Name: חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס Neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-14T22:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: חקור טכניקה רדיולוגית מתקדמת להקרנה ממוקדת במודלים של בעלי חיים קטנים באמצעות הדמיה תלת-ממדית מונחית טומוגרפיה ממוחשבת. שיטה זו מאפשרת עיכוב מדויק של נוירוגנזה במבוגרים ותרומה להבנת תפקודי מוח ומחלות נוירודגנרטיביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לג Montojo, ג&#39;רייס, ומ &#39;שריון לקבלת ייעוץ וסיוע טכניים. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים אמריקאים לבריאות מענק NS063550 F31 (לDAL), פרס בזיל אוקונור Starter Scholar ומענקים מקרן Klingenstein וNARSAD (לSB). SB הוא צעיר נכבד Scholar קק WM במחקר רפואי.

שימוש בבעלי חיים לקבל אישור מועדת טיפול בבעלי חיים והשימוש מוסדי לפרוטוקולי טיפול ושימוש סטנדרטיים. הפרוטוקול הנוכחי פותח ללימודי הקרנת מוקד בעכברים בוגרים ישנים 5.5-10 שבוע C57BL6 / J, כפי שתואר לעיל (איור 2) 2. עם זאת, בגילים אחרים וגם מינים של בעלי חיים קטנים (חולדות, אוגרים, סנאי קרקע, וכו &#39;) יכולים לשמש, ובלבד שפרוטוקולי הרדמה יעילים ואטלס התייחסות רדיוגרפי המאפשר זיהוי של האזור של עניין (ROI) הנן זמינים. 1. כיול של פלטפורמה רדיולוגית מודרכת-CT לבצע כיולים מבוססי סרט למינון קרינה על פלטפורמת רדיולוגי מראש לכל גודל collimator וסוג של מסנן שפופרת רנטגן בשימוש. על מנת למקד את קרן קשת של קרינה באתר היעד הרצוי, השתמש בavailabl 49 תוכנת מינון תכנון קרינהדואר ברוב פלטפורמות קרינה מסחריות לחישוב זמן אספקה ​​הנדרש המבוסס על מינון הקרינה, את עומק את האזור של העניין (ROI) המבוסס על סריקות CT של העכבר, ומהירות הסיבוב של הפלטפורמה רובוטית; פרטים בעניין זה נותרים בחוץ של פרוטוקול זה כפי שהם שונים בין פלטפורמות קרינה. לצורך המחשת ההיפותלמוס ventrobasal 2 (איור 3) עם ההדמיה CT, להפעיל את שפופרת רנטגן עם כתם 0.4 מ&quot;מ מוקד ואנרגיה אלומת 100 kVp עם 1 מ&quot;מ סינון אל. עבור הקרנת מוקד של HPZ, להפעיל את שפופרת רנטגן ב225 kVp, 13 mA, ובמקום מוקד 1 מ&quot;מ עם סינון של 0.15 מ&quot;מ Cu, כדי לספק 10 Gy של קרינה בעומק רקמה של 0.6 סנטימטר מעל טיפול זמן של 4.6 דקות. מיקוד בין ROIs שונה ידרוש חישוב פרמטרים שונים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם לומד את ההשפעות של דיאטה עתירה שומן על נוירוגנזה ברוממות החציוני כפי שתואר 2 בעבר, לקבל נשי C57B ארבעה שבועות בןעכברי L6 / י ממעבדות ג&#39;קסון מאוס, ובית ארבעה עכברים בכל כלוב. החלף מזון מאוכל רגיל לתזונה עתירה שומן בחמישה שבועות. לאפשר עכברים להסתגל לדיור ומזון חדשים. בצע טיפול CFIR ב5.5 שבועות ישנים. תחבורה מכפיפה לחדר הניתוח הכולל את פלטפורמת רדיולוגי. למזער את רמות לחץ בעת ההעברה. הכן את חדר הרדמה גז isoflurane. לאחר מכן, להוסיף עכבר אחת לחדר. במקביל, להכין כרית חימום (הגדרה נמוכה) שללאחר טיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהעכבר נמצא תחת ואינו מגיב לדחיסת הרגל-pad, להביא את הנושא לפלטפורמת רדיולוגי ומניח על מיטת הקיבוע של השלב רובוטית. הנח את פיו של הנושא לתוך כוס ההרדמה האף קונוס, ושיניים לשומר הביס (1D איור). שכב עכבר על מיטת חוסר התנועה ולבדוק כדי לראות אם הוא ממשיך לשמור על חוסר תגובה. אם כן, קלטת את העכבר למיטה עם קלטת גזה. אמנם מקליט את העכבר למיטה, ודא שראשו מפולס למישור אופקי. זה יכול להיקבע על ידי משיכת האוזניים ולראות אם הם מפולסים. ברגע שהעכבר נמצא במיקום הנכון, סגור את מגן העופרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש את סריקת מחשב טומוגרפיה באמצעות תוכנה של פלטפורמת רדיולוגי של הנסיין על הלוח (זה יהיה שונה בין פלטפורמות), אשר תספק סריקה מבנית אנטומיים תלת ממדית של נושא העכבר. בדקו אם ראש העכבר מפולס למישור האופקי. אם לא, חזור על שלבים 1.2-1.3 עד שראשו של הנושא מפולס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את ההחזר על ההשקעה על ידי תמונת ה-CT. לחשב את המרחק מההחזר על השקעה על פני השטח של הגולגולת באמצעות זווית של ° 45 למישור האופקי, כפי שמוצג באיור 3E. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנה על הלוח, לקחת את קרני ה-X של נושא העכבר מלמעלה, כפי שמוצג באיור 4 א. לאחר מכן, להסיר את העכבר מפלטפורמת רדיולוגי, לשים על כרית חימום, ולפקח עד פעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתמונות CT העטרה, לחשב את העומק אנטומיים ROI הממוצע של לפחות שלושה עכברים על מנת לקבוע מינון מסירה. כדוגמא ממחקר קודם שבו 2 10 Gy של קרינה היה מנוהל על ההיפותלמוס ventrobasal, עומק את ההחזר על ההשקעה מהגולגולת (מזווית של ° 45) הוא 0.66 סנטימטר (ראה איור 3E). בידיעה, החוקרים השתמשו בתוכנת תכנון מינון (DPS) המותקנת בפלטפורמת רדיולוגי כדי לחשב את המהירות המתאימה לסיבוב ואורך הטיפול להשגת מינון הרצוי להחזר על ההשקעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קביעת משך טיפול ומהירות סיבוב של הבמה רובוטית עם תוכנת מינון תכנון, למדוד הפצות מינון של הפרמטרים מחושבים עם סרטי קרינה רגישה GAFchromic המוטבע במודל חיקוי עכבר פלסטיק במים שווי ערך. כדי לעשות זאת, כדי לשבץ את שלושה סרטי קרינה רגישה GAFchromic בין ארבעה בלוקים נערמים אנכי מים שווי ערך פלסטיק 29 כמושמוצג באיור 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מודל עכבר מדומה המכיל סרטי GAFchromic על במה רובוטית, ולהפעיל את קרן הקרנת המוקד עם הפרמטרים מחושבים מחדש. לדוגמה, כדי למקד את ההיפותלמוס ventrobasal, קלט הפרמטרים של 0.15 מסנן Cu מ&quot;מ, 225 kVp, 13 mA, הגדרת 1 מ&quot;מ קוטר אלומת קרינה, זווית gantry 45 °, 1.3 סיבוב ° / sec, ו4.6 דקות כדי להשיג את ההחזר על ההשקעה מינון רדיולוגי של 10 Gy. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות הקרנה, לבדוק סרטים לדפוס ועוצמת מינון קרינה. לסיבוב זווית 360 ° עם הפרמטרים המפורטים למקד את ההיפותלמוס ventrobasal, טבעת כהה בסרט מעל isocenter, נקודה פריכה קטנה בסרט isocenter, וטבעת בהירה יותר בסרט מתחת לisocenter המתאימה החרוט ממשל אלומת הקרינה יקויימו (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב סרט GAFchromic isocenter על צילומי רנטגן של נושאי עכבר ממנו הפרמטרים היו calמחושב על. המוקד המוקרן בisocenter צריך חפיפה עם אזור ההחזר הרצוי על ההשקעה כפי שמוצג באיור 4C. </li></ol> שיטה חלופית: אם קושי במיקוד ROI המוח נמשך, השתמש ניגוד יוד מוזרק intrathecally כדי לשפר את ההדמיה של חדרים מתחת לתמונות CT. לשם קיצור, הליך זה נשאר בחוץ של פרוטוקול זה, אבל מתואר 35, 50 בעבר. לעומת זאת יוד יספק ציוני דרך נוספות חדרית (איור 5 א). 