Name: טכניקת לימוד של פרוקים-רגליים וקהילות חיידקים בתוך רקמות עץ (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: למדו לבנות כריכת פלואם לצפייה בפרוקי-רגליים וחיידקים ברקמת עצים. שיטה זו מאפשרת מחקר אקולוגי וחינוכי ביערות באמצעות פלקסיגלס ופלסטיק אטום.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לאלי ג'נסן, סטפנו פדילה וקייסי יטורלדה על הסיוע, ולקארן לונדון ולסוקרים אנונימיים של כתב היד. אנו מודים לג'ייק בייקר וקרלה טורס על צילומי הווידאו. המימון ניתן ל-R.W.H על ידי בית הספר ליערנות של NAU וקרן יוזמת הטכנולוגיה והמחקר של NAU (TRIF).

1. השיפה בחירה והוצאה מעץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר עץ עם מאפיינים מסוימים. לאסוף השיפה מאורנים (כלומר, עצים בסוג Pinus) כמו שיש להם שכבה ייחודית השיפה שהיא כמה מילימטרים. 18,27 ברגע שעץ נמצא שיש כמה ענפים נמוכים, לבדוק אותו לכל פגמים אחרים כגון התקפות חרקים ו / או גורמי מחלה. לחלופין, להשתמש השיפה מעצי מחט אחרות כגון עצי אשוח בכריכי השיפה. 9 מיני עצים אחרים עשויים להיות מתאימים להסרת השיפה כמו מעץ קשה. הערה: מחטי עצים עם כתרים גדולים יש בדרך כלל רקמת השיפה העבה. למקסם את כמות השיפה, עדיף לחתוך עצים שיש לי כמה פגמים וענפים על הגזע (בגזע). מיני אורן שעבודת גיזום עצמי הטוב ביותר. השיפה היא בדרך כלל עבה במהלך עונת הגידול והוא עבה יותר את תא המטען מ קרוב לקרקע. השיפה לפעמים קשה removדואר מהעצים בעונות הסתיו או בחורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך עץ למטה או להשתמש ביומנים לחתוך לאחרונה להשיג רקמת השיפה. בחר כיוון נפילה שימזער פגיעה בעץ, כמו גם עצים סמוכים. ענפים מנותקים תא המטען כדי לאפשר גישה קלה יותר לחומרי קליפה במהלך הסרת השיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שעץ נחתך (כרות; הושלך על הקרקע) מתחיל גירוד הקליפה מהגזע עם תיקו להב חד (איור 1 א.). לגרד בשטח של הקליפה מעל עד שתגיע לשכבת השיפה. הערה: שכבת השיפה היא בדרך כלל בהירה יותר בצבע (למשל, בצבע שמנת) ולח, ואילו הקליפה החיצונית היא יבשה יותר וכהה יותר בצבע (איור 1 ב &#39;.). קח טיפול מיוחד שלא לגרד את השיפה. האזור של קליפה מגורדת תלוי בגודל נתח השיפה (ים) נדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי הקליפה מוסרת, לחתוך קווי המתאר של יצירת השיפה עם סכין חד. ודא הסכין חותך את כל הדרך לעצה (איור. 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר את השיפה, להתחיל בפינה של יצירת השיפה באמצעות אצבעות לקלף בזהירות את השיפה. השתמש בסכין כדי לסייע בגירוד השיפה את העצה. המשך מושך השיפה את עד שכל פיסה מוסרת. הערה: השיפה בדרך כלל מקלף של העץ הכי קל בקיץ. להשיפה שהיא קשה ביותר להסרת, כלי בצורת מרית יכול לסייע במאמץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את יריעת השיפה מייד לתוך שקית סטרילית. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, ואקום לאטום את השקית (איור. 2 ב) או, אם שימוש בשקיות ניילון אטום, להסיר את כל האוויר מהשקית. זה מגדיל את תוחלת החיים של השיפה. לחלופין, להניח את החלקים מרובים של השיפה בתיק אחד. השיפה חנות בשקיות אטומות מעט מעל ההקפאה (בין 1 ל 10C) כדי לשמור על הטריות שלו. </li></ol> 2. יצירת סנדוויץ השיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך שתי חתיכות שווה של חומר פלסטי שקוף, פוליקרבונט, או חומר קשה, ברור דומה (למשל, זכוכית) גדול מעטr מהחתיכה (איור. 2C) של השיפה. סביב שולי אקריליק כדי למנוע את הפינות מקורעים את חותם Parafilm. פרוטוקול זה משתמש 1/8 ב. אקריליק ברור העבה. הערה: הגודל של החתיכות לחתוך תלויה בצרכי של האורגניזם הנושא ואת אורכו של המחקר. לדוגמא, זוג חיפושיות קליפה מנצל 4 dm 2 של השיפה על פני תקופה חודש, אבל רק צריך dm 1 2 אם המחקר מתרחש בתוך כמה ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח חור לתוך אחת יצירות אקריליק כדי לאפשר כניסה של האורגניזם מחקר (ים). הגודל ומספר החורים תלויים במטרות (איור. 2 ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הצבת השיפה בין חתיכות אקריליק, לעקר את פני השטח אקרילי (עם&gt; 70% אתנול) או, אם באמצעות אקריליק החדש, להסיר את הסרט המגן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח חתיכת השיפה הטרי בין חתיכות אקריליק סטרילי. אוריינט פיסת אקרילי עם החור (ים) בצד הפנימי או חיצוני של השיפה, whicheveיש צורך בr. בדרך כלל, להתמודד עם הצד החיצוני של השיפה (צד שקליפה על זה) לכיוון חורי הכניסה. </li></ol> 3. איטום סנדוויץ השיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור חותם זמני סביב כריך השיפה, להשתמש 2 ב. רצועות Parafilm רחבות משכו בקצוות של כריך השיפה (איור. 2 ג). לחלופין, להשתמש לעטוף כלוריד polyvinylidene לאטום את הקצוות. 6 הבא, למקם את מהדק בכל צד של הכריך לסחוט אקריליק השיפה. ודא את כל פני השטח הוא הידק למטה כדי למנוע את חלל אוויר בין אקריליק והשיפה (איור 2 ג). אם לא הידק כראוי, דגימות עשויות לנוע בין אקריליק והשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור חותם חצי קבוע להוסיף ריבת אפוקסי או נפט שאינו הדבקה סביב השיפה. ודא כי החומר המקיף את השיפה לחלוטין. לאחר מכן, השתמש מהדק או ברגים עם ברגים (ייתכן שיהיה צורך לקדוח חורים מראש) להחזיק אקריליק ההדוק להשיפה.הכריכים להישאר קיימא רק לתקופה של עד חודש או חודשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לצרכים החמצן של אורגניזמים המחקר, להוסיף מסנן אוויר על צד אחד או יותר של הכריך. זה יאפשר לאוויר להיכנס לתוך כריך השיפה אבל להגביל את אובדן מים מהשיפה. אנו משתמשים במסנני פחם פשוטים שגם להפחית את הסיכון של פטריות וזיהום חיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגימות מחקר שדורשות כניסה ויציאה כרצונו, להחליף את אחד חלקי אקריליק עם עץ או חומר דומה שחרקים יכולים נשאו ל. הדבר חשוב במיוחד להתבוננות בborers העץ, כי אחרי מצב הזחל שלהם הושלם בשכבת השיפה, אז הם נשאו לעצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע נבדקים מלצאת את חורי הכניסה, מקום מנות קטנות פטרי (או חפצים אחרים, קלטת) על החורים, בריחת חסימה. מאז אורגניזמים הנמצאים בחללים אלה הם להרגיל רמות אור נמוכות, ייתכן שיהיה צורך למקם את הכריכים בחדר חשוך או בתיבה, או o המקוםחומר Paque על גבי לחסום את האור. </li></ol> 4. אורגניזמים התבוננות בסנדוויץ השיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את דגימות מחקר לתוך חור כניסה של כריך השיפה (איור. 2 ד). שים לב דגימות באמצעות מיקרוסקופ לנתח תחת אור אדום או אור הלבן נקבע על עצמה נמוכה (איור. 2E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקליט את הפעילות או צמיחה של דגימות בתוך כריך השיפה לצרף מצלמה או מצלמת וידאו למיקרוסקופ. צרף מצלמות מיוחדות וידאו לעינית המיקרוסקופ (איור. 2E &amp; F). לאורגניזמים קטנים מאוד כגון קרדית, נמטודות, וpseudoscorpions, משתמש במצלמת וידאו בחדות גבוהה שצורפה למיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקליט צלילים, להכניס מיקרופונים לתוך חור הכניסה של כריך השיפה או באמצעות צד כריך השיפה. בגלל חור הכניסה קטן, להשתמש במיקרופון קטן כגון מיקרופון הקבל electret. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקליט מהצד או המשטח שלכריך השיפה להשתמש אלמנט פייזו (איור. 3 ב). כדי השמעת צליל, להשתמש באותו האלמנט פייזו, או לצרף את מתמר מישוש (מְעוֹרֵר) על פני השטח של החלק העליון או תחתון של אקריליק. </li></ol>

