Name: יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: למדו שיטה אוטומטית למדידת השפעת הרעב על התנהגות חיפוש מזון בדרוזופילה melanogaster. השיטה כוללת רעבה של 18-24 שעות ומעקב אחרי זמן ההגעה למקור ריח באמצעות מצלמה דיגיטלית ותוכנה ייעודית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי מחקר לJWW מהמכון הלאומי לבריאות (R01DK092640) והקרן הלאומית למדע (0,920,668).

1. טוס איסוף ורעב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחורי הזבובים הניסיוניים בתנאי טמפרטורה ולחות מבוקרים (למשל 21 ° C, 50-60% לחות יחסית) ב12-HR מחזור אור / חושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף נקבת הזבובים ביום eclosion ולמקם אותם, יחד עם 4-5 זכרים, לתוך צלוחיות חדשות מזון (30 למקסימום בקבוקון). גיל עף 2-5 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התאים להרעבה לטוס. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדחוף את רקמה בודדת (4.8 x 8.4 אינץ&#39;) עד לתחתית של בקבוקון פלסטיק ריק. לחלוטין לספוג את הרקמה עם מים מזוקקים. השתמש אובייקט לדחוף כלפי מטה על הרקמות ובעדינות לסחוט את המים עודפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הבקבוקון כדי לבטל את תוספת המים. צריך להיות מספיק מים כדי לשמור על כמות מים בזבובים וקאמרי הרעב לח, אבל לא מספיק כדי להטביע את הזבובים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים מבקבוקון המזון לתוך תא רעב ולסתום את הבקבוקון על 18-24 שעה לפני הניסוי מתחיל. אחסןבקבוקונים בתנאי טמפרטורה ולחות מבוקרים עד לילה שהניסוי יתחיל ביום שלמחרת. </li></ol> 2. הכנת ריח המזון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון agarose 1% על ידי הוספת 0.1 גרם של טמפרטורת התכה נמוכה agarose ל10 מיליליטר של מים מזוקקים בבקבוק זכוכית. מחממים את פתרון agarose במיקרוגל רק עד שהוא מתחיל לרתוח, אבל גם לפני שהוא רותח מעל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעצור את המיקרוגל ולערבל את הבקבוק פעם אחת. חזור על פעולה זו עוד פעמיים עד agarose נמס לגמרי. שמור את פתרון agarose במצב נוזלי על ידי שמירה על חם בקבוק על פלטה חמה להגדיר ב50 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 990 μl של פתרון agarose 1% ו10 μl של חומץ תפוחים לצינור 1.5 מיליליטר Eppendorf לבצע פתרון חומץ תפוחים 1%. ורטקס הפתרון עד מעורב ומקום בחממה אמבטיה יבשה מוגדרת 50 ° C. </li></ol> 3. חדר בדיקה והתקנת לשכת התנהגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; הגדר את חדר בדיקות לתנאים הרצויים (למשל הטמפרטורה ולחות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את פנל LED (660 ננומטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את מסננות וצלחות בדיקות עם מים חמים ולחמם אותם בתנור ייבוש עד שכל הרטיבות התאדתה. לקרר את מסננות וצלחות עד לטמפרטורת חדר בדיקות לפני ניסויים מתחילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם צלחת רדודה על גבי צלחת המפזר ולמלא אותו במים כדי להגדיל את הלחות המקומית וכדי להסוות את המים באגל agarose. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הנפות מעל קערת המים. </li></ol> 4. טוס טוען לצלחות הבדיקה ניתן למצוא תרשימים עם מפרט לצלחות בדיקות בסעיף משלימה הקבצים. צלחת הבדיקות עשויה אקריליק ברור וכוללת 6 זירות בדיקות. מחוון פשוט מכיל תאים מחזיקים המאפשרים טעינת זבוב, בלימה זמנית, ושחרורו הזמני של 6 זבובים לתוך התאים שלהם בתחילת הניסוי. קרוס שערות חרוטות במרכזה של כל זירה בצלחת לציין היכן צריך להיות pipetted הניחוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את המחוונים לתוך צלחת בדיקות אקרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלק בעדינות את aspirator לתוך בקבוקון העבר את תקע הכותנה ולאפשר כ -6 זבובים ללכת לaspirator.it הוא קריטי כדי להיות עדין ככל האפשר בטיפול בהם. אפשר לנצל את phototactic התנהגות לטוס כדי לגרום לזבובים לזחול כלפי aspirator ידי ההצבעה פתיחת הבקבוקון לכיוון מקור אור עמום. במידת צורך, ניתן גם להחיל שאיבה עדינה כדי לשאוב כ 6 זבובים ממין נקבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה aspirator לתוך החור הראשון של צלחת הבדיקה. לאפשר זבוב אחד לעבור לתא המעצר ובעדינות לקדם את המחוון קדימה כדי לטעון זבוב לתוך החור הבא. המשך עד שזבובים לכבוש את כל 6 תאי המעצר של הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 5 μl של 1% פתרון agarose חומץ תפוחים ישירות על גבי מרכז CRoss-שערות על הפנים הפנימיים של צלחת הבדיקה. </li></ol> 5. מיצוב פלייט הבדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למרכז את צלחת הבדיקה, פתח את הקובץ בשם &quot;מיקום Tool.vi.&quot; &quot;VI LabVIEW למיקום כלי. ניתן למצוא vi בסעיף משלימה הקבצים. הפעל את הקובץ על ידי לחיצה על החץ הלבן בפינה השמאלית העליונה של המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחת הבדיקה על גבי המסננת כזו שפתיחת זירת פרצופים רצפת המסננת ויעד הריח הוא על התקרה של הצלחת. יישר את הכוונת חרוטה לתוך אחורי של צלחת הבדיקה עם שערות צלב על מסך הצג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר יישור הושלם, להפיל ביצוע על ידי לחיצה על הנקודה האדומה הממוקמת בסמוך לפינה השמאלית העליונה של המסך. </li></ol> 6. להקליט את המיקום טוס במהלך הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעקוב ולהקליט את הקואורדינטות של הזבוב במהלך כל ניסוי חיפוש מזון, פתח את קובץ תוכנת רכישה &quot;פלורידהy מעקב - שש Zones.vi &quot;LabVIEW VIS ל&quot; טוס מעקב -. ניתן למצוא שש Zones.vi&quot; בסעיף משלימה הקבצים הפעל את הקובץ על ידי לחיצה על החץ הלבן בפינה השמאלית העליונה של המסך. . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקצות לקובץ שם ולחץ על &quot;אישור&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם את המחוונים בתאי הבדיקה כדי לשחרר את הזבובים לזירות בדיקות. היזהר שלא להעביר את התאים לבדיקה כמו זה יוביל ליישור לא תקין עם קואורדינטות תוכנה לניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;התחל&quot; (הקלטה מתחילה) ולהבטיח שמקור האור היחיד בחדר הבדיקה הוא פנל LED 660 ננומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הניסוי נגמר, להסיר את המסננת וקאמרית התנהגות. הרם את צלחת הבדיקה מהמסננת ולהסיר את הזבובים על ידי השריית את הצלחת בקרח. לנקות בעדינות את הצלחת עם מים חמים ולהסיר כל פסולת agarose. מקם את צלחות בדיקות בתנור ייבוש להסרת לחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאוורר את אזור הבדיקה על ידי הפעלת smalאוהד l למשך כ 2 דקות. הפעל את המאוורר ומלטעון את הקבוצה הבאה של זבובים לתוך צלחת הבדיקות הבאה. </li></ol> 7. ניתוח נתונים באמצעות תוכנה מותאמת אישית ניתן למצוא &quot;ניתוח נתונים למעקב Fly-שישה אזורים&quot; בסעיף משלימה הקבצים. במהלך רכישת נתונים, עמדת הזבוב בודדת רשומות תוכנת רכישת המתאם עבור כל נקודה בקובץ טקסט בזמן. מצלמה דיגיטלית יחידה הממוקמת מעל צלחות הבדיקות רוכשת תמונות בקצב מסגרת של 0.5 הרץ. ניתוח התוכנה &quot;ניתוח נתונים למעקב Fly-שישה אזורים&quot; מחלץ מידע מקובץ טקסט ל) לחשב את המהירות הממוצעת, ב) לקבוע את נקודת הזמן שבו זבוב ממוקם בהצלחה את מקור הריח, ג) לבנות חלונות גרפיים המאפשרים למשתמש להציג: לטוס מיקום, מרחק של הזבוב ממקור הריח לאורך זמן ומהירות זבוב ממוצע לאורך זמן. הוא גם מעצב את הנתונים ליצוא קל לspreתכנית adsheet. במקרו זה, חביון חיפוש מזון מוגדר כנקודת הזמן שבה טסה לבלות לפחות 5 שניות ברדיוס של 5 מ&quot;מ ממרכז הזירה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את קובץ תוכנה לניתוח &quot;ניתוח נתונים עבור טוס מעקב - שישה אזורים&quot;. תחת הלשונית &quot;Windows&quot;, לחץ על &quot;צור טבלה חדשה.&quot; חזור על פעולה זו עד לשישה שולחנות כבר נוצרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת לשונית &quot;פקודות מאקרו&quot;, לחץ על &quot;Foodfinding&quot;. פנל ראשי אמור להופיע עם האפשרויות הבאות: פתח את קובץ נתונים גולמיים לפריסה; להרחיב גלם קובץ נתונים לקובץ נתונים; מיקום Fly; מרחק; מהירות; פריסה; FormatDataFile. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להציג את הנתונים גולמיים ללא צירוף ערכים לקובץ טקסט, לחץ על &quot;פתח קובץ נתונים הגולמיים לפריסה.&quot; אתר ובחר את קובץ נתוני הניסוי בחלון הדפדפן שמופיע. לחץ על &quot;פתח&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;ארץ טוס&quot; כדי להציג את המיקום של כל זבוב בכל אחד משש הזירות (שש חלקות XY המתארות כל זבוב &#39;עמדה של לאורך הזמן אמורה להופיע על המסך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;מרחק&quot; כדי להציג המרחק של כל זבוב ממקור הריח (שש חלקות המתארות את מרחקו של הזבוב ממקור הריח לאורך הזמן אמורות להופיע על המסך). הקו האופקי בy = 5 מ&quot;מ מציין את הסף שבו לטוס נחשב להיות ממוקמים במקור המזון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;מהירות&quot; כדי להציג את המהירות הממוצעת של כל זבוב במהלך המשפט (שש חלקות המתארות את מהירותו של הזבוב לאורך הזמן אמורות להופיע על המסך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על &quot;פריסה&quot; לתצוגת פריסה בכל מיקום זבוב, מרחק, מהירות והגרפים בנוסף למהירות הממוצעת (במהלך 50 שניות הראשונות) וזמן האחזור של מציאת מקור ריח לכל זבוב (איור 1). כדי להציג את הפריסה כמו שצריך, ייתכן שיהיה צורך להתאים את השוליים. לשם כך, לחץ תחילה על חלון הפריסה. תחת הלשונית &quot;קובץ&quot;, לחץ על &quot;הגדרת עמוד לפריסה.&quot; לאפס את השוליים כדי0.2 סנטימטרים ולחצו על &quot;אישור&quot;. מייד עזב את כל עלילת מיקום הוא שולחן קטן עם הכותרות &quot;מהירות&quot; ו &quot;חביון&quot;. הערכים נכנסו תחת כל כותרת לציין את המהירות הממוצעת במ&quot;מ / השני והשהית חיפוש מזון בשניות. ערכים ריקים תחת חביון מצביעים על הזבוב לא הצליח לאתר את מקור הריח. חביון חיפוש מזון מוגדר כנקודת הזמן שבה הזבובים בילו לפחות 5 שניות ברדיוס של 5 מ&quot;מ ממרכז החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להדפיס פריסה, לחץ על אזור הפריסה (פריסת עדכונים לקובץ הנוכחי). לחץ על &quot;קובץ&quot; ולאחר מכן לחץ על &quot;פריסת הדפסה&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להציג את הקובץ הבא, פשוט לחץ על &quot;פתח קובץ נתונים הגולמיים לפריסה.&quot; לחץ על קובץ נתונים הגולמי הבא שברצונך להציג ולחץ על &quot;אישור&quot;. לחץ על חלון הפריסה לעדכן את החלון עם קובץ נתונים החדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההגדרות ניתן לשמור בקובץ ניסוי לשימוש מאוחר יותר. </li></ol> 8. יצוא נתונים מתוכנת ניתוח נתונים לתכנית גיליון אלקטרוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לייצא את מהירות ונתונים השהיה עבור כל קובץ, לחץ על &quot;Open גלם קובץ נתונים לקובץ נתונים.&quot; בחר קובץ נתוני ניסוי ולחץ על &quot;פתח&quot;. חלון דפדפן חדש יופיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלון החדש של הדפדפן, לחץ לחיצה ימנית על &quot;חדש&quot; ולאחר מכן לחץ על &quot;מסמך טקסט&quot;. שם מסמך הטקסט החדש. בחר את קובץ טקסט בשם החדש ולחץ על &quot;פתח&quot;. חנויות מידע זה מקובץ נתונים הגולמי לקובץ הטקסט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לייצא את הנתונים מקובץ אחר, לחץ על &quot;פתח קובץ נתונים הגולמיים לקובץ נתונים.&quot; לחץ על קובץ אחר ולחץ על &quot;פתח&quot;. בחר את קובץ טקסט מצעד 8.2). המשך בתהליך זה לקבצי הנתונים שנותרו שברצונך לייצא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שכל קבצי הנתונים הרצויים נוספו לקובץ הטקסט, לחץ על &quot;קובץ נתונים עיצוב.&quot; בחר את מסמך הטקסט המשמש לאחסון נתונים מהשלבים הקודמים, ולחץ על &quot;Open&quot; (Windo חדשw באופן אוטומטי ייפתח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור מסמך טקסט חדש בחלון, להקצות לקובץ שם, ולחץ על &quot;שמור&quot;. זה יוצר קובץ טקסט המכיל את שם קובץ, מהירות ממוצעת, והשהיה עבור כל לטוס ויכול להיות מיובא לתוך תכנית גיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלקות מצטברות בנויות מנתונים על המספר הכולל של זבובים שהגיעו למטרת ריח מזון כפונקציה של זמן (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ערכות נתונים ניסיוניות מנותחות למובהקות סטטיסטיות באמצעות מבחן z לפרופורציות. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שום אינטרס כלכלי מתחרה.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים הליך צעד אחר צעד עבור assay חיפוש מזון ההתנהגות. בנוסף לריחות מזון קשור, היא עשויה גם להיות מותאמת ללימוד היכולת של הזבוב כדי לאתר אובייקטי ריח אחרים. לדוגמא, זה יכול להיות מיושם כלפי המחקר של בן זוג לוקליזציה התנהגות בזבובי זכרי 3 ישנם כמה שיקולים נוספים לפרוטוקול זה שיזכירו כאן לגבי הליך זה.: ראשית, טמפרטורת הגידול קובעת כמה זמן צריכים להיות בגילי זבובים ניסיוניים לפני הבדיקה...