2. קביעת דיוק של ההקרנה Beam נוסף לאשר דיוק קרן CFIR ידי הדמיה ישירה של אלומת הקרינה ברקמות 2, 35, 51. כדי לעשות זאת, לבצע אימונוהיסטוכימיה לזהות 51 γH2AX, חלבון היסטון וסמן מוקדם של הפסקות גדיל כפולות ה-DNA. נושאים מאוס חייבים להיות perfused transcardially וקבוע בתוך שעה אחת של קרינה. irradi הבאation, תיקון דנ&quot;א במהירות ensues, והרמות של ΥH2Ax להקטין באופן משמעותי 35. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 1.1-1.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר היעד מזוהה על CT, נושא ההזזה העכבר שבשליטת רובוטית ליישר יעד זה עם קורה משלוח הקרינה. פרמטרים של קלט מחושבים (מהירות סיבוב ואורך הטיפול להשגת מינון הרצוי) משלב 1.6 לתוך תוכנת מינון תכנון ולהתחיל בטיפול. טיפול מועבר עם gantry הצביע 45 ° מהאנכי בזמן שהעכבר מסתובב על ציר אנכי בכיוון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות הקרנה, לבצע זלוף transcardial בנושאי עכבר. בצע זלוף בתוך שעה אחת 52. בעקבות מוח זלוף, לתקן טבילה בPFA 4% / PBS ועדינות רוק הלילה בשעה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר, לשטוף 5 דקות ב3x PBS להסיר מקבע paraformaldehyde. לאחר מכן, לטבול בסוכרוז 30% ב 1x PBS על כיסא נדנדה ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נער בעדינות על 4 מעלות צלזיוס (ually 12-16 שעה), עד שהמוח שוקע לתחתית צינור. זה משמש כצעד cryoprotection. ברגע שהמוח לשקוע, להסיר מוח עם כף מחוררת כדי למנוע 30% העברת PBS sucrose/1x עודפת. להטביע במהירות בהקפאה בינונית על קרח יבש. מערבולת מדיום הקפאה עם קצה פיפטה וליישר מוח בתבנית פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע קפוא לחלוטין, להעביר בלוקים מוח למקפיא -20 ° לאחסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום שבי אימונוהיסטוכימיה תבוצע, סעיף coronally ב40 עובי מיקרומטר, ולצוף לתוך צלחת 24 גם מכילה PBS עם מכחול דק. צריכים להישמר סעיפים על מנת סידורי נכון עבור immunostaining לקבוע כיסוי הקרנה של אזור היעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.01 Prewarm M פתרון נתרן ציטראט 80 מעלות צלזיוס באמבט מים כהכנה לצעד אחזור אנטיגן. במקביל, בעוד ציטרט הנתרן מתחמם, לבצע 5 שטיפות דקות 3x ב0.01 M PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שפתרון ציטרט הנתרן הוא על 80 מעלות צלזיוס, להטביע חלקים במוח in פתרון חיץ ציטרט הנתרן. השאר באמבט מים ב 80 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסעיף ולאפשר פתרון ציטרט הנתרן להגיע לטמפרטורת חדר, ולאחר מכן לבצע שלוש שוטף של 5 דקות הליכה ב0.01 M PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום חלקים במוח במשך שעה 1 ב-PBS-טריטון המכילה 5% נסיוב עזים נורמלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיפי דגירה הלילה במוח ב-PBS-טריטון המכילים 5% נסיוב עזים נורמלים עם 1:700 ריכוז של נוגדן ראשוני עכבר אנטי phospho-H2AX ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, לבצע 15 שוטף דקות 3x ב0.01 M-PBS טריטון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה חלקים במוח-PBS טריטון המכיל 5% נסיוב עזים נורמלים עם נוגדנים משני עז אנטי עכבר מצומד עם fluorphore 488 ננומטר ב1:500 ריכוז במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע 15 שוטף דקות 3x ב0.01 M-PBS טריטון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע כתם 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (1:5,000 PBS) עבור 10 דקות לדמיין גרעין. לאחר מכן, לשטוף חלקים במוח למשך 5 דקות עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר על אלקטרוסטטי chמיקרוסקופ arged מחליק על ידי סעיף צף בPBS. נגב את PBS העודף ולאפשר שקופיות לייבוש. Coverslip השקופיות באמצעות הרכבה בינונית ולאפשר את השקופיות לייבוש בחושך בטמפרטורת חדר למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח תמונות של סעיפי העטרה סידוריים עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי. immunostaining ΥH2Ax (ירוק) עולה באתר של קרינה. DAPI (כחול) הוא כתם גרעיני (איור 5). </li></ol> 3. הכנת עכבר נושאים להקרנת הפוקוס בחן את תוצאות immunostaining ΥH2Ax. ברגע שמרוצה מהכיול והמיקוד של אלומת הקרינה, להמשיך בניסוי. בשלב זה, את הסך כל הזמן הנדרש לטיפול בעכבר (מהגדרה של בעלי חיים להשלמת מסירת קרן) הוא כ 10-15 דקות לטיפול 10-Gy עם קרן 1 מ&quot;מ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזמין נקבות עכברי ארבעה שבועות בן C57BL6 / י ממעבדות ג&#39;קסון מאוס. בית ארבעה עכברים בכל כלוב, ולעבור מזון מאוכל רגיללתזונה עתירה שומן בחמישה שבועות. עכברי אגרוף באוזן לתת להם סימני זיהוי ייחודיים. לפקח על בריאותם של עכברים יומיים. הערה: סמנים מתכתיים לא ניתן להשתמש כפי שהם יגרמו לפסי חפצים על CT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל עכברים היום לפני טיפול קרינה או אחיזת עיניים. עכברי פיצול לשני מחזורים לקרינה או טיפול דמה ולהבטיח כי אין הבדל משמעותי במשקל בין קבוצות. ביום של טיפול, כאשר עכברים הם בן שישה שבועות, reweigh כל העכברים ולהקליט את המסה שלהם. בעדינות להעביר את שני הקבוצות לפלטפורמת רדיולוגי. תשמור על עצמך כדי למזער את רמות לחץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את חדר הרדמה גז isoflurane. הרדימי שני עכברים, אחד בקבוצת הקרינה שנקבעה מראש, ועוד בקבוצת ביקורת הדמה. הכן את כרית חימום שנקבעה בהגדרה הנמוכה לטיפול לאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות 1.2-1.4 לעכבר כדי לקבל הקרנה. לעכבר הדמה, לשמור על עכבר בחדר הרדמה בזמן הטיפול קורה. הפוך surדואר שתא ההרדמה הנמצא בסמוך לפלטפורמת CFIR כך שום השפעה על קרינה סביבתית נלקחת פנימה אחרי היעד מזוהה על CT, להעביר נושא העכבר שבשליטת רובוטית ליישר יעד זה עם קורה משלוח הקרינה. קלט מחושב פרמטרים (מהירות סיבוב ומשך טיפול) לתוך תוכנת מינון תכנון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר טיפול הקרנה יושלם, תחזור גם זיוף ועכברים מוקרנים לכרית חימום, ולפקח עד שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר שני דמה ועכברים מוקרנים למתקן חי. לפקח על כל יום. לשקול את העכברים כל חצי שבוע. כדי לאשר את ההקרנה של אזור שגשוג ההיפותלמוס הממוקד, להזריק intraperitoneal של BrdU (50 מ&quot;ג / קילוגרם) נוירוגנזה שלושה ימים שלאחר טיפול ולבחון בין קבוצות על ידי colabeling של אימונוהיסטוכימיה לBrdU וחודש סמן עצבי אחד לאחר חשיפת BrdU ראשונית (איור 6) 2. </li></ol>