<ol><li>Aukema, B. H., Raffa, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+adult+and+larval+Platysoma+cylindrical.+%28Coleoptera%3A+Histeridae%29+and+larval+Medetera+bistriata.+%28Diptera%3A+Dolichopodidae%29+during+subcortical+predation+of+Ips+pini+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavior of adult and larval Platysoma cylindrical. (Coleoptera: Histeridae) and larval Medetera bistriata. (Diptera: Dolichopodidae) during subcortical predation of Ips pini (Coleoptera: Scolytidae).</a> J Insect Behav. 17, 115-128 (2004).</li>
<li>Bedard, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+number+of+larval+instars+and+the+appropriate+length+of+the+larval+stadia+of+Dendroctonus+pseudotsugae.+Hopk.%2C+with+a+method+for+their+determination+in+relation+to+other+bark+beetle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Econ+Entomol%22%5BJournal%5D)">The number of larval instars and the appropriate length of the larval stadia of Dendroctonus pseudotsugae. Hopk., with a method for their determination in relation to other bark beetle.</a> J Econ Entomol. 26, 128-134 (1933).</li>
<li>Bridges, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrogen-fixing+bacteria+associated+with+bark+beetles%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Ecol%22%5BJournal%5D)">Nitrogen-fixing bacteria associated with bark beetles.</a> Microb Ecol. 7, 131-137 (1981).</li>
<li>Cardoza, Y. J., Klepzig, K. D., Raffa, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+in+oral+secretions+of+an+endophytic+insect+inhibit+antagonistic+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Entomol%22%5BJournal%5D)">Bacteria in oral secretions of an endophytic insect inhibit antagonistic fungi.</a> Ecol Entomol. 31, 636-635 (2006).</li>
<li>Cardoza, Y. J., Moser, J. C., Klepzig, K. D., Raffa, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipartite+symbioses+among+fungi%2C+mites%2C+nematodes%2C+and+the+spruce+beetle%2C+Dendroctonus+rufipennis%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Entomol%22%5BJournal%5D)">Multipartite symbioses among fungi, mites, nematodes, and the spruce beetle, Dendroctonus rufipennis.</a> Environ Entomol. 37, 956-963 (2008).</li>
<li>Chen, H. -F., Salcedo, C., Sun, J. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mate+choice+by+chemical+cues+leads+to+higher+reproductive+success+in+a+bark+beetle%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behavior%22%5BJournal%5D)">Male mate choice by chemical cues leads to higher reproductive success in a bark beetle.</a> Animal Behavior. 83, 421-427 (2012).</li>
<li>Dodds, K. J., Graber, C., Stephen, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facultative+intra+guild+predation+by+larval+Cerambycidae+%28Coleoptera%29+on+bark+beetle+larvae+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Entomology%22%5BJournal%5D)">Facultative intra guild predation by larval Cerambycidae (Coleoptera) on bark beetle larvae (Coleoptera: Scolytidae).</a> Environmental Entomology. 30, 17-22 (2001).</li>
<li>Franklin, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+studying+the+insect+parasites+of+Dendroctonus+frontalis.+and+other+bark+beetles+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Georgia+Entomology+Society%22%5BJournal%5D)">A technique for studying the insect parasites of Dendroctonus frontalis. and other bark beetles (Coleoptera: Scolytidae).</a> Journal of Georgia Entomology Society. 2, 43-44 (1967).</li>
<li>Gries, G., Pierce, H. D. Jr, Lindgren, B. S., Borden, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+techniques+for+capturing+and+analyzing+semiochemicals+for+Scolytid+beetles+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Econ+Entomol%22%5BJournal%5D)">New techniques for capturing and analyzing semiochemicals for Scolytid beetles (Coleoptera: Scolytidae).</a> J Econ Entomol. 81, 1715-1720 (1988).</li>
<li>Hofstetter, R. W., Moser, J. C., McGuire, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+of+the+mite+Schizosthetus+lyriformis.+%28Acari%3A+Parasitidae%29+preying+on+bark+beetle+eggs+and+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Entomology.+News%22%5BJournal%5D)">Observations of the mite Schizosthetus lyriformis. (Acari: Parasitidae) preying on bark beetle eggs and larvae.</a> Entomology. News. 120, 397-400 (2009).</li>
<li>Hofstetter, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+11%3A+Mutualists+and+Phoronts+of+the+Southern+Pine+Beetle%5BTitle%5D)+AND+%22United+States+Dept.+of+Agriculture+Forest+Service%2C+Southern+Research+Station+General+Technical+Report+SRS-140%22%5BJournal%5D)">Chapter 11: Mutualists and Phoronts of the Southern Pine Beetle.</a> United States Dept. of Agriculture Forest Service, Southern Research Station General Technical Report SRS-140. Klepzig, K. D., Coulson, R. , 161-181 (2011).</li>
<li>Hofstetter, R. W., Dunn, D. D., McGuire, R., Potter, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+acoustic+technology+to+reduce+bark+beetle+reproduction%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Using acoustic technology to reduce bark beetle reproduction).</a> Pest Manag Sci. 70, 24-27 (2014).</li>
<li>Hopping, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+rearing+Ips%5BTitle%5D)+AND+%22De+Geer+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29.+Can+Entomol%22%5BJournal%5D)">Techniques for rearing Ips.</a> De Geer (Coleoptera: Scolytidae). Can Entomol. 93, 1050-1063 (1961).</li>
<li>Hougardy, E., Gregoire, J. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleptoparasitism+increases+the+host+finding+ability+of+a+polyphagous+parasitoid+species%2C+Rhopalicus+tutela+%28Hymenoptera%3A+Pteromalidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ecol+Sociobiol%22%5BJournal%5D)">Cleptoparasitism increases the host finding ability of a polyphagous parasitoid species, Rhopalicus tutela (Hymenoptera: Pteromalidae).</a> Behav Ecol Sociobiol. 55, 184-189 (2003).</li>
<li>Kaston, B. J., Riggs, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+larvae+of+the+native+elm+bark+beetle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Econ+Entomol%22%5BJournal%5D)">Studies on the larvae of the native elm bark beetle.</a> J Econ Entomol. 30, 98-108 (1937).</li>
