Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Birte Kalveram; Olga Lihoradova; Sabarish V. Indran; Jennifer A. Head; Tetsuro Ikegami

doi:10.3791/50809

שימוש בכימיה לחץ כדי למדוד את ההשפעה של זיהום ויראלי בסינתזת RNA Host-Cell

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

שימוש בכימיה לחץ כדי למדוד את ההשפעה של זיהום ויראלי בסינתזת RNA Host-Cell

Full Text

12,287 Views

09:35 min

August 9, 2013

DOI: 10.3791/50809-v

Birte Kalveram¹, Olga Lihoradova¹, Sabarish V. Indran¹, Jennifer A. Head¹, Tetsuro Ikegami¹

¹Department of Pathology, Sealy Center for Vaccine Development, Center for Biodefense and Emerging Infectious Diseases,University of Texas Medical Branch

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

שיטה זו מתארת את השימוש בכימיה לחץ כדי למדוד שינויים בשעתוק תא מארח לאחר הדבקה בנגיף קדחת הבקעה (RVFV) מתח MP-12. תוצאות יכולות להיות דמיינו איכותית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או הושגו כמותית באמצעות cytometry הזרימה. שיטה זו ניתנת להתאמה לשימוש עם וירוסים אחרים.

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לנתח פעילות שעתוק בתאים נגועים בנגיף. תחילה להדביק את התאים 2 9 3 בנגיף קדחת עמק הבקעה, MP 12. לאחר מכן תייגו את התאים עם אנלוגי האורידין חמש הנאל אורידין, המשולב ב-RNA המתהווה.

הזוג הבא, שילבו חמישה אורידין הנאל לאזיד פלואורסצנטי. על מנת להמחיש תוצאות RNA מסונתזות חדשות שהתקבלו, העריכו את ההבדלים בכמות ה-RNA החדש שסונתז בין תאים נגועים ולא נגועים על סמך מיקרוסקופ פלואורסצנטי או ציטומטריית זרימה. בניגוד לתיוג עם טריטיאט, אורידין או חמישה ברומו, גישה כימית קליק זו אינה דורשת שימוש באיזוטופים רדיואקטיביים.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos