Name: לדמיין את ההשפעות של ניסיון מוקדם חיובי, מישוש גירוי, על דנדריטים מורפולוגיה וSynaptic קישוריות עם Golgi-קוקס מכתים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-25T09:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: חקור את השפעות הגירוי המישושי על המורפולוגיה הנוירונלית בעכברושים באמצעות צביעת Golgi-Cox. שיטה זו מאפשרת הדמיית דנדריטים וניתוח פלסטיות תלוית-חוויה במחקר נוירו-התפתחותי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי מענקי NSERC לBK וRG. המחברים גם רוצים להודות לKehe שיה וראסל חוסיין למומחיות מכתים Golgi-קוקס.

כל הניסויים בוצעו בהתאם להחלטת המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרו על ידי האוניברסיטה של ​​Lethbridge, ועדת טיפול בבעלי חיים. 1. רבייה ומישוש גירוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזמין חולדות הרות מהספקים בעלי חיים משותפים או להתרבות גורים בתוך הבית באמצעות נהלי רבייה מעבדה סטנדרטיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית כל בעלי החיים בחדר בטמפרטורה מבוקרת רבייה (21 מעלות צלזיוס), שמרה על אור 12:12 שעה: מחזור כהה ולספק גישה למזון ומים כהרצון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר גורים נולדים חולדות נקבות בית, בנפרד עם צאצאיהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע לחץ נוסף הקשורים לטיפול מייד לאחר לידה, להתחיל גירוי חוש המישוש של גורים בP3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גירוי חוש המישוש צריך להתבצע שלוש פעמים ביום (9:00 בבוקר, 1:00 PM, ו16:00) מP3-p21 ויש נגמלו גורים מאמותיהם ב p21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת שימוש בעיצוב המלטת צלב, מחצית מהגורים frאום כל המלטה תעבור גירוי חוש המישוש עם החצי השני שמש כקבוצת ביקורת. באופן אקראי להקצות מספרים שווים של גורי זכר ונקבה לכל קבוצה. כדי לבדל את הגורים עוברים גירוי ובקרות מישוש, לסמן קבוצה אחת של גורים עם סמן קבע על רגליהם האחוריות וזנב. סימון צריך להיות מיושם מחדש בכל יום אחר. </li></ol> מישוש גירוי <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסכרים מהכלוב בבית שלהם ולמקם אותם בכלוב זמני עם מזון ומים. שמור את הסכר וכלוב זמני בחדר רבייה / דיור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל גורי חולדה כקבוצה לפני ישיבת הבוקר גירוי חוש המישוש (9:00). עבור כל פגישה, עכברוש תחבורת גורי כלובים בביתם לחדר בדיקות נפרד לגירוי חוש המישוש. מקם את הכלוב בבית על כרית חימום שמוגדרת 24 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בלוח נוקשה לחלק את הכלוב בבית לשני חצאים. הנח גורי חולדה בגורי חצי ושליטה מישוש גירוי קבוצה אחת במחצית השנייה.להגדיר טיימר ל15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מטלית כמו נוצה רכה, מצחצח את כל הגורים בקבוצת גירוי חוש המישוש באותו הזמן ל15 דקות רצופות. גורי החולדה הצעירים (~ P3-P12) ususally להצטופף ביחד ונראים נכנסים למעגל שינה עמוק ולכן קלים מאוד כדי לעורר את כל הגורים בבת אחת. כמו גיל הגורים, הם הופכים להיות יותר פעילים, עם כמה גורים הולכים וחוקרים במהלך הפגישה. הנסיין צריך לעבור ברציפות גורים נודדים לקבוצה כדי להבטיח כל גור מקבל גירוי שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פגישת 15 דקות הושלמה, להעביר את הגורים בחזרה לחדר הגידול ולהחזיר את האמא לכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה שלוש פעמים ביום ל19 ימים של גירוי חוש המישוש. לאחר פגישת גירוי חוש המישוש הסופית ב p21, צריכים להיגמל הגורים מאמותיהם. גורים אמורים להיות שוכנו בכלובים עם 5 או 6 חיות נגמלו אחרות של אותו המין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם חולדות עוברות שום בדיקות נוספות, הם צריכים להישאר בלתימופרע, באור הרגיל: מחזור כהה עם גישה למזון ומי libitm מודעה (מלבד ניקוי כלוב וטיפול שוטפים) עד שהם מגיעים כ 100 ימים של גיל. אם עוברים מניפולציות ניסיוניות אחרות, יש להתייחס אל בעלי חיים או נבדקו בהתאם לפרוטוקולי מעבדה אלה. </li></ol> 2. להקריב וGolgi-קוקס מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על כ P100, לנהל ממנת יתר של נתרן pentobarbital באמצעות הזרקת ה-IP לחולדות וינקב intracardially עם כ 100 מיליליטר של תמיסת מלח 0.9%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלץ את המוח כאשר זלוף הוא מוחלט. הסר את המוח מהגולגולת, חיתוך עצב הראייה מתחת עם מאמץ לשמור על המוח הקטן ללא פגע; חוקרים יכולים לבחור לשמור או להסיר את נורות חוש הריח. הנח מוחות שחולצו בבקבוק Nalgene אטום עם 20 מיליליטר של תמיסת Golgi-קוקס 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את המוח בפתרון Golgi-קוקס ל14 ימים. לאחר 14 ימים, החלף את Golgi-Cפתרון שור עם תמיסת סוכרוז 30%. שמור את המוח בתמיסת סוכרוז ל2-5 ימים לפני חתך. </li></ol> הערה: אם אינו יכולים להיות מחולקים מוחות תוך 14 יום מהעברה לתמיסת סוכרוז, החוקר צריך להחליף את סוכרוז עם מלאי חדש של סוכרוז 30%. החוקר עשוי להחליף את סוכרוז כל שבועיים במשך 4 חודשים ללא השפעות שליליות על מכתים. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת סעיף המוח, המוח צריך להטשטש יבש וקבוע לבמה חתך עם דבק cyanocacrylic. כדי למנוע קריעה או חתך אחיד, החוקר חייב להיות זהיר ולוודא שכל המוח הוא מאובטח היטב לבמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאגר vibratome חייב להיות מלא עם 6% תמיסת סוכרוז לרמה שמכסה את להב חתך. הגדר את הפרמטרים vibratome למהירות ומשרעת עד 5, (נקודת האמצע על שני הסולמות). פורסים את המוח ל200 מיקרומטר חלקים ולמקם את הסעיפים על 2% מייקר gelatinizedשקופיות היקף. הקפד לשמור את החלקים רטובים במהלך חתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר כל החלקים של עניין כבר נאספו, לחץ על החלקים על גבי השקופיות על ידי הפעלה לחץ על השקופיות עם נייר bibulous לח. אחסן את השקופיות במעמד שקופיות בתא הלחות עד שהם מוכנים להיות מוכתמים. הם צריכים להישאר בתא הלחות במשך שעה לפחות 12, אך לא יותר מ -4 ימים. השקופיות צריכה להיות לח ולא צריך להיות מותרות להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הגדוד מכתים לפני תחילת תהליך הצביעה. תווית עשר מנות צביעת זכוכית (10.7 x 8.5 x 6.8 סנטימטר) ואת תהליך באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מים מזוקקים - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמוניום הידרוקסיד - 30 דקות (בחושך) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מים מזוקקים - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קודאק תקן לקולנוע - 30 דקות (בחושך) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מים מזוקקים - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלכוהול 50% - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלכוהול 70% - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלכוהול 95% - 1 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100% Alcohol - 5 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלכוהול 100% - 5 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון (כלורופורם 1/3, 1/3 HemoDe, 1/3 100% אלכוהול) - 15 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HemoDe - 15 דקות </li></ol></li></ol> * קסילן ניתן להשתמש בהחלפה של HemoDe. על מנת להבטיח איכות צביעה עקבית, יש להשתמש בפתרונות טריים עבור כל מדף שקופיות מעובד. <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות emersion 15 דקות האחרונות בHemoDe, coverslip השקופיות עם Permount. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר השקופיות לייבוש באוויר לפני שבודק במיקרוסקופ. </li></ol>