<li>Kinn, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+Dendrolaelaps+neodisetus.+%28Mesostigmata%3A+Digamasellidae%29%2C+a+nematophagous+mite+associated+with+pine+bark+beetles+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Entomol%22%5BJournal%5D)">Life cycle of Dendrolaelaps neodisetus. (Mesostigmata: Digamasellidae), a nematophagous mite associated with pine bark beetles (Coleoptera: Scolytidae).</a> Environ Entomol. 13, 1141-1144 (1984).</li>
<li>Kinn, D. N., Miller, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phloem+sandwich+unit+for+observing+bark+beetles%2C+associated+predators%2C+and+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22USDA+FS+Res.+Notes+SO-269%22%5BJournal%5D)">A phloem sandwich unit for observing bark beetles, associated predators, and parasites.</a> USDA FS Res. Notes SO-269. , 3(1981).</li>
<li>Lieutier, F., Day, K. R., Battisti, A., Gregoire, J. -C., Evans, H. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLieutier%2C+F+%22Bark+and+wood+boring+insects+in+living+trees+in+Europe%2C+a+synthesis%22">Bark and wood boring insects in living trees in Europe, a synthesis</a>. , Kluwer Academic Publishers. Boston, USA. 569(2004).</li>
<li>Massey, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+nematode+parasites+and+associates+on+bark+beetles+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Entomology+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">The influence of nematode parasites and associates on bark beetles in the United States.</a> Bulletin of the Entomology Society of America. 12, 384-386 (1966).</li>
<li>Moser, J. C., Roton, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mites+associated+with+southern+pine+bark+beetles+in%5BTitle%5D)+AND+%22Allen+Parish%2C+Louisiana.+Can+Entomol%22%5BJournal%5D)">Mites associated with southern pine bark beetles in.</a> Allen Parish, Louisiana. Can Entomol. 103, 1775-1798 (1971).</li>
<li>Mills, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+enemies+of+scolytids+infesting+conifer+bark+in+Europe+in+relation+to+the+biological+control+of+Dendroctonus.+spp+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Biocontrol+News+Information%22%5BJournal%5D)">The natural enemies of scolytids infesting conifer bark in Europe in relation to the biological control of Dendroctonus. spp in Canada.</a> Biocontrol News Information. 4, 305-328 (1983).</li>
<li>Nagel, W. P., Fitzgerald, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medetera+aldrichii.+larval+feeding+behavior+and+prey+consumption+%5BDipt.%3A+Dolichopodidae%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Entomophaga%22%5BJournal%5D)">Medetera aldrichii. larval feeding behavior and prey consumption [Dipt.: Dolichopodidae].</a> Entomophaga. 20, 121-127 (1975).</li>
<li>Paine, T., Raffa, K., Harrington, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+among+scolytid+bark+beetles%2C+their+associated+fungi%2C+and+live+host+conifers%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Entomol%22%5BJournal%5D)">Interactions among scolytid bark beetles, their associated fungi, and live host conifers.</a> Annu Rev Entomol. 42, 179-206 (1997).</li>
<li>Reeve, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predators+of+the+southern+pine+beetle%5BTitle%5D)+AND+%22Southern+Pine+Beetle+II%22%5BJournal%5D)">Predators of the southern pine beetle.</a> Southern Pine Beetle II. Coulson, R. N., Klepzig, K. D. , U.S. Department of Agriculture Forest Service, Southern Research Station. Asheville, NC. 153-160 Forthcoming.</li>
<li>Reid, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behavior+of+the+mountain+pine+beetle%2C+Dendroctonus+monticolae.+Hopkins%2C+during+mating%2C+egg+laying+and+gallery+construction%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Entomol%22%5BJournal%5D)">The behavior of the mountain pine beetle, Dendroctonus monticolae. Hopkins, during mating, egg laying and gallery construction.</a> Can Entomol. 90, 505-509 (1958).</li>
<li>Taylor, A. D., Hayes, J. L., Roton, L., Moser, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phloem+sandwich+allowing+attack+and+colonization+by+bark+beetles+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29+and+associates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Entomol.+Soc.+Amer%22%5BJournal%5D)">A phloem sandwich allowing attack and colonization by bark beetles (Coleoptera: Scolytidae) and associates.</a> J. Entomol. Soc. Amer. 27, 101-116 (1992).</li>
<li>Yu, C. C., Tsao, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gallery+construction+and+sexual+behavior+in+the+southern+pine+beetle%2C+Dendroctonus+frontalis.+Zimm.+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Georgia+Entomology+Society%22%5BJournal%5D)">Gallery construction and sexual behavior in the southern pine beetle, Dendroctonus frontalis. Zimm. (Coleoptera: Scolytidae).</a> Georgia Entomology Society. 2, 95-98 (1967).</li>
<li>Yturralde, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Acoustic+Ecology+of+Bark+Beetles+and+Bed+Bugs%5BTitle%5D)+AND+%22PhD.+Dissertation%22%5BJournal%5D)">The Acoustic Ecology of Bark Beetles and Bed Bugs.</a> PhD. Dissertation. , Northern Arizona University. 323 (2013).</li>
<li>Wermelinger, B., Seifert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+temperature+dependent+development+of+the+spruce+bark+beetle+Ips+typographus+%28L.%29+%28Col.%2C+Scolytidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Analysis of the temperature dependent development of the spruce bark beetle Ips typographus (L.) (Col., Scolytidae).</a> Journal of Applied Entomology. 122, 185-191 (1998).</li>
<li>Whitney, H. S. Relationships between bark beetles and symbiotic organisms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhitney%2C+HS+%22Bark+Beetles+in+North+American+Conifers%22">Bark Beetles in North American Conifers</a>. Mitton, J. B., Sturgeon, K. B. , University of Texas Press. Austin, TX. 183-211 (1982).</li>
<li>Wood, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bark+and+ambrosia+beetles+of+North+and+Central+America+%28Coleoptera%3A+Scolytidae%29%2C+a+taxonomic+monograph%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The bark and ambrosia beetles of North and Central America (Coleoptera: Scolytidae), a taxonomic monograph.</a> , Brigham Young University. Provo, Utah. 1359 (1982).</li>
</ol>

