שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב Elegans Caenorhabditis

גישות לבדיקת ההשפעות של תרופות אנטיפסיכוטיות (APDs) בelegans Caenorhabditis הם הפגינו. מבחני מתוארים לבדיקת השפעות תרופה בפיתוח וכדאיות ועל קצב שאיבת בלוע. שיטות אלה חלות גם על ניסויי pharmacogenetic עם כיתות סמים אחרות מאשר APDs.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבחון את ההשפעות של תרופות אנטי פסיכוטיות על התפתחות ושאיבת הלוע של אלגן ים. זה מושג על ידי גידול אוכלוסייה של נמטודות בוגרות ומהן יצירת אוכלוסייה מסונכרנת של בעלי חיים. השלב הבא הוא העברת ביציות מסונכרנות או מבוגרים ללוחות בדיקה עם תרופות.

השלב האחרון הוא להתבונן ולדרג את השפעות התרופות על התולעים. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות שתרופות אנטי פסיכוטיות מעכבות את ההתפתחות ומעכבות שאיבת לוע בבעלי חיים שנחשפו לסמים. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מנגנוני הפעולה של תרופות אנטי פסיכוטיות, ניתן ליישם אותה גם לחקר מולקולות קטנות אחרות ואפילו מולקולות גדולות כגון ליפידים הכינו תרופה מעניינת עם ריכוז עבודה ידוע.

התחל בהעמסת צלחת 12 באר עם שני מיליליטר NGM, בינוני לבאר. הניחו את הצלחת בצד להתקשות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, בחר מושבה של חיידקי OP 50 והעביר אותה לבקבוק של 50 מיליליטר של תרבית LB.

החיידקים הלילה ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-220 סל"ד למחרת לכל באר של הצלחת המוכנה. ב -20 מיקרוליטר מתרבית החיידקים, הגדר את הצלחת לדגור למשך הלילה ב -37 מעלות צלזיוס למחרת. טען כל אחד בישיבה היטב עם 80 מיקרוליטר של תרופה מעניינת בריכוז העבודה.

במקרה זה, התרופה היא C Clozapine. הקפד לערבב את התמיסה לפני נטילת ציטוטים. סובבו את התמיסה כדי לפזר אותה באופן שווה בבאר ואפשרו לה להיספג בטמפרטורת החדר כשמכסה הצלחת כבוי.

לאחר מכן המשך בבדיקה או אחסן את הצלחת ב-20 מעלות צלזיוס למשך הלילה והתחל את הבדיקה למחרת. התחל באיסוף ביציות מהגנוטיפ המעניין. התחל עם אוכלוסיית תולעים עם הרבה GR בוגרים.

שטפו את התולעים בצלחת של 3.5 ס"מ באמצעות מאגר M nine. לאחר מכן סובב אותם בצינור של 15 מיליליטר ב-2000 סל"ד למשך דקה אחת. הסר את הסופרנטנט באמצעות שאיפה והחלף אותו בחמישה מיליליטר אקונומיקה.

לאחר מכן שבשו בעדינות את הבוגרים על ידי היפוך הצינור והמתינו עד שבעלי החיים יתחילו להתמוסס ברציפות. התבונן בתולעים המתמוססות מתחת לטווח. כאשר כמחצית מהתולעים התמוססו.

לאחר כחמש דקות, סובבו את הצינור כדי לאסוף את הביצים, שאפו את הסופרנטנט והחליפו אותו במהירות במאגר M nine. לאחר מכן סובב את הצינור שוב כלפי מטה כמו קודם והסר את כל הסופרנטנט M 9 מלבד כ-100 מיקרוליטר. כדי להשעות את הביצים, מערבל את הצינור.

לאחר מכן העבירו שני מיקרוליטרים של התרחיף לצלחת NGM וספרו את מספר הביציות שהועברו. לאחר מכן טען את הצלחת המטופלת בתרופות עם 30 עד 35 ביצים לבאר ודגר את הצלחת בחום של 20 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר 24 שעות, קלעו את מספר הביצים שבקעו.

אם יש יותר מ-25 תולעים בכלל, הסר היטב את עודפי התולעים. החזירו את התולעים על הצלחת לאינקובטור להשגחה מאוחרת יותר במרווחים של 24 שעות בכל יום, ציינו את השלב ההתפתחותי של התולעים בבארות על סמך גודל התולעים וצורת הפות שלהן. השפעות חזקות נראות בדרך כלל ביום השלישי והרביעי.

הניסוי אמור להימשך כשבוע. עבור פרוטוקול זה, הכינו לוחיות בדיקת סמים כפי שתוארו קודם לכן יום קודם, והתחלת הבדיקה. בחר 50 חיות L בארבעה שלבים עבור כל גנוטיפ בניסוי.

מעבירים אותם לצלחות NGM ומדגרים את הצלחות למשך 24 שעות בחום של 20 מעלות צלזיוס. למחרת, כל 15 עד 20 דקות, העמיסו באר בדיקה עם 10 בעלי חיים לאחר שקבוצה נחשפה לתרופה במשך חצי שעה. התחל להתבונן בשאיבת הלוע שלהם תחת מיקרוסקופ דיסקציה.

ראשית, מצאו תולעת, ואז ספרו את משאבות הלוע שלה למשך 20 שניות. לאחר שקיבלת ניקוד, קח את התולעת מהצלחת. קלעו את כל התולעים בבאר באותו אופן.

התוצאות הצפויות של ביצוע עיכוב הניסוי. בדיקת קטלניות עם בקרות מסוג בר אמורה להראות שבניגוד לקצב הגדילה האופייני לשלב החמור והבוגר, בעלי חיים שנחשפו ל-c קלוזפין עדיין בשלבי הזחל הצעירים או מתים בבדיקת מוטציות על ריכוזים שונים של קלוזפין גילו מוטציות מדכאות כגון מוטציות אילמות 1 ומוטציות משפרות כגון MU 2. באופן אוניברסלי, הקטלניות של אילם אחד הייתה נמוכה יותר מהסוג הפראי, והקטלניות של MU 2 הייתה גבוהה יותר כצפוי בהשוואה לביקורת ששרדה אילמת אחת מסוגלת יותר לפתח, בעוד ששורדים אילמים שני מתעכבים יותר.

בדיקה נוספת העלתה כי חשיפה לקלוזפין הפחיתה את קצב שאיבת הלוע באופן תלוי ריכוז. עם זאת, שיעור הירידה של אילם אחד היה נמוך מזה של סוג הבר, בעוד שהשיעור הנמוך של אילם 2 היה גדול מזה של סוג הבר. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע בדיקת תרופות אנטי פסיכוטיות בקנה מידה קטן.

ניתן גם להרחיב את המסר לביצוע סקר גנטי בקנה מידה גדול.