<ol><li>Mychasiuk, R., Ilnystkyy, S., Kovalchuk, O., Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensity+matters%3A+Brain%2C+behaviour%2C+and+the+epigenome+of+prenatally+stressed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intensity matters: Brain, behaviour, and the epigenome of prenatally stressed rats.</a> Neuroscience. 180, 105-110 (2011).</li>
<li>Muhammad, A., Carroll, C., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+during+development+alters+dendritic+morphology+in+the+nucleus+accumbens+and+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Stress during development alters dendritic morphology in the nucleus accumbens and prefrontal cortex.</a> Neuroscience. 216, 103-109 (2012).</li>
<li>Wiesel, T., Hubel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+visual+deprivation+on+morphology+and+physiology+of+cells+in+the+cat%27s+lateral+geniculate+body%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Effects of visual deprivation on morphology and physiology of cells in the cat's lateral geniculate body.</a> Journal of Neurophysiology. 26 (978), 6(1963).</li>
<li>Dwyer, J., McQuown, S., Leslie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+effects+of+nicotine+on+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The dynamic effects of nicotine on the developing brain.</a> Pharmacology & Therapeutics. 122, 125-139 (2009).</li>
<li>Richards, S., Mychasiuk, R., Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+stimulation+during+development+alters+behaviour+and+neuroanatomical+organization+of+normal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tactile stimulation during development alters behaviour and neuroanatomical organization of normal rats.</a> Behavioural Brain Research. 231, 86-91 (2012).</li>
<li>Schanberg, S., Field, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+deprivation+stress+and+supplemental+stimulation+in+the+rat+pup+and+preterm+neonate%5BTitle%5D)+AND+%22Child+Development%22%5BJournal%5D)">Sensory deprivation stress and supplemental stimulation in the rat pup and preterm neonate.</a> Child Development. 58 (6), 1431-1447 (1987).</li>
<li>Caldji, C., Tannenbaum, J., Sharma, S., Francis, D., Plotsky, P., Meaney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+care+during+infancy+regulates+the+development+of+neural+systems+mediating+the+expression+of+fearfulness+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Maternal care during infancy regulates the development of neural systems mediating the expression of fearfulness in the rat.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (9), 5335-5340 (1998).</li>
<li>Imanaka, A., Morinobu, S., Toki, S., Yamamoto, S., Matsuki, A., Kozuru, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+tactile+stimulation+reverses+the+effect+of+neonatal+isolation+on+open-field+and+anxiety-like+behavior%2C+and+pain+sensitivity+in+male+and+female+adult+Sprague-Dawley+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Neonatal tactile stimulation reverses the effect of neonatal isolation on open-field and anxiety-like behavior, and pain sensitivity in male and female adult Sprague-Dawley rats.</a> Behavioural Brain Research. 186, 91-97 (2008).</li>
<li>Gibb, R., Gonzalez, C., Wegenast, W., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+stimulation+promotes+motor+recovery+following+cortical+injury+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tactile stimulation promotes motor recovery following cortical injury in adult rats.</a> Behavioural Brain Research. 214 (1), 102-107 (2010).</li>
<li>Rodrigues, A., Artneni, N., Abel, C., Zylbersztejn, D., Chazan, R., Viola, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+stimulation+and+maternal+separation+prevent+hippocampal+damage+in+rats+submitted+to+neonatal+hypoxia-ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tactile stimulation and maternal separation prevent hippocampal damage in rats submitted to neonatal hypoxia-ischemia.</a> Brain Research. 1002, 94-99 (2004).</li>
<li>Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+stimulation+after+frontal+or+parietal+cortical+injury+in+infant+rats+facilitates+functional+recovery+and+produces+synaptic+changes+in+adjacent+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tactile stimulation after frontal or parietal cortical injury in infant rats facilitates functional recovery and produces synaptic changes in adjacent cortex.</a> Behavioural Brain Research. 214, 115-120 (2010).</li>
<li>Muhammad, A., Hossain, S., Pellis, S., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+stimulation+during+development+attenuates+amphetamine+sensitization+and+structurally+reorganizes+prefrontal+cortex+and+striatum+in+a+sex-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tactile stimulation during development attenuates amphetamine sensitization and structurally reorganizes prefrontal cortex and striatum in a sex-dependent manner.</a> Behavioral Neuroscience. 125 (2), 161-174 (2011).</li>
<li>Golgi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulla+struttura+della+sostanza+grigia+dell+cervello%5BTitle%5D)+AND+%22Gaz+Med+Lomb%22%5BJournal%5D)">Sulla struttura della sostanza grigia dell cervello.</a> Gaz Med Lomb. 33, 244-246 Forthcoming.</li>
<li>Glaser, E. M., van der Loos, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+thick+brain+sections+by+obverse-reverse+computer+microscopy%3A+Application+of+a+new%2C+high+clarity+Golgi-Nissl+stain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of thick brain sections by obverse-reverse computer microscopy: Application of a new, high clarity Golgi-Nissl stain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 4, 117-125 (1981).</li>
<li>Gibb, R., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+vibratome+sectioning+of+Golgi-Cox+stained+whole+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for vibratome sectioning of Golgi-Cox stained whole rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 79, 1-4 (1998).</li>
<li>Meaney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+care%2C+gene+expression%2C+and+the+transmission+of+individual+differences+in+stress+reactivity+across+generations%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Maternal care, gene expression, and the transmission of individual differences in stress reactivity across generations.</a> Annual Review of Neuroscience. 24, 1161-1192 (2001).</li>
<li>Robinson, T. E., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+plasticity+associated+with+exposure+to+drugs+of+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Structural plasticity associated with exposure to drugs of abuse.</a> Neuropharmacology. 47, Suppl 1. 33-46 (2004).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין לנו אינטרסים כלכליים מתחרים.