לא הוכרז על ניגוד עניינים

כריך השיפה מאפשר את ההקדמה והתבוננות של פרוקי רגליים, חיידקים, ואורגניזמים קטנים אחרים המאכלסים את רקמות השיפה. 1,7,8,9,17,18 טכניקה זו הביאה לתגליות חדשות והבנה טובה יותר של התנהגויות, life- תכונות היסטוריה, פיתוח, ואינטראקציות של אורגניזמים בתוך השיפה עץ. 1,5,10 פרוטוקול הכריך שתואר כאן היא היברידי של עיצובי עבר, ותספקנה כריך חסכוני כי הוא נבנה בקלות עם ציוד וחומרים מינימאליים. ניתן לעשות שימוש חוזר חתיכות הזכוכית, אקריליק, או פוליקרבונט, והחומרים מתכלים רק Parafilm והשיפה. למרות שכל השלבים בפרוטוקול חשובים, צריכים להיות אחרי צעדים מסוימים אך ורק על מנת להבטיח את הרמה הגבוהה ביותר של הצלחה. ראשון, עץ צריך להיות ממוקם שיש לו חלק מגזעו חופשי, או חופשי יחסית, של סניפים. עצים שיש לו סניפים רבים קשים להתגלח ויהיה yכמה חתיכות ield קיימא השיפה, כמו בכל ענף יש לחתוך סביב בעת הסרת השיפה. בשלב הבא, חשוב למזער את החשיפה לאוויר של השיפה. אנחנו שמים במהירות כל פיסת השיפה בשקית עם ההסרה. ברגע ש05:57 חתיכות יוסרו, הם מועברים לתוך שקית אטום ואקום; אנו משתמשים ממיר מתח כדי להפעיל את אוטם את הסוללה רכב בתחום. אחרון, חיטוי חתיכות אקריליק וניקיון כללי בעת ביצוע פרוטוקול זה יאט את גידול פטריות בכריך. זה חשוב במיוחד לתצפיות ממושכות. כפי שצוין לעיל, יש מגבלות של מנגנון כריך השיפה. מאז שכבת השיפה היא דקה, רק אורגניזמים קטנים שנשארים בהשיפה יכולים להיות מוחדרים הכריך. חרקים גדולים יותר כמו borers עץ (כלומר, Buprestid, מיני Cerambycid) יכול להיות מוצגים ונצפו לשלבים המוקדמים של מחזור החיים שלהם בשלבים. פרק זמן זה הוא מוגבל בדרך כלל לשני לשלושה שבועות; לאחר שלב זה הזחלים דורשים עץ עצה לשעמם להתגלמות. בניגוד לכך, לחיפושיות קליפה, במיוחד אלה בסוג IPS, מחזור חיים מלאים ניתן הזדווגות, בקיעת ביצה, האכלה, pupating, וeclosion לחיפושית בוגרת-כוללים נצפו. בשלב זה, את הכדאיות של הכריך בדרך כלל מותשת מהתייבשות ופטריות צמיחה. 28 בנוסף, מנגנון זה אינו מאפשר חרקים ליישב או לצאת מכריך השיפה בחופשיות ובאופן טבעי. 27 הפרוטוקול שלנו הוא גמיש במונחים של גודל, צורה, וסוג של השיפה משמש. מחקרים קצרים דורשים פחות חומר השיפה וגודל כריך וניתן לשנותם בהתאם. מינים מחטניים רבים שנוצלו כתורמי השיפה בכריך השיפה (למשל, אורן עץ אורן 12, דאגלס-אשוח 2, אשוחית 29, 27 Loblolly אורן, אורן לונגליף 27). חומרים בכריך יכולים גם להשתנות; עבור לשעברצלחות בשפע, זכוכית יכולות לשמש במקום אקריליק ואפוקסי או קלטת במקום Parafilm. החלק הקשה ביותר של פרוטוקול זה הוא תהליך הסרת השיפה. עצים אחד ליד שני יכולים להיות שונים באופן קשה השיפה שלהם היא להסיר. כאשר עץ יש השיפה קשה, סבלנות היא קריטית. במקרים אלה, בזהירות לרוץ סכין בין העצה הקשה והשיפה הספוגית. תהליך זה מרגיש ממש כמו לפשוט את עור העץ. כאשר ישלוט בטכניקת הכריך הבסיסית, שינויים בפרוטוקול יכולים לעזור לצרכימים ספציפיים בכושר. לדוגמא, על ידי השחזת הטכניקות נדרשו להסיר השיפה, ניתן להסיר חתיכות גדולות ומשמשות ליצירת כריכים גדולים יותר. כמו כן, ניתן לבצע שינויים כדי להתאים מכשירים ספציפיים, לדוגמא, חורים נוספים כדי לפקח על פליטה כימית (איור. 3 א), או להקליט או השמעת צלילים (איור. 3 ב). שינויים יכולים להתבצע כדי לאפשר לשימור חצי קבוע של השיפה ואיברההאיזמים, או לתצפיות זמניות של אורגניזמים שיכולים להיות מאוחר יותר לתת חופשי.

