Name: שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב Elegans Caenorhabditis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: חקור את השפעות התרופות האנטי-פסיכוטיות על התפתחות ועל קצב שאיבת הלוע בנמטודות Caenorhabditis elegans. השיטה מאפשרת הערכת השפעות תרופתיות על התנהגות ועל תהליכי התפתחות ביולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה נתמכה על ידי הפרס פיתוח מדען הקליני K08NS002083-NIH, גרנט Shervert פרייזר מכון המחקר, ופרס לחוקר צעיר NARSAD לאדגר א Büttner.

1. דיליי / הקטלני Assay התפתחותית: סוג Wild-(N2) ושני הזנים מוטנטים (Mut1 וMut2) נבדקים בריכוזי Clozapine שלושה בפלייט 12 גם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> , ביום 1 לשפוך 2 מיליליטר NGM בינוני 10 לבאר כל צלחת 12 היטב (גם כל אחד בקוטר 2 סנטימטר) ולאפשר להקשות על הספסל בטמפרטורת חדר (RT) למשך לילה. באותו היום, לקחת מושבה של חיידקי OP50 Escherichia coli, להדביק בקבוק 50 פתרון מיליליטר LB, ותרבותה שייקרה 37 מעלות צלזיוס ב220 סיבוב סל&quot;ד לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 2, להעביר 20 תרבות חיידקי OP50 μl על מרכזו של כל NGM היטב. דגירה הצלחות בחממה 37 מעלות צלזיוס או להשאיר אותם על RT לילה כדי לאפשר את דשא החיידקים לגדול עבה יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן פתרון מניות קלוזאפין 80 מ&quot;מ על ידי המסת קלוזאפין בDMSO (sulfoxide דימתיל) ממס. ואז להפוך את הפתרון עובד 80 μl עם פתרון המניות בדילול מלא ב1.7 מ&quot;מ ב חומצה אצטיתased בטבלה 1. הערה: הפתרון עובד לתרופה מסוימת של ריבית צריך להיקבע על ידי ביצוע סדרה של בדיקות ריכוז ראשוניות כדי למצוא את הריכוז המתאים ביותר להבחנה מהסוג בר מהמוטציות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההעברה 80 μl קלוזאפין עובדת פתרון לצלחת NGM seeded היטב ולערבל את הצלחת על מנת לאפשר הפתרון לחלק באופן שווה על פני השטח. חכה לצלחת לייבוש. השתמש בצלחת עבור assay באותו היום או למקם אותו בחממה 20 מעלות צלזיוס לשימוש ביום שלמחרת. הערה: הפתרון עובד הוא השעיית סמים בשל המסיסות הנמוכה של קלוזאפין, במיוחד בריכוז גבוה יותר. לכן, מערבולת הצינור לפני העברת הפתרון לצלחת התרופה על מנת להבטיח כי ריכוז התרופה הוא מדויק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף תולעים את צלחת 3.5 סנטימטר המכילה רבים מבוגרים הרה להולדת עם חיץ M9 ואז לסובב אותם בצינור 15 מיליליטרב2,000 סל&quot;ד דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant. הוסף 5 מיליליטר פתרון אקונומיקה (NaOH: היפוכלוריט: 2 DDH O ב4:01:05) ולשבש את נמטודות בעדינות על ידי היפוך הצינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לבעלי החיים עד שהחצי מהם הם מומסים בסביבות 5 דקות. ספין למטה הביצים על 2,000 סל&quot;ד דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ולהוסיף 14 מיליליטר חיץ M9 במהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה הביצים על 2,000 סל&quot;ד דקות 1 ולשאוב supernatant, עוזב כ 100 פתרון μl. ורטקס להשעות את הביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 ביצי μl העברה תלויות בM9 על צלחת NGM קבועה כדי לבדוק כמה ביצים מועברים. כוון את עוצמת הקול של הביצים הושעו על מנת להבטיח כי ישנם כ 30-35 ביצים בכל העברה. העבר 30-35 ביצים היטב בכל צלחת assay, ואז דגירה בחממה 20 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הראשון של assay, ציון את מספר הביצים בקעו. התאם את המספר הכולל של בעלי חיים שבקעו ל25/well ידי picking את התולעים נוספים במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בימים שלאחר מכן, לבחון את בעלי החיים ואת ציונם בכל שעה 24. שלב התפתחותי הוא הבקיע בהתבסס על גודלו של בעל החיים ואת הצורה של 11 הפות. הניסוי נמשך 5-6 ימים עם האפקט חזק ביותר שנראה בדרך כלל ביום השלישי או רביעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלט את הנתונים לקובץ Excel ולחשב את האחוז של בעלי חיים בכל שלב התפתחותי, לכל יום של הניסוי. ליצור גרפים עם הפונקציה &#39;100% Stacked טור &#39;בעמודת &#39;2-D&#39; התפריט. </li></ol> 2. Assay שאיבת בלוע: בעלי חיים מבוגרים צעירים לWild-type וזנים מוטנטים האם קלעו על צלחות Clozapine Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת assay נעשתה בעקבות אותו הפרוטוקול המשמש עבור assay עיכוב / הקטלניות התפתחותית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיק 50 חיות L4 עבור כל זן לצלחות NGM seeded 24 שעות לפני assay דגירה התולעים ב20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיק 10 חיות לאסאy צלחת היטב. לאחר מכן לבחור 10 בעלי חיים ולכל דקות 15-20 הבאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי בעלי החיים בבאר הראשונה שנחשפו לתרופה ל30 דקות, להתחיל assay על ידי התבוננות שאיבת בלוע תחת מיקרוסקופ לנתיחה ואת ציון המשאבות ל20 שניות 9. פעם אחת שאיבת בלוע הוא הבקיע, להרים את התולעת מהצלחת. </li></ol>