בשל הפלסטיות הגלויה של המוח המתפתח, חשוב שהפרוצדורות הכרוכות בחוויות מוקדמות נבדקות ביסודיות ונעשים ניסיונות לשלוט בכל המשתנים מתערבים. מסיבה זו, עיצוב המלטת צלב מועסק במהלך הליך גירוי חוש המישוש כדי להבטיח שגורים מקבלים חוויות דומות בכל התחומים האחרים של התפתחות. בנוסף, חשוב גם שגורים מרובים מהמלטות מרובות נבחרו לניתוח, כדי למנוע את האפשרות שתופעות נובעות מהטיה בגור או המלטה אחת. הוא האמין גירוי חוש המישוש כדי לחקות את ההתנהגות האימהית הטבעי, מלקק וטיפוח, אשר נחשב כמועיל להתפתחות צאצאים. למרות שהמחקר קודם הדגיש בשבוע הראשון לחייהם (P0-P7) להיות תקופה קריטית לליקוק וטיפוח 16, הגודל העצום של שינוי שזוהה הבא 18 ימים של taגירוי ctile עשוי לרמוז כי למרות שפעמים רגישות קיימות, חשיפה ארוכה יותר היא מעולה. כמו כן, חשוב לציין כי גורים מקבלים גירוי חוש המישוש בפרדיגמה ניסויית זו גם לחוות ללקק וטיפוח על ידי האמהות שלהם, ולכן גירוי חוש המישוש הוא בנוסף לגירוי נורמלי מנוהל על ידי האמא. לבסוף, צריך גם להיות מודע לשינויים באזור תלוי. למרות שגירוי חוש המישוש במהלך התפתחות גידול במורכבות דנדריטים בקליפת מוח הקדם חזיתית, זה לא מבטיח ששינויים מבניים מסוג זה יהיו ברורים בכל אזורי המוח. יתכן שהמורפולוגיה עצבית באזורי מוח אחרים, כגון קליפת המוח הקודקודית, תגיב באופן שונה לחלוטין לאותה החוויה. עם זאת, מאחר שהליך גירוי חוש המישוש מנוהל בקלות ואינו מהווה סיכון לצאצאים או סכרים, יש לו הפוטנציאל לשמש ככלי רב ערך למחקרים רבים שנועדו לשפר את הפיתוחאל תוצאות. עם כל כבוד לצביעת Golgi-קוקס של רקמת המוח, הצעדים הקריטיים להדמיה מוצלחת של תאים עצביים הם כדלקמן: 1) חייבת להיות זלוף נאות של המוח עם תמיסת מלח. זלוף לא נכון או לא מספיק של תוצאות רקמת המוח בחפצי כלי דם זה עושים את זה קשה לדמיין בעצם תאים עצביים במבוך של כלי דם, בעוד שמסבך את היכולת לצלם נוירונים צבעוניים גם. 2) מוח perfused צריך להיות מאוחסן בפתרון Golgi-קוקס ותמיסת סוכרוז בחושך. אחסון רקמת המוח בחושך מפחית את מכתים הרקע של הרקמה, שוב מגדיל את הסיכוי להמחשה בהצלחה תאים עצביים איכות. 3) רקמת המוח מאוחסנת בתמיסת סוכרוז הבאה אחסון 14 היום בפתרון Golgi-קוקס. כאשר הרקמה היא שקועה בפתרון סוכרוז 30% ל2-5 ימים, המוח הוא גמישים יותר המונע מתנפץ וקריעה של חלקים כאשרחיתוך. זה חשוב כדי למנוע מרקמת המוח שנותר בתמיסת סוכרוז לפרקי זמן מוגבר (אלא אם כן פתרון סוכרוז מוחלף ברציפות עם פתרון טרי), כי אחסון ממושך בסוכרוז מפחית את האיכות מכתים. 4) לבסוף, לאחר שקופיות כבר מוכתמות וכיסוי החליק, הם צריכים לתת מספיק זמן לייבוש לפני ההדמיה באמצעות מיקרוסקופ. אם שקופיות אינן רשאים ישודרו כראוי יבש, הרקמה עלולה להכהות, הפחתת הדמיה מוצלחת של תאי עצב בקליפת המוח. שינויים יציבים בתפקוד פסיכולוגי ותגובות התנהגותיות המתרחשים בתגובה לחוויות הם האמינו להיות בהנחייתם של ארגון מחדש של מורפולוגיה עצבית וקישוריות הסינפטית 17. שינויים המבניים אלה מספקים משאבים למדידה לפלסטיות חוויה תלויה, השימוש בהליך מכתים אמין הוא חשוב. הליך מכתים Golgi-קוקס מבוסס vibratome זה מספק כתם אמיןing של ענפים דקים וקוצים הדנדריטים שלא יכול להיות ברור עם פרוטוקולים אחרים כגון celloidin-הטבעה. ייחודו של הליך Golgi-קוקס נובע מיכולתה כדי להכתים חלק קטן של אלמנטים עצביים (1-10%), המאפשר איתור של נוירונים בודדים למרחקים ארוכים בלבד. על אף העובדה שרק חלק קטן של הנוירונים ספוגים עם הכתם, תאים הניתנים לעין, לשמור על כל התכונות, כולל גוף תא, דנדריטים, קוצים הדנדריטים ואקסונים. יתר על כן, כאשר ההליך מכתים מתבצע בצורה נכונה, התאים המוכתמים להתבלט באופן ברור ומובהק על רקע שקוף, משום שמבנים בקליפת המוח אחרים יישארו ללא רבב ושקוף. בשל ההבנה ששינויים מתמשכים בתפקוד חיצוני חייבים להיות קשורים לפלסטיות של מערכת העצבים, כלומר היכולת של תאי עצב כדי לשנות את המבנה והקישוריות שלהם, ההליך מכתים Golgi-קוקס מספק לחוקריםטכניקה אמינה לחזות ולכמת פלסטיות זה.