רקמות השיפה וקליפה של עצי מחט הן מארח לאלפי אורגניזמים. Phloeophagy, ההאכלה ברקמות השיפה של הקליפה הפנימית, היא הרגל מזוהה בדרך כלל עם חיפושיות קליפה, woodborers, וכמה מינים של חסרי חוליות וחיידקים אחרים שחיות בתוך עצים 23 חיפושיות קליפה. (Coleoptera: חידקוניתיים) לפתח ולחיות בתוך השיפה פרט ל תקופות קצרות, כאשר מבוגרים מחפשים עצי מארח חדשים. ביום 31 בחיפושיות קליפה נחקרו רבות בשל ההשפעות הכלכליות שלהם על עצים 18,19, אבל תצפיות התנהגותיות ישירות של החרקים בתוך חומרי עץ היו מוגבלות. 4 יתר על כן, הגלריות נבנו על ידי חיפושיות קליפה הפך בית גידול למספר עצום של מינים. 11 מספרים עצומים של פטריות 30, חיידקי 3, קרדית 10,21, ונמטודות 16,19 יחד עם פרוקי רגליים טורפות וטפילות אחרים 22,24 מאכלסים את חומר השיפה. הטכניקות ניתנות כאןלאפשר להתבוננות ישירה בחיפושיות קליפה, קרדית, וborers העץ, כי בדרך כלל חיים בסביבות קורטיקליים. שינויים קלים בפרוטוקול יכולים להתבצע ללמוד פטריות וחיידקים. חיפושיות קליפה ואורגניזמים סביבתיים ברקמות עץ נחקרו באמצעות &quot;כריך השיפה.&quot; ניתן למצוא שימוש מוקדם של טכניקה זו בהיכרויות הספרות חזרה לשנת 1933, כאשר נעשה בו שימוש כדי לבחון את instars הזחל של חיפושית דאגלס-אשוח (Dendroctonus pseudotsugae). 2 כריך השיפה עבר נגזרות רבות כחומרים שונים הפכו זמינים. במקור, מכשיר זה מורכב מחתיכת השיפה הונחה בין שני לוחות זכוכית, צמודות זו לזו ברצועות של גומי. 2 מאוחר יותר, מהדק, קלטת, דבק, פלסטיק, וחומרים אחרים המשמשים לבנייה של הכריך. 13,14 , 15,17,26,28 הפרוטוקול המתואר כאן מציע שיפורים על פני כמה העיצובים האחרונים. לדוגמא, בהעבר, מיני מבחן היו נכנסו לצד של הכריך, בין הצלחות מזכוכית או מפלסטיק. זה הגביל את הבנייה של גלריות לכיוון אחד. השימוש של חורי כניסה בצלחת העליונה מאפשר חופש רב יותר למיני מבחן ליזום בניית גלריה טבעית. יתרון נוסף של הפרוטוקול שהוצג הוא העיצוב הפשוט שלה, אשר ניתן לבנות בקלות עם כמה כלים. השימוש בכריך השיפה אפשר לתצפיות ישירות של התנהגות האכלה, רבייה, התפתחות, ואינטראקציות של אורגניזמים שאחרת לא היו אפשריות. 1,5, 22 שיטה זו היא גם כלי מצוין לחינוך K-12 ומדע תוכניות ומציג. יש כמה דקויות ביצירת כריך השיפה שקשה לפרש מאו לא דווח בכתבי יד. אנו מאמינים כי תיאור חזותי (כלומר, וידאו) של הייצור של כריך השיפה נחוץ ויהיהשל ערך למדענים ואנשי חינוך מעוניין ללמוד אורגניזמים phloeophagous. הפרוטוקול שלנו מספק דרך פשוטה וזולה כדי לצפות פרוקי רגליים, חיידקים, ואורגניזמים אחרים המאכלסים את רקמות השיפה.