<ol><li>Donohoe, D. R., Jarvis, R. A., Weeks, K., Aamodt, E. J., Dwyer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+adaptation+in+C.+elegans+produced+by+antipsychotic+drugs+requires+serotonin+and+is+associated+with+calcium+signaling+and+calcineurin+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral adaptation in C. elegans produced by antipsychotic drugs requires serotonin and is associated with calcium signaling and calcineurin inhibition.</a> Neurosci. Res. 64, 280-289 (2009).</li>
<li>Karmacharya, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clozapine+interaction+with+phosphatidyl+inositol+3-kinase+%28PI3K%29%2Finsulin-signaling+pathway+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Clozapine interaction with phosphatidyl inositol 3-kinase (PI3K)/insulin-signaling pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Neuropsychopharmacology. 34, 1968-1978 (2009).</li>
<li>Rand, J. B., Johnson, C. D. Carnorhabditis elegans Modern Biological Analysis of an Organism. Estein, H. F., Shakes, D. C. 48, Academic Press, Inc.. 187-204 (1995).</li>
<li>Kwok, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small-molecule+screen+in+C.+elegans+yields+a+new+calcium+channel+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A small-molecule screen in C. elegans yields a new calcium channel antagonist.</a> Nature. 441, 91-95 (2006).</li>
<li>Wang, X., Sliwoski, G. R., Buttner, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+Caenorhabditis+elegans+genetics+for+understanding+human+psychiatric+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Harv.+Rev.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The relevance of Caenorhabditis elegans genetics for understanding human psychiatric disease.</a> Harv. Rev. Psychiatry. 19, 210-218 (2011).</li>
<li>Donohoe, D. R., Aamodt, E. J., Osborn, E., Dwyer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antipsychotic+drugs+disrupt+normal+development+in+Caenorhabditis+elegans+via+additional+mechanisms+besides+dopamine+and+serotonin+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Res%22%5BJournal%5D)">Antipsychotic drugs disrupt normal development in Caenorhabditis elegans via additional mechanisms besides dopamine and serotonin receptors.</a> Pharmacol. Res. 54, 361-372 (2006).</li>
<li>Karmacharya, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+effects+of+clozapine%3A+involvement+of+trace+amine+pathways+in+C.+elegans+and+M.+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral effects of clozapine: involvement of trace amine pathways in C. elegans and M. musculus.</a> Brain Res. 1393, 91-99 (2011).</li>
<li>Saur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Genome-Wide+RNAi+Screen+in+Caenorhabditis+elegans+Identifies+the+Nicotinic+Acetylcholine+Receptor+Subunit+ACR-7+as+an+Antipsychotic+Drug+Target%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">A Genome-Wide RNAi Screen in Caenorhabditis elegans Identifies the Nicotinic Acetylcholine Receptor Subunit ACR-7 as an Antipsychotic Drug Target.</a> PLoS Genet. 9, (2013).</li>
<li>Avery, L., You, Y. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAvery%2C+L+%22C.+elegans+feeding.+WormBook%2C+ed.+The+C.+elegans+Research+Community%2C+doi%3A10.1895%2Fwormbook.1.150.1%22">C. elegans feeding. WormBook, ed. The C. elegans Research Community, doi:10.1895/wormbook.1.150.1</a>. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.wormbook.org">http://www.wormbook.org</a> (2012).</li>
<li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+worm+lab%3A+from+culturing+worms+to+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis.</a> J Vis Exp. 47, (2011).</li>
<li>Lewis, J. A., Fleming, J. T. Carnorhabditis elegans Modern Biological Analysis of an Organism. Estein, H. F., Shakes, D. C. 48, Academic Press, Inc.. 3-29 (1995).</li>
<li>Davis, J. R., Li, Y., Rankin, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+developmental+exposure+to+ethanol+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of developmental exposure to ethanol on Caenorhabditis elegans.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 32, 853-867 (2008).</li>
<li>Kage-Nakadai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+very+long+chain+fatty+acid+acyl-CoA+synthetase+genes%2C+acs-20+and+acs-22%2C+have+roles+in+the+cuticle+surface+barrier+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Two very long chain fatty acid acyl-CoA synthetase genes, acs-20 and acs-22, have roles in the cuticle surface barrier in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Partridge, F. A., Tearle, A. W., Gravato-Nobre, M. J., Schafer, W. R., Hodgkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C.+elegans+glycosyltransferase+BUS-8+has+two+distinct+and+essential+roles+in+epidermal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The C. elegans glycosyltransferase BUS-8 has two distinct and essential roles in epidermal morphogenesis.</a> Dev. Biol. 317, 549-559 (2008).</li>
<li>Leung, C. K., Deonarine, A., Strange, K., Choe, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+and+biosensing+with+fluorescent+C.+elegans+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening and biosensing with fluorescent C. elegans strains.</a> J. Vis. Exp. (51), (2011).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין סכסוך העניין המעורב.