אמנם יש טכניקות רבות דיווחו ומנוצלות לבחינת חוויות שליליות בשלב מוקדם הבשלת המוח, כגון מתח סביב הלידה 1,2, חסך חושי 3, ורעילויות תרופת 4, יש מעט מאוד מתודולוגיות המועסקות כדי לבחון את ההשפעות של חוויות חיוביות ב פרק זמן זה. מלבד העשרה סביבתית, גירוי חוש המישוש הוא אחד מכמה מוח שיפור טיפולים עם אפקטים הפגינו 5. גירוי חוש המישוש הוא שיטה של ​​גירוי חושי לעור המחקה את התנהגות החולדה האימהית, מלקק וטיפוח. הקבלה הכללית שלה כמניפולציה חיובית העולה ממחקרים המראים כי גירוי חוש המישוש השתפר הבשלה של פגים וחולדות שזה עתה נולדו 6. בנוסף, מחקר במעבדה מייני 7 הוכיח כי רמות גבוהות יותר של ליקוק וטיפוח אימהיים צמודות לתוצאות חיוביות בצאצאים. בשל tהשפעות חיוביות hese, גירוי חוש המישוש התפתחו במהירות לתוך אסטרטגיה מתקנת שמטרתה הפחתת חרדה 8, שיפור תוצאות הקשורים לפגיעה מוחית 9-11, והפחתת רגישות לסמים 12. ככזה, גירוי חוש המישוש הוא טכניקה רבת ערך לקידום חוויות מוקדמות חיוביות, עם יכולת מוכחת לארגון מחדש של מורפולוגיה עצבית וקישוריות הסינפטית של המוח המתפתח באופן דרמטי. על מנת לבחון ולכמת את השינויים במורפולוגיה עצבית, יש צורך לדמיין נוירונים בשלמותה. ההליך מכתים Golgi-קוקס הוא שינוי של הטכניקה של קמילו גולג&#39;י שפורסמה בסוף 1800s המספקת צביעה של מספר קטן של תאי עצב מלאים 13 בדידה. למרות ההליך מופיע להכתים נוירונים באקראי והשחזור מצוטט בכינויו פגם עיקרי, ההדמיה היתרי שיעור הספגה הקטנה של המרכיב העצבי כולה, כוללים לסה&quot;נגופי ll, דנדריטים, קוצים הדנדריטים, ואקסונים. באופן דומה, את הזמן הנדרש כדי להספיג מוח נתון עם פתרון Golgi גם צוטט כנפילה. עם זאת, בהתחשב בכך שפעם אחת הצביעה היא רקמה שלמה יכולה להישמר ללא הגבלת זמן, ואת הזמן בין טפטוף של המוח וההדמיה של הנוירונים במיקרוסקופ ניתן להשלים בתוך פחות מ21 ימים, תקופת הזמן היא לא בלתי סבירה. בנוסף, עם שינויים קלים בפרוטוקול, מכתים Golgi-קוקס ניתן להשתמש ביעילות כדי להספיג מוחם של מכרסמים מכל הגילאים. כמו שינויים ברמה המבנית נמצאו קשורים לשינויים מתמשכים לתפקוד ההתנהגותי ופסיכולוגי, את טכניקת צביעת Golgi-קוקס מספקת חוקרים עם כלי רב ערך כדי למדוד neuroplasticity.