<table><tbody><tr><td>להב משיכה</td><td>מותג Big Horn&nbsp;</td><td>20265</td><td>11 אינץ' להב</td></tr><tr><td>סכין פילה</td><td>דייג אמריקאי</td><td>30530</td><td>9 אינץ' להב</td></tr><tr><td>פוליקרבונט</td><td>Nexan</td><td>GE-33</td><td>0.093 אינץ' עובי</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Fisher Scientific</td><td>S37441</td><td>2 אינץ'</td></tr><tr><td>רחב מהדקים פוני</td><td>פתיחת לסת</td><td>3201-HT-K</td><td>4 אינץ' x 1 אינץ'</td></tr><tr><td>אוטם ואקום&nbsp; ושקיות</td><td>FoodSaver</td><td>V2840; FSFSBF0742-015</td><td>שואב אבק VacLoc&nbsp; שקיות בגלילים</td></tr></tbody></table>

טכניקת לימוד של פרוקים-רגליים וקהילות חיידקים בתוך רקמות עץ

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

רקמות פלום של אורן הן בתי גידול לאלפים רבים של אורגניזמים. פרוקי רגליים ומיקרובים משתמשים ברקמות פלום וקמביום כדי לחפש בני זוג, להטיל ביצים, לגדל צאצאים, להאכיל או להסתתר מאויבים טבעיים או מתנאי סביבה קשים מחוץ לעץ. קשה לצפות באורגניזמים המתקיימים בתוך בית הגידול של הפלואמה בהתחשב במיקומם מתחת לקליפה. אנו מספקים טכניקה לשימור פלואם שלם ומכינים אותו לניסויים עם חסרי חוליות ומיקרואורגניזמים. המנגנון נקרא 'כריך פלום' ומאפשר החדרה והתבוננות בפרוקי רגליים, חיידקים ואורגניזמים אחרים. טכניקה זו הביאה להבנה טובה יותר של התנהגויות האכילה, תכונות תולדות החיים, הרבייה, ההתפתחות והאינטראקציות של אורגניזמים בתוך פלום העצים. נקודות החוזק של טכניקה זו כוללות שימוש בחומרים זולים, שונות בגודל הכריך, גמישות לפתוח מחדש את הכריך או להכניס אורגניזמים מרובים דרך חורים קדוחים, ושימור ותחזוקה של שלמות הפלום. כריך הפלום הוא כלי חינוכי מצוין לגילוי מדעי הן בקורסי מדע K-12 והן במעבדות מחקר אוניברסיטאיות.

הפרוטוקול שתואר לעיל יאפשר חוקר להתבונן אורגניזמים שחיים בסביבה הנסתר מתחת לקליפת עץ. כדי להמחיש את השימוש בטכניקה זו אנו מתארים מחקר נציג מהמעבדה שלנו שמשתמשת בטכניקה זו. 12 בניסוי זה, כריכי השיפה שמשו כדי לבחון את ההשפעות של טיפולים אקוסטיים בתפוקת רבייה, מרחק מנהור, והישרדות של חיפושיות קליפה (איור . 2E ו2F). תצפית ישירה של חיפושיות, מתאפשרת על ידי השימוש בכריך השיפה, חשפה כמה ממצאים מעניינים. ראשית, הקלטנו מרחקי נהור יומיים על ידי סימון מיקומם של החיפושיות באקריליק עם סמן כל 24h. תהליך זה נמצא הבדלים משמעותיים על פני טיפולי קול שהיה מוסתר בלי כריך השיפה. בשלב הבא, חוקרים מצאנו ירידה בייצור ביצים עם טיפולי צליל מסוימים. הטבע הנייד של כריך השיפה אפשר לדוארתצפיות GG להסתיים תחת מיקרוסקופ לנתח מבלי להפריע החיפושיות. במהלך התצפיות הללו, אנחנו שבויים של התנהגות ביצת חיפושית הנחת עם מצלמה בחדות גבוהה שצורפה למיקרוסקופ. תצפיות בולטות אחרות כללו את הריגתם של בני זוג והייזום של טיסה כרוכה בטיפולים אקוסטיים מיוחדים. Assay כריך השיפה היה חיוני למחקר של תגובות חיפושית קליפה לטיפולים אקוסטיים שלנו. גילויים אלה, שיהיו בלתי אפשריים לשמור מתחת לקליפת עץ, תרומות רבות ערך לפיתוח אפשרויות ניהול למאבק בהתפרצויות חיפושית קליפה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig1highres.jpg" /> 1. כלים איור) נדרשו כדי להסיר קליפה מעץ. פריטי 1 ו -2 הם לצייר להבים המשמשים לגרד קליפה מהעץ. פריטי 3 (גרזן) ו- 4 (ראה משיכה) יעילים להסרת סניפיםאזור סמוך גילוח. ב) שימוש של תיקו להב כדי להסיר קליפה מעץ. שים לב לצבע האור של השיפה מתחת לקליפה האדמדמה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig2highres.jpg" /> איור 2.) הסרת השיפה אחרי הקליפה היה לגרד מעץ. השיפה טריות המאוחסנת בשקית ואקום אטומה. כריך השיפה עם מהדק מחזיק חתיכות אקריליק יחד וParafilm סביב הקצוות כדי למנוע זיהום והתייבשות של השיפה C) B). D ) חור ליד חיפושית קליפה קדח לתוך אקריליק. E) באמצעות מיקרוסקופ כדי להתבונן כריך השיפה. תצוגת F) וידאו של חיפושיות קליפה בתוך כריך השיפה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/50793/50793fig3highres.jpg" /> איור 3. <stרונג&gt;) רכישת פרומון מחיפושיות בכריך השיפה. האוויר נמשך דרך צינורות שהכילו הקלטה סופר-Q סופג. B) והשמעה של קול באמצעות מתמר piezo החשמלי (מרכז התמונה) לחיפושיות אורן הר בתוך כריך השיפה.

אנו מספקים טכניקה לשימור פלום עצים שלם והכנתו לתצפית. אנו יוצרים מנגנון שנקרא כריך פלואם שמאפשר החדרה והתבוננות בפרוקי רגליים, מיקרובים ואורגניזמים אחרים שמאכלסים רקמות פלום.