כאן אנו מתארים שיטות לבדיקת ההשפעות של APDs על ההתפתחות וההתנהגות של ג elegans. DMSO או אתנול משמש כדי לפזר קלוזאפין, שכן התרופה היא יחסית בלתי מסיס במים. מכיוון שכבר דיווחו ממסים להשפיע ג הביולוגיה elegans 12, DMSO-לבד או בקבוצות שליטת אתנול לבד הן חיוניות. הריכוז הגבוה ביותר של DMSO משמש במבחנים שלנו הוא עד 3%, שאין לה השפעה ברורה על ג elegans פיתוח. DMSO יכול לשמש להרבה מולקולות קטנות, או אפילו כמה מולקולות גדולות, כגון: ח...

elegans Caenorhabditis הוא אורגניזם גנטי פשוט נוח למסכים בקנה מידה גדולה קדימה לאחור גנטיים והמסכים גנטיים כימיים. ג elegans הוא רגיש לספקטרום רחב של תרכובות ביו ולכן שמש בהצלחה להגדיר את מנגנוני פעולה של מגוון רחב של תרכובות מסוג זה. לדוגמא, תרכובות ביו למדו באמצעות פרמקוגנטיקה התולעת כוללת אגוניסטים קולטן האצטילכולין (למשל levamisole, ניקוטין, morantel, וpyrantel), חומרי הרדמה (למשל halothane), קפאין, חוסמי כולינסטרז (למשל aldicarb, lannate, וtrichlorfon), פלואוריד, GABA-קשורים תרכובות (למשל GABA וmuscimol), ivermectin, Paraquat, אסטרים phorbol, ותרופות הקשורים לסרוטונין (למשל סרוטונין וimiprimine) 3. יתר על כן, ג elegans שמש במשך מסכי מולקולה קטנה בקנה מידה גדולה, המאפשר גילוי של מתחם ביו חדשים וזיהוי של מטרות גנטיות רומן 4. ג הגנום elegans כולל תרופה פוטנציאלית אנטיפסיכוטיות (APD) מטרות נשמרים בבני אדם, ובם גנים המקודדים חלבונים דרושים לסינתזת נוירוטרנסמיטר ולמבנה ותפקוד 5 הסינפטי. לכן, ג elegans Neurogenetics והצעת נוירוביולוגיה שיטות לגילוי מנגנונים מולקולריים רומן של פעולה של APDs. בנמטודות, חשיפת APD מוקדם בהתפתחות מייצרת עיכוב התפתחותי, ובריכוזים גבוהים יותר, קטלני 2,6. חשיפת APD במהלך הבגרות מייצרת פנוטיפים התנהגותיים. לדוגמא, חשיפת קלוזאפין מעכבת תנועה ושאיבת בלוע ומשפרת את הטלת ביצים 1,2,7. עיכוב התפתחותי מושרה APD וקטלני הם פנוטיפים רבי עוצמה למסכים גנטיים כימיים בקנה מידה גדולה. פנוטיפים אלה הם מורכבים במידה שסבירה להניח שיש להם בשיא יותר מפעם אחת תאי והגנטיs. לכן, מסכי גנטיים כגון צפויים להניב מגוון רחב של מטרות תרופה עקיפות. עם זאת, המעבדה שלנו ביצעה מסכי גן מועמד ומסך RNAi הגנום למדכאים של עיכוב התפתחותי מושרה APD והקטלניות והתאוששה בהצלחה גנים אשר צפוי לקודד יעדים ישירים, ובם דופאמין, אינסולין, וקולטני אצטילכולין ניקוטינית 2,8. גם מסכי גנטיים המבוססים על התנהגויות הנגרמות APD במבוגרים הביאו לזיהוי מטרות APD רומן, וכעת אנו מאמתים מטרות ממסכים הן התפתחות והתנהגות ביונקים 7. לפיכך, גישה חסר חוליות כימיות גנטית כדי לגלות את המנגנונים מולקולריים רומן של פעולה של APDs מופיעה להיות ריאלי 5,8. ג לוע elegans הוא איבר הכולל 20 נוירונים, 20 תאי שריר, ו20 