<table><tbody><tr><td>אשלגן דיכרומט</td><td>פישר</td><td>P188</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד כספי</td><td>פישר</td><td>M1561</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כרומט</td><td>פישר</td><td>P220</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום הידרוקסיד</td><td>פישר</td><td>A669-500</td><td></td></tr><tr><td>קודאק תיקון מהיר</td><td>Vistek</td><td>קודאק 146 4016</td><td></td></tr><tr><td>EtOH-95 & </td><td>אלכוהול מסחרי</td> נטול מים <td>ללא מספרי חתול</td><td>כל שאר ה-Et-OH הם דילולים</td></tr><tr><td>Swiffers- אבק רך דמוי נוצה</td><td>Safeway</td><td></td><td>ניתן למצוא ברוב חנויות המכולת</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-9378</td><td></td></tr><tr><td>HemoDe</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>23410</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher</td><td>Sp15</td><td></td></tr><tr><td>Slides</td><td>VWR</td><td>160004-365</td><td></td></tr><tr><td>כיסויים</td><td>VWR</td><td>062011-9</td><td></td></tr></tbody></table>

לדמיין את ההשפעות של ניסיון מוקדם חיובי, מישוש גירוי, על דנדריטים מורפולוגיה וsynaptic קישוריות עם golgi-קוקס מכתים

Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining

כדי ליצור שינויים ארוך טווח בהתנהגות, חוויות חייבים להיות הפקת שינויים יציבים במורפולוגיה עצבית וקישוריות הסינפטית. גירוי חוש המישוש הוא חוויה ראשונית חיובית שמחק אימהית ללקק וטיפוח בחולדה. חשיפת גורי חולדה לחוויה חיובית זה יכול להסתיים בקלות וביעילות על ידי שימוש בחומרים נגישים מאוד כגון מטלית משק בית. באמצעות עיצוב המלטה צולבת, גורים הם ליטפו אחד או שמאלה באין מפריע, במשך 15 דקות, שלוש פעמים ביום לאורך כל התקופה סביב הלידה. כדי למדוד את שינויי neuroplastic הקשורים לניסיון המוקדם החיובי הזה, מכתים Golgi-קוקס של רקמת המוח מנוצל. בשל העובדה שהספגת Golgi-קוקס מכתימה מספר בדיד של נוירונים ולא כל התאים, מכתים של המוח המכרסם עם פתרון Golgi-קוקס מאפשר ההדמיה של אלמנטים עצביים כולה, ובכלל זה גוף התא, דנדריטים, אקסונים, ו קוצים הדנדריטים. I ההליך מכתיםים שבוצע על פני כמה ימים ודורש שהחוקר לשים לב לפרטים. עם זאת, ברגע שמכתים הושלם, כולו המוח כבר ספוג ויכול להישמר לזמן בלתי מוגבל לניתוח מתמשך. לכן, מכתים Golgi-קוקס הוא משאב יקר ערך לחקר פלסטיות חוויה תלויה.

כאשר הליך מכתים זה כבר אחרי כראוי, מכתים עקבי ואחיד של דנדריטים וקוצים שנוצר. ראה איור 1 עבור ייצוג של מכתים עצבי Golgi-קוקס. הליך זה מייצר כתמים כי ניתן להשוות להדמיה חדשה שפותחה בשיטות מבחנה ורשאית להתיר השדות דנדריטים שהטבעת הרקמה הבאה רציף. הטכניקה מבוססת vibratome עבור מכתים Golgi-קוקס כבר מצאה לייצר כתמים נרחבים יותר של סניפי מסוף ונוירונים פירמידליים, מאשר צביעה עם או מוטבע celloidin ורקמות מחולקים cryostat, 15. יתר על כן, מכיוון ששיטה זו של מכתים מכניסה את המוח כולו, ניתן לנתח את כל החלקים או מייד או בעתיד. כמיקום של שינוי מורפולוגי הוא שזה לא תמיד מובן מאליו בעת יצירת השערה מקורית, תהליך זה מאפשר הבדיקה של אזורי מוח נוספיםד מונע סילוק של רקמה שעשויה להיות שימושיים בעתיד. שיטת צביעה זו יכולה לשמש עבור מכתים אמין של כל מוחות בני חולדה (גיל P0-ישן). עם זאת, כאשר מכתימים את המוחות צעירים (&lt;1 גרם), המוח צריך להישאר רק בפתרון Golgi-קוקס במשך 6 ימים, ולא 14 הימים מומלצים למוחות בוגרים, כל ההליכים האחרים נשארים קבועים. הקושי העיקרי שעשויות להיות נתקלים במהלך תהליך צביעת Golgi-קוקס הזה הוא חוסר היכולת לייצר צביעה באיכות גבוהה של אזורים במוח מרכזיים, ובם התלמוס. כמו כל המוח הוא ספוג באותו הזמן, אזורים מרכזיים עשויים שלא לקבל ריכוזים אידיאליים של כתם. למרות ממצא זה, טכניקת Golgi-קוקס מייצרת כתמים חריגים של אזורים קורטיקליים כגון ההיפוקמפוס וסטריאטום. מגבלה סופית של ההליך נובעת מהסרת חלקית של דם מהמוח במהלך תהליך זלוף. דם עשוי לייצר חפצים ברקמת המוחזה עושה את זה קשה לצלם ולאתר את תאי העצב. טכניקות צביעת Golgi-קוקס מספקות מדד אמין של מורפולוגיה הדנדריטים וneuroanatomy כי הוא שימושי עבור מגוון רחב של מחקרים שנועדו לבחון את השינויים ברמה העצבית. כאשר בוחנים מבנה עצבי בקליפת מוח הקדם חזיתית בעקבות גירוי מישוש בתקופה המוקדמת שלאחר הלידה, מכתים Golgi-קוקס חשף עלייה דרמטית במורכבות הדנדריטים. שינויים אנטומיים הקשורים לגירוי חוש המישוש המוקדם ניתן להדגים באופן חזותי על ידי השוואת צפיפות עמוד השדרה של נוירונים פירמידליים מעכברוש שליטה לפירמידת נוירונים מעכברים שעברו גירוי חוש המישוש (ראה איור 1). כמו כן, ניתן לחשב פרמטרים כגון arborization הדנדריטים, אורך הדנדריטים, וצפיפות עמוד השדרה וסטטיסטית נותחו כדי להפיק נתונים רציפים הניתנים להשוואה על פני בעלי חיים. כדי להפיק תוצאות אמינות, ניתוח צריכה להתבצע בבוקרinimum של שלושה בעלי חיים לקבוצת טיפול וכחמישה נוירונים לאונה צריך להיות נבחר באופן אקראי לכל אזור במוח מתחת לניתוח. איור 2 מדגים את המורכבות דנדריטים (קוצים / מיקרומטר x מיקרומטר של דנדריט) של חיות שקיבלו גירוי ובעלי חיים שלא מישוש . בשני שדות הפסגה וbasilar של הנוירונים ניתחו מmPFC (CG3), גירוי חוש המישוש הביא לריבוי של פרמטרים עצביים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50694/50694fig1.jpg" /> איור 1. תמונת א &#39;הנציג של Golgi-קוקס מוכתם נוירון פירמידלי מהשכבה III של אזור CG3 בחולדה שקיבלה גירוי חוש המישוש במהלך פיתוח. ב נציג מוגדל תצלום (1,000 X) של קוצים הדנדריטים על דנדריטים הטרמינל בשדה basilar של CG3 ; התמונה בהירה יותר בצד השמאל היא לעכברים בקבוצת הביקורת ותמונה הכהה יותר על ריght הוא מעכברים שקיבלו גירוי חוש המישוש. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/50694/50694fig2.jpg" /> איור 2. ייצוג להמחשה המורכבות הממוצעת הפסגה וbasilar דנדריטים (קוצים / מיקרומטר x מיקרומטר) לנוירונים באזור CG3 מחולדות מבוגרים שגם קיבלו גירוי חוש המישוש במהלך פיתוח או לא (* p &lt;0.01).