הברית הרעב לקדם שני סוגים של התנהגויות תיאבון: חיפוש מזון וצריכת מזון 1. assay התנהגותיים פשוט זו שימושי לחקר התנהגויות הקשורות לחיפוש מזון chemotactic 2,3. באופן ספציפי, הוא עוקב אחר עמדה לטוס, מהירות הליכה והשהיה לאיתור יעד ריח אוכל. מיסות של ממצא מזון משמשת כמדד למדידת שינויים ברגישות של מערכת זיהוי הריח של הזבוב במורד הזרם של שינויים במצב התיאבון הפנימי שלה. גרסה ידנית של assay זה הייתה בשימוש בעבר כדי להראות איתות הקולטן GABA-B חשובה ללוקליזציה ריח התנהגות במבוגרים עף 3. הגרסה האוטומטית הנוכחית של assay סייעה במחקר של כמה קצר איתות נוירופפטידים-F (sNPF) מעצבת מחדש את מפת חוש הריח בדרוזופילה והשפעות appetitive התנהגויות 2. בדיקה נעשה בחדר מבוקר כהה, טמפרטורה ולחות. דיגיטלימצלמות וידאו נקבעות מעל צלחות בדיקות אקריליק ברורות לעקוב אחר הזבובים מוארים בתאורת LED 660 ננומטר. מידע מהמצלמה מעובד בזמן אמת על ידי מחשב שהוצב בסמוך לאזור הבדיקה. אנו משתמשים בתוכנת רכישת נתונים כדי להקליט ולשמור את הקואורדינטות של עמדות לטוס בתקופת הבדיקה. בפרדיגמה זו, הנושא הוא שוחרר לזירה המכילה ריח אוכל במרכז; אובייקט הריח יוצר שיפוע ריח אוכל בזירה שגורמת מזון התנהגות חיפוש בזבוב. פרוטוקול חיפוש ריח דומה כבר מיושם כלפי המחקר של chemosensation בזחלי דרוזופילה אחת 7. בעוד מבחני התנהגות אחרים כגון ארבעת שדה olfactometer 4,5 או t-מבוך 6 להעריך התנהגויות סלידה או משיכה ריח, פרדיגמה זו היא מתאימה ביותר כדי להעריך התנהגויות רגישות וchemotaxis חוש הריח. כמה יתרונות מרכזיים ילוו את אסא זהy. ראשית, הוא מאפשר רכישה מהירה של ערכות נתונים גדולות, כי איסוף הנתונים וניתוחם בעיקר אוטומטיים. שנית, assay זה מבודד ומודד את התנהגותם של זבובים יחיד, ובכך לחסל רמזי חוש הריח חברתיים שעשויים להשפיע על ההתנהגויות שלהם. שלישית, את הפשטות של הפרוטוקול ועיצוב ניסיוני פשוט לעשות את assay יעיל וקל ללמד אחרים. בנוסף, assay זה יכול לשמש כדי לחקור עוד יותר מעגלים עצביים שבבסיס מזון התנהגות חיפוש על ידי שילוב עם ערכת הכלים הגנטיים הנרחב זמינים לmelanogaster דרוזופילה 8. ביטוי ממוקד של transgenes שניתן להשיג תאי עצב שתיקה או לרגש עם כלים כגון מערכת GAL4-כטב&quot;מ כמו גם TS1 כטב&quot;מ-shibire, כטב&quot;מ-טטנוס הרעלן, וכטב&quot;מ-TrpA1 (ב &#39;) transgenes 9-12.