תאי אבזר, עטופים בקרום במרתף. דומה ללב היונקים, הלוע הוא אוטונומיnd משאבות כל הזמן אוכל מהסביבה החיצונית 9. עיכוב של קצב שאיבת בלוע פשרות ספיגת מזון, וכך מוטציות או תרופות המעכבים עיכוב גורם שאיבת בלוע התפתחותית או לעצור 9. APDs לעכב את קצב שאיבת בלוע, והיוו בחלקו להשפעות שלהם על פיתוח ו1,2 כדאיות. כאן, אנו משתמשים קלוזאפין APD לא טיפוסי לדוגמא ירושלים להפגין מבחני תרופה לפיתוח נמטודות ושאיבת בלוע.

<table><tbody><tr><td>Clozapine</td><td>Sigma</td><td>C6305</td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית (HAC)</td><td>Fisher</td><td>BP2401</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד (NaOH)</td><td>EMD</td><td>SX0590-13</td><td></td></tr><tr><td>היפוכלוריט</td><td>סיגמא-אולדריץ</td><td>' 425044</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה 5810</td><td>Eppendorf</td><td>5810 000.017</td><td></td></tr><tr><td>שייקר חממה</td><td>ניו ברונסוויק סיינטיפיק</td><td>M1246-0006</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור בטמפרטורה נמוכה 815</td><td>דיוק מדעי</td><td>J1790-1B</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>SZX12</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 35 x 10 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC9434271</td><td></td></tr><tr><td>12 בארות צלחת תרבית רקמות</td><td>BD Falcon</td><td>REF 353043</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב<em&gt; elegans caenorhabditis</em

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

elegans Caenorhabditis הוא אורגניזם גנטי פשוט מקובל בקנה מידה גדולה קדימה לאחור מסכי גנטיים והמסכים גנטיים כימיים. ג הגנום elegans כולל תרופה פוטנציאלית אנטיפסיכוטיות (APD) מטרות נשמרים בבני אדם, ובם גנים המקודדים חלבונים דרושים לסינתזת נוירוטרנסמיטר ולמבנה ותפקוד הסינפטי. חשיפת APD מייצרת עיכוב ו / או קטלני בנמטודות התפתחותיים באופן תלוי ריכוז. פנוטיפים אלה נגרמים, בין שאר, על ידי עיכוב הנגרם APD של בלוע שאיבת 1,2. לפיכך, פנוטיפ התפתחותית יש בסיס התוקפת, מה שהופך אותו לשימושי ללימודי pharmacogenetic של נוירולפטיות. כאן אנו מדגימים נהלים מפורטים לבדיקת השפעות APD בפיתוח נמטודות ושאיבת בלוע. עבור assay התפתחותי, עוברים מסונכרנים מונחים על מדיום נמטודות צמיחת צלחות (NGM) המכילות APDs, והשלבים של פיתוח aniאז Mals הם הבקיע יומי. עבור assay קצב שאיבת בלוע, מבוים בעלי חיים מבוגרים צעירים נבדקים על צלחות NGM המכילות APDs. מספר משאבות בלוע ליחידת זמן הוא רשם, ושיעור השאיבה מחושב. מבחני אלה יכולים לשמש ללימוד סוגים רבים אחרים של מולקולות קטנות או אפילו מולקולות גדולות.