מאמר זה מתאר את הנהלים לגירוי חוש המישוש של גורי חולדה ומכתים Golgi-קוקס הבא של מורפולוגיה עצבית. גירוי חוש המישוש הוא חוויה חיובית כי הוא מנוהל בתקופה סביב הלידה על ידי מלטף את הגורים עם מטלית משק בית. מכתים Golgi-קוקס הוא הליך אמין המאפשר ההדמיה של כל הנוירונים.

לדמיין את ההשפעות של ניסיון מוקדם חיובי, מישוש גירוי, על דנדריטים מורפולוגיה וSynaptic קישוריות עם Golgi-קוקס מכתים

To generate longer-term changes in behavior, experiences must be producing stable changes in neuronal morphology and synaptic connectivity. Tactile ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להשתמש בטכניקות צביעת gold G Cox כדי להדמיאן את השינויים המורפולוגיים בנוירונים המתרחשים בעקבות גירוי מגע בשלבים מוקדמים של החיים. דבר זה מושג תחילה על ידי מתן גירוי מגע שלוש פעמים ביום, מהיום השלישי לאחר הלידה ועד היום ה-21 לאחר הלידה. השלב השני הוא ביצוע פרפוזיה לבעלי החיים ברגע שהם מגיעים לגיל הבדיקה ואחסון מוחותיהם בתמיסת Goldy cos.בשלב הבא, המוחות נחתכים באמצעות Aome. השלב האחרון הוא סריקה של המוחות בטכניקת הצביעה המשותפת GOGI. בסופו של דבר, פרוצדורת GOGI משמשת להדמיה של נוירונים בודדים, דבר המאפשר ניתוח של שינויים מורפולוגיים.היתרון של טכניקת Goy Cox הוא שהיא מאפשרת לנו לכמת את מבנה הנוירונים ולהקריב זאת עם תוצאות התנהגותיות. ההשלכות של טכניקה זו חולות גם על הפרעות התפתחותיות, שכן הוכח שגירוי מגע יעיל בהשגת התאוששות התנהגותית ואנטומית מהפרעות אלו. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי הנוירו-אנטומיה של חולדות, ניתן ליישמה גם על אורגניזמי מודל אחרים ועל רקמות מוח אנושיות.כדי לסייע לנו להעמיק את הבנתנו בנוגע לפלסטיות תלוית-ניסיון, בעלי החיים מוחזקים במחזור של 12 שעות אור וחושך עם גישה חופשית למזון ומים לאחר הלידה. כל חולדה נקבה שוכנת באופן פרטני עם צאצאיה. כדי למנוע סטרס נוסף הקשור לטיפול, הגורים מקבלים גירוי מגע החל מיום P3.לאחר שקילול הגורים לפני סשן הגירוי המישואי של הבוקר, העבירו את הגורים בכלובי הבית שלהם לחדר בדיקה נפרד. הניחו את כלוב הבית על משטח חימום המכוון ל-24 °C. כאשר תהיו מוכנים לגירוי המישואי, הוציאו את האמהות מכלוב הבית שלהן והעבירו אותן לכלוב זמני עם מזון ומים.השאירו את נקבת האם ואת הכלוב הזמני בחדר הגידול. לאחר מכן, השתמשו בלוח קשיח כדי לחלק את כלוב הבית לשני חצאים. לאחר מכן, חלקו באופן אקראי מחצית מהגורים מכל שגרה להליך של גרייה תחושתית, כאשר המחצית השנייה תשמש כקבוצת ביקורת.סמנו את הרגליים האחוריות ואת הזנב של הגורים בעזרת טוש קבוע כדי להבדיל בין הקבוצות, והניחו את הגורים מקבוצת הגירוי המישוש בצד אחד של הכלוב ואת גורי הביקורת בצד השני. הגדירו טיימר ל-15 דקות והשתמשו במנקה אבק בעל נוצות רכות. הברישו את כל הגורים מקבוצת הגירוי המישוש בו-זמנית למשך 15 דקות רצופות.גורי החולדה הצעירים בדרך כלל נצמדים זה לזה ונראים כנכנסים למחזור שינה עמוק, מה שהופך את גירויים של כל הגורים בבת אחת לקל מאוד. ככל שהגורים מתבגרים, הם הופכים לפעילים יותר, וחלק מהגורים מתחילים ללכת ולחקור. במהלך הסשן, העבירו כל גור שמסתובב חזרה אל הקבוצה כדי להבטיח שכל גור יקבל גירוי שווה.לאחר 15 דקות של גרייה מגעית, החזירו את האם לכלוב והעבירו את הכלוב בחזרה לחדר הריבוי. תהליך זה חוזר על עצמו שלוש פעמים ביום. למשך 19 ימים לאחר מפגש הגרייה המגעית האחרון, גמלו את הגורים מאמהם. הגורים שוכנים בכלובים עם חמישה או שישה בעלי חיים גמולים אחרים מאותו מין. השאירו את החולדות ללא הפרעה בתנאי דיור סטנדרטיים עד שיגיעו לגיל הדרישה למחקר.