יש JW מימון מחקר וייעוץ הסכמים עם Xstrahl, Inc

הקרנה מודרכת-CT מוקד (CFIR) היא רומן גישת מערכת שלמה מסוגל לספק שדות קרינה למטרות בבעלי חיים קטנים שבשליטה רובוטית באמצעות CT-הדרכה 32. היכולת של CFIR לספק אלומה ממוקדת מאוד למודלים של בעלי חיים קטנים מספקת הזדמנויות מחקר חדשות לגשר מחקר במעבדה ותרגום קליני. מאמר זה מתאר את גישת CFIR למסירת קרינה מדויקת למקד אוכלוסייה עצבית ההיפותלמוס במיוחד. אנו מדגימים כאן כיצד לכייל ולאשר סגוליות משלוח קרינה באמצעות סרט X-ray וברקמת מוח על ידי אימונוהיסטוכימיה. <p class="jove_con...

תגליות שנעשו לאחרונה הראו כי המוח של היונקים הבוגרים יכול לעבור במידה יוצאת דופן של גמישות. מבוגר יליד נוירונים נוצרים לאורך הבגרות בנישות מיוחדות של המוח של היונקים 1. מהו תפקידיו של מבוגר יליד נוירונים אלה? ויותר מכך, אין הם ממלאים תפקיד בפיזיולוגיה והתנהגות? מחקרים בנושא זה התמקדו באופן מסורתי באזור subventricular של החדרים לרוחב ואזור subgranular של ההיפוקמפוס, עם זאת, מחקרים שנעשו לאחרונה מתאפיינים נוירוגנזה באזורים אחרים במוח כגון ההיפותלמוס היונקים 2. נוירוגנזה כבר דווחה שבלאחר הלידה וההיפותלמוס המבוגר 2-10, ואת הפונקציה של הנוירונים ההיפותלמוס יילוד אלה נותרת אזור פעיל של חקירה. האפיון הפונקציונלי של מבוגר יליד נוירונים עדיין מהוות אתגר משמעותי עבור תחום מדעי המוח באופן כללי. עיכוב סלקטיבי של מפרטific אוכלוסיות עצביות נותרת מוגבלות על ידי חוסר של סמנים מולקולריים זמינים שהנם ייחודיים לאוכלוסיות עצביות אחת 11. לפיכך, מחיקה סלקטיבית של מבוגר יליד נוירונים מאבות העצביים אלה באמצעות מיקוד גנטי עדיין קשה. כמו כן, משלוח ויראלי למקד מבוגר יליד נוירונים סובל ממשתנים מבלבלים פוטנציאליים כגון החדרת פציעה ודלקת לתוך הסביבה 12. הכלים רדיולוגי חדשים צצים, לעומת זאת, המאפשרים אחד כדי לעקוף את הבלבול אלה ולחקור את השאלות האלה באמצעות מיקוד האנטומי מדויק ומדויק בבעלי חיים קטנים. קרינה מייננת מעכבת את הלידה והתמיינות של תאי עצב חדשים, ומאפשרת בשיטה לא פולשנית למקד אוכלוסיות עצביות 13-15. לאחרונה, תיארתי את האזור נבטי של רוממות היונקים ההיפותלמוס החציוני (ME) שכינינו את אזור שגשוג ההיפותלמוס (HPZ) 2 </sup&gt;. מצאנו כי כאשר עכברי נקבה בוגרים צעירים קיבלו תזונה עתירה שומן (HFD), רמות הנוירוגנזה בעכברים שהוזנו-HFD היו גבוהות משמעותי מהאוכל שלהם הנורמלי (NC) בקרות האכילו בי האזור הזה 2. כדי לבדוק אם neurogenesis למבוגרים בתוך ME ההיפותלמוס מווסת את חילוף החומרים ומשקל, שבקשנו לשבש את התהליך הזה. רוממות החציוני היא מבנה חד צדדי קטן בבסיס של החדר השלישי שממנו ההורמונים רגולטוריים הם שוחררו. על מנת לעכב את התפשטות ונוירוגנזה הבאה מבלי לשנות את הפונקציות פיסיולוגיות האחרות של האזור הזה במוח, שפיתחנו טכניקת הקרנת מוקד פולשנית כדי לעכב את לידתו של נוירונים בוגרים שזה עתה נולדו ברוממות החציוני ההיפותלמוס 2 באופן סלקטיבי. מספר הקבוצות מועסק קרינה לדכא נוירוגנזה באזורים הקנונית 14-28. עם זאת, גישות רדיולוגי קודמות בדרך כלל ממוקדות שטחים גדולים, או often שלא במתכוון גם ממוקד אזורים במוח שבו מספר רב של נוירוגנזה כבר דיווחו, ולכן קשה לשייך באופן חד משמעי כל פגמים התנהגותיים שנצפו עם מומים באוכלוסיות עצביות ספציפיות. היכולת להקרנה ממוקדת יותר מסופקת על ידי פלטפורמות רדיולוגי המשלבות הדמיה מודרכת טומוגרפיה omputer ג עם הקרינה ו ocal ir קרן מסירה (CFIR) כדי לאפשר האנטומי מדויקת מיקוד 29-36. קורות קרינה קטנות כמו 0.5 מ&quot;מ קוטר זמינות למקד אוכלוסיות עצביות ספציפיות 35. מתודולוגיה זו מאפשרת לנו למקד את ME ההיפותלמוס ולעצור את ההתפשטות ולחסום נוירוגנזה בבעלי חיים קטנים. בעקבות טיפול רדיולוגי על אוכלוסיות אב אלה, ניתן לבצע בדיקות פיסיולוגיות והתנהגותיים כדי להאיר את פונקצית הפוטנציאל של תאי בוגרים שנולדו. מיקוד הפוקוס הוא חשוב במיוחד עבור היישום שלנו מאזבלוטת יותרת המוח ממוקמת קרובה לרוממות החציוני ההיפותלמוס; הקרנה של יותרת המוח עשויה להשפיע על תפקוד הורמונלי ובהמשך לבלבל את התוצאות. הבסיס הביולוגי לדיכוי ההקרנה הבאה נוירוגנזה עדיין אינו ברור. מחקרי קרינה קודמים הסתמכו על קורות שטח גדולות, והגיעו