניתן לתכנות

בעובר דרוזופילה המוקדם, אברונים רבים הם תנועתיים. באופן עקרוני, ניתן לדמות אותם בשידור חי באמצעות בדיקות פלואורסצנטיות ספציפיות, אך קליפת הביצית מונעת יישום ישיר על העובר. פרוטוקול זה מתאר כיצד להציג בדיקות כאלה באמצעות מיקרו-איניג'קציה, ולאחר מכן לנתח תנועת אברונים בתפזורת באמצעות ולוסימטריה של תמונת חלקיקים.

הדמיה של סחר תלוי-שלד ציטוסקלטון של אברונים המכילים שומנים בעוברי דרוזופילה

חקור אינדוקציה גנטית של גידולים שפירים ופולשניים ב-Drosophila melanogaster באמצעות חציית זנים וניתוח מורכז הראשי. שיטה זו מאפשרת הדמיה של תכונות הגידול ומסייעת בחקר אונקוגנים ומוטציות בגני קוטביות התא.

פרוטוקול גנטי אינדוקציה ויזואליזציה של גידולים שפירים ופולשני בסוג cephalic מכלולי

גלה סרטונים נוספים