<table><tbody><tr><td>ספקטרום</td><td></td> <td>חומץ תפוחים</td><td>זמין מסחרית</td></tr><tr><td>אגרוז, סוג VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td>טמפרטורת ג'ל נמוכה אגרוז</td></tr><tr><td>צלחת</td><td></td> בדיקה <td>אקרילית צלחת מותאמת אישית</td><td>מכילה 6 זירות. כל זירה בקוטר 60 מ"מ ובגובה 6 מ"מ. ראה דיאגרמות לוחות בדיקה למדידות ספציפיות.</td></tr><tr><td>פלטפורמת LabVIEW V.8.5</td><td>National Instruments</td><td>776670-09</td><td>עבור תוכניות: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi הערה: "time.vi שחלף", "זמן לתוך file.vi", ו-"שני אובייקטים detect.vi" כלולים תת-שגרות שחייבות להיות זמינות על מנת שתוכנית איסוף הנתונים הראשית "FlyTracking--Six zones.vi" תפעל.</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>פלטפורמה למאקרו: ניתוח נתונים למעקב אחר זבובים - שישה אזורים</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td><td>National Instruments</td><td>779980-01</td><td>מצלמה דיגיטלית הערה: דרייבר למצלמה זמין בעדשת</td></tr><tr><td>Baslerweb.com 8 מ"מ</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>עדשה למצלמה דיגיטלית של Basler</td></tr><tr><td>צלחת מפזר זכוכית קרקעית</td><td>אופטיקה אדמונד</td><td>מותאם אישית</td><td>מפזר אור, 25 ס"מ x 30 ס"מ</td></tr><tr><td>ארה"ב Std. מס' 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>מסננת עם פתיחה נומינלית של 150 &mu; m</td></tr><tr><td colspan="4" ><חזק>אפשרות תאורה 1</חזקה></td></tr><tr><td>LED תאורה אחורית 660 ננומטר (20 ס"מ x 20 ס"מ)</td><td>ספקטרה ווסט</td><td>BL47192</td><td>אפשרות תאורה פשוטה יותר אך יקרה יותר.</td></tr><tr><td>ספק כוח עבור תאורת LED אחורית</td><td>ספקטרה West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4" ><חזקה>אפשרות תאורה 2</חזקה></td></tr><tr><td>660 ננומטר נוריות</td><td>Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>אורך גל 660 ננומטר (כ-7 x 7 מערך LED עבור פאנל בגודל 14.7 אינץ' x 9.75 אינץ')</td></tr> <tr><td>ספק כוח DC ליניארי</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td><td>ספק כוח עבור לוח LED</td></tr> לוח <tr><td>לחם ללא הלחמה</td><td>Digikey</td><td>922354-ND</td><td>לוח אב-טיפוס עבור נורות LED</td></tr></tbody></table>