למסקנה כי דיכוי נוירוגנזה מתווך דרך תגובה דלקתית 14, 37. ככזה הוא לא ברור אם הקרנת מוקד מאוד יכולה לדכא נוירוגנזה, שכן הוא אינו מעורר תגובה דלקתית משמעותית. עם זאת, מחקרים שנעשה לאחרונה על ידי הקבוצה של האזור העצבי הקלאסי בהיפוקמפוס שלנו הוכיחו כי הקרנת מוקד מאוד עם מינון של 10 Gy יכולה לדכא נוירוגנזה לפחות 4 שבועות לאחר הקרנת 35. כדי לחקור את הפונקציה של הנוירונים ההיפותלמוס בוגרים שנולדו ברוממות החציוני, אנו משתמשים ד קרינת דיוקevice מסוגל לספק הדמיה CT בשילוב עם קורות קרינה בקוטר קטן כדי לעכב ME נוירוגנזה. שימוש בשפופרת רנטגן מצורף gantry שמסתובבת על פני טווח של 360 °, שאנו מספקים אלומת קרינת מיקרו קשת קורה עם השימוש בשלב דגימת רובוט מבוקר המאפשר סיבוב של נושא בעלי החיים במהלך טיפול בקרינה (איור 1) . גלאי רנטגן ברזולוציה גבוהה המשמשים לרכישת תמונות כאשר gantry הוא במצב האופקי 33. לצורך המחקר, תמונות CT שוחזרו בגודל voxel איזוטרופיים של 0.20 מ&quot;מ. ההדמיה CT על הלוח אפשרה זיהוי של יעד בעוד החיה נמצאת במצב הטיפול. היעד מקומי באמצעות תוכנת CT הניווט מתכנן במינון, שנכללה עם פלטפורמת רדיולוגי זמינה המסחרית שלנו. לאחר האיתור את ההחזר על ההשקעה שלנו על ידי הדמיה של CT, בעלי החיים הועברו לתפקיד על ידי הטיפול המתאים בשלב הדגימה רובוטית שיש לו ארבע מעלותריס של חופש (X, Y, Z, θ). באמצעות שילוב של זוויות פיגום ושלב רובוט, קורות יכולות להיות מועברות כמעט מכל כיוון ביחס לבעלי החיים, וטיפולים כמו קשת stereotactic אפשריים 29. לבדיקות הדמיה אחרות אלה וכל, העכברים הוצבו במכשיר קיבוע המאפשר אספקה ​​של גז isoflurane הרדמה תוך הגבלת תנועה. מיטת חוסר התנועה היא CT תואם, ומתחברת לשלב הדגימה רובוטית 34. אנו מצפים כי CFIR יספק התקדמות רעיונית במספר תחומי מחקר. למרות שאנו משתמשים במיקוד לפי רדיולוגי של רוממות החציוני ההיפותלמוס כהוכחה לעיקרון של טכניקה זו, CFIR יכול לשמש היעד כל אזור של הגוף של כל אורגניזם מודל קטן באופן עקרוני. בתחום מדעי המוח, למשל, אנו רואים בטכניקה זו יכולה לשמש כדי להעריך את תפקודן של אוכלוסיות אב פעיל שגשוג שהוצע לExis<html> לא באיברי circumventricular אחרים, כגון postrema האזור 38, 39, איבר subfornical 40, ובלוטת יותרת המוח 41. מחלוקות ארוכי שנים בנוגע לתפקיד הפונקציונלי של neurogenesis למבוגרים וזיהוי תפקיד סיבתי בהתנהגות יכולות גם עכשיו יהיו טובות יותר לטפל. בציפור שיר, טכניקה זו עשויה להתייחס לתפקיד של neurogenesis המבוגר בשמירה על ההתנהגות החזקה ועונתית של ציוץ ציפור 42, שכבר הקשו על ידי היכולת לעכב באופן סלקטיבי נוירוגנזה באזורים מסוימים במוח. הבנת מודל התנהגותי חזק זה עשויה לשפוך תובנה חדשה את התפקיד של neurogenesis למבוגרים בויסות התנהגויות מיניים דימורפית אחרות. לחלופין, בתחום מטבולים, CFIR עשוי לשמש כדי לחקור היבטים של התפקיד של התפשטות הפטוציט ותפקידה בחילוף חומרים ומאזן אנרגיה. האפשרות להתקדמות רעיונית בתחומי מחקר רבים היא משופרת על ידי ההקדמה של טכניקה זו. = &quot;Jove_content&quot;&gt; במאמר זה, אנחנו מדגימים את היכולות של CFIR לאנטומיים דיוק מיקוד של אלומת קרינת מוקד. למרות שאנחנו בהתחלה פיתחנו פלטפורמה זו קרינת חיה קטנה מחקר (SARRP) ללימודים שלנו, מכשירים דומים אחרים זמינים באופן מסחרי, שיכול להשיג הקרנה דומה מודרך CT מוקד 43, 44 עכשיו. לפיכך, אנו מכלילים פרוטוקול CFIR זה בצעדים הנדרשים לכל פלטפורמות המחקר ולא את אלה ספציפיים לSARRP. היתרונות של CFIR פני גישות רדיולוגי קודמות לעכב נוירוגנזה הם כי טכניקה זו מאפשרת הדרכת תמונת נפח תלת ממדים ללוקליזציה והמיקוד של המינון, מינון קונפורמי ממזער את החשיפה לאזורים במוח nontargeted, והגיאומטריה קורה דיוק גבוה מאפשרת להפצת מינון קונפורמי עם גבולות קורה חדים. אנחנו מתארים כיצד להשתמש דמיון מודרך-CT למקד את המינון לאזור אנטומי ספציפי, ועל כך, איך לדמיין את הקרינהמינון הפצה ישירות ברקמות באמצעות מכתים immunohistochemical לγ-H2AX, סמן של הפסקות גדילי הדנ&quot;א כפולות 35, 45-48. השימוש בגישה זו להקרנה סלקטיבית של נישות עצביות עשויה להיות השלכות משמעותיות בחושף את התפקיד הפונקציונלי של מבוגר יליד נוירונים חדש על פיזיולוגיה ומחלות.

<table><tbody><tr><td>פלטפורמת מחקר SARRP</td><td>Xstrahl</td><td>RS225A</td><td><a href="http://www.xstrahl.com/xstrahlrs225.htm" target="_blank">http://www.xstrahl.com/xstrahlrs225.htm</a></td></tr><tr><td>SARRP בונקר הקרנה</td><td>Xstrahl</td><td></td><td>אופציונלי, אך יש להכיל חשיפה לקרינה עם מיגון עופרת חלופי</td></tr><tr><td>סרט כרומי GAF</td><td>IPS</td><td>GAFchromic ETB2</td><td></td></tr><tr><td>פנטום עכבר</td><td>Gammex</td><td>457</td><td>רכוש לוחות מים מוצקים בגודל 0.5 ס"מ x 30 ס"מ x 30 ס"מ מגמקס וחתוך לגודל הרצוי.</td></tr><tr><td>נוגדן נגד פוספו-היסטון H2AX Ser139 עכבר</td><td>Millipore, Inc.</td><td>05-636</td><td>שיבוט JBW301</td></tr><tr><td>דיאטת מכרסמים עתירת שומן</td><td>דיאטות מחקר</td><td>D12492i</td><td>60% מהקלוריות כשומן, יש להקרין</td></tr> מזון <tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter Healthcare Corporation</td><td>10019-360-40</td><td></td></tr><tr><td>0.01 M נתרן ציטראט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td></td><td>1.471 גרם נתרן ציטראט מומס ב 500 מ"ל מים נטולי יונים</td></tr><tr><td>Superfrost Plus שקופיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>כתם נגד גרעיני</td></tr><tr><td>אמצעי הרכבה</td> עדיף <td>Fisher Scientific</td><td></td><td>Vectashield או Gelvatol</td></tr></tbody></table>

חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

האפיון הפונקציונלי של מבוגר יליד נוירונים עדיין מהווה אתגר משמעותי. יש גישות לעכב neurogenesis למבוגרים באמצעות משלוח נגיפי פולשניים או בעלי חיים מהונדסים בלבול פוטנציאלי שהופכים את הפרשנות של תוצאות מהמחקרים אלה קשים. הכלים רדיולוגי חדשים צצים, לעומת זאת, המאפשרים אחד כדי לחקור noninvasively הפונקציה של קבוצות נבחרות של מבוגר יליד נוירונים באמצעות מיקוד האנטומי מדויק ומדויק בבעלי חיים קטנים. קרינה מייננת המוקדים מעכבת את הלידה והתמיינות של תאי עצב חדשים, ומאפשרת מיקוד של אזורים עצביים ספציפיים. על מנת להאיר את התפקיד הפונקציונלי הפוטנציאלי שנוירוגנזה ההיפותלמוס מבוגר משחקת בוויסות של תהליכים פיסיולוגיים, פיתחנו טכניקת הקרנת מוקד פולשנית כדי לעכב את לידתו של מבוגר יליד נוירונים ברוממות החציוני ההיפותלמוס באופן סלקטיבי. אנו מתארים שיטה לomputer C-מודרך טומוגרפיהמשלוח ו ocal ir קרינה (CFIR) כדי לאפשר האנטומי מדויקת מדויקת מיקוד בבעלי חיים קטנים. CFIR משתמש בהדרכת תמונת נפח תלת ממדים ללוקליזציה והמיקוד של מינון הקרינה, מצמצם את החשיפה לקרינה לאזורים במוח nontargeted, ומאפשר להפצת מינון קונפורמי עם גבולות חדים קרן. פרוטוקול זה מאפשר לאדם לשאול שאלות לגבי תפקידו של מבוגר יליד נוירונים, אבל גם פותח אזורים לשאלות בתחומי radiobiology, ביולוגיה של גידול, ואימונולוגיה. הכלים רדיולוגי אלה יקלו את התרגום של תגליות בספסל לצד המיטה.