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ליצור מכשיר הנקרא AOL sandwich, המאפשר החדרה ותצפית על פרוקי רגליים, מיקרובים ואורגניזמים אחרים המאכלסים רקמת נשירה. הפרוטוקול המסופק, לעיתים עם שינויים קלים, מהווה כלי יעיל עבור חוקרים ומחנכים ללימוד חיפשניות קליפה, קרדיות, נמטודות ופטריות. ראשית, מאתרים עץ מתאים.לאחר מכן מסירים את הקליפה כדי לחשוף את שכבת הפלואום. ברגע שהפלואום הוסר, הוא מוחזר למעבדה, או שמונח בין שתי פיסות של פרספקס. לאחר שהדגימה נחתמה והודקה היטב, ניתן להחדיר את האורגניזם.במסגרת המחקר, לעצי אורן יש שכבת זרימה מובחנת שיכולה להגיע לעובי של מספר מילימטרים. האורגניזם הנחקר יקבע איזה מין של זרימת F נדרש. כאן אנו נמצאים ביער אורני פונדרוזה (Ponderosa pine) בצפון אריזונה.אנו מחפשים עץ אידיאלי שגודלו צנוע, בעל נוף רחב ומעט ענפים נמוכים. כאן מצאנו עץ מתאים. מאפיינים אלו יספקו ככל הנראה זרימה עבה יותר שקל יותר להסיר, כיוון שבעת הסרת הזרימה יש לחתוך מסביב לכל ענף.להלן דוגמה לציוד שבו אנו משתמשים כדי להכרתיע עץ. זכרו, הפלת עץ היא פעולה מסוכנת ויש לבצעה אך ורק על ידי אדם מנוסה בעל ציוד בטיחות מתאים. ברגע שהעץ נמצא בבטחה על הקרקע, התחילו בהסרת הענפים.לאחר מכן חתכו את גזע העץ לחלקים שניתן להתמודד איתם, בדרך כלל באורך של כשישה עד שמונה רגליים, תלוי בקוטר העץ. כעת הגיע הזמן להסיר את הקליפה. להלן דוגמה לכלים שבהם אנו משתמשים כדי לבצע זאת.קרח הוא חיוני במהלך תהליך זה; גרד בעדינות את הקליפה עד שיופיעו סימנים של לבן או חום בהיר המעידים על שכבת הזרימה. חשוב לא לחרוץ את השכבה הזו, שכן הדבר מפחית משמעותית את התועלת ממנה בהמשך. לאחר שחלק מהעץ קולף כראוי, השתמש בסכין כדי לחתוך את החלק המלא.משכו בעדינות את השכבה זו כלפי מעלה תוך כדי חיתוך בצד התחתון במידת הצורך. שימו לב שבחלק מהעצים קל יותר להסיר את העלים שנשרו מאשר באחרים. סבלנות היא המפתח.בעת עבודה עם עץ בעייתי, הקיץ הוא בדרך כלל זמן קל יותר בשנה להסרת הנשירה. לאחר שאספנו חמש עד שבע חתיכות לשקית הפלסטיק, אנו מעבירות אותן לשקיות ואקום שאנו מביאים לשטח. מומלץ לאחסן שקיות אלו בטמפרטורה השומרת על קירבה לנקודת הקיפאון (מעליה מעט).כעת השלמנו את מרכיב השטח של פרוטוקול זה ואנו חוזרים למעבדה כדי להרכיב את ה"סנדוויץ'". להלן הציוד שבו אנו משתמשים להרכבת הסנדוויץ'. בחלק התחתון מופיעות פלטות פלקסיגלס וזוגות פלטות שונות.משתמשים ב-Paraform כדי לאטום את הקצוות ובסגורים כדי להבטיח שאין מרווח בין הפלקסיגלס לזרימה. לאחר שפיסות הפלקסיגלס נחתכות ונקדחות, הן עוברים סטריליזציה באמצעות אתנול בריכוז של 90% ומעלה. התחילו בבניית ה"סנדוויץ'" על ידי הסרת פיסה רעננה של זרימה ומידה.זה מתאים ליחידת הפלקסיגלס. ניתן להחליף את הפלקסיגלס בזכוכית. ניתן להכין "סנדוויצ'ים" בגדלים שונים כדי להתאימם לאורגניזמים שונים ולאורכי ניסוי משתנים.לדוגמה, זוג חיפושיות קליפה עשויים להשתמש בחתיכה שנפלה בגודל של ארבעה דמטרים רבועים במהלך חודש, אך יזדקקו לחתיכה של דמטר רבוע אחד בלבד אם המחקר נערך בתוך מספר ימים. שימו לב שניתן גם לשנות את מספר נקודות הכניסה בפלקסיגלאס כדי להחדיר מספר אורגניזמים בבת אחת. דבר זה שימושי לצפייה בתחרות או בטורף על ידי מינים שונים.כעת, משתמשים ב-paraform בעובי שני אינץ' כדי לאטום את הקצוות. ניתן להשתמש בחומרים אחרים לאיטום, כגון דבק אפוקסי שאינו מכיל G או וזלין. לאחר מכן, מקבלים מספר מספיק של תפסנים מסביב לקצה כדי להדביק את הפלקסיגלס בחוזקה לשכבת הזרימה.כעת אנו מוכנים להציג את האורגניזם הנחקר. במעבדה שלנו, אנו משתמשים לעיתים קרובות בפרוטוקול המסופק כדי לצפות בחיפושיות קליפה ובאורגניזמים קשורים. הוא מספק הזדמנות מצוינת לצפות בדברים כגון אורך קידוח יומי והפקת ביצים, לצד דברים רבים אחרים.ניתן גם לדגום את הפליטות הכימיות של חיפושיות השורש, להפיק אותן ולנתח אותן מאוחר יותר, או שניתן להתחיל טיפול ולעקוב אחר התגובה. כאן, חיפושית קליפה מנסה להתרחק מטיפול אקוסטי. השתמשנו בפרוטוקול זה לצפייה גם בקרציות, נמטודות וטורפים של חרקים.לאחר צפייה בסרטון זה, אתם תהיו מסוגלים להרכיב "סנדוויץ' תעופה" (flown sandwich) ולהתאימו לצרכים הספציפיים של המחקר שלכם. בנוסף להיותו כלי מחקר יעיל, הליך זה מצוין למטרות חינוכיות וגילוי עבור תלמידים החל מבית הספר היסודי ועד לרמת המכללה.

technique-for-studying-arthropod-microbial-communities-within-tree

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

וידאו זה מדגים את הטכניקה להפקת DNA של זנים של חיידקים במעי האחורי תושב טרמיטים. ההכנה של שקופית הר רטוב, אשר הוא שימושי עבור לדמיין את הקהילה חיידקים במעיים מודגם גם, סיור דרך הסביבה, מינים עשיר הבטן הוא נתון.