יחיד לטוס assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

לבעלי חיים רבים, רעב מקדם שינויים במערכת ההרחה באופן שמקל את החיפוש אחר מקורות מזון מתאימים. במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה. בתיבת אור חזק המוארת באור אדום שהוא בלתי נראה לזבובי פירות, מצלמה קשורה לתוכנת רכישת נתונים המותאמת אישית עוקבת אחר מצבם של שישה זבובים בו זמנית. כל זבוב הוא מוגבל ללכת בזירות בודדות המכילות ריח אוכל במרכז. זירות הבדיקות לנוח על רצפה נקבובית שפונקציות כדי למנוע הצטברות ריח. חביון לאתר את מקור הריח, מדד המשקף את רגישות חוש הריח תחת מצבים פיסיולוגיים שונים, נקבע על ידי ניתוח תוכנה. כאן, אנו דנים את המכניקה הקריטית של הפעלת הפרדיגמה ההתנהגות הזה ונכסה נושאים ספציפיים לגבי loadi זבובng, זיהום ריח, טמפרטורת assay, איכות נתונים, וניתוח סטטיסטי.

תוכנה לניתוח נתונים והפריסה, דוגמא שניתן לראות בתרשים 1, המשמשים להערכת ביצועים של כל זבוב במהלך משפט 10 דקות שלו על פי סדרה של קריטריוני ניתוח. הקריטריונים הבאים משמשים כדי לקבוע אם הנתונים מכל זבוב ישמשו לניתוח נתונים ונועדו לחסל אותם הזבובים שאינם מסוגלים לבצע את משימת חיפוש מזון עקב פציעה, מחלה, מתח, או חוסר המוטיבציה. זבובים שאינם פעילים במשך יותר מ -300 שניות נחשבים 'לא פעיל', והם דחו מערכת...