מיקוד ודיוק מודרכים-CT הערכה הכיול המכני של המערכת הוא חיוני להבטחה שקורות מזוויות שונות בכל מצטלבות בנקודה אחת. כיול בוצע עם שיטת הדמיה מבוססת אוטומטית למחצה, שבו דיוק יישור קצה לקצה כבר נמדד להיות 0.2 מ&quot;מ 29. דיוק זה הוא קריטי מאוד כמו הנפח של מבנה רוממות החציוני ההיפותלמוס הוא קטן 2. כדי לבחון את הכיול הזה, מדדנו הפצות מינון עם סרטי קרינה רגישה GAFchromic המוטבע במודל מים שווי ערך פלסטי...

הפונקציה של תאי עצב של יונקים בוגרים שנולדו נשארת אזור פעיל של חקירה. קרינה מייננת מעכבת את לידתו של נוירונים חדשים. באמצעות הקרנה המונחה טומוגרפיה מחשב מוקד (CFIR), מיקוד אנטומיים תלת ממדי של אוכלוסיות עצביות ספציפיות כעת ניתן להשתמש כדי להעריך את התפקיד הפונקציונלי של neurogenesis למבוגרים.

חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס Neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לתאר טכניקה רדיולוגית מתקדמת, המאפשרת לבצע הקרנה מוקדית במודלים של בעלי חיים קטנים ולעכב לאחר מכן פרוליפרציה ברזולוציה אנטומית ספציפית. דבר זה מושג תחילה על ידי שימוש בדימות נפחי תלת-ממדי מונחה CT לצורך לוקליזציה של האזור המבוקש. השלב השני של הפרוצדורה הוא חישוב המינון ומשך הטיפול הרדיולוגי באזור המבוקש.השלב השלישי הוא ביצוע כיול מבוסס סרט עבור מנת הקרינה. השלב הסופי הוא קביעת הדיוק של קרן הקרינה באמצעות ויזואליזציה ישירה של קרן הקרינה ברקמה. בסופו של דבר, תוצאות ממחקרים אלו יכולים להדגים את התפקיד התפקודי הפוטנציאלי של אוכלוסיות נבחרות של תאי אב עצביים (neuro progenitor) מתרבים, באמצעות ניתוח של הפיזיולוגיה וההתנהגות לאחר הטיפול.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות לדיכוי נוירוגנזה, כגון הקרנה רחבה של המוח, הוא השימוש בקרני קרינה שקוטרן קטן עד 0.5 millimeters כדי לטרגט אוכלוסיות נוירוגנטיות ספציפיות. דבר זה מאפשר לקשור באופן חד-משמעי פגמים התנהגותיים או פיזיולוגיים לתפקודים הספציפיים של אוכלוסיות נוירוגנטיות. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן שלבי הגדרת קרן הקרינה קשים ללמידה בשלב הראשוני בשל השלבים הרבים המעורבים בשימוש הן בחומרה והן בתוכנה לצורך לוקליזציה של ה-prop ומינון. הכינו תא הרדמה של גז isoflurane, ולאחר מכן הכניסו עכבר בודד לתוך התא.במקביל, הכינו פד חימום המוגדר על עוצמה נמוכה לצורך טיפול בבעלי החיים לאחר הפרוצדורה. כאשר העכבר כבר אינו מגיב ללחיצה על כרית כף הרגל, העבירו אותו לפלטפורמה הרדיולוגית והניחו אותו על מיטת הקיבוע של הבמה הרובוטית. הניחו את פיו בתוך כוס ההרדמה של קונו האף ואת שיניו בתוך מגן הנשיכה.הנח את העכבר בצורה שטוחה על מיטת הקיבוע. אם העכבר נותר ללא תגובה, קבע אותו באמצעות סרט גזה. וודא שהראש נמצא במישור אופקי על ידי משיכה קלה של האוזניים כלפי מעלה.ברגע שהעכבר נמצא במיקום הנכון, סגרו את מגן העופרת. כעת בצעו סריקת טומוגרפיה ממוחשבת באמצעות התוכנה המובנית של הפלטפורמה הרדיולוגית כדי לקבל סריקה תלת-ממדית של המבנה האנטומי של העכבר מהתמונות. ודאו שהראש נמצא במקביל למישור האופקי.אם לא, המשיכו לכוונן את ראש העכבר עד שיהיה כך. כעת הגדירו את ה-ROI מתמונות ה-CT כדי להדמיות של ההיפותלמוס הבזאלי ונטרלי (ventral basal hypothalamus) באמצעות דימות CT. הפעילו את שפופרת רנטגן כפי שפורט.חשבו את המרחק מה-ROI מפני השטח של הגולגולת באמצעות זווית של 45 מעלות למישור האופקי. השתמשו בתוכנה המובנית כדי לבצע צילום רנטגן של העכבר מלמעלה. לאחר מכן, הוציאו את העכבר מפלטפורמת הרדיולוגיה.הניחו את העכבר על משטח החימום ועקבו אחריו עד שיהיה פעיל. מתוך תמונות CT חזיתיות (coronal), חשבו את העומק האנטומי הממוצע של ה-ROI עבור לפחות שלושה עכברים כדי לקבוע את מינון ההחדרה. כדוגמה ממחקר קודם שבו הוקטרו 10 gray של קרינת I להיפותלמוס הבזאלי-בנטרלי, עומק ה-ROI מהגולגולת מזווית של 45 מעלות הוא 0.66 centimeters.ברגע שהערך ידוע, השתמש בתוכנה לתכנון מינון כדי לחשב את הסיבוב, המהירות ואת משך הטיפול המתאימים עבור המינון הרצוי ב-ROI. לאחר מכן, מדוד את התפלגויות המינון של הפרמטרים שחושבו. השבץ שלושה סרטי GAF chromic הרגישים לקרינה בתוך מודל עכבר מפלסטיק שווה-מים.מקם אותם בין ארבעה בלוקים של פלסטיק שווה-מים המונחים זה על זה אנכית. הנח את דגם העכבר על הבמה הרובוטית והפעל את קרן ההקרנה הממוקדת עם הפרמטרים שחושבו לאחרונה. בדוגמה זו, נבדקת מנה של 10 Gray של קרינה להיפותלמוס הבסאלי הוונטרלי. לאחר ההקרנה, בדוק את תבנית ועוצמת המינון על הסרטים עבור סיבוב של 360 מעלות, תוך התמקדות בהיפותלמוס הבסאלי הוונטרלי, בקרן הקונית.קרינה יוצרת טבעת כהה בסרט שמעל מרכז ה-ISO, נקודה קטנה וחדה בסרט במרכז ה-ISO וטבעת בהירה יותר בסרט שמתחתיו. כעת מניחים את סרט ה-ISO center GA FCH Chromic על גבי תמונות הרנטגן כך שמרכזי ה-ISO יחפפו. נקודת המוקד שהוקרנה במרכז ה-ISO צריכה לחפוף מאוחר יותר עם ה-ROI הרצוי.ניתן להעריך את דיוקו של קרן ההקרנה ברקמה באמצעות ויזואליזציה של סמן לשברים דו-גדיליים ב-DNA. לאחר שהכיול ומיקוד קרן ההקרנה מספקים, ניתן להמשיך בניסוי. בדוגמה זו, עכברי נקבה מסוג C 57 black six J בני חמישה שבועות קיבלו תזונה עשירה בשומן במשך שבוע אחד לפני הטיפול.ביום שלפני הטיפול, נשקלו העכברים וחולקו לשני קהלים ללא הבדל משמעותי במשקל ביניהם. ביום הטיפול, נשקלו העכברים שנית ואז הועברו בעדינות לפלטפורמה הרדיולוגית והורדמו שני עכברים, אחד בקבוצת הניסוי והשני כביקורת. כמו כן, כוון את פד החימום להגדרה נמוכה עבור הטיפול הפוסט-אופרטיבי.הכינו את העכבר לקבלת הקרנה כפי שתושאר בעבר. בזמן שהטיפול נמשך, השאירו את עכבר הביקורת (sham) בתא ההרדמה סמוך לפלטפורמת ה-CFIR, כדי שכל השפעה של קרינת רקע תילקח בחשבון. לאחר זיהוי המטרה ב-ct, העבירו את העכבר תחת השליטה הרובוטית כדי ליישר את המטרה עם האלומה.לאחר מכן, הזינו את הגדרת המינון המחושבת והקרינו את הקרינה. לאחר ההקרנה, הניחו את שני העכברים על משטח החממה ועקבו אחריהם עד להתעוררותם. לאחר הקרנת כל העכברים, עקבו אחריהם מדי יום ושקלו אותם פעמיים בשבוע.שלושה ימים לאחר הטיפול, כדי לאשר את ההקרנה, יש להחדיר זריקות תוך-peritonium של BRDU חודש מאוחר יותר. זהו נוירוגנזה בתאים המבטאים BRDU וסמן נוירונלי. התפלגויות המינון נמדדו באמצעות GAF chromic.סרטים רגישים לקרינה המוטמעים בדגם של עכבר. לקונוס הקרינה היה רוחב מלא בחציו של המקסימום (FWHM) של 2.31 millimeters. קרן המוקד מדגימה את הדיוק ביישור של קרניים מכיוונים שונים.ניתן להלביש סרט זה על גבי צילום רנטגן של עכבר הניסוי כדי להדגים את מיקום ואת דיוק הקרן. במידה והטרגוט של ה-ROI אינו מספק באמצעות נקודות ציון אנטומיות, ניתן להשתמש בהזרקה של חומר ניגוד יוד תוך-תעלתי (intrathecal) כדי לשפר את הטרגוט. חדרי המוח הצדיים והשלישי נראים בבירור בסריקות CT שבוצעו בפלטפורמה הרדיולוגית A-C-F-I-R כדי לאשש עוד יותר את הטרגוט המודרך ב-CT של האזור ההיפותלמי.מיקומו של הקרן ברקמה הודגם באמצעות צביעת gamma H2AX לשבירות של DNA בשרשרת כפולה; הצביעה הוכיחה מיקוד מדויק עם קצה חד מאוד של הקרן. טיפול קשת דמוי סטראאוקטטי, המורכב מקשת בזווית של 45 מעלות מהאנך, מיקד ביעילות את הקרנה להיפותלמוס הבזאלי-ונטרלי, מבלי להקרין נישות נוירוגניות אחרות.השפעת הקרינה על הנוירוגנזה נחקרה בעכברים בוגרים שהוזנו בתזונה עשירה בשומן. נצפתה עיכוב של כ-85% בנוירוגנזה בהשוואה לקבוצות ביקורת שעברו טיפול דמה (sham). לעומת זאת, במבנה סמוך הגובל באתר הקרינה, לא נמצא הבדל מובהק סטטיסטית בין בעלי החיים שהוקרנו לבין ביקורות הדמה.עכברים שהוקרנו והוזנו בתזונה עשירה בשומן לפני הטיפול הראו עלייה מופחתת במשקל לאחר הטיפול בהשוואה לקבוצת הביקורת (sham). לעומת זאת, עכברי ביקורת שהוזנו במזון רגיל, אשר הראו רמות נמוכות משמעותית של נוירוגנזה ב-me בהשוואה למקביליהם שהוזנו בתזונה עשירה בשומן, לא הראו הבדל משמעותי במשקל בין קבוצת הביקורת לקבוצה שהוקרנה. יתרה מכך, עלייה מופחתת זו במשקל בעכברים שהוקרנו והוזנו בתזונה עשירה בשומן מלווה בשינויים במטבוליזם ובפעילות לאחר השליטה בתהליך.ניתן לבצע טכניקה זו בערך ב-15 דקות עבור כל עכבר, אם היא מבוצעת כראוי. יש לזכור כי עבודה עם קרינה עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון שימוש במיגון עופרת, גלאי קרינה והכשרה מתאימה בשימוש בקרינה, לפני ובמהלך ביצוע הליך זה.

functional-interrogation-adult-hypothalamic-neurogenesis-with-focal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הסרטון מדגים שיטת צביעה אימונופלואורסצנטית המשמשת לבחינת נוירוגנזה בהיפוקמפוס הבוגר. בתחילה, אזור מוח עכבר עובר טיפול בנוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבוני סמן הקשורים לנוירוגנזה בתאי אב עצביים. לאחר מכן, הוא מסומן עם נוגדנים משניים מתויגים עם fluorophores. לאחר מכן נצפה קטע המוח תחת מיקרוסקופ קונפוקלי כדי להבחין בין תת-סוגים שונים של תאי אב, בהתבסס על דפוסי הביטוי של שילובים שונים של חלבוני סמן.