חילוץ ה-DNA של חיידקים במעיים של טרמיטים (Zootermopsis Angusticollis) באופן חזותי חיידקים גוט

ג'ארד לידבטר מסביר מדוע הקהילה טרמיטים חיידקים במעיים היא מערכת מצוינת ללמוד את יחסי הגומלין המורכבים בין חיידקים. הקשר הסימביוטי הקיים בין חרקים המארח lignocellulose-משפיל החיידקים במעיים הוא הסביר, כמו גם שימושים תעשייתיים של חיידקים אלו ביומסה במפעל משפיל להפקת דלק ביולוגי.

חקירת הקהילה חיידקים במעי האחורי הטרמיטים - ראיון

כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר כיצד לדגום דגימות עץ להערכה כוללת של מבני הגידול שלהן. מתוארות טכניקות הכנה והדמיה מאקרו ומיקרוסקופיות הנחוצות ליצירת מערך נתונים אנטומי ודנדרואקולוגי של עץ משוכפל היטב וברזולוציה גבוהה.

פרספקטיבה טכנית במחקר העץ-טבעת מודרנית - כיצד להתגבר על Dendroecological ואתגרי אנטומי עץ

חפירה של שורשי צמחים מן השדה, כמו גם עיבוד של דגימות לתוך endosphere, rhizosphere ואדמה מתוארים בפירוט, כולל הפקת דנ א ושיטות ניתוח הנתונים. נייר זה נועד לאפשר מעבדות אחרות שימוש בטכניקות אלה לצורך המחקר של קרקע, endosphere, rhizosphere microbiomes.

בידוד וניתוח של הקהילות מיקרוביאלית בקרקע, Rhizosphere ושורשים בניסויים עשב רב שנתי

כדי להתבונן במבנה האולטרסאונד של מבנה החרקים, סריקה והעברה של מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM ו-TEM, בהתאמה) פרוטוקול הכנה לדוגמה הוצגו במחקר. יצירת רצף 20 נוספה לתוך התיקונים כדי למנוע דפורמציה לדוגמה ב-SEM. מיקרוסקופ פלואורסצנטית היה מועיל לשיפור דיוק חיתוך ב TEM.

הכנה לדוגמה שיטת סריקה ומיקרוסקופ אלקטרון שידור לתוספות של החיפושית המשעממת

אנו מתארים כיצד לכמת את מגורים העלה פרוקי רגליים על ידי איטום העלים והסוף של סניפים בשק, לגזור ולהקפיא את החומר הארוז, ושטיפה את החומר קפוא בעבר מים כדי להפריד פרוקי רגליים מן המצע עבור כימות.

שיטה לכימות עלווה-מגורים פרוקי רגליים

אנו מתארים גישה חצי כמותית של מאפייני מדידה של corticolous (קליפת מגורים) הקהילות. הוצבו מלכודות מסחרי מתוצרת מסחרית על בולרו עץ כדי להעריך שפע, אורך כולל (פונדקאית כדי ביומסה), עושר, שאנון גיוון להשוואה בין מינים עץ.

כימות Corticolous פרוקי רגליים באמצעות מלכודות דביק

Micro-CT הוא כלי לא הרסני שיכול לנתח מבנים צמחיים בתלת מימד. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הכנת הדגימה כדי למנף מיקרו-CT לניתוח מבנה ותפקוד צמחים טפיליים. מינים שונים משמשים כדי להדגיש את היתרונות של שיטה זו בשילוב עם תכשירים ספציפיים.

מינוף סריקת מיקרו-CT לניתוח אינטראקציות טפיליות בין צמח למארח

פרוטוקול זה נועד לספק נהלים מפורטים לאיסוף, תיקון ותחזוקה של דגימות צמחים מיקוהטרוטרופיים, תוך יישום טכניקות מיקרוסקופיה שונות כגון מיקרוסקופיית אלקטרונים סורקת והולכה, מיקרוסקופיית אור, קונפוקלית ופלואורסצנטית כדי לחקור התיישבות פטרייתית ברקמות צמחים ובזרעים שנבטו בפטריות מיקוריזאליות.

טכניקות מיקרוסקופיה לפענוח התיישבות פטרייתית ברקמות צמחים מיקוהטרוטרופיים ונביטה סימביוטית של זרעים

פרוטוקול זה מציג זרימת עבודה אמינה ויעילה מאיסוף דגימות ועד ניתוח נתונים לפרופיל המיקרוביום החיידקי האנדופיטי והאפיפיטי הקיים בקליפת הצפצפה הטריכוקרפה.

זרימת עבודה להערכה כמותית של המיקרוביום החיידקי האנדופיטי והאפיפיטי של קליפת הצפצפה

אנו מציעים פרוטוקול מיקרוסקופ אלקטרונים סורק אופטימלי להדמיית דגימות הטרוגניות ועדינות ביותר המכילות ביומסה צמחית ופטרייתית, יחד עם מיקרוביוטה וביופילם. פרוטוקול זה מאפשר לתאר את הממדים המרחביים של ארגון המיקרוביוטה.

מיקרוביוטה של גני נמלים אטיין: הדמיה של נוף מיקרוביאלי על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים

למדו לבנות כריכת פלואם לצפייה בפרוקי-רגליים וחיידקים ברקמת עצים. שיטה זו מאפשרת מחקר אקולוגי וחינוכי ביערות באמצעות פלקסיגלס ופלסטיק אטום.

טכניקת לימוד של פרוקים-רגליים וקהילות חיידקים בתוך רקמות עץ

גלה סרטונים נוספים