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לכמת שינויים התנהגותיים המופעלים על ידי מחסור במזון בזבוב הבוגר Salala Melanogaster. זה מושג על ידי זבובים מורעבים ראשונים במשך 18 עד 24 שעות. השלב השני הוא העמסת זבובים בודדים לתאי התנהגות, שכל אחד מהם מכיל מקור ריח אטרקטיבי במרכזו.לאחר מכן, מערכת מחשב עם מצלמה דיגיטלית עוקבת אחר מיקומו של כל זבוב לאורך זמן ומתעדת. הקואורדינטות שלו לניתוח נתונים מאוחר יותר. השלב האחרון הוא לקבוע את זמן ההשהיה של כל זבוב כדי להגיע למקור הריח באמצעות תוכנה מותאמת אישית.בסופו של דבר, ניתן להשתמש בבדיקת התנהגות חיפוש מזון בתפוקה גבוהה זו כדי לחקור את הקשר בין תפקוד המעגל העצבי לתגובות התנהגותיות. היתרון העיקרי של בדיקה זו על פני השיטה הקיימת, כמו חברי הצוות, הוא שהיא מכמתת התנהגות כימוטקטית בזבובים בודדים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות בנוירוביולוגיה כגון אילו מעגלים נוירולוגיים חשובים להתנהגות כימוטקטית וכיצד מעגלים נוירולוגיים אלה ממתנים על ידי המצב הפיזיולוגי הפנימי של החיה.המטרה של שיטה זו היא להשיג מערכי נתונים גדולים של התנהגות בזמן קצר. למרות ששיטה זו נתנה לנו תובנות לגבי התנהגות ליקוט מזון, ניתן להשתמש בה גם כדי לחקור התנהגויות אחרות כגון ביצוע לוקליזציה. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית.טיפול נכון בזבובים וביצוע תוכנת המחשב חיוניים להצלחת ניסוי זה. בדרך כלל, אדם חדש בשיטה זו עשוי להיאבק מעט בהתחלה מכיוון שלוקח קצת זמן וסבלנות ללמוד כיצד לטפל בזבובים בעדינות להדגים שההליך יעורר את המחט. להגיע לטכנאי למעבדה שלי לפני איסוף הזבובים.החזר את זבובי הניסוי בתנאי טמפרטורה ולחות מבוקרים במחזור חושך בהיר של 12 שעות. ביום הפיצוץ של EEC, יש להרדים את הזבובים תחת פחמן דו חמצני לפני ביצוע יחסי מין תחת מיקרוסקופ. ניתן להשתמש במספר קריטריונים בסיסיים כדי להבדיל בין זכרים לנקבות.לזכרים יש כתם של זיפים שחורים על ארבע רגליהם הנקראים מסרקי מין שאין לנקבות. כמו כן, קצה הבטן הזכרית מכוסה בציפורן כהה ואיברי מין מוצגים שאינם נראים אצל נקבות, אוספים נקבות זבובים ומניחים אותם יחד עם ארבעה עד חמישה זכרים לבני עיניים בקבצי מזון חדשים עם מקסימום 30 זבובים לגיל בקבוקון. הזבובים מכינים במשך יומיים עד חמישה ימים את התאים להרעבת זבובים על ידי דחיפה של רקמה בודדת לתחתית בקבוקון פלסטיק ריק, ומשרים לחלוטין את הטישו במים מזוקקים.לאחר מכן השתמש בחפץ כדי לדחוף כלפי מטה את הטישו ולסחוט בעדינות את עודפי המים. הפוך את הבקבוקון כדי להשליך את המים העודפים. צריכים להיות מספיק מים כדי לשמור על לחות הזבובים ותא הרעב לח, אך לא מספיק כדי להטביע את הזבובים.כ-18 עד 24 שעות לפני תחילת הניסוי, העבירו את הזבובים מבקבוקון המזון לתא הרעבה וסתמו את הבקבוקון. אחסן את הבקבוקונים בתנאי טמפרטורה ולחות מבוקרים למשך הלילה עד לתחילת הניסוי. הכן תמיסה אגרו של 1% על ידי הוספת 100 מיליגרם של טמפרטורת התכה נמוכה ל -10 מיליליטר מים מזוקקים.בבקבוק זכוכית. מחממים את תמיסת האגרו במיקרוגל רק עד שהיא מתחילה לרתוח, אך לפני שהיא רותחת, עצרו את המיקרוגל וסובבו את הבקבוק פעם אחת. חזור על שלב זה פעמיים נוספות עד שהארוס נמס לחלוטין.שמור על תמיסת Aros במצב נוזלי על ידי שמירה על חום הבקבוק על צלחת חמה. מוגדר על 50 מעלות צלזיוס, הוסף 990 מיקרוליטר מתמיסת 1% ארו ו -10 מיקרוליטר חומץ תפוחים לצינור DF הפוך של 1.5 מיליליטר. להכנת תמיסת חומץ תפוחים של 1%, מערבלים את התמיסה עד לערבוב לפני שמכניסים לאינקובטור אמבטיה יבש המכוון ל-50 מעלות צלזיוס, מכוונים את חדר הבדיקה לתנאים הרצויים כמו טמפרטורה ולחות.הפעל את לוח ה-LED בגודל 660 ננומטר. שוטפים את המסננות וצלחות הבדיקה במים חמים ומחממים אותם בתנור ייבוש עד שכל הלחות מתאדה. קריר. המסננות והצלחות עד לטמפרטורת חדר הבדיקה.לפני תחילת הניסויים, הניחו צלחת רדודה על גבי צלחת המפזר ומלאו אותה במים כדי להגביר את הלחות המקומית ולהסוות את המים בטיפת הארוס. לבסוף, מקם את המסננות מעל צלחת המים. לוחית הבדיקה עשויה אקריליק שקוף ומורכבת משש זירות בדיקה.המחוון מכיל תאי החזקה המאפשרים העמסת זבובים, בלימה זמנית ושחרור בו זמנית של שישה זבובים לתאים שלהם. בתחילת הניסוי, שערות צולבות חרוטות במרכז כל זירה בצלחת מצביעות על כך שיש לזרוק ריחות. הכנס את המחוונים ללוחית הבדיקה האקרילית.החלק בעדינות את השואב לתוך הבקבוקון מעבר לפקק הכותנה ואפשר לכשישה זבובים להיכנס לתוך השואב. זה קריטי להיות עדין ככל האפשר בטיפול בהם. אפשר לנצל את טקטיקת הצילום, התנהגות זבוב כדי לגרום לזבובים, ללכת לכיוון השואב על ידי הפניית פתח הבקבוקון לעבר מקור אור עמום.במידת הצורך ניתן להפעיל יניקה עדינה כדי לשאוב כשש נקבות זבובים. הימנע מבחירת זבובים זכרים לבני עיניים. הכנס את קצה השואב לחור הראשון של לוחית הבדיקה.