טכניקת צביעה אימונופלואורסצנטית לזיהוי נוירוגנזה של היפוקמפוס בוגר

למרות החשיבות הפונקציונלית ורפואית של...

מניפולציה גנטית של העכבר באמצעות פיתוח היפותלמוס<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

פעילותם של נוירונים בודדים מעכברים בגיל מבוגרים ניתן ללמוד על ידי מתנער נוירונים מאזורים מסוימים במוח ובאמצעות הדמיה לצבוע פוטנציאל הממברנה ניאון. על ידי תגובות בדיקות לשינויים ברמת סוכר, טכניקה זו יכולה לשמש כדי לחקור את רגישות הגלוקוז של נוירונים ההיפותלמוס ventromedial מבוגרים.

ממברנה דיי הדמיה אפשרית של ventromedial היפותלמוס נוירונים מעכברים בוגרים ללמוד גלוקוז חישה

שיטות למניפולציה והניתוח של neurogenesis בהיפוקמפוס המבוגר NF-κB תלוי מתוארות. פרוטוקול מפורט מוצג לבדיקה משוננת gyrus תלוי התנהגותי (שמכונה במבוך ההפרדה בארנס דפוס המרחבי) לחקירת תוצאה קוגניטיבית בעכברים. טכניקה זו צריכה גם לעזור לאפשר חקירות בהגדרות ניסיוניות אחרות.

שיטות לאפנון וניתוח של Neurogenesis מבוגרים NF-κB תלוי

המנגנון העומד בבסיס ההשפעות הטיפוליות של ניתוח גירוי מוחי עמוק (DBS) זקוק לחקירה. השיטות המוצגות בכתב יד זה מתארות גישה ניסיונית לבחינת האירועים התאיים המופעלים על ידי DBS על ידי ניתוח פרופיל ביטוי הגנים של גנים מועמדים שיכולים להקל על נוירוגנזה לאחר ניתוח DBS.

ניתוח שינויי ביטוי הגנים בהיפוקמפוס העכברוש לאחר Deep Brain Stimulation של Anterior התלמוס הגרעין

פרוטוקול זה מראה כיצד להגדיר שיטה אמינה מערכת קבצים הירארכית בעכברים. נוירונים ברחבי הכישור משוננת בהיפוקמפוס הם גירוי חשמלית על-ידי מערכת קבצים הירארכית ישירות ובעקיפין בתוך vivo. פעילות. עצבית והאיתות מולקולרית נבדקים על ידי c-פוס Notch1 immunofluorescent מכתים, בהתאמה; נוירוג'נסיס לכמת על-ידי bromodeoxyuridine תיוג וזמינותו.

שיטה פולשני עבור ההפעלה של הכישור משוננת העכבר על ידי גירוי בתדירות גבוהה

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר גישה לניתוח התנהגות של מבוגרים בתאי גזע/מחולל קדמון בתגובה לטיפול כימוגנטי של מעגל מקומי ספציפי עצביים.

Assaying בוויסות מעגל ספציפי של היפוקמאל מבוגרים תאים מקודמן עצבי

המתואר כאן הוא הליך סטריאוטקטי שיכול למקד אזורים מאתגרים וקשים להשכה למוח (בשל מגבלות מרחביות) באמצעות גישה קורונטית זוויתית. פרוטוקול זה מותאם הן למודלים של עכברים והן למודלים של חולדות וניתן ליישם אותו על יישומים מוחיים מגוונים, כולל השתלת צינורית ומיקרו-נג'קציה של מבנים ויראליים.

גישה סטריאו-טיאו-טסטרואקטיבית מסתגלת לטכניקות רב-תכליתיות במדעי המוח

מאמר זה מדגים את הכנת חלון הדמיה בהתאמה אישית בתוספת קנולה עירוי והשתלתו על אזור CA1 של ההיפוקמפוס בעכברים.

הליך גולגולתי להדמיית פעילויות עצביות בהיפוקמפוס של עכברים מתנהגים

מוצגת כאן שיטה לרצף גרעינים בודדים שבודדו מהפיתול המשונן של העכבר, שאינה כוללת את רוב תאי העצב באמצעות מיון גרעינים המופעלים על ידי פלואורסצנציה (FAN). גישה זו מייצרת פרופילי ביטוי איכותיים ומקלה על המחקר של רוב סוגי התאים האחרים המיוצגים בנישה, כולל אוכלוסיות נדירות כגון תאי גזע עצביים.

מיון שלילי של גרעינים המופעלים על ידי פלואורסצנציה של נוירונים בשילוב עם ריצוף RNA של גרעין יחיד כדי לחקור את הנישה הנוירוגנית של ההיפוקמפוס

כאן אנו מציגים פרוטוקול לגידול תת-סוגים ספציפיים של תאי היפותלמוס בתרבית. ניתן לבחור את התאים על סמך סמני ממברנה אופורטוניים/ייחודיים ולהשתמש בהם ביישומים רבים, כולל בדיקות אימונופלואורסצנטיות, אלקטרופיזיולוגיות וביוכימיות.

בידוד נוירונים היפותלמיים ממוקדים למחקרים על ויסות הורמונלי, מטבולי וחשמלי

חקור טכניקה רדיולוגית מתקדמת להקרנה ממוקדת במודלים של בעלי חיים קטנים באמצעות הדמיה תלת-ממדית מונחית טומוגרפיה ממוחשבת. שיטה זו מאפשרת עיכוב מדויק של נוירוגנזה במבוגרים ותרומה להבנת תפקודי מוח ומחלות נוירודגנרטיביות.

חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס Neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב

גלה סרטונים נוספים