1. עיכוב התפתחותי / תוצאת assay הקטלניות תוצאה אופיינית לassay עיכוב / הקטלניות התפתחותית מודגמת באיורי 1 א ו 1 ב. כאשר חיות בר מסוג בקבוצת הביקורת גדלו השלב הרה להולדת למבוגרים (איור 1 א), חיות בר מהסוג שנחשפו לקלוזאפין נמצאות עדיין בשלבי הזחל הצעירים או שהם (איור 1b). איור 1 ג מת מראה תוצאת נציג השוואה מוטציה מדכאת (Mut1) ומוטציה משפר <em...

גישות לבדיקת ההשפעות של תרופות אנטיפסיכוטיות (APDs) בelegans Caenorhabditis הם הפגינו. מבחני מתוארים לבדיקת השפעות תרופה בפיתוח וכדאיות ועל קצב שאיבת בלוע. שיטות אלה חלות גם על ניסויי pharmacogenetic עם כיתות סמים אחרות מאשר APDs.

שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבחון את ההשפעות של תרופות אנטי פסיכוטיות על התפתחות ושאיבת הלוע של אלגן ים. זה מושג על ידי גידול אוכלוסייה של נמטודות בוגרות ומהן יצירת אוכלוסייה מסונכרנת של בעלי חיים. השלב הבא הוא העברת ביציות מסונכרנות או מבוגרים ללוחות בדיקה עם תרופות.השלב האחרון הוא להתבונן ולדרג את השפעות התרופות על התולעים. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות שתרופות אנטי פסיכוטיות מעכבות את ההתפתחות ומעכבות שאיבת לוע בבעלי חיים שנחשפו לסמים. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מנגנוני הפעולה של תרופות אנטי פסיכוטיות, ניתן ליישם אותה גם לחקר מולקולות קטנות אחרות ואפילו מולקולות גדולות כגון ליפידים הכינו תרופה מעניינת עם ריכוז עבודה ידוע.התחל בהעמסת צלחת 12 באר עם שני מיליליטר NGM, בינוני לבאר. הניחו את הצלחת בצד להתקשות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, בחר מושבה של חיידקי OP 50 והעביר אותה לבקבוק של 50 מיליליטר של תרבית LB.החיידקים הלילה ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-220 סל"ד למחרת לכל באר של הצלחת המוכנה. ב -20 מיקרוליטר מתרבית החיידקים, הגדר את הצלחת לדגור למשך הלילה ב -37 מעלות צלזיוס למחרת. טען כל אחד בישיבה היטב עם 80 מיקרוליטר של תרופה מעניינת בריכוז העבודה.במקרה זה, התרופה היא C Clozapine. הקפד לערבב את התמיסה לפני נטילת ציטוטים. סובבו את התמיסה כדי לפזר אותה באופן שווה בבאר ואפשרו לה להיספג בטמפרטורת החדר כשמכסה הצלחת כבוי.לאחר מכן המשך בבדיקה או אחסן את הצלחת ב-20 מעלות צלזיוס למשך הלילה והתחל את הבדיקה למחרת. התחל באיסוף ביציות מהגנוטיפ המעניין. התחל עם אוכלוסיית תולעים עם הרבה GR בוגרים.שטפו את התולעים בצלחת של 3.5 ס"מ באמצעות מאגר M nine. לאחר מכן סובב אותם בצינור של 15 מיליליטר ב-2000 סל"ד למשך דקה אחת. הסר את הסופרנטנט באמצעות שאיפה והחלף אותו בחמישה מיליליטר אקונומיקה.לאחר מכן שבשו בעדינות את הבוגרים על ידי היפוך הצינור והמתינו עד שבעלי החיים יתחילו להתמוסס ברציפות. התבונן בתולעים המתמוססות מתחת לטווח. כאשר כמחצית מהתולעים התמוססו.לאחר כחמש דקות, סובבו את הצינור כדי לאסוף את הביצים, שאפו את הסופרנטנט והחליפו אותו במהירות במאגר M nine. לאחר מכן סובב את הצינור שוב כלפי מטה כמו קודם והסר את כל הסופרנטנט M 9 מלבד כ-100 מיקרוליטר. כדי להשעות את הביצים, מערבל את הצינור.