הדגימות נאספות כאשר בעלי החיים מגיעים לגיל 100 ימים. לאחר הפוטנזיה ופרפוזיה תוך-לבבית, המוח מופק, תוך הקפדה לשמור על הדורה (cerebellum) שלמה.הניחו את המוחות בבקבוק Nalgene אטום למאור המלא ב-20 milliliters של תמיסת Goldy Cox, שם יישמרו למשך 14 ימים. לאחר 14 ימים, החליפו את התמיסה בתמיסת sucrose בריכוז 30%. השאירו את המוחות בתמיסת ה-sucrose למשך יומיים עד חמישה ימים לפני ביצוע החיתוכים.ייבשו את המוח באמצעות נייר סופג לפני קיבועו לבמה לחיתוך באמצעות דבק אקרילי של Sano כדי למנוע קריעות או חיתוך לא אחיד; ודאו שכל המוח מקובע היטב לבמה. לאחר מכן, מלאו את מאגר ה-Vibram בתמיסת 6% sucrose עד שהיא מכסה את להב החיתוך. הגדירו את המהירות והאמפליטודה של ה-Vibram לערך חמש.חתכו את המוח לפרוסות בעובי 200 micron והניחו את הפרוסות על שקופית מיקרוסקופ עם ג'לטין 2%. הקפידו להשאיר את הפרוסות רטובות במהלך החיתוך עד לאיסוף כל הפרוסות הרלוונטיות. הדביקו את הפרוסות לשקופיות על ידי הפעלת לחץ באמצעות נייר סופג לח.הניחו את השקופיות במעמד לשקופיות ואחסנו אותן בתא לחות למשך 12 שעות לפחות, אך לא יותר מארבעה ימים. כדי להתחיל בתהליך הצביעה, סמנו והכינו 12 צלחות צביעה מזכוכית. ראשית, טבלו את השקופיות במים מזוקקים למשך דקה אחת.בשלב הבא, הניחו את השקופיות באמוניום הידרוקסיד ושמרו אותן בחושך למשך 30 דקות. לאחר דקה נוספת במים מזוקקים, הניחו את השקופיות ב-Kodak Fix למשך 30 דקות תחת הגנה מאור. הניחו את השקופיות שוב במים מזוקקים לפני ביצוע דהידרטציה בסדרה של תמיסות אלכוהול בריכוזים מדורגים.לאחר שטיפת האלכוהול האחרונה, השקיעו את השקופיות בתמיסה בערך של שליש למשך 15 דקות. לבסוף, השקיעו את השקופיות ב-hemo D למשך 15 דקות. כאשר השקופיות מוכנות, השתמשו ב-paramount להנחת זכוכיות כיסוי על השקופיות והמתינו להתייבשותן באוויר לפני בדיקתן באמצעות מיקרוסקופ.להלן תצלום מייצג של נוירון פארא-מטלי בחולדה שקיבלה גירוי מגע במהלך ההתפתחות, שנצבע בשיטת Golgi Cox. תצלום מוגדל מראה קוצים דנדריטיים על הדנדריטים הטרמינליים. התמונה הבהירה יותר משמאל היא מחולדה מקבוצת הביקורת, והתמונה הכהה יותר היא מחולדה שקיבלה גירוי מגע.גרף זה מייצג את המורכבות הדנדריטית האפיקלית והבסאלרית הממוצעת של נוירונים באזור CG three בחולדות בוגרות שקיבלו גרייה תחושתית במהלך ההתפתחות או שלא קיבלו. על ידי ביצוע פרוצדורה זו, אנו נהנים מהיתרון שמאחר שצבענו את המוח כולו, נוכל לחזור ולהשתמש באותה רקמת מוח כדי להשיב על שאלות נוספות במידה ונרצה. באמצעות פיתוח טכניקות אלו, סללנו את הדרך עבור חוקרים לבחון את התועלת של גרייה תחושתית כטיפול בטראומה ראשית או בצורות אחרות של פגיעה נוירולוגית לאחר התפתחותן.טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים במדעי המוח לבחון את הפוטנציאל שלה בשיקום טראומה מוחית והפרעות התפתחותיות. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להעניק לגורי חולדה את החוויה המעשירה של גרייה תחושתית, וכן לגבי האמצעים להדמיית נוירונים וסינפסות בודדים.

visualizing-effects-positive-early-experience-tactile-stimulation-on

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מחקרים עדכניים רבים זיהו מוטציות חלבונים סינפטיים הקשורים פתולוגיות במוח. ראשי נוירונים בקליפת המוח בתרבית להציע גמישות רבה לבחון את ההשפעות של מחלות אלה הקשורים חלבונים על מורפולוגיה תנועתיות עמוד השדרה הדנדריטים.