אפשרו לזבוב בודד לעבור לתא ההחזקה וקדמו בעדינות את המחוון קדימה כדי לטעון זבוב נוסף לתוך החור הבא. ממשיכים עד שזבובים. תפוס את כל ששת תאי האחיזה של הצלחת.לאחר מכן פיפטה חמישה מיקרוליטר של תמיסת אגרו חומץ תפוחים 1% ישירות על מרכז הכוונת בפנים הפנימיות של צלחת הבדיקה. כדי למרכז את לוחית הבדיקה, פתח את הקובץ בשם Positioning tool vi. הפעל את הקובץ על ידי לחיצה על החץ הלבן בפינה השמאלית העליונה של המסך.הנח את לוחית הבדיקה על גבי האב כך שפתח הזירה פונה לרצפת ה-SIV ויעד הריח נמצא על תקרת הצלחת. יישר את שערות הצלב של לוחית הבדיקה עם האוויר הצולב על מסך הצג לאחר השלמת היישור. בטל את הביצוע על ידי לחיצה על הנקודה האדומה הממוקמת ליד הפינה השמאלית העליונה של הצג כדי לעקוב ולתעד את הקואורדינטות של הזבוב.במהלך כל ניסיון חיפוש מזון, פתח את קובץ תוכנת הרכישה. מעקב אחר זבובים שש vi. הפעל את הקובץ על ידי לחיצה על החץ הלבן בפינה השמאלית העליונה של הצג.הקצה שם לקובץ ולאחר מכן לחץ על אישור. קדם את המחוונים בתאי הבדיקה כדי לשחרר את הזבובים לזירות הבדיקה. היזהר לא להזיז את תאי הבדיקה מכיוון שהדבר יוביל לרישום לא נכון של הקואורדינטות.לחץ על התחל וודא שמקור האור היחיד בתא הבדיקה הוא לוח ה-LED. בסיום הניסוי, הסר את המסננת ואת תא ההתנהגות. הרם את לוחית הבדיקה מהמסננת והסר את הזבובים על ידי טבילת הצלחת בקרח.נקו בעדינות את הצלחת במים חמים והסירו כל פסולת אגרו. הכניסו את צלחות הבדיקה לתנור ייבוש כדי להסיר לחות. אווררו את אזור הבדיקה על ידי הפעלת מאוורר קטן למשך כשתי דקות.כבה את המאוורר וטען את קבוצת הזבובים הבאה לצלחת הבדיקה הבאה. המשך לבצע ניתוח נתונים באמצעות תוכנה מותאמת אישית כמתואר בפרוטוקול הטקסט. תוכנת ניתוח הנתונים והפריסה משמשות להערכת ביצועיו של כל זבוב במהלך 10 דקות הניסוי שלו על פי סט של קריטריוני ניתוח.קריטריונים אלה משמשים כדי לקבוע אם נתונים מכל זבוב ישמשו לניתוח נתונים ונועדו לחסל את אותם זבובים שאינם מסוגלים לבצע את משימת חיפוש המזון עקב פציעה, מחלה, מתח או חוסר מוטיבציה, זבובים שאינם פעילים יותר מ-300 שניות נחשבים לא פעילים ונדחים ממערך הנתונים אלא אם כן הם כבר הצליחו לאתר את מקור המזון או התצוגה. מהירות ממוצעת גדולה מ-10 מילימטרים לשנייה למשך 100 שניות לפחות לאחר התקופה הלא פעילה כדי לבחור רק את הזבובים שמציגים מהירויות בריאות בשלבים המוקדמים של ריח פעיל. חיפוש רק זבובים שנעים בטווח מסוים של מהירויות במשך 50 השניות הראשונות של הניסוי מתקבלים לניתוח נתונים זבובים שאינם עוברים את כל ארבעת הרבעים בזירה ופונים ישר למקור המזון לאחר תחילת הניסוי נדחים.זבובים שמתרחקים ממקור המזון ברדיוס של 10 מילימטר למשך 50 שניות לפחות נחשבים כמי שמצאו בהצלחה את מקור המזון. ניתן להשתמש בעלילה המתארת את המרחק של הזבוב ממקור הריח לאורך זמן כדי להעריך את זירות המקרה הנדיר הזה עם חפצים גלויים במצב זבוב. גם עקבות נדחות.חפצים יכולים להיווצר על ידי כל אירוע שבו תוכנת רכישת הנתונים מזהה אובייקט שאינו הזבוב. לעתים קרובות הם מופיעים כקווים ישרים ארוכים המשתרעים על פני הזירה או קורנים ממרכזה. זבובים בוגרים מורעבים 18 עד 24 שעות מפגינים רגישות גבוהה יותר לריחות הקשורים למזון מאשר עמיתיהם הניזונים.תרשים גרפי של האחוז המצטבר של זבובים שמצליחים לאתר מקור ריח מזון מראה ש-30% מכל הזבובים המורעבים מצליחים בתוך חלון של 10 דקות. לעומת זאת, רק 7% מכלל הזבובים המוזנים עושים זאת. זבובים מורעבים צריכים להפגין משיכה גדולה יותר באופן משמעותי לחומץ מאשר לרכב אגרוס בלבד, וניתן להשתמש בתצפית זו כדי לפתור בעיות בתנאי הבדיקה.לדוגמא, כאשר ניסוי חיפוש מזון זה שבוצע ב-32 מעלות צלזיוס עם לחות סביבתית של 35% באמצעות זבובי בר, לא התגלה הבדל משמעותי בין משיכת הזבובים לחומץ לבין בקרת הארוס, סביר להניח שהדבר נובע ממשיכה גוברת למים המצויים בטיפת האגרוס בטמפרטורות בדיקה חמות יותר. על ידי הגדלת לחות הבדיקה בין 50 ל-60% שינוי התנהגותי זה תוקן וההבדל המשמעותי בין המשיכה לחומץ לרכב האגרוס שוחזר. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו ב-12, כולל ניסוי ניסיוני של 10 דקות אם הוא מבוצע כראוי.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לטפל בזבובים בעדינות רבה כדי להימנע מפציעה או הפרעה להם. אנא זכרו כי צלחות הבדיקה והמסננות יכולות להיות חמות במיוחד בתנור הייבוש, ולכן יש להסירן בעת לבישת כפפות לתנור לאחר התפתחותו. טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הנוירוביולוגיה לחקור התנהגויות כימוטקטיות.ניתן להתאים טכניקה זו גם כדי לחקור את יכולתו של הזבוב לאתר אובייקטים ריחניים אחרים. לדוגמה, ניתן ליישם אותו לחקר התנהגות לוקליזציה של בני זוג בזבובים זכרים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להתכונן לניסוי, להתאים את תנאי הניסוי, להריץ את הניסוי ולנתח את הביצועים של כל זבוב, מה שבסופו של דבר יספק לך תרשים מצטבר המציג את אחוז הזבובים שאיתרו בהצלחה את מקור הריח.