לאחר מכן העבירו שני מיקרוליטרים של התרחיף לצלחת NGM וספרו את מספר הביציות שהועברו. לאחר מכן טען את הצלחת המטופלת בתרופות עם 30 עד 35 ביצים לבאר ודגר את הצלחת בחום של 20 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר 24 שעות, קלעו את מספר הביצים שבקעו.אם יש יותר מ-25 תולעים בכלל, הסר היטב את עודפי התולעים. החזירו את התולעים על הצלחת לאינקובטור להשגחה מאוחרת יותר במרווחים של 24 שעות בכל יום, ציינו את השלב ההתפתחותי של התולעים בבארות על סמך גודל התולעים וצורת הפות שלהן. השפעות חזקות נראות בדרך כלל ביום השלישי והרביעי.הניסוי אמור להימשך כשבוע. עבור פרוטוקול זה, הכינו לוחיות בדיקת סמים כפי שתוארו קודם לכן יום קודם, והתחלת הבדיקה. בחר 50 חיות L בארבעה שלבים עבור כל גנוטיפ בניסוי.מעבירים אותם לצלחות NGM ומדגרים את הצלחות למשך 24 שעות בחום של 20 מעלות צלזיוס. למחרת, כל 15 עד 20 דקות, העמיסו באר בדיקה עם 10 בעלי חיים לאחר שקבוצה נחשפה לתרופה במשך חצי שעה. התחל להתבונן בשאיבת הלוע שלהם תחת מיקרוסקופ דיסקציה.ראשית, מצאו תולעת, ואז ספרו את משאבות הלוע שלה למשך 20 שניות. לאחר שקיבלת ניקוד, קח את התולעת מהצלחת. קלעו את כל התולעים בבאר באותו אופן.התוצאות הצפויות של ביצוע עיכוב הניסוי. בדיקת קטלניות עם בקרות מסוג בר אמורה להראות שבניגוד לקצב הגדילה האופייני לשלב החמור והבוגר, בעלי חיים שנחשפו ל-c קלוזפין עדיין בשלבי הזחל הצעירים או מתים בבדיקת מוטציות על ריכוזים שונים של קלוזפין גילו מוטציות מדכאות כגון מוטציות אילמות 1 ומוטציות משפרות כגון MU 2. באופן אוניברסלי, הקטלניות של אילם אחד הייתה נמוכה יותר מהסוג הפראי, והקטלניות של MU 2 הייתה גבוהה יותר כצפוי בהשוואה לביקורת ששרדה אילמת אחת מסוגלת יותר לפתח, בעוד ששורדים אילמים שני מתעכבים יותר.בדיקה נוספת העלתה כי חשיפה לקלוזפין הפחיתה את קצב שאיבת הלוע באופן תלוי ריכוז. עם זאת, שיעור הירידה של אילם אחד היה נמוך מזה של סוג הבר, בעוד שהשיעור הנמוך של אילם 2 היה גדול מזה של סוג הבר. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע בדיקת תרופות אנטי פסיכוטיות בקנה מידה קטן.ניתן גם להרחיב את המסר לביצוע סקר גנטי בקנה מידה גדול.

methods-for-studying-mechanisms-action-antipsychotic-drugs

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

וידאו זה מדגים כיצד להעסיק two ממריצים עצביים, aldicarb ו pentylenetetrazole (PTZ), בדרכים משלימות ללמוד לתפקד סינפטיים של נמטודות, C. elegans. גישה זו משלימה עשוי לשמש גם כדי לשפוך אור על מנגנוני שמור באבולוציה עבור בתיאום ויסות עצבי ויש לו השלכות על אפילפסיה והתקפים.

פרדיגמות אפיון תרופתי של C. elegans מוטאנטים הילוכים Synaptic

ביצה בתולעת assay (EIW) הוא שיטה יעילה לכמת-הטלת התנהגות. שינויים בנחת ביצה יכולים להיות תגובה התנהגותית של האורגניזם...