ניתוח של מורפולוגיה השדרה דנדריטים של נוירונים במערכת העצבים המרכזית Cultured

אנו מתארים שתי שיטות להדמיה וכימות של ארבוריזציה דנדריטית בהיפוקמפוס של מודלים של עכברים: הדמיה בזמן אמת ועומק שדה מורחב. בעוד שהשיטה הראשונה מאפשרת מעקב טופוגרפי מתוחכם וכימות של היקף ההסתעפות, השנייה מאפשרת הדמיה מהירה של העץ הדנדריטי.

הערכה של דנדריטים arborization ברכס המשונן של האזור בהיפוקמפוס של עכברים

סרטון זה מציג את הליך הגולגולת המאפשר הדמיה כרונית של נוירונים בקליפת המוח הרטרו-טחולית של העכבר באמצעות מיקרוסקופ פוטונים שני פוטונים in vivo בקו טרנסגני Thy1-GFP. גישה זו משולבת עם הזרקת נגיף הקשור לאדנו המבטא mCherry לתוך ההיפוקמפוס הגבי. טכניקות אלו מאפשרות ניטור ארוך טווח של פלסטיות מבנית תלוית ניסיון ב-RSC.

שני פוטונים סימולטני<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של תשומות Synaptic ויעדי Postsynaptic בקליפת עכבר Retrosplenial

אנו מציגים פרוטוקול בשיטת מכתים גולגי-קוקס בסעיפי מוח עבים, כדי להמחיש נוירונים עם עצי דנדריטים ארוכים בתוך דגימות רקמה אחת. שתי גרסאות של פרוטוקול זה גם מוצגים שכוללות counterstaining סגול cresyl, והקפאת המוח מעובד עבור אחסון לטווח ארוך.

נוירונים הדמיה בתוך חלקים במוח עבים שימוש בשיטת גולגי-קוקס

כאן אנו מציגים פרוטוקול Golgi-Cox בפירוט רב. זו שיטה אמינה רקמת כתם מאפשר הערכה איכותית גבוהה של cytoarchitecture בהיפוקמפוס, ובכל רחבי המוח כולו, עם פתרון מינימלי.

הערכת המורכבות בהיפוקמפוס דנדריטי בעכברים בגילאים בשיטת Golgi-Cox

פרוטוקול זה מתאר שיטת הדמיה סימולטני של thalamocortical האקסון מסעף סינפסה היווצרות של organotypic cocultures של תלמוס, קליפת המוח. Thalamocortical בודדים אקסונים ומסופי presynaptic שלהם הם דמיינו ידי טכניקה אלקטרופורציה תא בודד עם DsRed ו מתויג GFP synaptophysin.

ויזואליזציה של האקסון Thalamocortical הסתעפות, סינפסה-צורה Organotypic Cocultures

כאן אנו מתארים שיטה לדמיין סינפטוגנזה של נוירונים גרגיריים במוח הקטן של העכבר במהלך הזמן של התפתחות המוח לאחר הלידה, כאשר תאים אלה משכללים את המבנים הסינפטיים שלהם ויוצרים סינפסות כדי לשלב את עצמם במעגל המוח הכולל.

שימוש באלקטרופורציה לאחר הלידה של In Vivo לחקר מורפולוגיה של נוירון גרגיר המוח הקטן והתפתחות סינפסה

הפרוטוקול מתאר שינוי של שיטת גולגי המהירה, אשר ניתן להתאים לכל חלק של מערכת העצבים, עבור הכתמת נוירונים בהיפוקמפוס וקליפת המוח הקדם מצחית המדיאלית של החולדה.

כתם גולגי מהיר להדמיית עמוד שדרה דנדריטי בהיפוקמפוס וקליפת המוח הקדם-מצחית

אנו מתארים כאן שיטות להשראת וניתוח שיפוץ תלוי חוויית ריח של גלומרולי סינפטי של אונת אנטנה במוח הצעיר של דרוזופילה .

עיצוב מחדש תלוי ניסיון של נוירון חושי חושי הריח של המוח הצעיר קישוריות סינפטית בתקופה קריטית לחיים מוקדמים

הפרוטוקול המוצג מתאר את השימוש במיקרוסקופ אלקטרונים שידור (TEM) כדי לכמת שינויים צירקדיים בקליפת המוח של חבית העכבר, תוך התמקדות בעיקר במספר הסינפסות ובמורפולוגיה של עמוד השדרה הדנדריטית.

מיקרוסקופ אלקטרונים שידור כטכניקת הדמיה לניתוח הפלסטיות הסינפטית הצירקדית בקליפת המוח של חבית העכבר

חקור את השפעות הגירוי המישושי על המורפולוגיה הנוירונלית בעכברושים באמצעות צביעת Golgi-Cox. שיטה זו מאפשרת הדמיית דנדריטים וניתוח פלסטיות תלוית-חוויה במחקר נוירו-התפתחותי.

לדמיין את ההשפעות של ניסיון מוקדם חיובי, מישוש גירוי, על דנדריטים מורפולוגיה וSynaptic קישוריות עם Golgi-קוקס מכתים

גלה סרטונים נוספים