a-single-fly-assay-for-foraging-behavior-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מבחני התנהגות למדידת פונקציות של תנועה, למידה, ויכולות...

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

נקבות דרוזופילה בוחרות בין מצעים ובוחרות אתרים אטרקטיביים להטלת ביצים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית שבוחנת את קבלת ההחלטות שלהם, הנקראת בדיקת העדפת הטלת ביצים. הסרטון המוצג מדגים את ההליך עם מערך שנבנה בהתאמה אישית, המאפשר לחוקרים לא רק לבחון את התנהגותן של נקבות רבות בו זמנית, אלא גם תואם להקלטת וידאו והגדרות אופטוגנטיות.

דרוזופילה בדיקת העדפת הטלת ביצים: שיטה לבדיקת קבלת החלטות בזבובים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

Flywalk מערכת מעקב האוטומטי משמש לכימות ברזולוציה גבוהה של מודרך ריח התנהגות בmelanogaster תסיסנית.

כימות ברזולוציה גבוהה של התנהגות מודרכת ריח<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; שימוש ב<em&gt; Flywalk</em&gt; פרדיגמה

אנו מספקים פרוטוקול מפורט לבדיקת אורך נתיב חיפוש מזון של Drosophila melanogaster. אנו דנים בהכנה ובטיפול בחיות ניסוי, כיצד לבצע את הבדיקה ולנתח את הנתונים.

פרוטוקול נתיב באורך שארגן לעצמו<em&gt; תסיסנית</em&gt; זחלים

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

אנחנו מציגים פרוטוקול לבדיקת האכלה של שתי אפשרויות לזבובים. מבחני האכלה אלה מהירים וקלים להפעלה ומתאימים לא רק למחקר מעבדה בקנה מידה קטן, אלא גם למסכים התנהגותיים בעלי תפוקה גבוהה בזבובים.

מבחני העדפת מזון מהירה בדרוסופילה

הפרוטוקול הנוכחי מעריך את הפעילות המוטורית של דרוזופילה על ידי מעקב וניתוח תנועת הזבובים בזירה בעבודת יד באמצעות תוכנת קוד פתוח פיג'י, התואמת לתוספים לפלח פיקסלים של כל פריים בהתבסס על הקלטת וידאו בחדות גבוהה כדי לחשב פרמטרים של מהירות, מרחק וכו '.

טכניקה פשוטה להערכת פעילות לוקומוטורית בדרוזופילה

פרוטוקול זה מתאר בדיקה התנהגותית לרישום התנהגות חיפוש המעוררת סוכר באמצעות Drosophila melanogaster. הבדיקה יכולה לשמש לחקר התנהגויות הקשורות להאכלה וליקוט מזון, כמו גם את המנגנונים העצביים הבסיסיים.

מעקב אחר התנהגות חיפוש מקומי בדרוזופילה

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

למדו שיטה אוטומטית למדידת השפעת הרעב על התנהגות חיפוש מזון בדרוזופילה melanogaster. השיטה כוללת רעבה של 18-24 שעות ומעקב אחרי זמן ההגעה למקור ריח באמצעות מצלמה דיגיטלית ותוכנה ייעודית.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

גלה סרטונים נוספים