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג Elegans</em&gt; התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה

כאן, אנו מציגים assay Caenorhabditis elegans- Specific שנועד להעריך שינויים התנהגות הנטייה נחושת ואת היכולת לאתר מקור מזון משותף, כמו האורגניזם מתקדמת ממצב תזונה רעב עד כדי רעב.

א<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; מצב תזונתיים מבוססי Assay Assersion

אנו מציגים התנהגות הקלטה הקלטה ופרוטוקול המאפשר ניתוח אוטומטי של נמטודות, Caenorhabditis elegans 'העדפת תרכובות מסיסות באסאי מבוסס האוכלוסייה. מאמר זה מתאר את הבנייה של תא התנהגות, פרוטוקול assay התנהגותי, וניתוח וידאו השימוש בתוכנה.

ניתוח אוטומטי של אוכלוסיה מבוססת נמטודות מבוססי Assay העדפה

השימוש מותאם "צ'יפ חוש הריח" עבור ההדמיה סידן יעיל של C. elegans זכרים מתואר כאן. מחקרים של חשיפה זכר גליצרול פרומון מוצגים גם.

באמצעות שבב חוש הריח של Microfluidic מותאם עבור ההדמיה של פעילות. עצבית בתגובה פרומונים בנוירונים הראש הגברי C. Elegans

אנו מתארים פרוטוקולים עבור באמצעות פלטפורמת מעקב נמטודות רחב שדה-of-view (WF-NTP), המאפשרת אפיון פנוטיפי תפוקה גבוהה של אוכלוסיות גדולות של Caenorhabditis elegans. פרוטוקולים אלה ניתן לאפיין שינויים התנהגותיים עדינים זנים מוטציה או בתגובה טיפול תרופתי באופן מדרגי במיוחד.

אוטומטיות התנהגותית ניתוח של גדול C. elegans אוכלוסיות שימוש רחב שדה-of-view מעקב פלטפורמה

מחקר זה מציג פרוטוקולים עבור שתי גישות ניתוח פעילות לוקומוטור חצי אוטומטי ב C. elegans קומפלקס I מחלות גז-1(fc21) תולעים, כלומר, ZebraLab (בדיקת תפוקה בינונית) ו- WormScan (בדיקה בעלת תפוקה גבוהה) ומספקים ניתוח השוואתי בין מגוון רחב של שיטות מחקר לכימות התנהגות נמטודה ותפקוד עצבי שרירי משולב.

ניתוח השוואתי של שיטות ניסיוניות לכימות פעילות בעלי חיים בקאנורבדיטיס אלגנס מודלים של מחלות מיטוכונדריאליות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת הפעילויות הנוירו-הגנתיות של תרכובות בדיקה ב - Caenorhabditis elegans, כולל צבירה של פוליגלוטמין, מוות עצבי והתנהגות כימואבואידית, כמו גם שילוב מופתי של פנוטיפים מרובים.

Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לגילוי תרכובות ביו-אקטיביות נגד רעילות עצבית בתיווך פוליגלוטמין

מאמר זה מתאר שיטה פשוטה וזולה לתיעוד התנהגות הימנעות מדשאה של Caenorhabditis elegans, באמצעות פריטים זמינים כגון טלפון חכם וקופסת אור פולטת אור (LED). אנו מספקים גם סקריפט Python לעיבוד קובץ הווידאו לפורמט נוח יותר לספירה.

שיטת הדמיה מבוססת סמארטפון עבור C. elegans Lawn Avoidance Assay

העברת גן שיטה למוח עכבר בפיתוח מתואר באמצעות שיטה ניתוחית ייחודית צורה מיוחדת של אלקטרודות. זו טכניקה ייחודית זו מאפשרת transfection של DNA פלסמיד temporally מרחבית, אשר יסייעו מדעני מוח רבים בחקר התפתחות המוח.

עכבר בתוך הרחם Electroporation: ג&#39;ין מבוקרת transfection Spatiotemporal

חקור את השפעות התרופות האנטי-פסיכוטיות על התפתחות ועל קצב שאיבת הלוע בנמטודות Caenorhabditis elegans. השיטה מאפשרת הערכת השפעות תרופתיות על התנהגות ועל תהליכי התפתחות ביולוגיים.

שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב

גלה סרטונים נוספים